專利名稱：白鮮皮中單體化合物的提純方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及白鮮皮中單體化合物的提純方法，尤其是分離純化白鮮堿的方法。
背景技術(shù)：
白鮮屬蕓香科植物白鮮Dictammus dasycarpus Turcz.的干燥根皮。具有清熱燥 濕，祛風(fēng)解毒功效。用于濕熱瘡毒，黃水淋漓，濕疹，風(fēng)疹，疥癬瘡癩，風(fēng)濕熱痹，黃疸尿赤。白 鮮堿(dicatamine)屬于喹啉類生物堿，分子式C12H9NO2,分子量199. 20 ；為棱柱結(jié)晶，熔點(diǎn) 133°C，溶于熱乙醇及氯仿，略微溶于乙醚，實(shí)際不溶于水。中藥白鮮皮主要化學(xué)成分為生物 堿，自鮮堿為其重要活性成分，含量0. 022-0. 1%。藥理研究表明白鮮堿可通過間接影響真菌細(xì)胞遺傳物質(zhì)的正常合成從而抑制真 菌生長甚至導(dǎo)致死亡，其在紫外線長波UVA照射下，可鈍化小鼠MCMV和togavirus，具有體 外抗癌活性，另外白鮮堿還具有動(dòng)脈血管舒張效應(yīng)，為鈣離子拮抗劑，能與DNA雙螺旋結(jié)構(gòu) 中的嘧啶堿基形成加成物，有可能成為牛皮癬治療藥物，發(fā)展前景可觀。白鮮堿具有多樣生 物活性，需要進(jìn)行更加深入的研究，這就需要較多的高含量白鮮堿，然而目前國內(nèi)尚無白鮮 堿提取工藝方面的相關(guān)專利，李翔等公開的文獻(xiàn)“從白鮮皮中同時(shí)制備涔酮、白鮮堿、黃柏 酮單體的方法”采用乙酸乙酯回流提取，硅膠常壓柱層析，石油醚-丙酮梯度洗脫，丙酮重結(jié) 晶，該方法提取率低，且晶形不理想。國外文獻(xiàn)主要通過人工合成白鮮堿，反應(yīng)條件不易控 制，且產(chǎn)品不穩(wěn)定，產(chǎn)率低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是客服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種適合工業(yè)生產(chǎn)，并且提取純化白 鮮皮中重要活性成分白鮮堿的工藝。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的(1)提取將粉碎后的白鮮皮用4-6倍(V/W)水回流提取雜質(zhì)，殘?jiān)稍锖笥?-15 倍(ν/W)的80% -95%體積濃度的乙醇-酸水溶液液泛法提取3-6小時(shí)，提取液冷卻、減壓 濃縮成稀浸膏；(2)樹脂吸附分離將上述稀浸膏調(diào)ρΗΙΟ-11，乙酸乙酯反復(fù)萃取，至萃余液生物 堿反應(yīng)為陰性。將乙酸乙酯萃取液上D101、AB-8、XAD-4或XAD-7大孔吸附樹脂飽和吸附， 石油醚洗脫雜質(zhì)，氯仿-乙醇(50 1-4 1)洗脫，HPLC跟蹤檢識，洗脫至無白鮮堿流分， 收集白鮮堿流分；(3)氧化鎂柱層析將白鮮堿流分干法上氧化鎂柱層析，戊醇-乙酸乙酯 (6 1-2 1)洗脫，收集白鮮堿流分；(4)重結(jié)晶將白鮮堿流分減壓濃縮，真空干燥得粗品。將粗品用熱無水乙醇飽和 溶解，冷卻，緩慢加入去離子水，靜置結(jié)晶，過濾冷凍干燥即得產(chǎn)品。所述乙醇-酸水溶液為乙醇與鹽酸水溶液的混合溶液，鹽酸濃度為總提取溶劑體積的 0. 1-0. 5%。所述調(diào)pH所用堿可選氨水溶液、氫氧化鈉溶液或碳酸氫鈉溶液。所述大孔樹脂洗脫條件洗脫流速控制在0. 5-lBV/h,每500ml洗脫液接收一部 分，洗脫至HPLC檢識無白鮮堿；樹脂用量為藥材等倍量。所述氧化鎂為與原料的比例為10 1-5 1，優(yōu)選比例7 1。綜合以上所述，本發(fā)明具有以下特點(diǎn)1)水回流提取雜質(zhì)，可除去部分水溶性雜質(zhì)，初步提高了產(chǎn)品質(zhì)量。2)以液泛法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的回流提取法、索式提取法、滲漉法、浸提法，快速、高效。3)酸醇提取提取，且較乙酸乙酯提取成本低。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。實(shí)施例1 將白鮮皮粉碎，取IOkg投入自制液泛提取罐，加入50L水提取，棄去提取液，殘?jiān)?真空干燥后加入100L含0. 鹽酸的85%乙醇溶液提取4小時(shí)，將提取液趁熱過濾，冷卻， 減壓濃縮至密度為1. 2，加10%氨水調(diào)pH至10，加乙酸乙酯反復(fù)萃取至萃余液生物堿反應(yīng) 為陰性。將乙酸乙酯萃取液上預(yù)處理好的XAD-4大孔吸附樹脂飽和吸附，先用4BV石油醚洗 脫雜質(zhì)，再用氯仿-乙醇(48 2)洗脫，HPLC跟蹤檢識，收集白鮮堿流分，減壓濃縮得到粗 提物；將相當(dāng)于粗提物5倍量的氧化鎂裝柱，預(yù)處理，將流分進(jìn)行氧化鎂柱層析，用戊醇_乙 酸乙酯(65 25)洗脫，將流分分別減壓濃縮、真空干燥得粗晶。將粗晶用無水乙醇加熱飽 和溶解，冷卻，緩慢加入1倍飽和液的去離子水，靜置結(jié)晶，過濾，冷凍干燥后稱重得白鮮堿 3. 8g(含量為 95. 4% )。實(shí)施例2:將白鮮皮粉碎，取20kg投入自制液泛提取罐，加入80L水提取，棄去提取液，殘?jiān)?真空干燥后加入300L含0. 5%鹽酸的80%乙醇溶液提取6小時(shí)，將提取液趁熱過濾，冷卻， 減壓濃縮至密度為1.3，加5%氫氧化鈉調(diào)pH至11，加乙酸乙酯反復(fù)萃取至萃余液生物堿 反應(yīng)為陰性。將乙酸乙酯萃取液上預(yù)處理好的DlOl大孔吸附樹脂飽和吸附，先用5BV石油 醚洗脫雜質(zhì)，再用氯仿-乙醇(75 5)洗脫，HPLC跟蹤檢識，收集白鮮堿流分，減壓濃縮得 到粗提物；將相當(dāng)于粗提物8倍量的氧化鎂裝柱，預(yù)處理，將流分進(jìn)行氧化鎂柱層析，用戊 醇-乙酸乙酯(75 25)洗脫，將流分分別減壓濃縮、真空干燥得粗晶。將粗晶用無水乙醇 加熱飽和溶解，冷卻，緩慢加入1. 5倍飽和液的去離子水，靜置結(jié)晶，過濾，冷凍干燥后稱重 得白鮮堿7. 8g(含量為96.1%)。實(shí)施例3 將白鮮皮粉碎，取50kg投入自制液泛提取罐，加入300L水提取，棄去提取液，殘?jiān)?真空干燥后加入400L含0. 2 %鹽酸的90 %乙醇溶液提取3小時(shí)，將提取液趁熱過濾，冷卻， 減壓濃縮至密度為1. 2，加10%氫氧化鈉調(diào)pH至10，加乙酸乙酯反復(fù)萃取至萃余液生物堿 反應(yīng)為陰性。將乙酸乙酯萃取液上預(yù)處理好的XAD-7大孔吸附樹脂飽和吸附，先用4BV石 油醚洗脫雜質(zhì)，再用氯仿-乙醇(85 15)洗脫，HPLC跟蹤檢識，收集白鮮堿流分，減壓濃 縮得到粗提物；將相當(dāng)于粗提物7倍量的氧化鎂裝柱，預(yù)處理，將流分進(jìn)行氧化鎂柱層析，用戊醇-乙酸乙酯(6 1)洗脫，將流分分別減壓濃縮、真空干燥得粗晶。將粗晶用無水乙 醇加熱飽和溶解，冷卻，緩慢加入1. 5倍飽和液的去離子水，靜置結(jié)晶，過濾，冷凍干燥后稱 重得白鮮堿19. 6g(含量為96. 3% )。實(shí)施例4 將白鮮皮粉碎，取50kg投入自制液泛提取罐，加入200L水提取，棄去提取液，殘 渣真空干燥后加入600L含0. 鹽酸的95%乙醇溶液提取4小時(shí)，將提取液趁熱過濾，冷 卻，減壓濃縮至密度為1. 2，加5 %氨水調(diào)pH至11，加乙酸乙酯反復(fù)萃取至萃余液生物堿反 應(yīng)為陰性。將乙酸乙酯萃取液上預(yù)處理好的AB-8大孔吸附樹脂飽和吸附，先用5BV石油醚 洗脫雜質(zhì)，再用氯仿-乙醇(65 15)洗脫，HPLC跟蹤檢識，收集白鮮堿流分，減壓濃縮得 到粗提物；將相當(dāng)于粗提物10倍量的氧化鎂裝柱，預(yù)處理，將流分進(jìn)行氧化鎂柱層析，用戊 醇-乙酸乙酯(5 1)洗脫，將流分分別減壓濃縮、真空干燥得粗晶。將粗晶用無水乙醇加 熱飽和溶解，冷卻，緩慢加入1倍飽和液的去離子水，靜置結(jié)晶，過濾，冷凍干燥后稱重得白 鮮堿20. lg(含量為95.8% )0
權(quán)利要求
白鮮皮中單體化合物的提純方法，其特征在于它包括以下步驟(1)提取將粉碎后的白鮮皮用4-6倍(V/W)水回流提取雜質(zhì)，殘?jiān)稍锖笥?-15倍(V/W)的80％-95％體積濃度的乙醇-酸水溶液液泛法提取3-6小時(shí)，提取液冷卻、減壓濃縮成稀浸膏；(2)樹脂吸附分離將上述稀浸膏調(diào)pH，乙酸乙酯反復(fù)萃取，至萃余液生物堿反應(yīng)為陰性。將乙酸乙酯萃取液上D101、AB-8、XAD-4或XAD-7大孔吸附樹脂飽和吸附，石油醚洗脫雜質(zhì)，氯仿-乙醇(50∶1-4∶1)洗脫，HPLC跟蹤檢識，洗脫至無白鮮堿流分，收集白鮮堿流分；(3)氧化鎂柱層析將白鮮堿流分干法上氧化鎂柱層析，戊醇-乙酸乙酯(6∶1-2∶1)洗脫，收集白鮮堿流分；(4)重結(jié)晶將白鮮堿流分減壓濃縮，真空干燥得粗品。將粗品用熱無水乙醇飽和溶解，冷卻，緩慢加入去離子水，靜置結(jié)晶，過濾冷凍干燥即得產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白鮮皮中單體化合物的提純方法，其特征在于所述乙醇_酸 水溶液為乙醇與鹽酸水溶液的混合溶液，鹽酸濃度為總提取溶劑體積的0. 1-0. 5%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白鮮皮中單體化合物的提純方法，其特征在于所述調(diào)pH所用 堿可選氨水溶液、氫氧化鈉溶液或碳酸氫鈉溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白鮮皮中單體化合物的提純方法，其特征在于所述大孔樹脂 洗脫條件洗脫流速控制在0. 5-lBV/h，每500ml洗脫液接收一部分，洗脫至HPLC檢識無白 鮮堿；樹脂用量為藥材質(zhì)量的等倍量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白鮮皮中單體化合物的提純方法，其特征在于所述氧化鎂與 原料的比例為10 1-5 1。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從白鮮皮中分離純化高純度的單體化合物白鮮堿的方法。該方法包括用酸醇經(jīng)液泛法提取，大孔樹脂吸附和氧化鎂柱層析分離精制、重結(jié)晶。本發(fā)明制備的白鮮堿含量達(dá)95％以上，適于工業(yè)化生產(chǎn)，能夠提取純度較高的白鮮堿。
文檔編號C07D491/048GK101805344SQ20101015610
公開日2010年8月18日 申請日期2010年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月27日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司