專利名稱：：制造酰肼的改良方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及自胼及?；戎苽漉ｋ莸母牧己铣煞椒?。所述酰胼產(chǎn)物具有可用于將卡奇霉素連接至單克隆抗體的經(jīng)保護(hù)硫醇基團(tuán)。
背景技術(shù)：
：麥羅塔(MYLOTARG)(吉妥單抗奧佐米星(gemtuzumabozogamicin))也稱為CMA-676或僅CMA，其由通過酸可水解連接體與卡奇霉素結(jié)合的抗⑶33的單克隆抗體組成。當(dāng)經(jīng)衍生化的卡奇霉素與DNA小溝結(jié)合時(shí)，其干擾DNA進(jìn)展并最終造成癌細(xì)胞死亡。所述市售產(chǎn)品以麥羅塔名稱作為靶向第一抗體的化學(xué)治療劑出售，且當(dāng)前已批準(zhǔn)用于治療老年患者的急性髓性白血病(AML)。統(tǒng)稱為卡奇霉素或LL-E33288復(fù)合物的抗菌及抗腫瘤劑強(qiáng)效家族成員闡述于美國專利第4，970，198號(hào)；第4，939，244號(hào)及第5，079，233號(hào)中。所述家族成員可用于與作為載體的單克隆抗體形成治療有用的免疫偶聯(lián)物?？贵w可為抗-CD33抗體(例如，hp67.6)、抗-CD22抗體(例如，G544)、抗-路易斯Y抗體(anti-LewisYantibody)(例如，G193)、抗-5T4抗體(例如，H8)或抗-CD20抗體(例如，利妥昔單抗(rituximab))?？ㄆ婷顾丶易宄蓡T優(yōu)選為N-?；ㄆ婷顾兀鼉?yōu)選為N-乙?；每ㄆ婷顾?。卡奇霉素家族成員含有甲基三硫醚，其可與合適硫醇反應(yīng)形成二硫醚，同時(shí)引入可用于將卡奇霉素衍生物連接至載體的酰胼官能團(tuán)。所述與卡奇霉素的反應(yīng)的實(shí)例在美國專利第5，053，394號(hào)中給出。所述卡奇霉素酰胼衍生物經(jīng)由形成腙而連接至單克隆抗體。例如，將藥物的酰胼衍生物連接至氧化抗體的一般方法闡述于麥克恩(T.J.McKearn)等人，美國專利第4，671，958號(hào)中。美國專利第5，770，701號(hào)涉及制備目標(biāo)形式的LL-E33288復(fù)合物的二硫醚化合物的方法。使連接體4-(4-乙?；?苯氧基)丁酸與卡奇霉素酰胼衍生物(優(yōu)選為卡奇霉素N-乙?；鵜二甲基酰胼)縮合以提供羧酸腙，所述羧酸腙用N-羥基琥珀酰亞胺進(jìn)一步處理，得到準(zhǔn)備用以與所選生物大分子偶聯(lián)的OSu酯(N-琥珀酰亞胺基氧基)?？ㄆ婷顾睾型ㄟ^造成雙鏈DNA斷裂的-S-S-鍵結(jié)還原而激活的烯二炔彈頭。因此，其中?；袔€基官能團(tuán)的經(jīng)單?；碾菘捎糜趯⒖ㄆ婷顾剡B接至單克隆抗體。3-甲基-3-巰基丁酸酰胼(也稱為DMH連接體或CL-332258)是用于將卡奇霉素連接至單克隆抗體以制造(例如)吉妥單抗奧佐米星或伊妥單抗奧佐米星(inotuzumabozogamicin)的優(yōu)選含巰基N-酰胼。隨后將經(jīng)衍生化的卡奇霉素激活以與經(jīng)人源化的單克隆抗體偶聯(lián)得到CMA-676。當(dāng)前，DMH連接體可通過5步反應(yīng)方法經(jīng)由中間體對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰胼5制備。(化學(xué)方程式I-V)。在于USA實(shí)施的本制造過程中，對(duì)-甲氧基-芐基硫醇與3，3-二甲基丙烯酸的邁克爾加成(Michaeladdition)是經(jīng)哌啶輔助(化學(xué)方程式I)?；瘜W(xué)方程式I<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>所得硫醚酸(1)與草酰氯在二氯甲烷中反應(yīng)形成對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰氯(2)(化學(xué)方程式II)?；瘜W(xué)方程式II<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>在低溫(-70°C)下將酰氯(2)緩慢添加至胼/二氯甲烷(比率為約28%，ν/ν)的混合物中。以約74%產(chǎn)率形成對(duì)應(yīng)的對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼(3)(化學(xué)方程式III)化學(xué)方程式III<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>然而，期望產(chǎn)物對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼(3)通常含有約20%的不期望副產(chǎn)物雙甲氧基芐基硫醚酰胼(參見下文化學(xué)方程式VI)。在酸性條件下移除芐基保護(hù)基團(tuán)(化學(xué)方程式IV)，隨后酸鹽中和及純化(化學(xué)方程式V)，以45%產(chǎn)率提供3-甲基-3-巰基丁酸酰胼(5)?；瘜W(xué)方程式IV<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰肼陰離子交換樹脂MW=IM㈣<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>化學(xué)方程式V<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>不期望副產(chǎn)物雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)是自產(chǎn)物對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼與起始材料對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰氯的反應(yīng)產(chǎn)生(化學(xué)方程式VI)。所述副產(chǎn)物產(chǎn)生導(dǎo)致產(chǎn)率及質(zhì)量較低?；瘜W(xué)方程式VI<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>雙對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰肼使用原始方法程序，產(chǎn)生約20%的量的雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)。顯然，自化學(xué)方程式III存在所述含量或更高含量的不期望副產(chǎn)物非我們所樂見。本發(fā)明闡述克服此問題并使不期望副產(chǎn)物的產(chǎn)率降低的技術(shù)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的某些實(shí)施例提供合成酰胼(例如，3-甲基-3-巰基丁酸酰胼(4))同時(shí)將副產(chǎn)物雙甲氧基芐基硫醚酰胼(例如，(6))的含量自約20%減少至約3-5%的方法。在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例中，將甲氧基芐基硫醚酰氯(2)溶液添加至經(jīng)攪拌的胼/二氯甲烷混合物中，所述混合物較原始方法中的混合物更加稀釋(例如，體積比=14%，相對(duì)于原始方法中的約24%至32%ν/ν)。優(yōu)選稀釋體積比為約14%ν/ν。任選地且不加限制，其它非反應(yīng)性(或惰性)經(jīng)鹵化溶劑(替代二氯甲烷或與其組合)可用于本文所述的本發(fā)明實(shí)施例中，以形成向其中添加酰氯的胼混合物。所述其它溶劑的優(yōu)選實(shí)例包括四氯化碳、氯仿、二氯乙烷及氯苯。在某些實(shí)施例中，二氯甲烷(或?qū)?yīng)惰性溶劑)的量加倍，此可顯著減少不期望雙酰胼副產(chǎn)物的量。在某些實(shí)施例中，將甲氧基芐基硫醚酰氯溶液以穩(wěn)定速率連續(xù)地而非逐份添加至胼/二氯甲烷漿液中。在某些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)添加速率以使反應(yīng)溫度保持在-68°C至-75°C。在某些實(shí)施例中，于圓底燒瓶中使用介于300rpm至400rpm之間的攪動(dòng)速度，或于莫頓(Morton)型燒瓶中使用270rpm的攪動(dòng)速度。本發(fā)明某些方法以91.濃度以85%產(chǎn)率獲得對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼(3)，形成約4.7%的雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)。在本發(fā)明的另一實(shí)施例中，已發(fā)現(xiàn)，盡管通過使用更加稀釋的二氯甲烷系統(tǒng)已獲得改良，但仍需要刮掉反應(yīng)器容器底部及側(cè)部的冰凍結(jié)晶的胼。先前標(biāo)準(zhǔn)操作是將二氯甲烷/胼溶液一起冷卻至約-70°C。此使得相當(dāng)部分的胼在容器側(cè)部結(jié)晶及沉淀。為確保所有胼都可為反應(yīng)所利用，需要自容器壁刮掉所述物質(zhì)以使其形成可攪拌的漿液。為避免所述情形，發(fā)明了作為本發(fā)明某些實(shí)施例一部分的替代程序。所述替代程序涉及將二氯甲烷冷卻至-68°C至_75°C，優(yōu)選為-70°C，隨后向所述冷二氯甲烷中緩慢逐滴添加胼以形成均勻漿液。此新程序可形成更加均勻的胼漿液，此使得燒瓶?jī)?nèi)壁上形成的結(jié)晶胼最少化，并減少或消除了刮削燒瓶的需要。此使得反應(yīng)可利用期望量的胼，有助于減少雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)的形成。本發(fā)明的某些實(shí)施例提供涉及向相當(dāng)稀釋(自原始方法角度)且可攪拌的經(jīng)冷卻胼/二氯甲烷非均質(zhì)混合物(優(yōu)選具有約14%的胼濃度)中連續(xù)添加甲氧基芐基硫醚酰氯(2)溶液的方法。將甲氧基芐基硫醚酰氯溶液以大致穩(wěn)定的速率連續(xù)地而非逐份添加至胼/二氯甲烷漿液中。優(yōu)選調(diào)節(jié)添加速率以使反應(yīng)溫度保持在_68°C至_75°C。優(yōu)選為于圓底燒瓶中介于300rpm至400rpm之間的攪動(dòng)速度，或于莫頓型燒瓶中270rpm的攪動(dòng)速度。本發(fā)明某些實(shí)施例的改良方法使副產(chǎn)物雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)的含量自先前所達(dá)成的約20%含量降低至約3-5%或更低。中間體1的改良合成使得合成吉妥單抗奧佐米星的總方法效率得以提高。本發(fā)明的某些實(shí)施例提供自胼及酰基氯制備酰胼的方法，其包含以下步驟(a)制備包含胼及惰性溶劑的實(shí)質(zhì)上已攪拌均勻的漿液；及(b)向所述漿液中連續(xù)添加酰基氯。在所述實(shí)施例的另一方面中，在添加步驟(b)中所述?；葘?shí)質(zhì)上逐滴添加至所述漿液中。本發(fā)明的某些實(shí)施例提供自?；u及胼制備酰胼的方法。在一個(gè)實(shí)施例中，所述制備是經(jīng)由酰基氯的親電?；驶c胼的親核氮間的化學(xué)反應(yīng)實(shí)現(xiàn)。與適于本發(fā)明的?；驶B接的特定取代基可為不妨礙酰胼鍵結(jié)形成的任一部分，包括納入保護(hù)基團(tuán)以防止妨礙酰胼鍵結(jié)形成的所述部分。保護(hù)基團(tuán)的使用及移除闡述于麥克妙(McOmie)，有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán)(ProtectingGroupsinOrganicChemistry)，普雷那姆出版社(PlenumPress),NY,1973；及格林(Greene)及伍茲(Wuts)，有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)(ProtectingGroupsinOrganicSynthesis)，第4版，約翰威利父子出版公司(Johnffiley&Sons),NY,2006中。例如，在本發(fā)明的某些實(shí)施例中，?；u包含經(jīng)保護(hù)硫醇。經(jīng)保護(hù)硫醇的實(shí)例包括但不限于芐基硫醚。在本發(fā)明的另一方面中，?；染哂幸韵陆Y(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中P是硫醇保護(hù)基團(tuán)，R1及R2各選自由C1-C5烷基組成的群組，且L是亞烷基連接體。亞烷基連接體L的實(shí)例包括但不限于L是-(CH2)n-,其中η是1至5的整數(shù)。在某些實(shí)施例中，R1及R2相同，例如當(dāng)R1及R2二者均為相同的C1-C5烷基時(shí)。C1-C5烷基的實(shí)例包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基，包括其直鏈及具支鏈同分異構(gòu)體二者。硫醇保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于芐基，其中苯基部分任選地經(jīng)取代。可選取代基的實(shí)例包括但不限于烷氧基，例如甲氧基、乙氧基及其類似物。因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，?；染哂幸韵陆Y(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>本發(fā)明的另一實(shí)施例是自胼及?；戎苽漉ｋ莸姆椒ǎ浒苽浒菁岸栊匀軇┑膶?shí)質(zhì)上已攪拌均勻的漿液的第一步驟。在所述實(shí)施例的另一方面中，惰性溶劑是二氯甲烷。本發(fā)明的另一實(shí)施例是自胼及?；戎苽漉ｋ莸姆椒āＴ谒鰧?shí)施例的另一方面中，酰胼產(chǎn)物具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中P是硫醇保護(hù)基團(tuán)，且L&R1及R2可如上所述。在所述實(shí)施例的再一方面中，P是任選地在苯環(huán)上經(jīng)取代的芐基。在所述實(shí)施例的另一方面中，P是對(duì)-甲氧基芐基，且R1及R2各選自由C1-C5烷基組成的群組，且L是亞烷基連接體。亞烷基連接體的實(shí)例包括但不限于L是-CH2-。在一個(gè)實(shí)施例中，R1及R2各獨(dú)立為甲基。本發(fā)明的另一實(shí)施例是按照本發(fā)明方法制備的酰胼產(chǎn)物。在一個(gè)實(shí)施例中，期望酰胼具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>或其鹽。在本發(fā)明的再一實(shí)施例中，酰胼是3-甲基-3-巰基丁酸酰胼。在本發(fā)明的另一方面中，期望酰胼產(chǎn)物含有小于5%的具有以下結(jié)構(gòu)的雙酰胼副產(chǎn)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中R及R’是任選地經(jīng)取代的烷基、雜烷基或雜烷芳基。在所述實(shí)施例的另一方面中，雙酰胼副產(chǎn)物中的R及R’部分各為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中P是硫醇保護(hù)基團(tuán)，R1及R2各選自由C1-C5烷基組成的群組，且L是亞烷基連接體。亞烷基連接體L的實(shí)例包括但不限于-CH2-。在所述實(shí)施例的另一方面中，R1及R2各獨(dú)立為甲基。在所述實(shí)施例的另一方面中，P是任選地在苯環(huán)上經(jīng)取代的芐基；實(shí)例包括但不限于P是對(duì)-甲氧基芐基。本發(fā)明的另一實(shí)施例是自胼及?；戎苽漉ｋ莸姆椒?，其中所述酰胼產(chǎn)物含有小于5%的具有以下結(jié)構(gòu)的雙酰胼副產(chǎn)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>本發(fā)明的另一實(shí)施例是自胼及酰基氯制備酰胼的方法，其包含制備包含胼及惰性溶劑的實(shí)質(zhì)上已攪拌均勻的漿液的第一步驟及隨后向所述漿液中連續(xù)添加?；鹊牡诙襟E。在所述實(shí)施例的另一方面中，調(diào)節(jié)所述酰氯溶液的連續(xù)添加以使反應(yīng)溫度保持在約_68°C至約-75V。在所述實(shí)施例的再一方面中，所述胼漿液實(shí)質(zhì)上均勻。在本發(fā)明的另一實(shí)施例中，酰胼鍵結(jié)是按照包含以下步驟的方法制備(a)將包含經(jīng)攪拌惰性溶劑的反應(yīng)容器冷卻至期望低溫；(b)以連續(xù)方式向所述反應(yīng)容器中添加胼，由此制備包含胼及惰性溶劑的實(shí)質(zhì)上已攪拌均勻的漿液；(c)以連續(xù)方式向所述漿液中添加酰氯，由此形成酰胼鍵結(jié)。在所述實(shí)施例的另一方面中，惰性溶劑是二氯甲烷。在本發(fā)明的另一實(shí)施例中，胼漿液是通過包含以下步驟的方法制備(a)將惰性溶劑冷卻至約_68°C至約_75°C溫度，及(b)向所述冷惰性溶劑中逐滴添加溶解于惰性溶劑中的胼。在所述實(shí)施例的另一方面中，惰性溶劑是二氯甲烷。在所述實(shí)施例的又一方面中，將所述胼漿液在約270rpm至約400rpm的速度下攪拌。本發(fā)明的另一實(shí)施例是制備卡奇霉素家族成員與作為載體的單克隆抗體的免疫偶聯(lián)物的方法，其包含按照本發(fā)明方法制備經(jīng)單酰基化的胼(其中?；蠸經(jīng)保護(hù)的巰基官能團(tuán))，移除保護(hù)基團(tuán)并使用所得酰胼來制備所述免疫偶聯(lián)物。本發(fā)明的另一實(shí)施例是制備吉妥單抗奧佐米星或伊妥單抗奧佐米星的方法，其包含按照本發(fā)明方法制備連接體3-甲基-3-巰基丁酸酰胼并使用所述連接體來制造吉妥單抗奧佐米星或伊妥單抗奧佐米星的步驟。圖1是制備對(duì)-甲氧基芐基硫醚酸(1)的示意性方法。圖2是制備對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰氯(2)及對(duì)_甲氧基芐基硫醚酸酰胼⑶的示意性方法。圖3是制備DMH連接體(5)的示意性方法。具體實(shí)施例方式對(duì)-甲氧基芐基硫醇在哌啶中經(jīng)歷與3，3_二甲基丙烯酸的邁克爾加成。試劑的量影響反應(yīng)結(jié)果。在一個(gè)實(shí)施例中，對(duì)-甲氧基芐基硫醇的量略微莫耳過量于3，3_二甲基丙烯酸，例如介于0.354(2.3mol)與0.362kg(2.35mol)之間的范圍內(nèi)。若量低于所述范圍，則隨后可能不完全反應(yīng)。若量高于所述范圍，則過量試劑可能使處理變得復(fù)雜。將反應(yīng)混合物加熱(注意不要超過約98°C)最少約15小時(shí)以避免形成過多雜質(zhì)。通過用二氯甲烷稀釋并用鹽酸水溶液及隨后水洗滌移除哌啶。在添加HCl之前及期間需要將溫度保持高于50°C且低于90°C以避免反應(yīng)產(chǎn)物沉淀。如實(shí)驗(yàn)部分所指示，將反應(yīng)物進(jìn)一步冷卻并隨后用二氯甲烷萃取。所用溶劑的量隨反應(yīng)規(guī)模成正比調(diào)整，以獲得最佳結(jié)果及純化。將所得CH2Cl2產(chǎn)物溶液用硫酸鎂干燥，凈化，在真空中濃縮，隨后用庚烷稀釋以沉淀粗中間體，將粗中間體過濾并用庚烷洗滌。純化是通過將粗物質(zhì)再溶解于二氯甲烷中并再次用庚烷沉淀實(shí)現(xiàn)。將經(jīng)純化的對(duì)-甲氧基芐基硫醚酸(1)過濾分離，用庚烷洗滌并在真空中干燥。使用草酰氯以二氯甲烷作為溶劑將對(duì)_甲氧基芐基硫醚酸(1)轉(zhuǎn)化成對(duì)應(yīng)酰氯。草酰氯應(yīng)對(duì)于對(duì)-甲氧基芐基硫醚酸莫耳過量存在以完全反應(yīng)。通過在真空中濃縮以移除二氯甲烷/過量草酰氯而將酰氯產(chǎn)物分離為油狀物。將所得油狀物用二氯甲烷稀釋，并在約3-5小時(shí)時(shí)間內(nèi)于65°C至75°C溫度范圍內(nèi)緩慢添加至胼與二氯甲烷的經(jīng)稀釋混合物中。本發(fā)明的一個(gè)方面是形成包含胼及諸如二氯甲烷等惰性溶劑的均勻漿液。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，均勻漿液是通過將液體胼緩慢逐滴添加至在開始添加胼之前已經(jīng)預(yù)冷卻至約68°C至_75°C(優(yōu)選為-70°C)的二氯甲烷中來制備。相反，將胼存于二氯甲烷中的預(yù)混合溶液冷卻至相同溫度會(huì)不利地導(dǎo)致形成結(jié)晶胼，結(jié)晶胼集中在反應(yīng)容器的側(cè)部。不受限于理論，我們認(rèn)為將胼緩慢逐滴添加至經(jīng)預(yù)冷卻的二氯甲烷中并控制二氯甲烷中胼的最大濃度使得形成較小、較均勻的胼晶體，所述胼晶體仍懸浮于二氯甲烷的經(jīng)攪拌混合物中并實(shí)質(zhì)上不會(huì)凍結(jié)在容器壁上。形成實(shí)質(zhì)上均勻的漿液有助于確保胼仍與經(jīng)攪拌的二氯甲烷接觸且可為與引入的酰氯溶液的反應(yīng)所利用。形成均勻漿液排除了現(xiàn)有方法中所需要的刮削反應(yīng)燒瓶?jī)?nèi)部的需要。另外，此確保反應(yīng)可以利用期望量的胼，此也使所形成的雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)的量減少。二氯甲烷中的胼濃度影響作為副產(chǎn)物形成的雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)的量。在現(xiàn)有方法中，胼/二氯甲烷的濃度為約24-32%ν/ν。將胼/二氯甲烷(更加稀釋胼)的比率減半至約12-16%ν/ν(優(yōu)選為約14%ν/ν)使得所形成的不期望雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)的量降低(見表1)。表1改良后的方法結(jié)果實(shí)驗(yàn)編號(hào)I酰肼濃度*雙酰肼副產(chǎn)物(％)I經(jīng)校正酰肼產(chǎn)率(%)(%)~791.6196985Λ<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>*通過高壓液相色譜測(cè)定在本發(fā)明的某些實(shí)施例中，將酰氯溶液以穩(wěn)定速率連續(xù)地而非逐份添加至胼/二氯甲烷漿液中。所添加酰氯的量及其添加速率二者均影響期望的甲氧基芐基硫醚(3)的產(chǎn)率。若添加太少酰氯，則可能形成過多量的雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)副產(chǎn)物。而且，若酰氯的添加時(shí)間太短，少于3hr，則可能形成過多量的雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)副產(chǎn)物?？烧{(diào)節(jié)添加速率，以使反應(yīng)溫度保持在_68°C至_75°C。若反應(yīng)溫度升至較高溫度，則也可能形成過多量的雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)副產(chǎn)物。優(yōu)選為于圓底燒瓶中以300rpm至400rpm之間的攪動(dòng)速度或在莫頓型燒瓶中以270rpm的攪動(dòng)速度攪拌胼漿液。所述改良方法的兩個(gè)方面-使用更加稀釋的胼/二氯甲烷混合物及形成均勻漿液使得副產(chǎn)物雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)的含量自約20%減少至約3-5%。形成胼的改良方法步驟使合成連接體3-甲基-3-巰基丁酸酰胼的總效率得以提高，且因此也使制備麥羅塔(吉妥單抗奧佐米星)的總效率得以提高。反應(yīng)完成后，在真空中濃縮反應(yīng)混合物，并用氫氧化鈉的甲醇溶液(約4-5%)處理殘留物。將所述溶液在真空中濃縮，用二氯甲烷稀釋，用水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，凈化并在真空中濃縮成濃縮物。應(yīng)注意使用足量硫酸鎂以完全干燥產(chǎn)物，以免在下一合成步驟中出現(xiàn)產(chǎn)物分解或產(chǎn)物結(jié)晶的干擾。將最終濃縮物用1.33倍對(duì)-甲氧基芐基硫醚酸(1)重量的二氯甲烷稀釋，并將所述溶液添加至7.6倍對(duì)-甲氧基芐基硫醚酸(1)重量的二乙醚中。將1.83倍對(duì)-甲氧基芐基硫醚酸(1)重量的諸如庚烷、己烷、辛烷或異己烷(優(yōu)選為庚烷)等脂族烴溶劑添加至所得漿液中，以完成沉淀。將對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼(6)過濾分離，用庚烷洗滌，并在真空中干燥。在苯甲醚存在下使用三氟乙酸作為溶劑用三氟甲磺酸處理對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼(3)。必須注意，在添加及隨后反應(yīng)時(shí)間期間反應(yīng)溫度不應(yīng)超過約20°C以避免形成不期望雜質(zhì)。在對(duì)-甲氧基芐基保護(hù)基團(tuán)的解離完成后，使反應(yīng)混合物在甲醇中驟冷，并過濾以移除固體副產(chǎn)物。將濾液在真空中濃縮，溶解于水中，用二氯甲烷洗滌，并用陰離子交換樹脂處理以得到3-甲基-3-巰基丁酸酰胼(5)。通過過濾移除樹脂，并隨后向粗產(chǎn)物溶液中添加鹽酸水溶液以形成HCl鹽。將批料在真空中濃縮，溶解于乙醇中，通過過濾凈化并在真空中濃縮。將所述濃縮物用乙酸乙酯稀釋并在真空中濃縮。再次，將殘留物用乙酸乙酯稀釋，隨后過濾分離。將濕濾餅與乙酸乙酯加熱至約48°C至55°C，冷卻，過濾并抽吸干燥。通過在水中用陰離子交換樹脂處理將干燥HCl鹽轉(zhuǎn)化成游離堿。通過過濾移除樹脂，并在真空中濃縮濾液。將濃縮物溶解于乙醇中，在真空中濃縮，在二乙醚中制漿，并在真空中濃縮。作為最終純化，將3-甲基-3-巰基丁酸酰胼(5)溶解于二氯甲烷中，通過過濾凈化，并用硅石(其隨后通過過濾移除)處理。通過在真空中濃縮來分離溶液中的經(jīng)純化產(chǎn)物。在一優(yōu)選純化方法(展示于實(shí)例15中)中，在20°C士3°C下將3-甲基-3-巰基丁酸酰胼(5)溶解于50份(v/w)二氯甲烷中，攪拌30分鐘并過濾。將所得溶液用0.7-1份(w/w，相對(duì)于粗連接體)硅膠處理，攪拌30分鐘，過濾，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至干燥。所得固體用正庚烷研磨。分離并在真空中干燥后，以約76%產(chǎn)率獲得自由流動(dòng)固體形式的3-甲基-3-巰基丁酸酰胼(5)。本發(fā)明的一個(gè)方面是提供含有小于5%的不期望副產(chǎn)物雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)的對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼的方法。所述改良方法包含用于使硫醚酰氯與胼結(jié)合以形成對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼的改進(jìn)方法。所述方法步驟示意性地顯示于化學(xué)方程式I中。不期望副產(chǎn)物雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)是自產(chǎn)物對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼(3)與起始材料對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰氯(2)的結(jié)合產(chǎn)生。產(chǎn)生不期望的雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)導(dǎo)致質(zhì)量及產(chǎn)率較低。在本發(fā)明的另一方面中，所述方法揭示內(nèi)容可概念性地理解為涵蓋較寬應(yīng)用。具體反應(yīng)順序(化學(xué)方程式III)可根據(jù)化學(xué)方程式VII加以推廣化學(xué)方程式VII<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>P是硫醇保護(hù)基團(tuán)Rl、R2是烷基L是亞烷基連接體當(dāng)在方法步驟中物質(zhì)闡述為連續(xù)添加時(shí)，則意指所述添加是在一段時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定地而非逐份或一次性地發(fā)生。逐滴添加液體或通過穩(wěn)定流添加液體是連續(xù)添加的實(shí)例。在某些實(shí)施例中，連續(xù)添加是通過將反應(yīng)放熱的物質(zhì)的添加速率控制在足夠緩慢以使反應(yīng)物溫度保持在一定溫度范圍內(nèi)的速率實(shí)現(xiàn)。本文所用的漿液是指固相與液相的組合，其充分混合在一起且通常冷卻至支持固相及液相二者均存在的溫度，而所述混合物在環(huán)境溫度下將為純液體。有時(shí)，漿液用以指相同物質(zhì)的固體/液體混合物的混合物，例如冰/水混合物，其中冰相對(duì)細(xì)碎并與液體水充分混合。在本發(fā)明上下文中，漿液可指自兩種物質(zhì)(例如胼及諸如二氯甲烷等溶劑)的組合形成的固體/液體混合物。在經(jīng)冷卻的胼/二氯甲烷漿液中，認(rèn)為液相含有二氯甲烷與胼的混合物，而認(rèn)為固相主要為胼。術(shù)語“烷基”包括具有1個(gè)至10個(gè)碳原子的直鏈或具支鏈烷基，且優(yōu)選為具有1個(gè)至5個(gè)碳原子的低碳數(shù)烷基。例如，包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、新戊基、叔戊基、2-甲基丁基、正己基、異己基、庚基、異庚基、辛基、異辛基、壬基、癸基及其類似物。術(shù)語“亞烷基”包括具有1個(gè)至10個(gè)碳原子的烷烴的直鏈及具支鏈二價(jià)基團(tuán)，例如亞甲基(-CH2-)、亞乙基(-CH2CH2-)、亞丙基、亞丁基及亞戊基。術(shù)語“雜烷基”是指其中一或多個(gè)碳原子被雜原子(氧、硫、氮或磷原子)置換的本文所定義烷基，且可任選地含有額外雜原子。術(shù)語雜烷芳基是指如上所述但進(jìn)一步經(jīng)芳基部分取代的雜烷基部分，其中所述芳基部分可任選地經(jīng)取代。任選地經(jīng)取代的芳基包括苯基及經(jīng)取代苯基。在經(jīng)取代苯基中，一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)可選取代基可能取代苯環(huán)上的氫，且位于芐基碳的亞甲基的鄰位、間位及/或?qū)ξ?或其它連接點(diǎn))。在實(shí)例1中，甲氧基位于亞甲基的對(duì)位?？蛇x芳基取代基的非限制性實(shí)例包括C1-C5烷基、C1-Qg氧基、C1-C5鹵代烷基W1-C5鹵代烷氧基，其中與烷基或烷氧基碳連接的氫原子可被鹵素原子置換，如(例如)在-CF3及-OCF3中。以下非限制性實(shí)例闡釋本發(fā)明。實(shí)例1對(duì)-甲氧基芐基硫醚酸(1)的原始制備參考化學(xué)方程式I，向裝備有熱電偶、機(jī)械攪拌器、頂部帶有N2入口的回流冷凝器及250mL壓力平衡加料漏斗的5L圓底燒瓶中加入400g，465mL，4.70mol哌啶。將3，3-二甲基丙烯酸(215g，2.15mol)逐份添加至經(jīng)攪拌的5L反應(yīng)燒瓶中。將反應(yīng)物在N2中劇烈攪拌。添加期間使反應(yīng)溫度保持低于35°C至40°C(注強(qiáng)放熱，即，排放氣體)。將對(duì)-甲氧基芐基硫醇(386g，323mL，2.32mol)經(jīng)由壓力平衡加料漏斗經(jīng)15分鐘加入(5L)反應(yīng)燒瓶中。將混合物在N2中邊攪拌邊加熱至82°C至88°C。使反應(yīng)溫度在所述范圍內(nèi)保持15分鐘。注放熱。將澄清黃色混合物在N2中邊攪拌邊加熱至92°C至95°C，保持最少15小時(shí)。取ImL樣品用于HPLC分析。當(dāng)以面積計(jì)3，3-二甲基丙烯酸剩余小于3%時(shí)，認(rèn)為反應(yīng)完成。通過移除加熱包將反應(yīng)物冷卻至70°C至75°C。將3M鹽酸溶液(1，900mL,2，090g)經(jīng)由IL壓力平衡加料漏斗添加至經(jīng)攪拌的黃色溶液中，同時(shí)保持溫度低于90°C。最終溫度為70°C至75°C。通過施用冷水浴將混合物冷卻至20°C至25°C。將二氯甲烷(l，600g，l，210mL)加入至所述非均質(zhì)混合物中。將所述混合物攪拌5分鐘。檢測(cè)燒瓶中上部水性層的pH值，并視需要添加3MHCL直至所述水性層的PH值小于2。將所述5L反應(yīng)燒瓶的全部所含物轉(zhuǎn)移至4L分液漏斗中。使所述兩層分離最少10分鐘。將有機(jī)(底)層自分液漏斗轉(zhuǎn)移回5L反應(yīng)燒瓶中。將水性(頂)層自分液漏斗轉(zhuǎn)移至(4L)愛倫美氏燒瓶(Erlenmeyerflask)中。經(jīng)10分鐘將3M鹽酸溶液(1,050mL,1,154g)經(jīng)由1，OOOmL壓力平衡加料漏斗加入至5L容器中的二氯甲烷溶液中。檢測(cè)燒瓶中上部水性層的PH值，并視需要添加3MHCL直至所述水性層的pH值小于2。將所述5L反應(yīng)燒瓶的全部所含物轉(zhuǎn)移至4L分液漏斗中。記錄合并的體積。使所述兩層分離最少10分鐘。將有機(jī)(底)層自分液漏斗轉(zhuǎn)移至4L干凈愛倫美氏燒瓶中。將水性(頂)層自分液漏斗轉(zhuǎn)移至4L干凈愛倫美氏燒瓶中。將水性層合并至5L反應(yīng)燒瓶中。向先前步驟中所獲得的水溶液中加入二氯甲烷(305mL，400g)。將混合物攪拌最少5分鐘。將5L燒瓶的全部所含物轉(zhuǎn)移至6L分液漏斗中，并記錄合并的體積。使所述兩層沉降至少5分鐘。將有機(jī)(底)層自分液漏斗轉(zhuǎn)移至4L愛倫美氏燒瓶中。用1，OOOmL水洗滌所述二氯甲烷溶液。將混合物充分?jǐn)嚢?至2分鐘，并隨后使其沉降最少10分鐘。分離水性層。量測(cè)燒瓶中水性層的PH值。合并水性層并丟棄。向二氯甲烷溶液中添加無水硫酸鎂(IlOg)，并攪拌至少15分鐘。將(5L)反應(yīng)燒瓶在800mL、900mL及1，OOOmL水平處預(yù)作標(biāo)記。使用抽吸，通過帶有濾紙(沃特曼(Whatman)#1)的15cm布氏漏斗(Buchnerfunnel)將黃色混合物過濾至5L反應(yīng)燒瓶中。用300mL，400g二氯甲烷沖洗燒瓶及濾餅。如下對(duì)所述二氯甲烷溶液實(shí)施濃縮給5L圓底燒瓶裝備機(jī)械攪拌器及配備有熱電偶的克氏蒸餾頭(Claisenstillhead)。使所述蒸餾頭與30cm簡(jiǎn)易冷凝器相連，并使所述冷凝器與配備有在冰浴中冷卻的IL燒瓶的接受器應(yīng)接管連接。使所述接受器應(yīng)接管與冰冷捕獲器相連。使所述冷捕獲器與真空泵相連。在15°C至35°C溫度下于真空中將二氯甲烷自5L燒瓶中的溶液中蒸餾出來，直至瓶容積達(dá)到約900mL。丟棄餾出物。將5L反應(yīng)燒瓶的所含物的溫度調(diào)節(jié)至15°C至20°C。經(jīng)最少約10分鐘將庚烷(2，442mL,1，670g)經(jīng)由壓力平衡加料漏斗加入至經(jīng)攪拌的濃縮溶液中。在添加約l，000ml，684g庚烷后形成沉淀。經(jīng)最少20分鐘邊攪拌邊將非均質(zhì)混合物冷卻至0°C至5°C溫度，并在所述溫度下維持最少30分鐘。通過帶有沃特曼#1濾紙的30cm布氏漏斗來過濾5L反應(yīng)燒瓶的所含物。濾液收集在4L抽吸燒瓶中。用2X310mL，2X212g庚烷沖洗5L反應(yīng)燒瓶至濾餅中。抽吸干燥所述濾餅，直至實(shí)質(zhì)上收集不到濾液且持續(xù)最少25分鐘。濾餅高約20mm。濾餅重約601g。丟棄濾液。將濾餅轉(zhuǎn)移至裝備有熱電偶、機(jī)械攪拌器、N2入口及IL壓力平衡加料漏斗的5L圓底燒瓶中。向5L反應(yīng)燒瓶中加入二氯甲烷(750mL，990g)，并攪拌直至所有固體都溶解(約10分鐘)。向所述5L反應(yīng)燒瓶中加入庚烷(l，060mL，725g)。使用冰浴經(jīng)最少15分鐘將非均質(zhì)溶液冷卻至0°C至5°C，并隨后攪拌至少30分鐘。觀察到稠非均質(zhì)溶液。在帶有沃特曼#1濾紙的30cm布氏漏斗上過濾5L反應(yīng)燒瓶的所含物。濾液收集在4L抽吸燒瓶中。用2X310mL，2X212g庚烷沖洗5L反應(yīng)燒瓶至濾餅中。抽吸干燥所述濾餅，直至實(shí)質(zhì)上收集不到濾液(最少20分鐘)。濾餅高約20mm。濾餅重約632g。丟棄濾液。將濕濾餅轉(zhuǎn)移至干燥盤中。給含有對(duì)-甲氧基芐基硫醚酸的干燥盤覆蓋上干凈濾紙。將產(chǎn)物在38°C至40°C且28-30英寸汞柱真空的真空烘箱中干燥約20小時(shí)。實(shí)例2對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰氯(2)的原始制備參考化學(xué)方程式II，將對(duì)-甲氧基芐基硫醚酸(400g，1.57mol)加入至裝備有熱電偶、機(jī)械攪拌器、頂部帶有N2入口的回流冷凝器及0.5L壓力平衡加料漏斗的5L圓底燒瓶中。向所述5L反應(yīng)燒瓶中加入二氯甲烷(l，600g，l，212mL)。將澄清溶液加熱至20°C至25°C。向0.5L壓力平衡加料漏斗中加入二氯甲烷(300g)及草酰氯(110g，78mL)。經(jīng)由加料漏斗添加350mL草酰氯/二氯甲烷溶液，同時(shí)使反應(yīng)溫度保持在20°C至30°C。將澄清黃色溶液在20°C至25°C下攪拌最少30分鐘，直至起泡平息。重復(fù)添加草酰氯。將350ml草酰氯/二氯甲烷溶液經(jīng)由壓力平衡加料漏斗添加至反應(yīng)燒瓶中，同時(shí)使反應(yīng)溫度保持在20°C至30°C(添加時(shí)間約為45分鐘)。將反應(yīng)混合物加熱至約32°C至38°C。使經(jīng)攪拌溶液在所述溫度范圍內(nèi)維持最少1小時(shí)。取ImL樣品用于HPLC分析。當(dāng)以面積計(jì)甲氧基芐基硫醚酸起始材料剩余小于3%時(shí)，認(rèn)為反應(yīng)完成。經(jīng)最少5分鐘將反應(yīng)物冷卻至23°C至28°C。將溶液轉(zhuǎn)移至配衡3L圓底燒瓶中。用100ml，132g二氯甲烷將反應(yīng)燒瓶沖洗至3L燒瓶中。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器且浴溫設(shè)置在33°C至36°C且壓力為25-28英寸汞柱在真空中濃縮反應(yīng)溶液，直至無揮發(fā)物剩余。最終重量為1，367g，且對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰氯的凈重為500.3g。丟棄餾出物。實(shí)例3對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼(3)的原始制備參考化學(xué)方程式III，給5L莫頓型圓底燒瓶裝備熱電偶、機(jī)械攪拌器、頂部帶有N2入口的回流冷凝器及0.5L壓力平衡加料漏斗。將對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰氯溶解于500ml，660g二氯甲烷中。將溶液轉(zhuǎn)移至2L愛倫美氏燒瓶中。添加500ml二氯甲烷以使溶液總體積補(bǔ)充至1，300mL。在5L莫頓型圓底燒瓶(RBF)(莫頓型)中，加入2，400g、l，818mL二氯甲烷及256g、245mL、98%濃度、7.8mol的無水胼。機(jī)械攪拌器速度設(shè)置為255_270rpm。使用干冰/丙酮將混濁漿液冷卻至_69°C至-72°C。將酰氯溶液經(jīng)由0.5L壓力平衡加料漏斗逐滴添加至5L反應(yīng)燒瓶中，同時(shí)使反應(yīng)溫度保持在_68°C至_72°C。重要的是，調(diào)節(jié)甲基芐基硫醚酰氯溶液至經(jīng)攪拌胼/二氯甲烷漿液中的添加速率，以確保反應(yīng)溫度低于_67°C。約3小時(shí)后完成添加。使經(jīng)攪拌反應(yīng)物維持在-68°C至_72°C最少30min。取ImL樣品用于HPLC分析。通過移除冰浴使溶液升溫至室溫(20°C至30°C)。將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至配衡3L圓底燒瓶中。在真空中通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮反應(yīng)溶液。浴溫設(shè)置為32°C至36°C且壓力為25-28英寸汞柱。移除所有揮發(fā)物。最終重量為1，490.7g，且粗固體對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼的凈重為630g。丟棄餾出物。向粗對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼固體中添加甲醇(1，250g,1，580mL)，并將非均質(zhì)混合物在33°C至36°C下在5L圓底燒瓶中混合最少5分鐘直至獲得澄清溶液。將粗對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼/甲醇溶液轉(zhuǎn)移至5L反應(yīng)燒瓶中。在28°C至34°C下經(jīng)8分鐘將1，312g4%氫氧化鈉/甲醇溶液加入至5L反應(yīng)燒瓶中。將澄清混合物在33°C至36°C下攪拌20分鐘。形成淺色沉淀。在帶有濾紙(沃特曼#1)的30cm布氏漏斗上過濾5L反應(yīng)燒瓶的所含物。用200mL，158g甲醇沖洗(5L)反應(yīng)燒瓶。將濾液轉(zhuǎn)移至配衡3L圓底燒瓶中。在真空中通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮反應(yīng)溶液。浴溫設(shè)置為36°C至40°C且壓力為25-28英寸汞柱。移除所有揮發(fā)物。最終重量為l，484g，且粗對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼固體的凈重為622.7g。丟棄餾出物。將固體溶解于700g，530mL二氯甲烷中。將非均質(zhì)混合物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(非真空)中于33°C至36°C下混合最少10分鐘直至獲得澄清溶液。在真空中通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮所述溶液。浴溫設(shè)置為36°C至40°C，壓力為28-30英寸汞柱。移除所有揮發(fā)物。最終重量為1，494.2g，且粗對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼固體的凈重為632.5g。丟棄餾出物。用2，100mL，2，772g二氯甲烷溶解固體。將非均質(zhì)混合物在20°C至25°C下混合最少5分鐘直至獲得澄清溶液。向所述二氯甲烷溶液中添加IlOg無水硫酸鎂，并將混合物攪拌1小時(shí)。使用抽吸，通過帶有濾紙(沃特曼#1)的15cm布氏漏斗(Buchnerfunnel)將黃色混合物過濾至5L反應(yīng)燒瓶中。用500mL，660g二氯甲烷沖洗燒瓶及濾餅。將濾液轉(zhuǎn)移至配衡3L圓底燒瓶中。在真空中通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮溶液。浴溫設(shè)置為32°C至35°C，壓力為20-25英寸汞柱。移除所有揮發(fā)物。最終重量為l，090g，且粗對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰胼固體的凈重為643g。丟棄餾出物。用400mL，528g二氯甲烷溶解固體。將非均質(zhì)混合物在35°C至40°C下混合最少5分鐘直至獲得澄清黃色溶液。將4，260mL,3,040g醚加入至裝備有熱電偶、機(jī)械攪拌器、N2入口及2L壓力平衡加料漏斗的12L圓底燒瓶中。使用鹽水及冰將醚在12L燒瓶中冷卻至0°C至-10°C。將黃色對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼/二氯甲烷溶液(上文制備)經(jīng)由壓力平衡加料漏斗添加至經(jīng)300-400rpm快速攪拌的醚中，同時(shí)使溫度保持在0°C至-10°C。加入l，070mL，732g庚烷。將所述非均質(zhì)混合物在0°C至_5°C下攪拌20分鐘。通過帶有濾紙(沃特曼#1)的30cm布氏漏斗過濾(12L)反應(yīng)燒瓶的所含物。濾液收集在4L抽吸燒瓶中。用l，070mL，732g庚烷將5L反應(yīng)燒瓶沖洗至濾餅中。丟棄濾液。將所述濾餅抽吸干燥最少50分鐘，直至實(shí)質(zhì)上收集不到濾液。濾餅高15mm。濾餅重429g。將濕濾餅轉(zhuǎn)移至干燥盤中。給含有甲氧基芐基硫醚酸的干燥盤覆蓋上干凈濾紙。將產(chǎn)物在38°C至40°C且28-30英寸汞柱真空的真空烘箱中干燥至少18小時(shí)。使用實(shí)例1-3的方法的典型批料反應(yīng)的結(jié)果匯總于表2中。表2在增添方法改良之前的典型批料<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實(shí)例4對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼(3)的改進(jìn)制備為減少副產(chǎn)物雙甲氧基芐基硫醚酰胼(6)的含量，對(duì)影響分離產(chǎn)物對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰胼中所述副產(chǎn)物形成的反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行研究。重復(fù)實(shí)例3的程序。在_78°C下，胼/CH2Cl2溶液是不可攪拌的冰凍混合物。膠粘塊粘著于反應(yīng)燒瓶上，而攪拌槳在空氣中旋轉(zhuǎn)。將硫醚酰氯/CH2Cl2溶液逐滴添加至所述胼/CH2Cl2(28%ν/ν)冰凍混合物中，同時(shí)使溫度保持在約_72°C。添加結(jié)束時(shí)的HPLC分析(溫度為_72°C)顯示反應(yīng)很少。此與其是快速反應(yīng)的預(yù)期相反。此可能是由于反應(yīng)中缺少適當(dāng)混合所致。使大量未反應(yīng)的反應(yīng)混合物升溫。當(dāng)溫度達(dá)到約-50°C時(shí)，成為可攪拌的非均質(zhì)混合物，隨后快速放熱，推動(dòng)溫度立即至IJ-28°C，反應(yīng)顏色由黃色變成灰白色。此得出無效混合可能導(dǎo)致有利于產(chǎn)生雙酰胼的局部反應(yīng)的假定。升溫至室溫并如實(shí)例3中實(shí)施反應(yīng)，提供作為主要產(chǎn)物的雙酰胼(82%，HPLC面積％)。此遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于通常不期望含量20%。我們推斷所添加的硫醚酰氯(2)/CH2Cl2溶液未與胼的冰凍塊有效混合。實(shí)例5溫度對(duì)對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼(3)制備的影響實(shí)例5重復(fù)實(shí)例4的相同反應(yīng)，只是在0°C下而非在約_72°C下實(shí)施。將硫醚酰氯/CH2Cl2溶液逐滴添加至可攪拌的胼/CH2Cl2(28%ν/ν)均質(zhì)溶液中。在所述情形下，形成39%(HPLC面積％)的雙酰胼。所述條件意味著較低溫度及攪拌是影響不期望副產(chǎn)物形成的因素。實(shí)例3.1及3.2的結(jié)果匯總于表3中。表3對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼的制備隨溫度的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>實(shí)例6胼濃度對(duì)對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰胼(3)制備的影響隨后檢驗(yàn)在低溫下使用較低濃度的胼的影響。結(jié)果匯總于下表4中。在_65°C至-72°C下通過將胼/CH2Cl2稀釋至5%及19%濃度(相對(duì)于28%(ν/ν))來制備胼/CH2Cl2的可攪拌非均質(zhì)混合物。分別在19%及5%的胼/CH2Cl2濃度下實(shí)施的表4中的實(shí)驗(yàn)4.1及4.2提供可攪拌的非均質(zhì)混合物，其與硫醚酰氯反應(yīng)獲得雙酰胼副產(chǎn)物含量分別為3%及5%的期望產(chǎn)物。使用較少胼(表4中的實(shí)驗(yàn)4.3使用5mol當(dāng)量，相對(duì)于IOmol當(dāng)量)重復(fù)相同反應(yīng)產(chǎn)生僅3%的雙酰胼。相對(duì)于硫醚酸，胼的典型量為5mol當(dāng)量。使胼的量加倍至IOmol當(dāng)量(表4實(shí)驗(yàn)4.1及4.2)不會(huì)顯著改變最終產(chǎn)物中雙酰胼的含量。將酰氯以較快速率(參見表4中的實(shí)驗(yàn)4.4及4.5，其使用lmL/min，相對(duì)于0.25mL/min)添加至稀釋胼/CH2Cl2非均質(zhì)混合物(5%及19%)中分別產(chǎn)生含量為3%及9%的雙酰胼。雙酰胼的含量急劇下降(自82%至3%，參見上文表3中的實(shí)驗(yàn)3.1及表4中的實(shí)驗(yàn)4.4)可能歸因于一或多個(gè)以下因素溫度、濃度、胼的量、添加速率及混合。表4中的實(shí)驗(yàn)4.5中產(chǎn)生9%的雙酰胼可能由起始無效攪拌造成。表4在胼/CH2CL2的多種稀釋下制備對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰胼<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>實(shí)例7溫度對(duì)對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼(3)制備的影響溫度對(duì)產(chǎn)物中雙酰胼含量的影響在表5中予以檢驗(yàn)。在將硫醚酰氯于-20°C及-72°C(表5實(shí)驗(yàn)5.1及5.2)下添加至經(jīng)攪拌胼/CH2Cl2(19%ν/ν)混合物中的實(shí)驗(yàn)中，分別產(chǎn)生28%及4%含量的雙酰胼。在實(shí)驗(yàn)5.3及5.4(表5)中觀察到類似結(jié)果。以上結(jié)果表明，較低反應(yīng)溫度(約_70°C)對(duì)于獲得較低含量(3-5%)的雙酰胼是必需的。表5溫度對(duì)所形成雙酰胼含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>實(shí)例8胼濃度對(duì)對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰胼(3)制備的影響對(duì)表4中實(shí)驗(yàn)的檢驗(yàn)揭示_70°C左右的添加溫度及19%或5%(ν/ν)的胼/CH2Cl2濃度產(chǎn)生的結(jié)果相當(dāng)。所述觀察結(jié)果在表6中進(jìn)一步予以檢驗(yàn)。在表6中的實(shí)驗(yàn)6.1、6.2及6.4(其中硫醚酰氯是以19%、14%及10%濃度添加至胼/CH2Cl2的非均質(zhì)混合物中)中，分別產(chǎn)生6%、13%及4%含量的雙酰胼。反應(yīng)體積、燒瓶尺寸及攪動(dòng)速度保持恒定。結(jié)果顯示以19%濃度的反應(yīng)與以10%濃度的反應(yīng)的結(jié)果相當(dāng)。以30g規(guī)模重復(fù)14%的胼/CH2Cl2濃度實(shí)驗(yàn)(表6中的實(shí)驗(yàn)6.3)，獲得僅含有3%雙酰胼雜質(zhì)的期望產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)6.2中雙酰胼的含量較高歸因于起始快速添加酰氯造成反應(yīng)溫度在快速調(diào)節(jié)之前達(dá)到峰值_57°C。表6胼/CH2CL2濃度對(duì)所形成雙酰胼含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>實(shí)例9混合速度對(duì)對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰胼(3)制備的影響檢驗(yàn)混合的影響(表7)。實(shí)驗(yàn)7.2及7.1顯示較快混合(400rpm相對(duì)于200rpm)產(chǎn)生較少雙酰胼(22%相對(duì)于40%)?？紤]到與表8中20mL液體存于IOOmL燒瓶中相比50mL燒瓶中胼/CH2Cl2的起始液體含量(36mL)，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中雙酰胼的含量高于平常可能是由無效混合造成。此意味著除混合速度外，必須考慮反應(yīng)器的幾何結(jié)構(gòu)及液體含量。表7混合對(duì)所形成雙酰胼含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>實(shí)例10按比例放大對(duì)對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰胼(3)制備的影響在19%或5%(ν/ν)的胼/CH2Cl2濃度下制備對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼產(chǎn)生的結(jié)果相當(dāng)。雖然在_70°C下濃度為19%的胼/CH2Cl2通常為可攪拌的混合物，但存在其可能變成較差混合的冰凍混合物的風(fēng)險(xiǎn)。若制造規(guī)模批料(400g)是在5%的胼/CH2Cl2濃度下進(jìn)行，則可能需要較大的反應(yīng)器(20L莫頓型)。然而，若所述制程是在14%的胼/CH2Cl2濃度下進(jìn)行，則反應(yīng)可使用玻璃反應(yīng)器5L莫頓型圓底燒瓶實(shí)施。當(dāng)所述制程是在14%ν/ν的胼/CH2Cl2*度下以20g規(guī)模(表8中的實(shí)驗(yàn)8.1)進(jìn)行時(shí)，則分離產(chǎn)物對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼含有4.4%(HPLC面積％)的副產(chǎn)物雙甲氧基芐基硫醚酰胼雜質(zhì)。在按比例放大的制造條件下重復(fù)上述條件(胼/CH2Cl2濃度為14%)(表8中的實(shí)驗(yàn)8.2)產(chǎn)生含有4.2%(HPLC面積％)的副產(chǎn)物雙甲氧基芐基硫醚酰胼雜質(zhì)的對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼。表8在14%的胼/CH2CL2濃度下制備對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>原始方法(表9，實(shí)驗(yàn)9.1)提供含有19.3%副產(chǎn)物雙酰胼的78.4%濃度的產(chǎn)物對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰胼。表9實(shí)驗(yàn)9.2中的改進(jìn)方法利用將甲氧基芐基硫醚酰氯溶液連續(xù)添加至更加稀釋且可攪拌的胼/二氯甲烷非均質(zhì)混合物中(濃度為14%)。制得含有4.7%副產(chǎn)物雙酰胼的91.濃度的產(chǎn)物對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼。表9用于制備對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰胼的改進(jìn)方法與先前方法的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>以下條件確保形成低含量的雙酰胼副產(chǎn)物且推薦用于制造對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰胼。所述反應(yīng)條件視為本發(fā)明某些實(shí)施例的方面1.調(diào)節(jié)甲氧基芐基硫代酰氯溶液至胼/CH2Cl2混合物中的添加速率，以使反應(yīng)溫度保持在_681至-751。2.在高混合速度(300rpm至400rpm)下有效混合(起始液體體積占反應(yīng)器尺寸的30-40%液體體積)。在5L莫頓型燒瓶中保持在260-270rpm速度下混合。3.胼/CH2Cl2的可攪拌均勻混合物(濃度為5-19%，ν/ν)0在一個(gè)實(shí)例中，胼/CH2Cl2的比率為14%，ν/ν。4.起始液體體積占反應(yīng)器尺寸的30-40%液體體積。以下實(shí)例11-15聯(lián)合闡釋本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例。實(shí)例11對(duì)-甲氧基芐基硫醚酸中間體(1)的改進(jìn)制備安裝具有冷凝器、N2入口、攪拌器及溫度探針/控制器的5L反應(yīng)燒瓶。在N2氣氛中向所述容器中加入哌啶(0.402kg)。邊攪拌邊逐份添加3，3-二甲基丙烯酸(0.215kg)，隨后對(duì)-甲氧基芐基硫醇(0.358kg)。經(jīng)最少15分鐘將反應(yīng)混合物逐漸加熱至82°C至88°C且保持所述反應(yīng)溫度直至觀察到放熱。使溫度不超過95°C。當(dāng)放熱完成后，繼續(xù)加熱至92°C至98°C并保持最少15小時(shí)。制備3升3MHCl水溶液。移除加熱包并使反應(yīng)混合物冷卻至70°C至75°C。緩慢添加1.9LHCl溶液。用水浴繼續(xù)冷卻直至燒瓶所含物達(dá)到20°C至30°C溫度。添加CH2Cl2(1.64kg)，并將燒瓶所含物攪拌最少5分鐘。檢測(cè)pH值并視需要使用HCl溶液調(diào)節(jié)至小于2。將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，分離各相，并將較低的有機(jī)產(chǎn)物層排放回反應(yīng)燒瓶中。將上部水性層轉(zhuǎn)移至分離燒瓶中。將剩余HCl溶液添加至有機(jī)相中并攪拌最少5分鐘。檢測(cè)PH值并視需要用剛剛制備的3MHCl溶液調(diào)節(jié)至小于2。將反應(yīng)燒瓶的所含物返回至分液漏斗中，并使各層分離最少5分鐘。將較低的有機(jī)相排放至干凈愛倫美氏燒瓶中，并將水性層排放至反應(yīng)燒瓶中。將來自先前萃取的水相以及CH2Cl2(0.400kg)添加至反應(yīng)燒瓶中。將反應(yīng)物攪拌最少5分鐘，隨后將反應(yīng)燒瓶的所含物轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，并使各層分離最少5分鐘。使較低的有機(jī)產(chǎn)物相與先前的有機(jī)產(chǎn)物相合并，并轉(zhuǎn)移至反應(yīng)燒瓶中。合并的水相作為廢物丟棄。向反應(yīng)燒瓶中加入水(1.00kg)并攪拌最少5分鐘。將混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，并使各相分離最少5分鐘。將較低的產(chǎn)物有機(jī)相排放至干凈愛倫美氏燒瓶中。水相作為廢物丟棄。將有機(jī)產(chǎn)物溶液經(jīng)無水MgSO4干燥，隨后吸濾至5L4頸燒瓶中。用CH2Cl2(0.350kg)將愛倫美氏燒瓶及濾餅沖洗至5L4頸燒瓶中。蒸餾出CH2Cl2以使瓶容積為900士50mL。將濃縮物的溫度調(diào)節(jié)至15°C至20°C，并隨后通過添加庚烷(1.67kg)沉淀。將混合物冷卻至約5°C并攪拌最少30分鐘，隨后對(duì)批料實(shí)施吸濾并用庚烷(2X0.272kg)沖洗產(chǎn)物餅。取樣產(chǎn)物以進(jìn)行干燥失重分析(LOD)，并取樣濾液以進(jìn)行固體含量預(yù)測(cè)。若所述濾液含有大于0.110kg，則將其濃縮并用庚烷處理以如先前沉淀第二批產(chǎn)物。稱重潮濕產(chǎn)物餅，并使用LOD數(shù)據(jù)計(jì)算干重。產(chǎn)物的干燥質(zhì)量等于常數(shù)A(kg)。將潮濕產(chǎn)物返回至5L燒瓶中，并溶解于CH2Cl2(最小值為1.76XAkg，最大值為2.20XAkg)中。緩慢添加庚烷(4.56XAkg)，開始沉淀。將漿液冷卻至0°C至5°C，隨后陳化最少30分鐘。對(duì)批料實(shí)施吸濾，并用庚烷(2份，每份0.272kg)沖洗產(chǎn)物餅。繼續(xù)過濾，直至濾液流動(dòng)實(shí)質(zhì)上停止。將濕產(chǎn)物餅轉(zhuǎn)移至稱量皿(tareddish)中，獲得重量，隨后將濾液轉(zhuǎn)移至合適廢物容器中。將所述餅在不高于38°C的真空烘箱中干燥，直至滿足小于1.0%的干燥失重LOD指標(biāo)。提交樣品供分析。實(shí)例12A對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰氯(2)的制備安裝裝備有冷凝器、水洗滌器、溫度探針、IL加料漏斗、N2入口及攪拌器的5L反應(yīng)燒瓶。在N2氣氛中邊攪拌邊加入CH2Cl2(1.6kg)，隨后加入對(duì)-甲氧基芐基硫醚酸(0.400kg)。在加料漏斗中制備草酰氯(0.220kg)及CH2Cl2(0.600kg)的溶液。添加約一半草酰氯溶液，同時(shí)使溫度保持在20°C至30°C范圍內(nèi)(放熱！)。觀察到在攪拌最少30分鐘時(shí)放出C02/C0，隨后添加剩余草酰氯溶液，同時(shí)保持溫度介于20°C與30°C之間。攪拌反應(yīng)物直至氣體放出減少(約30min)，隨后將混合物加熱至33°C至38°C。使所述溫度保持約60分鐘，直至氣體放出減少。取樣反應(yīng)物，且使用HPLC來測(cè)定剩余酸的量。當(dāng)起始材料的量不多于5%時(shí)，斷定反應(yīng)完全。若未完全反應(yīng)，則在33°C至38°C下再繼續(xù)攪拌1小時(shí)，隨后再次取樣并測(cè)試。移除加熱包并使反應(yīng)混合物冷卻至20°C至30°C。將混合物轉(zhuǎn)移至3L單頸燒瓶中，隨后用CH2Cl2沖洗。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮批料，直至移除大部分揮發(fā)物。實(shí)例12B對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼中間體(3)的制備安裝帶有冷凝器、N2入口、熱電偶、攪拌器及2L加料漏斗的5L4頸莫頓型反應(yīng)燒瓶。在N2氣氛中加入CH2Cl2(2.40kg)并冷卻至-75°C至_65°C。加入無水胼(0.252kg)以得到均勻胼冰漿液，而不在燒瓶側(cè)壁上形成胼晶體。將硫醚酰氯溶液轉(zhuǎn)移至加料漏斗中，視需要在CH2Cl2中沖洗以使溶液體積為1.30L。以穩(wěn)定速率經(jīng)最少3小時(shí)逐滴添加酰氯溶液，同時(shí)使溫度保持介于_65°C至_75°C之間(優(yōu)選介于-70°C至_75°C之間)。添加完成后，將反應(yīng)在_65°C至_75°C下攪拌最少30分鐘。使批料升溫至20°C至25°C。通過HPLC取樣反應(yīng)物，且若剩余酰氯的量不多于5%則斷定反應(yīng)完全。若此刻未完全反應(yīng)，則在20°C至25°C下繼續(xù)攪拌最少1小時(shí)，隨后再次取樣。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮3L燒瓶中的批料。視需要用CH2Cl2將所述批料沖洗至燒瓶中。將濃縮物用MeOH(l.25kg)稀釋，并轉(zhuǎn)移至裝備有攪拌器、熱電偶及N2入口的5L反應(yīng)燒瓶中，視需要用MeOH沖洗。在N2氣氛中添加NaOH(0.0640kg)存于MeOH(l.25kg)中的溶液，并攪拌最少20分鐘。通過吸濾凈化批料，并視需要用MeOH沖洗。將濾液轉(zhuǎn)移至3L配衡燒瓶中(視需要用MeOH沖洗)，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮直至移除所有揮發(fā)物，隨后在真空中繼續(xù)最少30分鐘。停止施用真空并添加CH2Cl2(0.704kg)。繼續(xù)旋轉(zhuǎn)以使?jié)饪s物溶解，隨后重新開始施用真空并濃縮成固體殘留物。獲得殘留物的重量并使用CH2Cl2(2.84kg)將所述殘留物轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。攪動(dòng)混合物以得到溶液。用兩份水(每份1.OOkg)洗滌CH2Cl2溶液。向CH2Cl2溶液中添加無水MgSO4(0.300至0.420kg)并旋動(dòng)約15分鐘直至溶液澄清。對(duì)批料實(shí)施吸濾，視需要用CH2Cl2沖洗。將濾液轉(zhuǎn)移至3L配衡燒瓶中，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮成固體殘留物。獲得殘留物的重量，并將其溶解于CH2Cl2(不少于0.532kg)中。將溶液轉(zhuǎn)移至與裝備有攪拌器、熱電偶及N2入口的12L4頸反應(yīng)燒瓶連接的IL加料漏斗中。在N2氣氛中向燒瓶中加入醚(3.04kg)。將醚冷卻至0°C至-10°C。將對(duì)-甲氧基芐基硫醚酰胼溶液添加至快速攪拌的醚溶劑中，同時(shí)使溫度保持介于-10°C與0°C之間。使用CH2Cl2(0.0660kg)將其它溶液沖洗至燒瓶中。向加料漏斗中加入庚烷(0.732kg)并緩慢添加至稀薄漿液中，再次保持相同的溫度范圍。將所得漿液在相同溫度下攪拌最少60分鐘。通過濾紙對(duì)批料實(shí)施吸濾。用庚烷(2份，每份0.366kg)沖洗產(chǎn)物餅，并抽吸干燥直至形成濕濾餅。將濕濾餅轉(zhuǎn)移至稱量皿中并獲得濾餅重量。將濾餅在真空烘箱(不高于38°C)中干燥直至LOD不大于2.0%。獲得干燥對(duì)_甲氧基芐基硫醚酰胼的重量，并提交樣品供測(cè)試。實(shí)例13制備硫醇去保護(hù)的中間體(4)道威克斯(Dowex)SRBOH陰離子交換樹脂是通過向大布氏漏斗中添加2.4kg樹脂并用水(4份，每份2.40kg)隨后MeOH(4份，每份1.92kg)洗滌來制備。將樹脂在燒杯中用水覆蓋并浸泡最少1小時(shí)，隨后過濾出水。將樹脂轉(zhuǎn)移至合適儲(chǔ)存容器中。安裝裝備有攪拌器、熱電偶、N2入口及250mL加料漏斗的5L反應(yīng)燒瓶。在N2氣氛中加入三氟乙酸(2.80kg)并冷卻至5°C至10°C。逐份添加硫醚酰胼(0.380kg)(放熱！)，同時(shí)使溫度保持介于5°C與15°C之間。將溶液冷卻至0°C至5°C。向加料漏斗中加入三氟甲磺酸(0.243kg)并添加至反應(yīng)混合物中，同時(shí)使溫度保持介于0°c至10°C之間。添加完成后，添加苯甲醚(0.0152kg)。將反應(yīng)混合物在10°C至15°C下攪拌最少兩小時(shí)或直至反應(yīng)顏色為深紅色且不進(jìn)一步變化。取樣反應(yīng)物并通過TLC進(jìn)行測(cè)試，且若反應(yīng)混合物含有不多于4%的起始材料則斷定為反應(yīng)完全。安裝裝備有攪拌器、N2入口及2L加料漏斗的12L反應(yīng)燒瓶。加入MeOH(3.01kg)。將容器在N2氣氛中冷卻至0°C至5°C。將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至加料漏斗中，并隨后以適中速率添加至經(jīng)冷卻的MeOH中，使反應(yīng)溫度保持在0°C至5°C。形成白色沉淀。用額外MeOH(0.0790kg)將反應(yīng)燒瓶沖洗至加料漏斗中。將白色漿液在0°C至5°C下攪拌約15分鐘。通過濾紙對(duì)批料實(shí)施吸濾，并用MeOH(2份，每份0.600kg)沖洗產(chǎn)物餅。在通過濾餅的濾液流動(dòng)實(shí)質(zhì)上停止后，將濾液轉(zhuǎn)移至3L配衡燒瓶(視需要用MeOH沖洗)中，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮成半固體殘留物。將殘留物再溶解于Me0H(0.600kg)中并如先前再次濃縮。將殘留物再溶解于CH2Cl2(0.600kg)中，如先前再次濃縮并獲得殘留物重量。將殘留物再溶解于水(1.52kg)中并將溶液轉(zhuǎn)移至6L分液漏斗中。用CH2Cl2(3份，每份0.927kg)洗滌殘留物。將合并的有機(jī)相轉(zhuǎn)移至合適廢物容器中。將含有產(chǎn)物的水相轉(zhuǎn)移至燒杯中，并通過添加膨脹樹脂將PH值調(diào)節(jié)至6.5-7.5pH單位。視需要用三氟乙酸調(diào)節(jié)pH值。在達(dá)到期望的pH值范圍后，將漿液攪拌約30分鐘，并再次檢測(cè)pH值，并視需要調(diào)節(jié)。對(duì)批料實(shí)施吸濾并用水(2份，每份0.600kg)沖洗樹脂。添加37%HCl溶液(0.160kg)。量測(cè)pH值以確保其小于1.5。若需要?jiǎng)t添加額外HC1。將水溶液轉(zhuǎn)移至3L配衡燒瓶(視需要用水沖洗)中，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮成固體殘留物。獲得殘留物重量。將殘留物溶解于無水EtOH(l.20kg)中并再次濃縮。將殘留物再溶解于無水EtOH(l.65-2.85kg)中并加熱至50°C至65°C。對(duì)所述熱溶液實(shí)施吸濾。將濾液轉(zhuǎn)移至3L配衡燒瓶中，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮所述乙醇溶液直至蒸餾實(shí)質(zhì)上終止。分份加入EtOAc(8.21kg)并如先前進(jìn)行濃縮。加入四份EtOAc(2.74kg)并冷卻至20°C至25°C。將反應(yīng)物攪拌約15分鐘。對(duì)批料實(shí)施吸濾并用EtOAc(2份，每份0.135kg)沖洗。繼續(xù)抽吸，直至濾液流動(dòng)實(shí)質(zhì)上停止。將濾餅抽吸干燥約60分鐘。丟棄濾液。獲得潮濕產(chǎn)物餅的重量且所述質(zhì)量(kg)在隨后計(jì)算中用作常數(shù)B。將產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至裝備有冷凝器、攪拌器、N2入口及熱電偶的12L反應(yīng)燒瓶中。在隊(duì)中加入EtOAc(45.IXBkg)，并將漿液邊攪拌邊加熱至48°C至53°C。在達(dá)到50°C后，停止加熱。移除加熱包并將漿液冷卻至20°C至25V。對(duì)批料實(shí)施吸濾并用EtOAc(2份，每份0.270kg)沖洗。繼續(xù)抽吸，直至濾液流動(dòng)實(shí)質(zhì)上停止。將濾餅在不高于38°C的真空烘箱中干燥最少12小時(shí)。獲得濾餅重量且產(chǎn)物質(zhì)量(kg)(等于常數(shù)C)用于隨后計(jì)算中。實(shí)例14制備游離堿酰胼(5)將粗鹽酸鹽產(chǎn)物(4)與水(20.OXCkg)在12L4頸反應(yīng)燒瓶中混合并攪拌以得到溶液。用經(jīng)處理的樹脂調(diào)節(jié)溶液的PH值直至達(dá)到6.5-7.5pH單位范圍。將批料攪拌約15分鐘，隨后再次檢測(cè)PH值且視需要調(diào)節(jié)以獲得6.5-7.5pH單位的值。對(duì)批料實(shí)施吸濾并用水(3.OOXCkg)，隨后用無水EtOH(2份，每份5.30XCkg)沖洗。繼續(xù)吸濾，直至濾液流動(dòng)實(shí)質(zhì)上停止。將產(chǎn)物濾液轉(zhuǎn)移至3L配衡燒瓶中并視需要用無水EtOH沖洗。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮批料直至蒸餾實(shí)質(zhì)上停止。將產(chǎn)物殘留物再溶解于無水EtOH(l.58XCkg)中并如先前進(jìn)行濃縮。將產(chǎn)物殘留物再溶解于無水醚(2.57XCkg)中并如先前進(jìn)行濃縮。在蒸餾實(shí)質(zhì)上停止后，使用高真空繼續(xù)干燥并繼續(xù)蒸發(fā)最少兩個(gè)小時(shí)。殘留物的凈重是常數(shù)D。使用CH2Cl2(66.3XDkg)將濃縮物轉(zhuǎn)移至裝備有攪拌器組件、溫度探針及氮?dú)馊肟诘?2L反應(yīng)燒瓶中。將混合物在15°C至30°C下攪拌最少30分鐘。過濾批料，將濾液收集在第二12L反應(yīng)燒瓶中。使用CH2Cl2(3.98XDkg)通過過濾器將第一燒瓶沖洗至第二燒瓶中。含有批料的第二燒瓶裝備有攪拌器組件、溫度探針及氮?dú)馊肟凇＿厰嚢柽吋尤牍枘z(0.700XDkg)且繼續(xù)攪拌約30分鐘。對(duì)批料實(shí)施吸濾并用CH2Cl2(2份，每份3.98XDkg)洗滌硅石，將合并的濾液收集在IOL抽吸燒瓶中。將批料在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上于約30°C下濃縮至IL燒瓶中。視需要用CH2ClJfIOL燒瓶沖洗至蒸發(fā)器中。繼續(xù)蒸餾直至其實(shí)質(zhì)上停止。將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器切換到高真空源并在35°C至40°C下繼續(xù)蒸發(fā)約3小時(shí)。通過將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器浴調(diào)節(jié)至0°C至5°C同時(shí)以最大速率旋轉(zhuǎn)燒瓶使油狀產(chǎn)物結(jié)晶。在產(chǎn)物凝固后繼續(xù)蒸發(fā)約30分鐘。取樣游離堿產(chǎn)物(5)并測(cè)試殘留二氯甲烷并干燥，直至對(duì)殘留溶劑的測(cè)試可以接受。獲得最終重量，將產(chǎn)物包裝在具有惰性襯層的帶有蓋子的琥珀玻璃瓶中，并提交樣品供測(cè)試。產(chǎn)率所述5步制程的總產(chǎn)率限值不低于理論值的33%(0.105kg)且最高與最低產(chǎn)率的差必須不大于15%。先前制程的限值為理論值的33-43%;然而，我們預(yù)期通過在酰胼形成反應(yīng)中增加二氯甲烷所獲得的副產(chǎn)物形成減少將使產(chǎn)率提高。有效批料中的實(shí)際產(chǎn)率將用以界定生產(chǎn)批料的產(chǎn)率范圍。實(shí)例153-甲基-3-巰基丁酸酰胼，Cl-332258(DMH連接體)的最終純化向裝備有機(jī)械攪拌器、N2入口、回流冷凝器及溫度控制裝置的2L4頸反應(yīng)燒瓶中加入二氯甲烷(l，000mL，l，325g)。向反應(yīng)燒瓶中加入DMH連接體(20g)。在隊(duì)中，將漿液在20士3°C下攪拌最少30分鐘。通過350mL中號(hào)尺寸燒結(jié)玻璃布氏漏斗對(duì)所得混濁DMH連接體溶液進(jìn)行過濾。將濾液收集在裝備有機(jī)械攪拌器、N2入口、回流冷凝器及溫度控制裝置的干凈的2L4頸圓底燒瓶中。將反應(yīng)燒瓶用20mL，26.5g二氯甲烷沖洗至干凈反應(yīng)燒瓶中。將硅膠(20g)加入至反應(yīng)燒瓶中的溶液中，同時(shí)使溫度保持在15°C至25°C。將漿液在N2中于20士3°C下攪拌最少30分鐘。通過(350mL，中號(hào)尺寸)燒結(jié)玻璃布氏漏斗過濾非均質(zhì)混合物。將濾液收集在干凈的2L單頸圓底燒瓶中。用二氯甲烷(50mL，66.3g)將反應(yīng)燒瓶沖洗至濾餅中，將濾液收集在單頸燒瓶中。使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(浴=35士5°C)及機(jī)械式吸水器15-30mmHg，隨后高真空(7_10mmHg)將濾液濃縮至干燥。將所得白色固體冷卻至0-5°C并在7mmHg的高真空中干燥2小時(shí)。向硬固體中加入正庚烷(100mL，68.4g)并在室溫下攪拌最少10分鐘，直至獲得均勻懸浮液。通過經(jīng)濾紙(#1沃特曼)在15cm布氏漏斗上吸濾來分離產(chǎn)物。用正庚烷母液隨后2X50mL，2X34.2g正庚烷洗滌將2L燒瓶沖洗至濾餅中。將濾餅在室溫下抽吸干燥最少5分鐘。將濾餅轉(zhuǎn)移至放置在真空干燥器中的琥珀玻璃瓶中，并在真空(小于IOmmHg)中于20-25°C下將潮濕濾餅14.34g干燥3小時(shí)至恒重。產(chǎn)量14.21g。75.9%，理論產(chǎn)量18.7g。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>權(quán)利要求一種自肼及?；戎苽漉ｋ碌姆椒ǎ浒韵虏襟E(a)制備包含肼及惰性溶劑的實(shí)質(zhì)上已攪拌均勻的漿液；及(b)向所述漿液中連續(xù)添加?；取?.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述酰基氯實(shí)質(zhì)上逐滴添加至所述漿液中。3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述?；冗M(jìn)一步包含經(jīng)保護(hù)的硫醇。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述酰基氯包含芐基硫醚。5.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述?；染哂幸韵陆Y(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中P是硫醇保護(hù)基團(tuán)；隊(duì)及R2各選自由烷基組成的群組；L是亞烷基連接體。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中L是-CH2-。7.如權(quán)利要求5或6所述的方法，其中禮及R2各獨(dú)立為甲基。8.如權(quán)利要求5、6或7所述的方法，其中P是任選地在苯環(huán)上經(jīng)取代的芐基。9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中P是對(duì)_甲氧基芐基。10.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述酰基氯具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>11.如權(quán)利要求1至10中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述惰性溶劑是二氯甲烷。12.如權(quán)利要求1、2或11所述的方法，其中所述酰胼產(chǎn)物具有以下結(jié)構(gòu)其中P是硫醇保護(hù)基團(tuán)；隊(duì)及R2各選自由烷基組成的群組；L是亞烷基連接體。13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中L是-CH2-。14.如權(quán)利要求12所述的方法，其中禮及R2各獨(dú)立為甲基。15.如權(quán)利要求12所述的方法，其中P是任選地在苯環(huán)上經(jīng)取代的芐基。16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中P是對(duì)-甲氧基芐基。17.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述期望酰胼是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>或其鹽。18.如權(quán)利要求1至16中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述酰胼含有小于5%的具有以下結(jié)構(gòu)的雙酰胼副產(chǎn)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中R及R’是任選地經(jīng)取代的烷基、雜烷基或雜烷芳基。19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中R及R’是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中P是硫醇保護(hù)基團(tuán)；隊(duì)及R2各選自由烷基組成的群組；L是亞烷基連接體。20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中L是-CH2-。21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中禮及R2各獨(dú)立為甲基。22.如權(quán)利要求19所述的方法，其中P是任選地在苯環(huán)上經(jīng)取代的芐基。23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中P是對(duì)-甲氧基芐基。24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述雙酰胼副產(chǎn)物具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>25.如權(quán)利要求1至24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中調(diào)節(jié)所述酰氯溶液的連續(xù)添加，以使反應(yīng)溫度保持在約_68°C至約-75V。26.如權(quán)利要求1至25中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述胼漿液實(shí)質(zhì)上均勻。27.一種制備含有酰胼鍵結(jié)的化合物的方法，其包含以下步驟(a)將包含經(jīng)攪拌惰性溶劑的反應(yīng)容器冷卻至期望低溫；(b)以連續(xù)方式向所述反應(yīng)容器中添加胼，由此制備包含所述胼及所述惰性溶劑的實(shí)質(zhì)上已攪拌均勻的漿液；(c)以連續(xù)方式向所述漿液中添加酰氯，由此形成酰胼鍵結(jié)。28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述惰性溶劑是二氯甲烷。29.一種制備胼漿液的方法，其包含以下步驟(a)將惰性溶劑冷卻至約_68°C至約_75°C的溫度；及(b)向所述冷惰性溶劑中逐滴添加溶解于惰性溶劑中的胼。30.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述惰性溶劑是二氯甲烷。31.如權(quán)利要求29或30所述的方法，其中所述胼漿液是在約270rpm至約400rpm速度下攪拌。32.—種制備3-甲基-3-巰基丁酸酰胼的方法，其包含按照權(quán)利要求16所述的方法制備酰胼的步驟。33.一種制備卡奇霉素(calicheamicin)家族成員與作為載體的單克隆抗體的免疫偶聯(lián)物的方法，其包含按照如權(quán)利要求3所述的方法制備其中?；蠸經(jīng)保護(hù)的巰基官能團(tuán)的經(jīng)單?；碾?，移除所述S經(jīng)保護(hù)的巰基官能團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)，并使用所述所得酰胼來制備所述免疫偶聯(lián)物。34.如權(quán)利要求33所述的方法，其中所述所得酰胼是3-甲基-3-巰基丁酸酰胼。35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中3-甲基-3-巰基丁酸酰胼用作連接體來制造吉妥單抗奧佐米星(gemtuzumabozogamicin)或伊妥單抗奧佐米星(inotuzumabozogamicin)。全文摘要本發(fā)明揭示自肼及酰基氯制備酰肼的方法，其包含以下步驟(a)在低溫下制備包含肼及惰性溶劑的實(shí)質(zhì)上已攪拌均勻的漿液；及(b)向所述漿液中連續(xù)添加?；?。所述方法可避免或限制產(chǎn)生不期望的雙酰肼副產(chǎn)物。所述方法可用于制備用以將卡奇霉素(calicheamicin)連接至單克隆抗體的3-甲基-3-巰基丁酸酰肼分子。文檔編號(hào)C07C241/04GK101835494SQ200880021652公開日2010年9月15日申請(qǐng)日期2008年5月20日優(yōu)先權(quán)日2007年5月22日發(fā)明者喬治·A·基亞雷洛,艾曼·薩赫利申請(qǐng)人:惠氏有限責(zé)任公司