專利名稱：：一種轉(zhuǎn)錄因子蛋白及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種轉(zhuǎn)錄因子蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：轉(zhuǎn)錄因子是生物體內(nèi)與基因啟動(dòng)子區(qū)順式作用元件相結(jié)合、調(diào)控該基因表達(dá)的蛋白質(zhì)。它們?cè)谏锏纳顒?dòng)中起著非常重要的作用，不僅參與了生物體的生長(zhǎng)、發(fā)育，同時(shí)也調(diào)控著生物體對(duì)外界逆境如干旱、高鹽、低溫、病原物侵染等的應(yīng)答反應(yīng)。1994年，Yamaguchi-Shinozaki和Shinozaki在對(duì)擬南芥逆境應(yīng)答基因r必劃啟動(dòng)子區(qū)域的研究中，發(fā)現(xiàn)了一個(gè)逆境脅迫應(yīng)答順式作用元件，即干旱應(yīng)答元件(DRE，drought-responsiveelement)。1998年，劉強(qiáng)等運(yùn)用酵母單雜交方法(yeastone-hybridmethod)克隆出與該DRE元件結(jié)合的反式作用因子編碼基因，艮卩干旱應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(DREB，drought—responsiveelementbindingprotein)基因。該DREB基因表達(dá)的產(chǎn)物與順式作用元件DRE結(jié)合后，可激活一系列與植物抗性相關(guān)基因的表達(dá)。自從對(duì)DREB類轉(zhuǎn)錄因子的研究工作開(kāi)展以來(lái)，對(duì)其結(jié)構(gòu)和功能的研究及其在植物遺傳改良上的應(yīng)用研究已成為生物化學(xué)及分子生物學(xué)等領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。目前已發(fā)現(xiàn)植物中許多逆境應(yīng)答基因啟動(dòng)子區(qū)域含有DRE元件；DREB類轉(zhuǎn)錄因子在植物中普遍存在，是植物中特有的調(diào)控對(duì)外界干旱、高鹽、低溫等逆境的應(yīng)答反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子，具有巨大的潛在應(yīng)用價(jià)值。.在水資源日益短缺的當(dāng)今世界，大量培育耐旱節(jié)水高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的農(nóng)作物新品種是解決糧食危機(jī)、實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的最有效方式。小麥?zhǔn)鞘澜缟系闹匾Z食作物，是我國(guó)第三大糧食作物，對(duì)我國(guó)糧食安全、民生和可持續(xù)發(fā)展有著至關(guān)重要的意義。在我國(guó)由干旱引起的小麥減產(chǎn)常年達(dá)到15%以上，干旱是首要的減產(chǎn)因子。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種轉(zhuǎn)錄因子蛋白及其編碼基因，該蛋白能與DRE元件特異結(jié)合。本發(fā)明所提供的蛋白，來(lái)源于歐山羊草"e^7oAs/^/"cisJA)，是如下a)或b)的蛋白質(zhì)a)由序列表中序列l(wèi)所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；b)將序列表中序列1所示的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由a)衍生的蛋白質(zhì)。為了使上述(a)中的蛋白便于純化，可在由序列表中序列l(wèi)所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表l所示的標(biāo)簽。表l標(biāo)簽的序列<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>上述(a)或(b)中的蛋白可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進(jìn)行生物表達(dá)得到。上述(b)中的蛋白的編碼基因可通過(guò)將序列表中序列2所示的DNA序列中缺失一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的密碼子，和/或進(jìn)行一個(gè)或幾個(gè)堿基對(duì)的錯(cuò)義突變，和/或在其5'端和/或3'端連上表1所示的標(biāo)簽的編碼序列得到。所述蛋白的編碼基因?yàn)槿缦耹)、2)、3)或4)的基因1)其核苷酸序列是序列表中序列2中自5'末端第1-768位核苷酸所示DNA分子；2)其核苷酸序列是序列表中序列2所示DNA分子；3)在嚴(yán)格條件下與l)或2)限定的DNA序列雜交且編碼所述蛋白的DNA分子；所述嚴(yán)格條件可為在0.1xSSPE(或O.lxSSC)，0.P/。SDS的溶液中，在65°C下雜交，并用該溶液洗膜。4)與l)或2)限定的DNA序列具有95X以上的同源性且編碼所述蛋白的DNA分子。序列表中SEQIDNq:2所示的DNA長(zhǎng)度為945bp，其中，自其5，端的第1-768位核苷酸為編碼序列(開(kāi)放閱讀框架)，自5'端第127到第300位核苷酸為EREBP/AP2保守結(jié)構(gòu)域的編碼序列，編碼58個(gè)氨基酸，其3'端的非翻譯區(qū)長(zhǎng)度為177bp;該基因的蛋白的氨基酸序列為序列表中SEQIDNs:l所示，由255個(gè)氨基酸殘基組成，該蛋白具有DREB蛋白家族的特征，其中自N端第43-100位為EREBP/AP2保守結(jié)構(gòu)域。將歐山羊草的DREB基因命名為^e/^處X編碼蛋白命名為AebDREB。擴(kuò)增上述基因全長(zhǎng)或其任意片段的引物對(duì)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述引物對(duì)具體可為如下1)、2)或3)所示的引物對(duì)-1)一條引物的序列如序列表中序列3所示，另一條引物的序列如序列表中序列4所示；此引物對(duì)可用于擴(kuò)增基因的全長(zhǎng)；2)—條引物的序列如序列表中序列3所示，另一條引物的序列如序列表中序列5所示；此引物對(duì)可用于擴(kuò)增基因的編碼區(qū)；3)—條引物的序列如序列表中序列6所示，另一條引物的序列如序列表中序列7所示；此引物對(duì)可用于擴(kuò)增基因的3'末端區(qū)。含有上述任一所述基因的重組載體、重組菌、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或表達(dá)盒也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述重組載體具體可為在載體YEpGAP112的多克隆位點(diǎn)插入序列表中序列2中自5'末端起第1-768位所示核苷酸序列得到的重組載體；所述重組菌是可以通過(guò)將上述任一種重組載體導(dǎo)入大腸桿菌、枯草芽孢桿菌或酵母得到的。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種培育抗逆性植物的方法。本發(fā)明所提供的培育抗逆性植物的方法，是將上述任一所述基因?qū)胫参镏?，培養(yǎng)得到抗逆性植物。所述基因可以通過(guò)重組載體導(dǎo)入植物。所述抗逆性可為抗低溫和/或抗干旱。所述植物具體可為歐山羊草"ew7oASZ;iw7ci3hs)。本發(fā)明的轉(zhuǎn)錄因子具有DREB類轉(zhuǎn)錄因子家族共有的特征具有一個(gè)含有58個(gè)氨基酸的EREBP/AP2保守區(qū)。酵母單雜交實(shí)驗(yàn)證明該轉(zhuǎn)錄因子具有轉(zhuǎn)錄激活功能。此外實(shí)驗(yàn)還表明^eZ^A^^基因明顯受干旱和低溫的誘導(dǎo)表達(dá)。所以該轉(zhuǎn)錄因子，可與多個(gè)逆境應(yīng)答基因啟動(dòng)子共有的DRE調(diào)控元件特異結(jié)合，調(diào)控這些基因的表達(dá)，從而激活植物體內(nèi)的多種抗逆機(jī)制，提高抗逆能力。本發(fā)明的轉(zhuǎn)錄因子AebDREB可同時(shí)激活一系列抗性相關(guān)基因的表達(dá)，克服了傳統(tǒng)植物抗逆基因工程中用單個(gè)功能基因提高抗逆性的局限性，使植物抗逆特性的大幅度提高成為可能。因此本發(fā)明轉(zhuǎn)錄因子為基因工程改良植物耐逆性提供了一條新的技術(shù)途徑，尤其在小麥等農(nóng)作物抗逆性的綜合改良過(guò)程中具有廣泛的應(yīng)用前景和巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。圖1為不同脅迫處理下歐山羊草總RNA的瓊脂糖凝膠檢測(cè)結(jié)果。圖2為不同脅迫處理下歐山羊草Je6"必WRT-PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠檢測(cè)結(jié)果。圖3為不同脅迫處理下歐山羊草^;/wA7RT-PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠檢測(cè)結(jié)果。圖4為0mM3-AT條件下，歐山羊草^WZW^^酵母單雜交功能鑒定結(jié)果。圖5為40mM3-AT條件下，歐山羊草JeZ;/MXS酵母單雜交功能鑒定結(jié)果。具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從生物公司購(gòu)買。實(shí)施例l、蛋白及其編碼基因的發(fā)現(xiàn)1、歐山羊草Je/;/yffi^基因的分離，具體包括如下步驟1)將歐山羊草"e^7op5&'朋"^/50種子(購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院)浸泡于1%次氯酸鈉溶液中消毒20分鐘后，用無(wú)菌水洗三遍，播于1/2MS固體培養(yǎng)基(pH5.8)中，在22'C、16小時(shí)/8小時(shí)(光/暗)的條件下培養(yǎng)14天后，取幼苗洗凈，將其置于超凈工作臺(tái)上自然風(fēng)干4小時(shí)，隨后用液氮速凍，保存于-8(TC冰箱用于總RNA的提取。2)用Trizol法(Trizol購(gòu)于天根公司)提取步驟1)保存的受脫水脅迫4小時(shí)的歐山羊草植株的總RNA，經(jīng)DNA酶I處理后備用。3)用oligo(dT)引物和麗LV反轉(zhuǎn)錄酶(Promega公司產(chǎn)品)將步驟2)的總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。oligo(dT)引物序列為5'-ACTCTATGAGAATTCGATGAGCGATCTGtttttttttttttttttt—3'。反應(yīng)體系及參數(shù)為(RNaseFreeH20l扭l5XMMLVbuffer5l4dNTP(lOraMeach)1.{核糖核酸酶抑制劑(40U/W)lri亂V(200UM)Moligo(dT)(IO幽)kTotalRNA(2^g/W)反應(yīng)條件為42°C90分鐘，75°C10分鐘。反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物存于-2(TC待用。4)根據(jù)已報(bào)道的DREB基因的AP2/EREBP保守區(qū)序列設(shè)計(jì)一個(gè)兼并引物，引物序列為引物l(正向引物):5'-G(C/a)CGC(C/t/g)TGCCTCAACTTC-3';以步驟3)中的cDNA為模板，在引物l和oligo(dT)(反向引物)的引導(dǎo)下，用PCR方法擴(kuò)增得到歐山羊草DREB基因的3'-末端；其中，,SteriledistilledH2013.則10XPCRBuffer2.5)4dNTP(2mMeach)2.乂Taq0.引物1(2MM)2.oligo(dT)(2幽)2.5^1(cDNA反應(yīng)體系及參數(shù)94°C5分鐘；反應(yīng)條件94°C30秒，62°C30秒，72°C60秒，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；、72°C10分鐘。PCR產(chǎn)物經(jīng)純化回收后克隆到T載體(Promega公司產(chǎn)品)中，挑陽(yáng)性克隆送到諾賽公司測(cè)序，得到歐山羊草DREB基因的3，-末端cDNA序列。5)將步驟4)獲得的歐山羊草DREB基因的3，-末端cDNA序列送到基因庫(kù)進(jìn)行blast,與已報(bào)道的DREB基因序列進(jìn)行序列比對(duì)，從中找出相似性高的基因序列；以這些序列為基礎(chǔ)，在其5'-末端和3'-末端分別設(shè)計(jì)基因特異引物，引物序列為引物2(正向引物):5'-ATGGACGTCGCCGACATC-3'，引物3(反向引物):5'-CCCTTTTCCCCAAAACTAGAAACC-3';以步驟3)中的cDNA為模板，在引物2和引物3的引導(dǎo)下，用步驟4)的PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)條件擴(kuò)增得到歐山羊草DREB基因的全長(zhǎng)cDNA序列。將得到的歐山羊草DREB基因的全長(zhǎng)cDNA序列克隆測(cè)序，得到如序列表中SEQIDNQ:2所示的核苷酸序列，該序列長(zhǎng)度為945bp，3'端的非翻譯區(qū)長(zhǎng)度為177bp，其編碼序列(開(kāi)放閱讀框架)長(zhǎng)度為768bp，是自SEQIDN2:2的5'端的第1-768位堿基，其編碼的蛋白的氨基酸序列如序列表中SEQIDN2:l所示，具有255個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。將歐山羊草的DREB基因命名為力W/M^及編碼的蛋白命名為AebDREB。對(duì)AebDREB進(jìn)行生物信息學(xué)分析，結(jié)果表明AebDREB具有DREB蛋白家族的特征，其中自N端第43-100位為EREBP/AP2保守結(jié)構(gòu)域。2、冷、干旱和鹽誘導(dǎo)處理下^eMW^9基因的表達(dá)模式1)分別對(duì)實(shí)驗(yàn)1中培養(yǎng)的歐山羊草幼苗進(jìn)行冷誘導(dǎo)、干旱誘導(dǎo)和鹽誘導(dǎo)處理，處理方法如下1)冷誘導(dǎo)處理歐山羊草幼苗置于4'C光照培養(yǎng)箱處理,其根部置于蒸餾水中；2)干旱誘導(dǎo)處理歐山羊草幼苗置于超凈工作臺(tái)上風(fēng)干處理，濕度為50%;3)鹽誘導(dǎo)處理歐山羊草幼苗的根部置于250mMNaCl溶液中進(jìn)行處理；分別于處理后O、1、2、4、8和24小時(shí)對(duì)經(jīng)上述不同方法誘導(dǎo)處理的歐山羊草幼苗間隔取樣，然后將樣品立即用液氮速凍，-8(TC保存用于提取總RNA。用Trizol法(Trizol購(gòu)于天根公司)提取上述不同樣品的總RNA，并用1.0%瓊脂糖凝膠電泳對(duì)不同樣品的總RNA進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖1A，B，C所示(A為冷處理，B為干旱處理，C為鹽處理；泳道0、1、2、4、8和24分別表示第0、1、2、4、8和24小時(shí)采集的樣品的總RNA)。2)用RT-PCR法分析冷、干旱、鹽誘導(dǎo)條件下^eM^ffi^基因的表達(dá)模式分別以步驟l)提取的不同樣品的總RNA為模板，在引物2(正向引物)5'-ATGGACGTCGCCGACATC-3'，和引物4(反向引物)5'-GCTAAATTAGTCGAACAAGCAGCTCC-3'的引導(dǎo)下，用One-st印realtimeRT-PCRkit(TaKaRa)進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，檢測(cè)在冷、干旱和鹽誘導(dǎo)條件下^eZ^yfi^的表達(dá)模式，并在引物5(正向引物)5'-ACCGCCAGCTCTTCCACCCT-3'和引物6(反向引物)5'-TCACTGGGGCATAGGAGGAA-3'引導(dǎo)下，用同樣的參數(shù)條件及反應(yīng)條件下PCR擴(kuò)增歐山羊草的看家基因微管蛋白tubulin基因(內(nèi)參)，RT-PCR反應(yīng)體系為RNaseFreeH2010.5Hl，10XOnest印RNAPCR緩沖液2.5W，dNTP混合物(各10mM)2.5W，MgCl2(25mM)5W，RNaseInhibitor(40U/W)0.5W，M-MLVRTase(25幽)0.5W，TaKaRaExTaqHS(5U/W)0.5(4，引物2和引物4(各IO幽)各1|4，總RNA1Pg;反應(yīng)條件先50。C30分鐘，94°C2分鐘；再94°C30秒，58°C30秒，72°C60秒，進(jìn)行22個(gè)循環(huán)；最后72°C5分鐘。將PCR產(chǎn)物進(jìn)行1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖2A，B，C和圖3A,B，C所示。(圖2和圖3中，A表示受冷誘導(dǎo)處理的歐山羊草，B表示受干旱誘導(dǎo)處理的歐山羊草，C表示受鹽誘導(dǎo)處理的歐山羊草，泳道0、1、2、4、8和24分別表示第0、1、2、4、8和24小時(shí)采集的樣品的RT-PCR產(chǎn)物，圖2示目的條帶，圖3示tubulin基因)結(jié)果表明基因JeZ^y^S受低溫和干旱誘導(dǎo)表達(dá)。實(shí)施例2、蛋白及其編碼基因的功能1、基因JeZ^^S的制備1)以實(shí)施例1中基因Je/^^^的全長(zhǎng)cDNA序列為模板，在引物2和引物4的引導(dǎo)下，用高保真PfuDNA聚合酶(Pr咖ega公司)通過(guò)PCR法獲得^^^fi^的編碼區(qū)；其中，r10XPfuPCRbufferdNTP(2.5mM)糾PfuDNA聚合酶(2.5,)反應(yīng)體系及參數(shù)k引物2(10I4O引物4(IO幽)模板DNAU10ngAa)1^1、H20(滅菌超純水)35(4,94°C5分鐘反應(yīng)條件吣94°C30秒/58°C30秒，/72°C、72°C10分鐘(Promega公司)72°C80秒(30次循環(huán))2)將步驟1)獲得的^eZ^^^的編碼區(qū)片段克隆到載體pGEM-T(Promega公司)上，獲得重組載體，經(jīng)測(cè)序檢測(cè)無(wú)誤后，用限制性內(nèi)切酶SacII和PstI從重組載體上切下Je6Zy^"的編碼區(qū)片段，并將其與用相同酶酶切的YEpGAP112(ATCC公司)連接獲得重組載體，命名為/(eZ^/ffi^/YEpGAP112，測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明載體構(gòu)建正確，插入載體YEpGAP112的SacII和PstI位點(diǎn)間的基因序列為序列表中序列2中自5'末端起第1-768位核苷酸，獲得陽(yáng)性重組載體。將陽(yáng)性重組載體加似W朋/YEpGAP112分別轉(zhuǎn)化到含雙報(bào)道子(HIS3和LacZ)的含野生型DRE元件酵母菌株YM4271(LiuQ，KasugaM,SakumaY,AbeH，MiuraS,Yamaguchi-ShinozakiK,ShinozakiK，PlantCell,1998，10(8):1391-1406，)(中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所)和含突變型DRE元件酵母菌株YM4271(LiuQ,KasugaM,SakumaY,AbeH,MiuraS,Yamaguchi-ShinozakiK,ShinozakiK，PlantCel1,1998，10(8):1391-1406，)(中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所)中，再將轉(zhuǎn)化有重組載體Je/^A^萬(wàn)/YEpGAP112的重組酵母菌株涂于含有3-AT(濃度分別為0mM，40raM)的SD-Agar三缺固體培養(yǎng)基(His—，Leu—，Ura—，Clontech公司)上檢測(cè)其生長(zhǎng)情況。同時(shí)以含擬南芥"^aW的重組載體"7^fi57Z/YEpGAPl12(LiuQ，KasugaM,SakumaY,AbeH,MiuraS，Yamaguchi-ShinozakiK,ShinozakiK，PlantCell,1998,10(8):1391-1406，)為對(duì)照，將其分別轉(zhuǎn)化到含雙報(bào)道子(HIS3和LacZ)的含野生型DRE元件酵母菌株YM4271和含突變型DRE元件酵母菌株YM4271中，再將轉(zhuǎn)化有重組載體"7K^W/YEpGAPl12的重組酵母菌株分別涂于含有3-AT(濃度分別為OmM,40mM)10的SD-Agar三缺固體培養(yǎng)基(His—，Leu—，Ura—，Clontech公司)上檢測(cè)其生長(zhǎng)情況。結(jié)果如圖4-5所示。1為擬南芥"7ffi^X4在含野生型DRE元件酵母中；2為^6/Vffi^基因在含野生型DRE元件酵母中；3為野生型酵母對(duì)照；4為擬南芥"vffiSW基因在含突變型DRE元件酵母中；5為^似W^^基因在含突變型DRE元件酵母中；6為突變型酵母對(duì)照。結(jié)果表明含AebDREB和野生型DRE元件的酵母菌株在3-AT-SD-Agar三缺培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，而含AebDREB和突變型DRE元件的酵母菌株在3-AT-SD-Agar三缺培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)。說(shuō)明AebDREB可特異結(jié)合DRE元件，從而激活下游目的基因的表達(dá)，具有調(diào)控歐山羊草抗逆性應(yīng)答的功能。序列表<160〉7〈210>1<211>255<212>PRT<213>山羊草屬歐山羊草"egz7o;w6/w"c/afc)<400〉1MetAspValAlaAsplieAlaSerProSerAlaGinGinValGinGly151015HisArgThrValSerSerGluProProLysArgProAlaGlyArgThr202530LysPheHisGluThrArgHisProLeuTyrArgGlyValArgArgArg354045GlyArgValGlyGinTrpValCysGluValArgValProGlylieLys505560GlySerArgLeuTrpLeuGlyThrPheAsnThrAlaGluMetAlaAla65707580ArgAlaHisAspAlaAlaValLeuAlaLeuSerGlyArgAlaAlaCys859095LeuAsnPheAlaAspSerAlaTrpArgMetLeuProValLeuAlaAla100105110GlySerPheGlyPheGlySerAlaSerGlulieLysAlaAlaValAla115120125ValAlaValValAlaPheGinArgLysGinlielieProValAlaVal130135140AlaValValAlaLeuGinLysGinGinValProValAlaValAlaVal145150155160ValAlaLeuGinGinLeuLysValProValAlaValAlaValValAla165170175LeuGinGinGinGinlielieLeuProValAlaCysLeuAlaProGlu180185190PheTyrMetSerSerGlyAspLeuLeuGluLeuAspGluGluGinTrp195200205PheGlyGlyMetAspAlaGlyLeuLeuArgGluLeuGlyAlaGlyTyr210215220AlaArgValThrAlaGlyArgGluArgGluAlaGlyGluArgArgAla225230235240GluArgArgProAspThrAlaMetGluLeuLeuValArgLeulie245250255<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>〈400>4cccttttccccaasactaga3scc24〈210〉5〈211〉26<212>DNA<220〉<223〉<400〉5gctaaeittagtcg己acaagcagctcc26<210〉6<211〉46<212〉腿<220〉<223〉<400〉6actctatgagaattcgatgagcgatctgtttttttttttttttttt46<210〉7<211〉18<212>DNA<220〉<221>misc-feature<222>(2，6)<223〉m=c或a，b=c或t或g<400〉7gmcgcbtgcctcaacttc18權(quán)利要求1、一種蛋白，是如下a)或b)的蛋白質(zhì)a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；b)將序列表中序列1所示的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由a)衍生的蛋白質(zhì)。2、權(quán)利要求l所述蛋白的編碼基因。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因，其特征在于所述蛋白的編碼基因?yàn)槿缦?)、2)、3)或4)的基因1)其核苷酸序列是序列表中序列2中自5'末端第1-768位核苷酸所示DNA分子；2)其核苷酸序列是序列表中序列2所示DNA分子；3)在嚴(yán)格條件下與l)或2)限定的DNA序列雜交且編碼所述蛋白的DNA分子；4)與l)或2)限定的DNA序列具有95X以上的同源性且編碼所述蛋白的DNA分子。4、擴(kuò)增權(quán)利要求2或3所述基因全長(zhǎng)或其任意片段的引物對(duì)。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的引物對(duì)，其特征在于所述引物對(duì)為如下l)、2)或3)所示1)一條引物的序列如序列表中序列3所示，另一條引物的序列如序列表中序列4所示；2)—條引物的序列如序列表中序列3所示，另一條引物的序列如序列表中序列5所示；3)—條引物的序列如序列表中序列6所示，另一條引物的序列如序列表中序列7所示。6、含有權(quán)利要求2或3所述編碼基因的重組載體、重組菌、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或表達(dá)盒。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的重組載體，其特征在于所述重組載體為在載體YEpGAP112的多克隆位點(diǎn)插入序列表中序列2中自5'末端起第1-768位所示核苷酸序列得到的重組載體。8、一種培育抗逆性植物的方法，是將權(quán)利要求2或3中所述的基因?qū)胫参镏校囵B(yǎng)得到抗逆性植物。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述抗逆性為抗低溫和/或抗干旱10、根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于所述植物為歐山羊草全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種轉(zhuǎn)錄因子蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。該蛋白是如下a)或b)的蛋白質(zhì)a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；b)將序列表中序列1所示的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由a)衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的轉(zhuǎn)錄因子具有DREB類轉(zhuǎn)錄因子家族共有的特征具有一個(gè)含有58個(gè)氨基酸的EREBP/AP2保守區(qū)。該轉(zhuǎn)錄因子，可與多個(gè)逆境應(yīng)答基因啟動(dòng)子共有的DRE調(diào)控元件特異結(jié)合，調(diào)控這些基因的表達(dá)，從而激活植物體內(nèi)的多種抗逆機(jī)制，提高抗逆能力。因此本發(fā)明轉(zhuǎn)錄因子為基因工程改良植物耐逆性提供了一條新的技術(shù)途徑，尤其在小麥等農(nóng)作物抗逆性的綜合改良過(guò)程中具有廣泛的應(yīng)用前景和巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。文檔編號(hào)C07K14/415GK101456908SQ20081024680公開(kāi)日2009年6月17日申請(qǐng)日期2008年12月31日優(yōu)先權(quán)日2008年12月31日發(fā)明者劉冬成,孫家柱,張愛(ài)民,李俊明,陽(yáng)文龍申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所