專利名稱：：梅花參中新的抗腫瘤化合物AnanasideB的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，是一種從海洋動(dòng)物梅花參中分離到的新的抗腫瘤化合物AnanasideB。
背景技術(shù)：
：梅花參(7fe/e"otoa朋"oyJ.)，又名"鳳梨參"，屬海洋棘皮動(dòng)物門海參綱刺參科。其體形很大，長(zhǎng)一般為700mm，寬約100mm，高約80mm，廣泛分布于我國(guó)西沙群島和臺(tái)灣南端。其體內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)、多糖、維生素、皂苷類物質(zhì)，具有補(bǔ)肝腎，益精，養(yǎng)血的功效。有關(guān)其所含的皂苷類成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)及抗腫瘤活性迄今尚未見有過報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是從生長(zhǎng)于中國(guó)福建海域的梅花參中提取分離一種新的皂苷類化合物，命名為AnanasideB，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下AnanasideB為無色結(jié)晶性粉末，溶點(diǎn)203~205°C(MeOH-H20)，[a]D-12.3°(c=0.2，MeOH)，Liebermann-Burchard反應(yīng)和Molisch反應(yīng)均呈陽性。電噴霧質(zhì)譜信號(hào)w/z1229[M+Na]+和m/z1183[M-Na]'。紅外光譜max-3416，強(qiáng)寬峰(羥基)，1740(羰基)，1637(雙鍵)，1256，1070(us，磺酸基)。'H-和13C核磁共振數(shù)據(jù)見表l。表1AnanasideB的的和13C核磁共振數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>Xyl:木糖，Qui:奎諾糖，MeGlc:3-氧甲基葡萄糖，J值偶合常數(shù)本發(fā)明還提供了從梅花參提取分離AnanasideB的方法，其步驟如下(1)提取將梅花參洗凈，切碎，用5倍量(重量)95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡提取2次，每次7天，合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫。收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物。(2)分離將上述總皂苷提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲烷甲醇水為8~5:1~4:1混合溶劑洗脫，薄層層析檢測(cè)，收集含AnanasideB的流份，再經(jīng)c18反相柱層析，以甲醇水為9:i~7:3梯度洗脫，薄層層析檢測(cè)，得AnanasideB純品。本發(fā)明對(duì)AnanasideB進(jìn)行了體外抗腫瘤試驗(yàn)，表明其具有明顯的抑制腫瘤的效果。試驗(yàn)所用細(xì)胞株為國(guó)際通用的腫瘤細(xì)胞株，即A-549(肺癌)MCF-7(乳腺癌)IA-9(卵巢癌)CAKI-1(腎癌)U-87-MG(神經(jīng)母細(xì)胞癌)PC-3(前列腺癌)KB(鼻咽癌)KB-VIN(鼻咽癌)SK-MEL-2(黑色素瘤)HCT-8(腸癌)試驗(yàn)方法為國(guó)際通用的SRB法根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速率，將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞以90pl/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長(zhǎng)24小時(shí)再加藥10pl/孔。每個(gè)濃度設(shè)三復(fù)孔。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對(duì)照及無細(xì)胞調(diào)零孔。腫瘤細(xì)胞在37°C、5XCO;條件下培養(yǎng)72小時(shí)，然后傾去培養(yǎng)液，用10%冷TCA固定細(xì)胞，4'C放置1小時(shí)后用蒸餾水洗滌5次，空氣干燥。最后加入150pl/孔的Tris溶液，酶標(biāo)儀520nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值。試驗(yàn)結(jié)果見表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>ic5():表示本發(fā)明化合物的半數(shù)有效抑制濃度上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，AnanasideB對(duì)10種不同的腫瘤細(xì)胞株均顯示明顯的抑制作用。本發(fā)明為研制新的抗腫瘤藥物提供了新的先導(dǎo)化合物，為開發(fā)利用中國(guó)的海洋藥用生物資源具有重要意義。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步描述AnanasideB的分離制備。將梅花參1000克洗凈，切碎，分別用5倍量(重量)的95%、85%、85%乙醇依次浸泡，每次浸泡7天，合并乙醇浸出液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于3倍量水中，過濾，濾液通過DA201-B大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至干，得總皂苷5.6克。將總皂苷進(jìn)行硅膠柱層析，以二氯甲垸甲醇水為7:3:1的溶劑洗脫，收集含AnanasideB的流份，再經(jīng)d8反相柱層析，以甲醇水為9:1~7:3溶劑進(jìn)行梯度洗脫，薄層層析檢測(cè)，得AnanasideB純品0.6克。權(quán)利要求1.一種抑制腫瘤的化合物，其特征在于化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下∶2.權(quán)利要求i所述抑制腫瘤的化合物的制備方法，其具體步驟如下(1)提取將原料梅花參洗凈，切碎，用95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡2次，每次7天；合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏；將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫；收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物；(2)分離將上述總皂苷提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲烷甲醇水為8~5:1~4:l混合溶劑洗脫，薄層層析檢測(cè)，收集含權(quán)利要求i所述化合物的流份，再經(jīng)c18反相柱層析，以甲醇水為9:1~7:3梯度洗脫，薄層層析檢測(cè)，得權(quán)利要求i所述化合物純品。權(quán)利要求i所述抑制腫瘤的化合物用于制備抗腫瘤藥物的用途c全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具休為一種從梅花參中分離的抗癌化合物AnanasideB，分子式C₅₄H₈₇O₂₆SNa。經(jīng)多種現(xiàn)代光譜分析，特別是應(yīng)用先進(jìn)的二維核磁共振譜和高分辨質(zhì)譜的綜合解析，確定了該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及立體構(gòu)型。體外抗腫瘤試驗(yàn)表明，該化合物對(duì)A-549肺癌和IA-9卵巢癌等10種腫瘤細(xì)胞株有明顯的抑制作用。本發(fā)明可為研制新的抗腫瘤藥物提供先導(dǎo)化合物，對(duì)開發(fā)利用中國(guó)的海洋藥用生物資源具有重要價(jià)值。文檔編號(hào)C07J71/00GK101376671SQ20081012075公開日2009年3月4日申請(qǐng)日期2008年9月11日優(yōu)先權(quán)日2008年9月11日發(fā)明者軍巫申請(qǐng)人:寧波保稅區(qū)欣諾生物技術(shù)有限公司