專(zhuān)利名稱(chēng)：肽硼酸及其酯類(lèi)化合物、制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物合成領(lǐng)域，具體涉及一類(lèi)新型肽硼酸及其酯類(lèi)化合物的制備方法及其在藥效學(xué)上的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
目前，惡性腫瘤仍然是威脅人們生命的主要疾病之一。美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)在2007年12月17日的《全球癌癥事實(shí)和數(shù)據(jù)》中報(bào)告，2007年全球新增癌癥病患1200萬(wàn)例，760萬(wàn)人死于癌癥，相當(dāng)于每天死亡2萬(wàn)人。其中發(fā)達(dá)國(guó)家新增癌癥患者670萬(wàn)人，有470萬(wàn)人死于癌癥；發(fā)展中國(guó)家當(dāng)年新增癌癥患者540萬(wàn)人，290萬(wàn)人因癌癥死亡。而在中國(guó)，據(jù)衛(wèi)生部統(tǒng)計(jì)資料表明，我國(guó)惡性腫瘤全國(guó)患病率達(dá)到1.15‰，如果按照目前全國(guó)總?cè)丝?3億為基數(shù)，目前我國(guó)惡性腫瘤每年新增患者約有148.5萬(wàn)左右，另外良性腫瘤全國(guó)患病率達(dá)到0.93‰，按照全國(guó)總?cè)丝?3億為基數(shù)，目前我國(guó)良性腫瘤患者新增約有120萬(wàn)左右，兩者合計(jì)每年新增約有268.5萬(wàn)左右的腫瘤患者。從腫瘤死亡率看，每年我國(guó)腫瘤患者的死亡率全國(guó)合計(jì)約每10萬(wàn)人有119.54人死于腫瘤病因，也就是說(shuō)全國(guó)腫瘤死亡人數(shù)每年約有154萬(wàn)人左右，城市死亡率略高于農(nóng)村死亡率。癌癥的治療目前雖然已經(jīng)取得了很大的進(jìn)步，但還未能從根本上治療癌癥的目的。目前上市的抗癌藥物雖然具有一定的療效，但它們大多是細(xì)胞毒藥物，具有嚴(yán)重的毒副作用。因此，如何從有效的腫瘤靶點(diǎn)出發(fā)來(lái)研究靶向性的新型抗癌藥物成為當(dāng)務(wù)之急。
目前已經(jīng)證實(shí)，泛素-蛋白酶體這一降解途徑對(duì)很多生理過(guò)程的調(diào)控以及人類(lèi)許多重要疾病的發(fā)展過(guò)程都起到非常重要的作用。例如，如果這一過(guò)程過(guò)度地降解腫瘤抑制因子p53和依賴(lài)周期素的激酶的抑制劑p27Kipl，就會(huì)引起腫瘤的發(fā)生以及導(dǎo)致人的癌細(xì)胞的失控繁殖。同時(shí)，這一過(guò)程在免疫監(jiān)督、肌肉萎縮、代謝過(guò)程的調(diào)控、長(zhǎng)期記憶的獲得以及生理節(jié)奏的調(diào)控等方面也起到了非常關(guān)鍵的作用。近期發(fā)現(xiàn)，這一過(guò)程還對(duì)神經(jīng)退行性疾病、肌萎縮側(cè)索硬化癥(Amyotrophic Lateral Sclerosis，ALS)、阿爾茨海默病(Alzheimer’disease，AD)、帕金森病(Parkinson’disease，PD)、亨廷頓舞蹈病(Huntington’disease，HD)、皮質(zhì)-紋狀體-脊髓變性病(Creutzfeld-Jacob disease，CJD)以及糖尿病的發(fā)病都有很大的影響。
在這個(gè)關(guān)鍵途徑中，蛋白酶體起到了非常重要的催化作用。蛋白酶體是依賴(lài)ATP的蛋白酶水解復(fù)合物，是真核細(xì)胞中分解內(nèi)源性蛋白質(zhì)的主要酶系統(tǒng)，屬于蘇氨酸蛋白酶家族。蛋白酶體組分最多，是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的最大、最復(fù)雜的蛋白質(zhì)，大約占全部基因產(chǎn)物的1-2％。蛋白酶體密度梯度離心沉降系數(shù)為26S，故又被稱(chēng)為26S蛋白酶體，它由催化顆粒(catalytic particle，CP)和調(diào)控顆粒(regulatory particle，RP)組成，CP的沉降系數(shù)為20S，所以又稱(chēng)20S蛋白酶體，分子量700～750kD，CP由分子量為20～30kD的多個(gè)催化亞基組成；RP有三倍體ATP酶亞基(RP triple ATPase，Rpt)和非ATP酶亞基(RP non-ATPase，RPn)，分子量在30～110kD之間。
26S蛋白酶體是一個(gè)圓柱狀的對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu)，兩端為兩個(gè)“瓶蓋”狀的19S蛋白酶體，中間則為兩個(gè)“水桶”狀的20S蛋白酶體。雖然一般把這種蛋白酶體叫做26S蛋白酶體，而且最初認(rèn)為它的分子量是1000kD或者1500kD，但是，近年來(lái)更精確的測(cè)定表明，它的沉降系數(shù)為30S，分子量為2000kD。Baumeister等人運(yùn)用電鏡耦合的數(shù)字影像分析表明，從兩棲動(dòng)物、哺乳動(dòng)物、高等植物和酵母菌里提取出來(lái)的這種復(fù)合物具有相當(dāng)一致的結(jié)構(gòu)。
X射線表明，古細(xì)菌熱源體屬嗜酸菌(T.acidophilun)的20S蛋白酶體呈圓柱形狀，長(zhǎng)148

，最大直徑是113

，最小直徑是75

，它由四個(gè)圓環(huán)共28個(gè)亞基按照(α1-α7，β1-β7)2的方式有序堆疊而成，呈D7對(duì)稱(chēng)。中央為貫穿整個(gè)顆粒的孔道，顆粒內(nèi)部有三個(gè)大的空腔，中間較大的空腔為蛋白質(zhì)水解的場(chǎng)所。腔的入口位于各圓環(huán)的中心，這些孔很窄，一方面能控制蛋白質(zhì)的進(jìn)入，另一方面又能組織部分水解的底物從活性位點(diǎn)釋放。近年來(lái)，X射線證實(shí)，哺乳動(dòng)物牛的20S蛋白酶體和酵母菌有完全相同的亞基排列順序，一級(jí)結(jié)構(gòu)特性與酵母菌的類(lèi)似，具有高度的保守性。但是，牛的20S蛋白酶體的高級(jí)結(jié)構(gòu)和酵母菌的是不同的。其中，α2、β1、β5、β6和β7等亞基是不相同的。而且在牛的20S蛋白酶體中，β7亞基具有N端親核水解酶的活性，這個(gè)活性部位的裂口比β1、β2和β5亞基的要小。
小分子抑制劑一般只作用于20S蛋白酶體的催化位點(diǎn)。真核細(xì)胞20S蛋白酶體含有六個(gè)活性位點(diǎn)，每個(gè)β環(huán)上有三個(gè)，分別位于β1、β2和β5亞基上。已發(fā)現(xiàn)20S蛋白酶體有三種明顯的酶活性1、糜蛋白酶樣(chymotrypsin-like，CT-L)活性，在大的疏水性氨基酸殘基后水解肽鍵，該活性部位主要位于β5亞基上；2、胰蛋白酶樣(trypsin-like，T-L)活性，在堿性氨基酸殘基后水解肽鍵，活性部位主要位于β2亞基；3、多肽-谷氨酰-多肽水解酶活性(postglutamyl-hydrolase，PGPH)，在酸性氨基酸殘基后水解肽鍵，活性部位主要位于β1亞基。不過(guò)后來(lái)發(fā)現(xiàn)這個(gè)位點(diǎn)上分解天冬氨酸殘基的速度比谷氨酸快，所以又被稱(chēng)為半胱天冬酶樣(caspase-like)活性。(半胱天冬酶是細(xì)胞內(nèi)賴(lài)氨酸分解酶，在細(xì)胞代謝凋亡途徑起作用，只作用于天冬氨酸殘基)。需要注意的是這些名稱(chēng)只表達(dá)了它們與傳統(tǒng)的蛋白水解酶之間的相似之處，并不能解釋為相同的催化機(jī)理或生理功能。
如果上述三種活性被抑制后，蛋白酶體則顯示出另外兩種活性一種是在帶分枝側(cè)鏈的氨基酸殘基后優(yōu)先水解肽鍵的活性(BrAAP活性)；另一種是在小的中性氨基酸殘基后水解肽鍵的活性(SNAAP活性)。然而，利用X射線衍射、動(dòng)力學(xué)和位點(diǎn)定向突變等方法的研究卻表明具有這兩種活性的新位點(diǎn)并不存在。而且，分解支鏈氨基酸(如亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸)主要由半胱天冬酶位點(diǎn)執(zhí)行，糜蛋白酶樣位點(diǎn)稍弱。因此，蛋白酶體活性位點(diǎn)的名稱(chēng)并不能反映出它們的全部特性。
目前報(bào)道的蛋白酶體抑制劑可以分為兩大類(lèi)共價(jià)鍵抑制劑和非共價(jià)鍵抑制劑。共價(jià)鍵抑制劑包括肽醛類(lèi)、α-酮酰胺類(lèi)、肽硼酸及其酯類(lèi)、肽乙烯砜類(lèi)、天然產(chǎn)物TMC-95-A-D、β-內(nèi)酯類(lèi)化合物、環(huán)氧酮類(lèi)化合物等；非共價(jià)鍵抑制劑包括茶多酚類(lèi)及2-取代氨基芐基statine類(lèi)等。在這些抑制劑中，已有一個(gè)二肽硼酸Bortezomib(PS-341)上市。該藥是由它是由美國(guó)千年制藥公司(Millennium Pharmaceuticals)開(kāi)發(fā)的新型抗腫瘤藥物，2003年5月13日獲美國(guó)FDA批準(zhǔn)，以商品名VelcadeTM(每支含bortezomib無(wú)菌粉末3.5mg，僅供靜脈注射用)在美國(guó)上市。2004年4月該藥又被批準(zhǔn)在歐盟上市。2005年9月21日，該藥由西安楊森首次在我國(guó)的廣州上市。2005年，該藥同時(shí)在法國(guó)、比利時(shí)和荷蘭獲得具有醫(yī)藥界的諾貝爾獎(jiǎng)稱(chēng)號(hào)的“PrixGalien”獎(jiǎng)。在2007年7月11日，該藥又被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于治療復(fù)發(fā)或難治性套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)。它是目前唯一獲FDA批準(zhǔn)用于治療MCL的藥物。這一藥物的成功上市，更加證明了蛋白酶體可以作為一個(gè)新型的靶點(diǎn)進(jìn)行抗腫瘤藥物的設(shè)計(jì)。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種結(jié)構(gòu)新穎的且具有抑制蛋白酶體功能的新型硼酸和硼酸酯類(lèi)化合物。它們作為20S蛋白酶體抑制劑，能阻斷腫瘤細(xì)胞增殖，誘發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡，從而可用于人和動(dòng)物的多種疾病如惡性腫瘤的治療和預(yù)防。
本發(fā)明的另一目的是提供一種上述肽硼酸及其酯類(lèi)化合物的制備方法。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種上述肽硼酸及其酯類(lèi)化合物在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的具體可以通過(guò)以下措施來(lái)達(dá)到 一種肽硼酸及其酯類(lèi)化合物，其結(jié)構(gòu)如式I所示，
其中 R1或R2分別獨(dú)立地為取代或非取代的C1～10的烷基、C3～6的環(huán)烷基或雜環(huán)烷基、芐基、萘甲基或吲哚甲基，R1或R2優(yōu)選分別獨(dú)立地為取代或非取代的C1～10的烷基、芐基、萘甲基或吲哚甲基，R1最優(yōu)選為取代或非取代的C1～10的烷基、芐基、1-萘甲基、2-萘甲基或吲哚甲基，R2最優(yōu)選為取代或非取代的C1～10的烷基或芐基。對(duì)R1或R2的取代或非取代的限定并非僅狹義地指C1～10的烷基，而是擴(kuò)大到所有所述的基團(tuán)，即包括取代或非取代的C3～6的環(huán)烷基或雜環(huán)烷基、取代或非取代的芐基、取代或非取代的萘甲基、取代或非取代的吲哚甲基等，其中所述的取代基為C1～4的烷基、氰基、羥基、巰基、氨基或鹵素，優(yōu)選為C1～4的烷基或鹵素。
Z1或Z2分別獨(dú)立地為羥基、C1～10的烷基、C1～10的烷氧基或芳氧基，或者B、Z1和Z2一起形成含有N、S或O的雜環(huán)基團(tuán)；Z1或Z2優(yōu)選分別獨(dú)立地為羥基、C1～10的烷基、C1～10的烷氧基或芳氧基，或者B、Z1和Z2一起形成硼酸-α-蒎烷二醇酯；Z1或Z2最優(yōu)選分別獨(dú)立地為羥基，或者B、Z1和Z2一起形成硼酸-α-蒎烷二醇酯。
Pg為取代或非取代的至少含有一個(gè)不飽和環(huán)的二環(huán)酰基或三環(huán)?；鶊F(tuán)，優(yōu)選為取代或非取代的四氫萘?；?，其中所述的取代基為C1～4的烷基、C1～4的烷氧基、鹵素或C1～4的鹵代烷基。更進(jìn)一步，Pg優(yōu)選為
其中R3或R4分別獨(dú)立地為氫、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或三氟甲基。
術(shù)語(yǔ)“烷基”用于表示飽和烴基，C1～10的烷基是指含有1～10個(gè)碳原子的飽和烴基，C1～4的烷基是指含有1～10個(gè)碳原子的飽和烴基。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”指非芳族碳環(huán)基，包括環(huán)化的烷基。環(huán)烷基可以包括二環(huán)或多環(huán)系統(tǒng)。環(huán)烷基的例子包括環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基，C3～6的環(huán)烷基是指含有1～10個(gè)碳原子的環(huán)烷基。
術(shù)語(yǔ)“芐基”是指苯甲基，取代的芐基是指在芐基的苯環(huán)上至少一個(gè)氫原子被非氫部分取代，芐基的取代基可以是鹵素，-CN，-OH，-SH，-NH2，1-6個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基，1-6個(gè)碳的取代的直鏈或支鏈烷基。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)烷基”是指非芳族雜碳環(huán)基，包括環(huán)化的烷基，其中一個(gè)或多個(gè)成環(huán)碳原子被雜原子例如O，N或S原子取代。雜環(huán)烷基優(yōu)選具有3，4，5，6或7個(gè)成環(huán)原子。
“1-萘甲基”是指
“2-萘甲基”是指
“吲哚甲基”是指
“烷氧基”是指-O-烷基基團(tuán)，其碳原子數(shù)一般為1～10個(gè)。烷氧基的例子包括甲氧基，乙氧基，丙氧基(如，n-丙氧基和異丙氧基)，t-丁氧基等。
“芳基”是指芳族碳環(huán)基，包括單環(huán)或多環(huán)芳烴例如苯基，萘基，蒽基，菲基等。
“芳氧基”是指-O-芳基，而芳基的概念如上所述，芳氧基最優(yōu)選的例子是苯氧基。
“鹵素”包括氟，氯，溴和碘。
本發(fā)明化合物可以用以制備抗腫瘤藥物，其總的制備路線為
該反應(yīng)式中各基團(tuán)Pg，R1，R2，Z1，Z2的定義如前所述，式(II-1)在SOCl2作用下與甲醇反應(yīng)得到式(II-2)，式(II-2)在肽縮合劑下與Pg縮合生成式(II-3)或者式(II-2)與酰氯的Pg反應(yīng)生成式(II-3)，式(II-3)皂化再酸化生成(II)；而另一邊，(III-6)與金屬試劑R2MgX反應(yīng)，再在室溫下被無(wú)水ZnCl2催化成式(III-7)，式(III-7)與MN(SiMe3)2反應(yīng)生成式(III-8)，式(III-8)在酸性條件下脫保護(hù)形成式(III)；最后(II)和(III)縮合成式(I)。式(I)還可脫除與B連接的基團(tuán)從而得到硼酸產(chǎn)物。
以下詳述本發(fā)明化合物的制備方法
Pg，R1，R2，Z1，Z2的定義如上所述。
化合物(II)的制備方法包括如下的步驟 1)式(II-1)結(jié)構(gòu)的氨基酸在SOCl2作用下與甲醇反應(yīng)得到式(II-2)結(jié)構(gòu)的化合物； 2)式(II-3)結(jié)構(gòu)的化合物可以通過(guò)以下兩種途徑來(lái)制備a、式(II-2)結(jié)構(gòu)的化合物在肽縮合劑存在下，與Pg發(fā)生縮合反應(yīng)，生成式(II-3)的化合物；b、Pg與SOCl2發(fā)生反應(yīng)生成酰氯，然后再與式(II-2)結(jié)構(gòu)的化合物反應(yīng)生成式(II-3)結(jié)構(gòu)的化合物。
3)式(II-3)結(jié)構(gòu)的化合物在堿性條件下發(fā)生皂化反應(yīng)生成其鈉鹽，然后在酸性條件下生成化合物(II)。

其中，Pg和R1的定義如上所述。
上述反應(yīng)中常見(jiàn)的肽縮合劑為N，N-二環(huán)己基-碳二亞胺(縮寫(xiě)為DCC)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(縮寫(xiě)為EDC·HCl)，1-羥基苯并三氮唑(縮寫(xiě)為HOBt)或氯甲酸異丁酯。
化合物(III)的制備方法包括如下的步驟(以B、Z1和Z2一起構(gòu)成硼酸-α-蒎烷二醇酯為例) 1)式(III-1)所示的α-蒎烯在氧化劑OsO4的作用下生成手性的蒎烷二醇(III-2)； 2)干燥的CH2Cl2在-110℃下與正丁基鋰發(fā)生反應(yīng)，生成式(III-3)所示的有機(jī)金屬中間體； 3)式(III-3)結(jié)構(gòu)的化合物與式(III-4)所示的硼酸酯在-110℃下反應(yīng)，生成式(III-5)所示的同源硼酸酯； 4)式(III-5)結(jié)構(gòu)的化合物與式(III-2)結(jié)構(gòu)的手性蒎烷二醇進(jìn)行酯交換，生成式(III-6)所示的硼酸酯； 5)式(III-6)結(jié)構(gòu)的化合物與金屬試劑R2MgX在-78℃下反應(yīng)，然后在室溫下被無(wú)水ZnCl2催化生成式(III-7)所示的化合物； 6)式(III-7)結(jié)構(gòu)的化合物與MN(SiMe3)2反應(yīng)生成雙(三甲基硅)保護(hù)的胺基硼酸酯如式(III-8)所示的化合物； 7)式(III-8)所示的化合物在酸性條件下將保護(hù)基雙(三甲基硅)脫除生成氨基裸露的如式(III)所示的硼酸酯類(lèi)化合物。

其中，R1的定義同前所述，R5是指1到4個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或取代烷烴，X代表鹵素如F、Cl、Br、I，M代表堿金屬如Li、Na、K等。
最后將化合物(II)和(III)在一定的縮合劑存在下反應(yīng)生成(I)。所用縮合劑為T(mén)BTU(O-苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲脲四氟硼酸酯)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(縮寫(xiě)為EDC·HCl)，1-羥基苯并三氮唑(縮寫(xiě)為HOBt)或氯甲酸異丁酯。
如果(I)所示的化合物為硼酸酯，則通過(guò)下述反應(yīng)可以脫去酯基生成硼酸
脫除酯基的方法有兩種一是在高碘酸鈉的作用下，二醇發(fā)生斷裂，生成硼酸的鈉鹽，將體系pH值調(diào)為酸性，得到硼酸；二是硼酸酯與空間位阻較大的硼酸(如異丁基硼酸、苯基硼酸)發(fā)生酯交換得到目的產(chǎn)物硼酸，經(jīng)過(guò)一些分離手段得到產(chǎn)物。
本發(fā)明的發(fā)明人通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明化合物具有良好的抑制蛋白酶體的活性和抗腫瘤活性，所有的化合物在納摩爾水平下表現(xiàn)出較好的蛋白酶體抑制活性和抗腫瘤作用，具有廣闊的應(yīng)用價(jià)值。同時(shí)，本發(fā)明所設(shè)計(jì)的化合物制備方法產(chǎn)率較高，工藝簡(jiǎn)單，可適合于工業(yè)化生產(chǎn)。

具體實(shí)施例方式 第一部分化合物的合成 本發(fā)明的化合物的制備可按照如下過(guò)程實(shí)施 一、化合物(II)的制備
1、氨基酸甲酯II-2的制備 將不帶任何保護(hù)基的氨基酸II-1溶解于無(wú)水甲醇中，-5℃下向反應(yīng)體系中滴加SOCl2，緩慢升至室溫后反應(yīng)1小時(shí)，再回流1小時(shí)。蒸除溶劑，得到的固體經(jīng)重結(jié)晶(甲醇/乙醚)得到氨基酸甲酯的鹽酸鹽(式II-2)。
2、氨基保護(hù)的氨基酸甲酯II-3的制備 方法a 將氨基保護(hù)劑Pg和1中所制備的氨基酸甲酯II-2溶于THF中，0℃下加入N-甲基嗎啉及合適的肽縮合反應(yīng)試劑(DCC+HOBt)。緩慢升至室溫，繼續(xù)反應(yīng)一定時(shí)間，直至TLC顯示反應(yīng)完成。過(guò)濾除去不溶性固體，蒸干濾液，向得到的粘稠液體中加入適量的乙酸乙酯溶解，有機(jī)相分別用堿洗(5％碳酸氫鈉)，酸洗(10％檸檬酸)，堿洗(5％碳酸氫鈉)及飽和食鹽水洗。干燥劑干燥(無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂)。濾除干燥劑，減壓蒸干溶劑，得到氨基保護(hù)的氨基酸甲酯II-3的粗產(chǎn)品。粗產(chǎn)品未經(jīng)純化，直接用于下步皂化反應(yīng)。
方法b 在0℃下，將氨基保護(hù)劑Pg溶解于SOCl2中，加入催化量的干燥DMF，室溫下反應(yīng)20分鐘，升溫到50℃反應(yīng)一定時(shí)間，蒸除未反應(yīng)的SOCl2。得到保護(hù)劑Pg的酰氯。用適量的干燥甲苯溶解，干燥放置備用。
將氨基酸甲酯II-2溶于有機(jī)溶劑(甲苯)中，加入過(guò)量的N-甲基嗎啉，在0℃下滴加上述制備的Pg的酰氯的甲苯溶液。在0℃下反應(yīng)一定時(shí)間，然后緩慢升至室溫反應(yīng)一定時(shí)間，直至TLC顯示反應(yīng)完成。減壓蒸除溶劑，得到的固體用適量有機(jī)溶劑(乙酸乙酯)溶解，分別用堿洗(5％碳酸氫鈉)，酸洗(10％檸檬酸)，堿洗(5％碳酸氫鈉)及飽和食鹽水洗。干燥劑干燥(無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂)。濾除干燥劑，減壓蒸干溶劑，得到氨基保護(hù)的氨基酸甲酯II-3的粗產(chǎn)品。粗產(chǎn)品未經(jīng)純化，直接用于下步皂化反應(yīng)。
3、化合物II的制備 將上述制備好的II-3的粗產(chǎn)品溶解于有機(jī)溶劑(丙酮)中，在0℃下加入無(wú)機(jī)堿的水溶液(2N NaOH)，使體系pH值保持在11～13之間，直至TLC顯示反應(yīng)完成。減壓蒸除有機(jī)溶劑，水相用有機(jī)溶劑(乙酸乙酯)萃取2遍，水相在0℃下滴加無(wú)機(jī)酸的水溶液(5N HCl)直至體系pH值為1～3之間。用有機(jī)溶劑(乙酸乙酯)萃取，有機(jī)相用干燥劑干燥(無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂)。濾除干燥劑，減壓蒸干溶劑，得到產(chǎn)物II。
二、化合物(III)的制備 1、化合物III-a的制備

1)III-2a的制備 將Me3NO·2H2O溶解于水中，向反應(yīng)體系中加入III-1a、叔丁醇、少量吡啶及催化量的四氧化鋨。一定溫度下(100℃)加熱回流24小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。自然降至室溫，加入適量還原劑(NaHSO3)及固體食鹽。分液，水層用有機(jī)溶劑(乙醚)提取，合并有機(jī)相，有機(jī)相用干燥劑干燥(無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂)。濾除干燥劑，減壓蒸干溶劑，得到粘稠液體。經(jīng)柱層析分離得產(chǎn)品III-2a。
2)化合物III-3的制備 在-110℃下，向惰性氣體(如N2或Ar氣)保護(hù)的無(wú)水二氯甲烷和無(wú)水四氫呋喃體系中慢慢滴加正丁基鋰溶液，滴加完畢后保持-110℃繼續(xù)反應(yīng)1小時(shí)。得到化合物III-3的溶液。直接用于下步反應(yīng)。
3)化合物III-5的制備 在-110℃下，向2)中制備好的化合物III-3的反應(yīng)體系中慢慢滴加式III-4所示的硼酸三酯，保持-110℃攪拌1小時(shí)后加入無(wú)機(jī)酸溶液(5N HCl)淬滅反應(yīng)，自然升至室溫。分液，水層用有機(jī)溶劑(乙醚)萃取，合并有機(jī)相，有機(jī)相用干燥劑干燥(無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂)。濾除干燥劑，減壓蒸干溶劑得白色粘稠狀固體化合物III-5。產(chǎn)品未經(jīng)純化直接用于下步反應(yīng)。
4)化合物III-6a的制備 將化合物III-5用有機(jī)溶劑(無(wú)水乙醚或二氯甲烷)溶解，加入制備好的III-2a，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)18小時(shí)后，TLC顯示反應(yīng)完成。分液，水相用有機(jī)溶劑(乙酸乙酯)提取，合并有機(jī)相，有機(jī)相用干燥劑干燥(無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂)。濾除干燥劑，減壓蒸干溶劑，經(jīng)柱層析分離得化合物III-6a。
5)格式試劑R2MgX的制備 在嚴(yán)格干燥過(guò)的反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加入鎂屑、無(wú)水有機(jī)溶劑(無(wú)水THF或無(wú)水乙醚)及一小粒碘片。室溫下向反應(yīng)體系中滴加鹵代烴R2X和無(wú)水有機(jī)溶劑(無(wú)水THF或無(wú)水乙醚)的混合溶液。用水浴將反應(yīng)體系加熱至微沸狀態(tài)，待大部分鎂反應(yīng)完后，加熱回流體系30分鐘，使剩余的鎂全部反應(yīng)完全。使反應(yīng)體系慢慢冷卻，備用。
6)化合物III-7a的制備 在惰性氣體(如N2或Ar氣)保護(hù)下，用無(wú)水有機(jī)溶劑(無(wú)水THF或乙醚)溶解III-6a，反應(yīng)體系降溫至-78℃。向其中慢慢滴加5)中制備好的R2MgX格式試劑的有機(jī)溶劑(無(wú)水THF或乙醚)溶液。滴加完畢后，加入干燥好的ZnCl2粉末。反應(yīng)體系自然升至室溫，室溫下繼續(xù)攪拌18h后TLC顯示反應(yīng)完成。過(guò)濾除去固體，濃縮后柱層析分離得化合物III-7a。
7)化合物III-8a的制備 用無(wú)水有機(jī)溶劑(無(wú)水THF)溶解6)中制備好的III-7a，反應(yīng)體系用惰性氣體(如N2或Ar氣)保護(hù)并降溫至-78℃，然后慢慢滴加MN(SiMe3)2溶液。滴加完畢后，自然升至室溫，室溫下繼續(xù)攪拌。TLC檢測(cè)顯示，20h后反應(yīng)完畢。減壓蒸除溶劑，得到粘稠液體。加入正己烷溶解，過(guò)濾除去不溶物，得到III-8a的正己烷溶液。備用。
8)化合物III-a的制備 將上述制備好的III-8a的正己烷溶液用惰性氣體(如N2或Ar氣)保護(hù)并降溫至-78℃。向反應(yīng)體系中加入溶解氯化氫氣體的有機(jī)溶劑(如二氧六環(huán)、乙醚)溶液，然后自然升至室溫，析出固體。過(guò)濾，濾餅用有機(jī)溶劑(乙醚)洗滌，得到化合物III-a。產(chǎn)品未經(jīng)純化，直接用于下步反應(yīng)。
2、化合物III-b的制備
1)III-2b的制備 將Me3NO·2H2O溶解于水中，向反應(yīng)體系中加入III-1b、叔丁醇、少量吡啶及催化量的四氧化鋨。一定溫度下(100℃)加熱回流48小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。自然降至室溫，加入適量還原劑(NaHSO3)及固體食鹽。減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑，向殘余的液體和固體的混合物中加入有機(jī)溶劑(乙醚和乙酸乙酯)，分液，水層用有機(jī)溶劑(乙醚和乙酸乙酯)提取，合并有機(jī)相，有機(jī)相用干燥劑干燥(無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂)。濾除干燥劑，減壓蒸干溶劑，得到粘稠液體。高真空度下減壓蒸餾得產(chǎn)品III-2b。
2)化合物III-3的制備 在-110℃下，向惰性氣體(如N2或Ar氣)保護(hù)的無(wú)水二氯甲烷和無(wú)水四氫呋喃體系中慢慢滴加正丁基鋰溶液，滴加完畢后保持-110℃繼續(xù)反應(yīng)1小時(shí)。得到化合物III-3的溶液。直接用于下步反應(yīng)。
3)化合物III-5的制備 在-110℃下，向2)中制備好的化合物III-3的反應(yīng)體系中慢慢滴加式III-4所示的硼酸三酯，保持-110℃攪拌1小時(shí)后加入無(wú)機(jī)酸溶液(5N HCl)淬滅反應(yīng)，自然升至室溫。分液，水層用有機(jī)溶劑(乙醚)萃取，合并有機(jī)相，有機(jī)相用干燥劑干燥(無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂)。濾除干燥劑，減壓蒸干溶劑得白色粘稠狀固體化合物III-5。產(chǎn)品未經(jīng)純化直接用于下步反應(yīng)。
4)化合物III-6b的制備 將化合物III-5用有機(jī)溶劑(無(wú)水乙醚或二氯甲烷)溶解，加入制備好的III-2b，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24小時(shí)后，TLC顯示反應(yīng)完成。減壓蒸除有機(jī)溶劑，向剩余粘稠液體中加入有機(jī)萃取劑(乙酸乙酯或乙醚)，分液，水相用有機(jī)溶劑(乙酸乙酯或乙醚)提取，合并有機(jī)相，有機(jī)相用干燥劑干燥(無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂)。濾除干燥劑，減壓蒸干溶劑，經(jīng)柱層析分離得化合物III-6b。
5)格式試劑R2MgX的制備 在嚴(yán)格干燥過(guò)的反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加入鎂屑、無(wú)水有機(jī)溶劑(無(wú)水THF或無(wú)水乙醚)及一小粒碘片。室溫下向反應(yīng)體系中滴加鹵代烴R2X和無(wú)水有機(jī)溶劑(無(wú)水THF或無(wú)水乙醚)的混合溶液。用水浴將反應(yīng)體系加熱。使溶液呈微沸狀態(tài)，待大部分鎂反應(yīng)完后，加熱回流體系30分鐘，使剩余的鎂全部反應(yīng)完全。使反應(yīng)體系慢慢冷卻，備用。
6)化合物III-7b的制備 在惰性氣體(如N2或Ar氣)保護(hù)下，用無(wú)水有機(jī)溶劑(無(wú)水THF或乙醚)溶解III-6b，反應(yīng)體系降溫至-78℃。向其中慢慢滴加5)中制備好的R2MgX格式試劑的有機(jī)溶劑(無(wú)水THF或乙醚)溶液。滴加完畢后，加入干燥好的ZnCl2粉末。反應(yīng)體系自然升至室溫，室溫下繼續(xù)攪拌24h后TLC顯示反應(yīng)完成。過(guò)濾除去固體，濃縮后柱層析分離得化合物III-7b。
7)化合物III-8b的制備 用無(wú)水有機(jī)溶劑(無(wú)水THF)溶解6)中制備好的III-7b，反應(yīng)體系用惰性氣體(如N2或Ar氣)保護(hù)并降溫至-78℃，然后慢慢滴加MN(SiMe3)2溶液。滴加完畢后，自然升至室溫，室溫下繼續(xù)攪拌。TLC檢測(cè)顯示，24h后反應(yīng)完畢。減壓蒸除溶劑，得到的粘稠液體。加入大量干燥的石油醚溶解，過(guò)濾除去不溶物，得到III-8b的石油醚溶液，備用。
8)化合物III-b的制備 將上述制備好的III-8b的石油醚溶液用惰性氣體(如N2或Ar氣)保護(hù)并降溫至-78℃。向反應(yīng)體系中加入溶解氯化氫氣體的有機(jī)溶劑(如二氧六環(huán)、乙醚)溶液，然后自然升至室溫，析出固體。過(guò)濾，濾餅用干燥的有機(jī)溶劑(乙醚)洗滌，得到化合物III-b。產(chǎn)品未經(jīng)純化，直接用于下步反應(yīng)。
三、化合物(I)的制備
1、硼酸酯(I)的制備 將II及III溶解在有機(jī)溶劑(如THF、CH2Cl2)中，冷卻到-5℃，加入N-甲基嗎啉及縮合劑(TBTU或EDC·HCl+HOBt或氯甲酸異丁酯)，反應(yīng)2小時(shí)后，升至室溫反應(yīng)1小時(shí)。過(guò)濾除去不溶性固體，減壓蒸干溶劑。得到的固體用有機(jī)溶劑(乙酸乙酯)溶解，有機(jī)相分別用堿洗(5％碳酸氫鈉)，酸洗(0.1N鹽酸)，堿洗(5％碳酸氫鈉)及飽和食鹽水洗。有機(jī)相用干燥劑干燥(無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂)。濾除干燥劑，減壓蒸干溶劑得玻璃狀固體化合物硼酸酯I。
2、硼酸(IV)的制備
方法a酯交換法 用有機(jī)溶劑(如乙醚和CH2Cl2)溶解1中制備的硼酸酯I，加入水及苯基硼酸。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4小時(shí)后TLC顯示反應(yīng)完成。有機(jī)相用水提取3遍，合并水相，減壓蒸發(fā)至干。得到的粘稠固體用少量乙醚洗滌，得到膠狀固體化合物硼酸IV。
方法b氧化斷裂法 用有機(jī)溶劑(丙酮或甲醇)溶解1中制備的硼酸酯I，然后加入醋酸銨水溶液及NaIO4。室溫下攪拌24小時(shí)后，TLC顯示反應(yīng)完成。減壓蒸除有機(jī)溶劑，水相用無(wú)機(jī)酸(鹽酸)調(diào)節(jié)pH值為3，用有機(jī)溶劑(乙酸乙酯或CH2Cl2)萃取，合并有機(jī)相，有機(jī)相用干燥劑干燥(無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂)。濾除干燥劑，減壓蒸干溶劑得泡沫狀固體化合物硼酸IV。
以下以具體化合物的合成來(lái)描述本發(fā)明的化合物制備過(guò)程 一、式(II)中化合物的制備
R1a＝PhCH2；b＝(CH3)2CHCH2；c＝1-naCH2；d＝2-naCH2；e＝(CH3)2CH；f＝3-IndolCH2；g＝CH3CH2(CH3)CH； PgA＝1-THna；B＝2-THna；C＝1-naTH。
其中，1-na結(jié)構(gòu)為

2-na結(jié)構(gòu)為

；3-Indol結(jié)構(gòu)為

1-THna結(jié)構(gòu)為

立體構(gòu)型可以為(s)、(r)或兩者的消旋體(m)；2-THna結(jié)構(gòu)為

立體構(gòu)型可以為(s)、(r)或兩者的消旋體；1-naTH結(jié)構(gòu)為
1、N-1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲?；?L-苯丙氨酸(3aA)的制備 (1)L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(1a)的制備
在100mL反應(yīng)瓶中加入25mL無(wú)水甲醇，冰鹽浴冷卻到-10℃以下，攪拌下緩慢滴加SOCl2(7mL，96mmol)，然后于-10℃以下反應(yīng)10min，再加入L-苯丙氨酸(1.65g，10mmol)，低溫反應(yīng)40min，撤去冰鹽浴，于室溫反應(yīng)48h，減壓濃縮，再加入15mL甲醇，反復(fù)減壓濃縮兩次。加入50mL乙醚，放置，析出針狀結(jié)晶，過(guò)濾干燥，粗產(chǎn)品再用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得白色晶體L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽2.0g，收率95％，[α]D25＝+37.2°(c＝1，CH3CH2OH)，m.p.155-158℃。
本發(fā)明中所用到的其它氨基酸甲酯的鹽酸鹽可以采用上述步驟制備，化合物1b按合成化合物1a的方法采用L-亮氨酸合成；化合物1c按合成化合物1a的方法采用L-(β-1-萘基)丙氨酸合成；化合物1d按合成化合物1a的方法采用L-(β-2-萘基)丙氨酸合成；化合物1e按合成化合物1a的方法采用L-纈氨酸合成；化合物1f按合成化合物1a的方法采用L-色氨酸合成；化合物1g按合成化合物1a的方法采用L-異亮氨酸合成。合成的具體化合物及其性質(zhì)如下表。

(2)N-1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲?；?L-苯丙氨酸甲酯(s-2aA)的制備
方法aDCC縮合法 將化合物1a(1.12g，5.2mmol)溶于20mL THF中，用N-甲基嗎啉(NMM)(0.7mL，6.2mmol)中和，于冰浴下冷卻備用。在另一反應(yīng)瓶中加入1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲酸(0.92g，5.2mmol)，用THF 20mL溶解，冰水浴冷卻，于0℃加入二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(1.07g，5.2mmol)，HOBt(0.84g，6.2mmol)，于0℃反應(yīng)40min，然后加入已制備并冷卻好的中和完畢的1a的THF溶液。TLC檢測(cè)反應(yīng)，4h后反應(yīng)完畢，過(guò)濾除去不溶物N，N’-二環(huán)己基脲(DCU)，濾液加入乙酸乙酯150mL，分別用5％NaHCO3溶液(30mL)、10％的檸檬酸溶液(30mL)、5％NaHCO3溶液(30mL)和飽和食鹽水溶液洗滌(2×20mL)。乙酸乙酯層用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑，得化合物1.72g，產(chǎn)物為白色固體，收率98％。產(chǎn)品未經(jīng)純化，直接用于下步反應(yīng)。
方法b酰氯法 在0℃下，向1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲酸(0.92g，5.2mmol)中加入SOCl2(3.8ml，52mmol)，然后加入催化量的干燥DMF。緩慢升至室溫，反應(yīng)20分鐘，再升溫到50℃反應(yīng)1小時(shí)，停止反應(yīng)。蒸除未反應(yīng)的SOCl2。得到1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲酰氯。將之溶解于10ml干燥的甲苯中，備用。
將化合物1a(1.12g，5.2mmol)溶于20mLTHF中，加入N-甲基嗎啉(NMM)(0.7mL，6.2mmol)，在0℃下滴加上述制備好的1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲酰氯的甲苯溶液。在0℃下反應(yīng)2小時(shí)，然后緩慢升至室溫反應(yīng)1小時(shí)，TLC顯示反應(yīng)完成。減壓蒸除溶劑，得到的固體用30ml乙酸乙酯溶解，分別用5％碳酸氫鈉(30mL)、10％檸檬酸(30mL)、5％碳酸氫鈉(30mL)及飽和食鹽水洗(2×20mL)。有機(jī)相用無(wú)水Na2SO4干燥。濾除干燥劑，減壓蒸干溶劑，得到粘稠的白色固體1.70g，收率96.9％。產(chǎn)品未經(jīng)純化，直接用于下步皂化反應(yīng)。
鑒于DCC縮合法得到的產(chǎn)品不但產(chǎn)率高，而且色澤較好，所以本發(fā)明中所用到的其它氨基保護(hù)的氨基酸甲酯可以采用實(shí)施例(2)中所述的DCC縮合法制備，所有甲酯均未純化，直接用于下步反應(yīng)。
化合物m-2aA按DCC縮合法利用1-1，2，3，4-四氫萘甲酸和1a合成；r-2aA按DCC縮合法利用1-(R)-1，2，3，4-四氫萘甲酸和1a合成；s-2bA按DCC縮合法利用1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲酸和1b合成；s-2dA按DCC縮合法利用1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲酸和1d合成；m-2dA按DCC縮合法利用1-1，2，3，4-四氫萘甲酸和1d合成；s-2eA按DCC縮合法利用1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲酸和1e合成；s-2fA按DCC縮合法利用1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲酸和1f合成；m-2gA按DCC縮合法利用1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲酸和1g合成；s-2aB按DCC縮合法利用2-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲酸和1a合成；s-2aC按DCC縮合法利用1-(S)-5，6，7，8-四氫萘甲酸和1a合成；s-2bC按DCC縮合法利用1-(S)-5，6，7，8-四氫萘甲酸和1b合成；s-2cC按DCC縮合法利用1-(S)-5，6，7，8-四氫萘甲酸和1c合成；s-2dC按DCC縮合法利用1-(S)-5，6，7，8-四氫萘甲酸和1d合成；s-2eC按DCC縮合法利用1-(S)-5，6，7，8-四氫萘甲酸和1e合成。合成的具體化合物及其性質(zhì)如下表。



(3)N-1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲?；?L-苯丙氨酸(s-3aA)的制備
將化合物s-2aA(1.0g，2.96mmol)用10mL丙酮溶解，冰水浴下慢慢滴加2N NaOH至pH值為12～13，繼續(xù)保持冰水浴中反應(yīng)，TLC檢測(cè)，2h后反應(yīng)完畢。冰水浴下滴加鹽酸至pH值為2～3，產(chǎn)生大量白色固體，過(guò)濾產(chǎn)生的沉淀，用水、乙醚洗滌后真空干燥，得白色產(chǎn)品0.89g，收率93.6％，m.p.146.2～148.8℃。1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.50～1.57(1H，m)，1.67～1.86(3H，m)，2.61～2.69(2H，m)，2.88～3.16(2H，m)，3.67(1H，t，J＝6.9)，4.49～4.57(1H，m)，7.03～7.10(4H，m)，7.20～7.33(5H，m)，8.31(1H，d，J＝8.2)，12.74(1H，s)。MS(ESI)observedm/z 322.2[M-H]-，calcd323.3。
本發(fā)明中所用到的其它氨基保護(hù)的氨基酸可以采用實(shí)施例(3)中所述的方法制備。m-3aA將m-2aA采用實(shí)施例(3)的方法合成；r-3aA將r-2aA采用實(shí)施例(3)的方法合成；s-3bA將s-2bA采用實(shí)施例(3)的方法合成；s-3cA將s-2cA采用實(shí)施例(3)的方法合成；s-3dA將s-2dA采用實(shí)施例(3)的方法合成；m-3dA將m-2dA采用實(shí)施例(3)的方法合成；s-3eA將s-2eA采用實(shí)施例(3)的方法合成；s-3fA將s-2fA采用實(shí)施例(3)的方法合成；s-3gA將s-2gA采用實(shí)施例(3)的方法合成；s-3aB將s-2aB采用實(shí)施例(3)的方法合成；s-3aC將s-2aC采用實(shí)施例(3)的方法合成；s-3bC將s-2bC采用實(shí)施例(3)的方法合成；s-3cC將s-2cC采用實(shí)施例(3)的方法合成；s-3dC將s-2dC采用實(shí)施例(3)的方法合成；s-3eC將s-2eC采用實(shí)施例(3)的方法合成。合成的具體化合物及其性質(zhì)如下表。




二、式(III)中化合物的制備 1、化合物III-a的制備 (1)(+)-α-蒎烷二醇(化合物III-2a)的制備
將Me3NO·2H2O(165.6g，1.49mol)用216mL水溶解，攪拌下依次加入(+)α-蒎烯1b(191.4g，1.4mol)、1L叔丁醇、108mL吡啶和四氧化鋨(1g，3.9mmol)。然后通入氮?dú)猓?0分鐘后，加熱至100℃回流。TLC檢測(cè)顯示，72小時(shí)反應(yīng)完畢。自然降至室溫，加入NaHSO3(20g，0.19mol)攪拌60分鐘，待溶液顏色變?yōu)榈S色時(shí)，再加入60g的NaCl，再攪拌10分鐘后，減壓蒸除有機(jī)溶劑。釜底殘液用3×200mL乙醚提取，合并有機(jī)相，并用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸除有機(jī)溶劑，得到的紅棕色液體高真空度下減壓得白色固體230.1g，收率96.5％，[α]D20＝+8.3°(c＝6.5，甲苯)，m.p.53-56℃。1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ0.94(3H，s)，1.27(3H，s)，1.31(3H，s)，1.37(1H，d，J＝5.4)，1.62～1.66(1H，m)，1.91～1.93(1H，m)，2.01(1H，t，J＝5.8)，2.18～2.21(1H，m)，2.44～2.48(1H，m)，2.81～2.95(2H，m)，3.97～4.00(2H，q，J＝5.0)。13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ24.15，27.89，28.08，29.64，38.18，39.00，40.60，54.10，69.27，73.88. (2)二氯亞甲基鋰(化合物III-3a)的制備
在250mL三口瓶中加入無(wú)水二氯甲烷(4.26mL，66mmol)和120mL無(wú)水四氫呋喃，通入氮?dú)?，降溫?110℃，然后慢慢滴加正丁基鋰的正己烷溶液(25.2mL，60mmol)，滴加完畢后低溫繼續(xù)攪拌1小時(shí)。溶液直接用于下步反應(yīng)。
(3)二氯亞甲基硼酸二甲酯(化合物III-4a)的制備
在-110℃下，向上述制備好的化合物III-3a的溶液中加入硼酸三甲酯(7.5mL，66mmol)，繼續(xù)低溫?cái)嚢?小時(shí)后加入5N HCl溶液12mL，自然升至室溫。反應(yīng)液轉(zhuǎn)入分液漏斗，分出有機(jī)相，水層用乙醚提取(2×10mL)，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥。蒸除溶劑得白色粘稠狀固體9.3g，收率99.4％。產(chǎn)品未經(jīng)純化直接用于下步反應(yīng)。
(4)二氯亞甲基硼酸二異丙酯(化合物III-5a)的制備
在-110℃下，向已制備好的化合物III-3a的溶液中加入硼酸三異丙酯(9.3mL，40mmol)，繼續(xù)低溫?cái)嚢?小時(shí)后加入5N HCl溶液10mL，自然升至室溫。反應(yīng)液轉(zhuǎn)入分液漏斗，分出有機(jī)相，水層用乙醚提取(2×15mL)，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥。蒸除溶劑得白色粘稠狀固體8.73g，收率＞100％。產(chǎn)品未經(jīng)純化直接用于下步反應(yīng)。
(5)二氯亞甲基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯(化合物III-6a)的制備
方法a從化合物III-4a出發(fā) 在25mL瓶中加入化合物II-2a(32.2g，0.19mol)和化合物III-4a(51.6g，0.33mol)。再加入30mLTHF溶解，室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，20h后反應(yīng)完畢。柱層析分離(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶18)得無(wú)色液體49.4g，收率98.9％。1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ0.85(3H，s)，1.21(1H，d，J＝11.2)，1.31(3H，s)，1.46(3H，s)，1.93～1.97(2H，m)，2.13(1H，t，J＝5.2)，2.27～2.30(1H，m)，2.38～2.39(1H，m)，4.47(2H，dd，J＝8.8)，5.40(1H，s)。13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ23.90，26.19，26.95，28.19，35.00，38.32，39.23，51.17，79.43，88.03。
方法b從化合物III-5a出發(fā) 在60mL瓶中加入化合物II-2a(2g，0.012mol)和化合物III-5a(6.36g，0.03mmol)。再加入20mLTHF溶解，室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，48h后反應(yīng)完畢。柱層析分離(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶15)得無(wú)色液體2.92g，收率92.7％。
(6)2-甲基-4-氯-丁基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯(化合物III-7a)
于250mL三口瓶中加入剪碎的鎂條(1.45g，60mmol)、70mL無(wú)水四氫呋喃，再加入一小粒碘，室溫下滴加叔丁基溴(8.22g，60mmol)的四氫呋喃溶液30ml，滴完后加熱微沸至鎂條溶解完畢，自然冷卻得叔丁基格式試劑的四氫呋喃溶液。干燥放置備用。
將二氯甲基硼酸-α-蒎烷二醇酯III-6a(15.78g，60mmol)用100mL無(wú)水四氫呋喃溶解。通入干燥的氮?dú)?，并降溫?78℃，然后慢慢滴加上述制備好的叔丁基格式試劑的四氫呋喃溶液，滴加完畢后，加入干燥好的ZnCl2粉末(4.09g，30mmol)。自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，18h后反應(yīng)完畢。過(guò)濾除去固體，濃縮后柱層析分離(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶200)得無(wú)色液體15.26g，收率89.5％。1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ0.85(-CH3，s，3H)，0.92(-CH3，q，J＝6.6，6H)，1.19(-CH2，d，J＝11.0，1H)，1.30(-CH3，s，3H)，1.42(-CH3，s，3H)，1.60～1.66(-CH2，m，1H)，1.78～1.80(-CH2，m，1H)，1.88～1.94(-CH2，-CH，m，3H)，2.09(-CH，t，J＝5.1，1H)，2.24～2.26(-CH，m，1H)，2.34～2.37(-CH2，m，1H)，3.51～3.55(-CH，m，1H)，4.35～4.37(-CH，m，1H)。13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ21.22，21.27，22.85，23.94，25.58，25.64，26.30，27.02，28.41，35.28，38.25，39.40，42.81，51.26，78.50，86.63。
(7)5-氯-戊基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯(化合物III-8a)
于100mL三口瓶中加入剪碎的鎂條(0.14g，6mmol)、20mL無(wú)水乙醚，再加入一小粒碘，室溫下滴加正丁基溴(0.82g，6mmol)的乙醚溶液10ml，滴完后加熱微沸至鎂條溶解完畢，自然冷卻得正丁基格式試劑的乙醚溶液。干燥處放置備用。
將二氯亞甲基硼酸-α-蒎烷二醇酯III-6a(1.58g，6mmol)用20mL乙醚溶解，室溫下攪拌。通入氮?dú)?，并降溫?78℃，然后慢慢滴加制好的正丁基格式試劑的乙醚溶液。滴加完畢后，加入干燥好的ZnCl2粉末(0.41g，3mmol)。自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，18h后反應(yīng)完畢。過(guò)濾除去固體，濃縮后柱層析分離(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶250)得無(wú)色液體1.44g，收率84.5％。1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ0.85(3H，s)，0.91(3H，t，J＝7.2)，1.18(1H，dd，J＝11.0)，1.30(3H，s)，1.31～1.41(3H，m)，1.42(3H，s)，1.48～1.51(1H，m)，1.82～1.95(4H，m)，2.09(1H，t，J＝5.2)，2.23～2.28(1H，m)，2.33～2.39(1H，m)，3.44～3.48(1H，m)，4.36(1H，dd，J＝8.8)。13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ13.91，22.19，23.94，26.34，27.02，28.45，29.50，33.91，35.29，38.22，39.41，51.24，78.51，86.65。
(8)1-苯基-2-氯-乙基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯(化合物III-9a)
于100mL三口瓶中加入剪碎的鎂條(0.12g，5mmol)、20mL無(wú)水乙醚，再加入一小粒碘，室溫下滴加芐氯(0.63g，5mmol)的乙醚溶液10ml，滴完后加熱微沸至鎂條溶解完畢，自然冷卻得芐氯的格式試劑的乙醚溶液。干燥處放置備用。
將二氯亞甲基硼酸-α-蒎烷二醇酯III-6a(1.31g，5mmol)用20mL乙醚溶解，室溫下攪拌。通入氮?dú)猓⒔禍刂?78℃，然后慢慢滴加制好的芐氯的格式試劑的乙醚溶液。滴加完畢后，加入干燥好的ZnCl2粉末(0.41g，3mmol)。自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，24h后反應(yīng)完畢。過(guò)濾除去固體，濃縮后柱層析分離(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶15)得無(wú)色液體1.24g，收率77.8％。1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ0.83(3H，s)，1.07(1H，d，J＝11.0)，1.28(3H，s)，1.37(3H，s)，1.84～1.90(2H，m)，2.05(1H，t，J＝4.8)，2.15～2.17(1H，m)，2.30～2.34(1H，m)，3.08～3.23(2H，m)，3.64(1H，q，J＝8.6)，4.32(1H，q，J＝8.8)，7.21～7.30(5H，m)。13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ23.92，26.18，26.99，28.33，29.68，35.14，38.21，39.34，40.42，51.19，78.54，86.77，126.71，126.76，128.34，129.17，129.23，138.40。
(9)1-對(duì)甲苯基-2-氯-乙基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯(化合物III-10a)
于100mL三口瓶中加入剪碎的鎂條(0.48g，20mmol)、30mL無(wú)水乙醚，再加入一小粒碘，室溫下滴加對(duì)甲基芐氯(2.81g，20mmol)的乙醚溶液15ml，滴完后加熱微沸至鎂條溶解完畢，自然冷卻得對(duì)甲基芐氯的格式試劑的乙醚溶液。干燥處放置備用。
將二氯亞甲基硼酸-α-蒎烷二醇酯III-6a(4.52g，20mmol)用30mL乙醚溶解，室溫下攪拌。通入氮?dú)?，并降溫?78℃，然后慢慢滴加制好的對(duì)甲基芐氯的格式試劑的乙醚溶液。滴加完畢后，加入干燥好的ZnCl2粉末(0.55g，4mmol)。自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，24h后反應(yīng)完畢。過(guò)濾除去固體，濃縮后柱層析分離(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶15)得無(wú)色液體5.33g，收率80.3％。1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ0.83(3H，s)，1.09(1H，d，J＝11.1)，1.28(3H，s)，1.38(3H，s)，1.83～1.92(2H，m)，2.06(1H，t，J＝5.0)，2.14～2.21(1H，m)，2.29～2.37(4H，m)，3.01～3.21(2H，m)，3.58～3.66(1H，m)，4.29～4.36(1H，m)，7.08～7.16(4H，m)。13C-NMR(CDCl3，75MHz)δ21.02，23.91，26.10，26.23，27.00，28.33，35.15，38.21，39.35，40.01，51.21，78.52，86.71，128.26，128.96，129.02，129.08，135.30，136.21。
(10)1-對(duì)氟苯基-2-氯-乙基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯(化合物III-11a)
于100mL三口瓶中加入剪碎的鎂條(0.24g，10mmol)、15mL無(wú)水乙醚，再加入一小粒碘，室溫下滴加對(duì)氟芐溴(3.36g，10mmol)的乙醚溶液10ml，滴完后加熱微沸至鎂條溶解完畢，自然冷卻得對(duì)氟芐溴的格式試劑的乙醚溶液。干燥處放置備用。
將二氯亞甲基硼酸-α-蒎烷二醇酯III-6a(2.26g，10mmol)用20mL乙醚溶解，室溫下攪拌。通入氮?dú)猓⒔禍刂?78℃，然后慢慢滴加制好的對(duì)氟芐溴的格式試劑的乙醚溶液。滴加完畢后，加入干燥好的ZnCl2粉末(0.27g，2mmol)。自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，24h后反應(yīng)完畢。過(guò)濾除去固體，濃縮后柱層析分離(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶10)得無(wú)色液體2.04g，收率60.7％。1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ0.82(3H，s)，1.00(1H，dd，J＝11.1)，1.28(3H，s)，1.36(3H，s)，1.83～1.90(2H，m)，2.06(1H，t，J＝5.3)，2.31～2.35(1H，m)，3.04～3.19(2H，m)，3.58～3.63(1H，m)，4.30～4.35(1H，m)，6.95～6.99(2H，m)，7.22～7.26(2H，m)。13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ23.95，26.16，26.99，28.40，35.19，39.35，39.65，51.23，71.49，78.68，86.92，115.21，130.79，134.22，162.90。
(11)2-甲基-4-氨基-丁基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯鹽酸鹽(化合物III-12a)
于150mL單口瓶中加入LiN(SiMe3)2(10mL，10mmol)，通入氮?dú)?，并降溫?78℃，然后用注射器慢慢加入含有2-甲基-4-氯-丁基硼酸-α-蒎烷二醇酯III-7a(2.85g，10mmol)的THF溶液10mL，滴加完畢后，自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，20h后反應(yīng)完畢。減壓蒸除溶劑，加入30mL正己烷溶解，過(guò)濾除去不溶物。將濾液降溫至-78℃，加入23mL濃度為1.3M氯化氫的乙醚溶液，然后自然升至室溫，出現(xiàn)大量乳白色固體。冷凍使固體完全析出，過(guò)濾，乙醚洗滌產(chǎn)品得乳白色固體2.11g，收率70.1％。1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ0.82(3H，s)，0.85～0.88(6H，m)，1.12～1.16(1H，m)，1.26(3H，s)，1.37(3H，s)，145～1.55(2H，m)，1.72～1.78(2H，m)，1.87～1.89(1H，m)，2.00(1H，t，J＝5.4)，2.17～2.20(1H，m)，2.70～2.76(1H，m)，4.42～4.45(1H，m)，7.42(3H，t，J＝50.7)，7.98(3H，s，)。13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ22.07，22.43，23.53，24.41，25.82，26.75，28.07，34.59，37.76，38.33，38.79，50.69，75.49，77.52，86.55。MS(ESI)observedm/z 266.3[M+H]+，calcd265.2。
(12)5-氨基-戊基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯鹽酸鹽(化合物III-13a)
于150mL單口瓶中加入LiN(SiMe3)2(15mL，15mmol)，通入氮?dú)?，并降溫?78℃，然后用注射器慢慢加入含有5-氯-戊基硼酸-α-蒎烷二醇酯III-8a(4.28g，15mmol)的THF溶液15mL，滴加完畢后，自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，18h后反應(yīng)完畢。減壓蒸除溶劑，加入30mL正己烷溶解，過(guò)濾除去不溶物。將濾液降溫至-78℃，加入34.5mL濃度為1.3M氯化氫的乙醚溶液，然后自然升至室溫，出現(xiàn)大量乳白色固體。冷凍使固體完全析出。過(guò)濾，乙醚洗滌產(chǎn)品得乳白色固體3.86g，收率76.7％。1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ0.83(3H，s)，0.86(3H，J＝6.6)，1.12～1.16(1H，m)，1.24～1.32(5H，m)，1.38(3H，s)，161～1.63(2H，m)，1.76(2H，d，J＝14.5)，1.88～1.90(1H，m)，2.01(1H，t，J＝5.6)，2.19～2.21(1H，m)，2.32～2.36(1H，m)，2.72～2.74(1H，m)，4.45(1H，d，J＝8.9)，7.30(3H，t，J＝50.7)，7.90(3H，s)。13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ13.60，21.79，23.51，24.41，25.87，26.74，28.00，28.85，34.63，37.76，38.79，50.67，75.45，77.53，86.58。MS(ESI)observedm/z266.3[M+H]+，calcd265.2。
(13)1-苯基-2-氨基-乙基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯鹽酸鹽(化合物III-14a)
于100mL單口瓶中加入LiN(SiMe3)2(10mL，10mmol)，通入氮?dú)猓⒔禍刂?78℃，然后用注射器慢慢加入含有1-苯基-2-氯-乙基硼酸-α-蒎烷二醇酯III-9a(3.19g，10mmol)的THF溶液10mL，滴加完畢后，自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，24h后反應(yīng)完畢。減壓蒸除溶劑，加入30mL正己烷溶解，過(guò)濾除去不溶物。將濾液降溫至-78℃，加入23mL濃度為1.3M氯化氫的乙醚溶液，然后自然升至室溫，出現(xiàn)大量乳白色固體。冷凍使固體完全析出。過(guò)濾，乙醚洗滌產(chǎn)品得乳白色固體2.31g，收率68.8％。1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ0.78(3H，s)，1.06(1H，d，J＝10.9)，1.23(3H，s)，1.26(3H，s)，1.62～1.66(2H，m)，1.80～1.83(1H，m)，2.00(1H，t，J＝5.4)，2.07～2.11(1H，m)，2.23～2.27(1H，m)，2.88～2.93(1H，m)，3.03～3.10(2H，m)，4.35(1H，dd，J＝8.8)，7.22～7.32(5H，m)，7.42(3H，t，J＝50.7)，8.14(3H，s)。13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ23.50，25.76，26.73，27.97，34.38，35.14，37.72，38.72，50.57，77.50，86.55，126.65，128.28，128.33，129.04，129.08，136.92。MS(ESI)observedm/z 300.3[M+H]+，calcd299.2。。
(14)1-對(duì)甲苯基-2-氨基-乙基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯鹽酸鹽(化合物III-15a)
于100mL單口瓶中加入LiN(SiMe3)2(3mL，3mmol)，通入氮?dú)?，并降溫?78℃，然后慢慢加入含有1-對(duì)甲苯基-2-氯-乙基硼酸-α-蒎烷二醇酯III-10a(1g，3mmol)的THF溶液5mL，滴加完畢后，自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，24h后反應(yīng)完畢。減壓蒸除溶劑，加入40mL正己烷溶解，過(guò)濾除去不溶物。將濾液降溫至-78℃，加入6.9mL濃度為1.3M氯化氫的乙醚溶液，然后自然升至室溫，出現(xiàn)大量乳白色固體。冷凍使固體完全析出。過(guò)濾，乙醚洗滌產(chǎn)品得乳白色固體0.76g，收率72.5％。1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ0.78(3H，s)，1.08(1H，d，J＝10.9)，1.23(3H，s)，1.27(3H，s)，1.63～1.67(2H，m)，1.81～1.84(1H，m)，1.94(1H，t，J＝5.4)，2.09～2.11(1H，m)，2.23～2.28(4H，m)，2.85～2.89(1H，m)，2.97～3.03(2H，m)，4.35(1H，dd，J＝8.9)，7.11(5H，q，J＝8.1)，7.45(3H，t，J＝50.7)，8.12(3H，s)。13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ20.50，23.44，25.72，26.70，27.93，34.33，34.65，37.67，38.72，50.59，77.50，86.49，128.77，128.82，128.90，128.95，133.80，135，56。MS(ESI)observedm/z 314.3[M+H]+，calcd313.2。
(15)1-對(duì)氟苯基-2-氨基-乙基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯鹽酸鹽(化合物III-16a)
于100mL單口瓶中加入LiN(SiMe3)2(10mL，10mmol)，通入氮?dú)?，并降溫?78℃，然后慢慢加入含有1-對(duì)氟苯基-2-氯-乙基硼酸-α-蒎烷二醇酯III-11a(3.36g，10mmol)的THF溶液10mL，滴加完畢后，自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，24h后反應(yīng)完畢。減壓蒸除溶劑，加入60mL正己烷溶解，過(guò)濾除去不溶物。將濾液降溫至-78℃，加入23mL濃度為1.3M氯化氫的乙醚溶液，然后自然升至室溫，出現(xiàn)大量淡黃色固體。冷凍使固體完全析出。過(guò)濾，乙醚洗滌產(chǎn)品得乳白色固體1.93g，收率54.6％。1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ0.77(3H，s)，0.95(1H，d，J＝10.9)，1.22(3H，s)，1.26(3H，s)，1.63～1.66(1H，m)，1.81(1H，d，J＝5.1)，1.92(1H，t，J＝11.0)，2.06～2.11(1H，m)，2.22～2.27(1H，m)，2.88～2.93(1H，m)，3.01～3.09(2H，m)，4.34～4.36(1H，m)，7.11(2H，t，J＝8.9)，7.28～7.31(2H，q，J＝5.7)，7.38(3H，t，J＝50.3)，8.18(3H，s)。13C-NMR(DMSO-d6，125MHz)δ23.53，25.78，26.75，28.00，34.41，37.73，38.75，50.59，77.54，86.59，114.93，115.09，131.10，133.24，160.19，162.12。MS(ESI)observedm/z 318.3[M+H]+，calcd317.2。
2、化合物III-b的制備 (1)(-)-α-蒎烷二醇(化合物III-2b)的制備
將Me3NO·2H2O(11.3g，102mmol)用16mL水溶解，攪拌下依次加入(-)α-蒎烯1b(13.2g，96.9mmol)、74mL叔丁醇、7.4mL吡啶和四氧化鋨(60mg，0.24mmol)。然后通入氮?dú)猓?0分鐘后，加熱至回流。TLC檢測(cè)，18小時(shí)反應(yīng)完畢。自然降至室溫，加入NaHSO3(1.2g，11.5mmol)攪拌10分鐘，待溶液顏色變?yōu)辄S色時(shí)，再加入20g的NaCl。分出有機(jī)相，水層用乙醚提取(3×20mL)，合并有機(jī)相，并用無(wú)水硫酸鈉干燥。濃縮后柱層析分離(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶30)，得白色固體15.33g，收率92.9％，[α]D20＝-10.79°(c＝5.5，甲苯)，m.p.52-54℃。1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ0.94(3H，s)，1.28(3H，s)，1.32(3H，s)，1.37(1H，d)，1.66(1H，m)，1.93(1H，m)，2.01(1H，t)，2.20(1H，m)，2.33(2H，s)，2.49(1H，m)，4.00(1H，q)；13C-NMR(CDCl3，75MHz)δ24.11，27.80，28.00，29.54，38.21，38.99，40.51，53.98，69.26，73.88；Anal.Calcd.for C10H18O2C，70.55；H，10.66。FoundC，70.55；H，10.67。
(2)二氯亞甲基鋰(化合物III-3b)的制備
將無(wú)水二氯甲烷(7.1mL，110mmol)和200mL無(wú)水四氫呋喃在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫至-110℃，然后慢慢滴加正丁基鋰的正己烷溶液(44mL，110mmol)，滴加完畢后低溫繼續(xù)攪拌1小時(shí)。溶液直接用于下步反應(yīng)。
(3)二氯亞甲基硼酸二甲酯(化合物III-4b)的制備
在-110℃下，向上述制備好的化合物III-3b的溶液中加入硼酸三甲酯(12.5mL，110mmol)，繼續(xù)低溫?cái)嚢?小時(shí)后加入5N HCl溶液20mL，自然升至室溫。反應(yīng)液轉(zhuǎn)入分液漏斗，分出有機(jī)相，水層用乙醚提取(2×20mL)，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥。蒸除溶劑得白色粘稠狀固體17.6g，收率102.1％。產(chǎn)品未經(jīng)純化直接用于下步反應(yīng)。
(4)二氯亞甲基硼酸二異丙酯(化合物III-5b)的制備
在-110℃下，向已制備好的化合物III-3b的溶液中加入硼酸三異丙酯(10.2mL，44mmol)，繼續(xù)低溫?cái)嚢?小時(shí)后加入5N HCl溶液15mL，自然升至室溫。反應(yīng)液轉(zhuǎn)入分液漏斗，分出有機(jī)相，水層用乙醚提取(2×20mL)，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥。蒸除溶劑得白色粘稠狀固體10.32g，收率＞110.2％。產(chǎn)品未經(jīng)純化直接用于下步反應(yīng)。
(5)二氯亞甲基硼酸-(-)-α-蒎烷二醇酯(化合物III-6b)的制備
方法a從化合物III-4b出發(fā) 在25mL瓶中加入化合物II-2b(3.23g，0.019mol)和化合物III-4b(5.38g，0.035mol)。再加入10mL THF溶解，室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，18h后反應(yīng)完畢。柱層析分離(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶20)得無(wú)色液體4.92g，收率98.5％。1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ0.85(3H，s)，1.22(1H，d，J＝11.2)，1.31(3H，s)，1.46(3H，s)，1.94～1.96(2H，m)，2.13(1H，t，J＝5.1)，2.27～2.30(1H，m)，2.36～2.41(1H，m)，4.47(2H，dd，J＝8.9)，5.40(1H，s)。13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ23.87，26.15，26.92，28.17，34.97，38.29，39.20，51.14，79.40，88.00。。
方法b從化合物III-5b出發(fā) 在50mL瓶中加入化合物II-2b(1.70g，0.01mol)和化合物III-5b(5.30g，0.025mmol)。再加入15mLTHF溶解，室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，48h后反應(yīng)完畢。柱層析分離(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶15)得無(wú)色液體2，38g，收率90.8％。
(6)2-甲基-4-氯-丁基硼酸-(-)-α-蒎烷二醇酯(化合物III-7b)
于100mL三口瓶中加入剪碎的鎂條(1.1g，45.8mmol)、30mL無(wú)水乙醚，再加入一小粒碘，室溫下滴加叔丁基溴的乙醚溶液(6.0mL，45mmol)，滴完后加熱微沸至鎂條溶解完畢，自然冷卻得叔丁基格式試劑的乙醚溶液。干燥放置備用。
將二氯甲基硼酸-α-蒎烷二醇酯III-6b(1.18g，4.49mmol)用12mL乙醚溶解，室溫下攪拌。通入氮?dú)?，并降溫至?8℃，然后慢慢滴加制好的叔丁基格式試劑的乙醚溶液(6mL，4.50mmol)，滴加完畢后，加入干燥好的ZnCl2粉末(0.44g，3.25mmol)。自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，18h后反應(yīng)完畢。過(guò)濾除去固體，濃縮后柱層析分離(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶200)得無(wú)色液體1.13g，收率88.5％。1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ0.85(3H，s)，0.90～0.94(6H，m)，1.19(1H，dd，J＝11.0)，1.30(3H，s)，1.42(3H，s)，1.63～1.66(1H，m)，1.78～1.80(1H，m)，1.88～1.93(3H，m)，2.09(1H，t，J＝5.2)，2.24～2.26(1H，m)，2.33～2.38(1H，m)，3.51～3.55(1H，m)，4.36(1H，dd，J＝8.9)。13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ21.29，21.34，22.88，23.97，25.68，26.36，27.07，28.46，35.34，38.30，39.47，42.90，51.35，78.56，86.66。
(11)2-甲基-4-氨基-丁基硼酸-(-)-α-蒎烷二醇酯鹽酸鹽(化合物III-8b)
于100mL單口瓶中加入LiN(SiMe3)2(5mL，5mmol)，通入氮?dú)?，并降溫?78℃，然后用注射器慢慢加入含有2-甲基-4-氯-丁基硼酸-α-蒎烷二醇酯III-7b(1.42g，5mmol)的THF溶液10mL，滴加完畢后，自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，20h后反應(yīng)完畢。減壓蒸餾除去溶劑，加入20mL正己烷溶解，過(guò)濾除去不溶物。將濾液降溫至-78℃，加入12mL濃度為1.3M氯化氫的乙醚溶液，然后自然升至室溫，出現(xiàn)大量乳白色固體。冷凍使固體完全析出，過(guò)濾，乙醚洗滌產(chǎn)品得乳白色固體1.12g，收率74.6％。1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ0.82(3H，s)，0.86～0.89(6H，m)，1.11～1.16(1H，m)，1.25(3H，s)，1.37(3H，s)，144～1.55(2H，m，)，1.71～1.79(2H，m)，1.86～1.88(1H，m)，1.99(1H，t，J＝5.3)，2.17～2.20(1H，m)，2.30～2.34(1H，m)，2.70～2.75(1H，m)，4.41～4.44(1H，m)，7.45(3H，t，J＝50.7)，8.01(3H，s)。13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ22.04，22.45，23.54，24.42，25.83，26.76，28.06，34.60，37.77，38.33，38.80，50.68，75.48，77.52，86.55。MS(ESI)observedm/z266.3[M+H]+，calcd265.2。。
三、式(I)的制備 1、硼酸酯化合物(I)的制備 (1)N-1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲?；?L-苯丙酰胺-D-亮氨酸硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯的制備(I-1)
在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將實(shí)施例一中N-1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲?；?L-苯丙氨酸(s-3aA)(0.12g，0.37mmol)溶解在10ml干燥的THF中，將體系冷卻到-5℃，加入HOBt(0.06g，0.44mmol)，反應(yīng)20分鐘后，將體系降溫到-15℃，加入EDC·HCl(0.37mmol)。最后加入實(shí)施例二中的2-甲基-4-氨基-丁基硼酸-α-蒎烷二醇酯鹽酸鹽III-12a(0.11g，0.37mmol)和NMM(0.041mL，0.37mmol)。繼續(xù)保持在-15℃反應(yīng)1小時(shí)，升至室溫反應(yīng)2小時(shí)，TLC顯示反應(yīng)結(jié)束。過(guò)濾除去不溶物，減壓蒸除溶劑，用20mL乙酸乙酯溶解，分別用5％NaHCO3溶液(20mL)、10％的檸檬酸溶液(20mL)、5％NaHCO3溶液(20M1)、飽和食鹽水溶液(2×20mL)洗滌。乙酸乙酯層用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，濃縮后柱層析(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3)分離得玻璃狀固體0.059g，收率30.1％。1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ0.80～0.86(-CH3，m，9H)，1.19～1.38(-CH3，-CH2，m，9H)，1.49～1.70(-CH2，-CH，m，5H)，1.78～1.83(-CH2，m，2H)，1.88～1.93(-CH，m，1H)，2.05～2.07(-CH，m，1H)，2.24～2.26(-CH2，m，1H)，2.58～2.67(-CH2，m，2H)，2.80～2.88(-CH，m，1H)，2.96～3.11(-CH2，m，2H)，3.64(-CH，t，J＝6.5，1H)，4.15～4.23(-CH，m，1H)，4.65～4.69(-CH，m，1H)，6.98～7.08(-Ph，m，4H)，7.21～7.30(-Ph，m，5H)，8.27(-CONH，dd，J＝8.4，1H)，8.85(-CONH，d，J＝3.2，1H)。13C-NMR(DMSO-d6，125MHz)δ20.34，21.93，23.02，24.02，25.43，26.28，27.14，28.04，28.60，29.11，29.67，35.49，38.23，39.64，40.08，46.88，51.50，53.73，69.29，77.90，85.89，126.19，126.80，127.31，128.56，128.65，129.23，129.31，129.73，129.97，133.13，136.56，137.75，170.88，175.09。MS(ESI)observedm/z 571.4[M+H]+，calcd570.6。
本發(fā)明的其它類(lèi)似化合物的合成方法可以采用上述的方法。I-2將m-3aA與III-12a反應(yīng)制備；I-3將r-3aA與III-12a反應(yīng)制備；I-4將s-3aA與III-13a反應(yīng)制備；I-5將s-3aA與III-14a反應(yīng)制備；I-6將s-3aA與III-15a反應(yīng)制備；I-7將s-3aA與III-16a反應(yīng)制備；I-8將s-3bA與III-12a反應(yīng)制備；I-9將s-3cA與III-12a反應(yīng)制備；I-10將m-3dA與III-12a反應(yīng)制備；I-11將s-3dA與III-12a反應(yīng)制備；I-12將s-3eA與III-12a反應(yīng)制備；I-13將s-3fA與III-12a反應(yīng)制備；I-14將m-3gA與III-12a反應(yīng)制備；I-15將s-3aB與III-12a反應(yīng)制備；I-16將s-3aB與III-14a反應(yīng)制備；I-17將s-3aB與III-15a反應(yīng)制備；I-18將s-3aC與III-12a反應(yīng)制備；I-19將s-3cC與III-12a反應(yīng)制備；I-20將m-3dC與III-12a反應(yīng)制備；I-21將m-3bC與III-12a反應(yīng)制備；I-22將s-3eC與III-12a反應(yīng)制備；I-23將s-3aA與III-8b反應(yīng)制備；中間體羧酸部分采用實(shí)施例一中制備的化合物(II)，中間體硼酸-α-蒎烷二醇酯氨基的鹽酸鹽采用實(shí)施例二中制備的化合物(III)。









2、硼酸的制備 N-1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲?；?L-苯丙酰胺-D-亮氨酸硼酸的制備(IV)
方法a酯交換法 將N-1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲?；?L-苯丙酰胺-D-亮氨酸硼酸-α-蒎烷二醇酯(0.5g，0.876mmol)用6mL的甲醇溶解，加入2-甲基丙基硼酸(0.27g，2.63mmol)及6mL己烷，最后加入HCl溶液(2N，1.5mL)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)。5小時(shí)后TLC顯示反應(yīng)完成。分層，下層用10mL己烷洗滌1遍，加壓蒸干。過(guò)柱，先用乙酸乙酯沖洗，最后用甲醇沖洗得到無(wú)色固體0.33g，收率87.3％。1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ0.81～0.88(-CH3，m，6H)，1.30～1.66(-CH2，m，6H)，1.76～1.78(-CH，m，1H)，2.63～2.65(-CH2，m，2H)，2.77～2.80(-CH，m，1H)，2.98～3.05(-CH2，m，2H)，3.63～3.65(-CH，m，1H)，4.52～4.61(-CH，m，1H)，5.98～6.14(-CONH，m，1H)，6.73～6.80(-CONH，m，1H)，7.04～7.25(-Ph，m，7H)，7.35～7.42(-Ph，m，1H)，7.52～7.73(-Ph，m，1H).13C-NMR(CDCl3，125MHz)δ20.47，20.52，24.00，26.87，28.69，29.53，37.42，38.13，45.24，53.65，55.78，71.1，125.28，125.96，126.13，127.88，128.08，128.78，129.19，135.07，136.86，137.91，170.62，173.64。MS(ESI)observedm/z 437.1[M+H]+，calcd436.4。
方法b氧化斷裂法 將N-1-(S)-1，2，3，4-四氫萘甲?；?L-苯丙酰胺-D-亮氨酸硼酸-α-蒎烷二醇酯(0.1g，0.175mmol)用5mL的丙酮溶解，加入NH4OAC溶液(0.1N，4mL)，最后加入NaIO4(0.11g，0.525mmol)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)。TLC檢測(cè)顯示，10h后反應(yīng)完全。向反應(yīng)溶液中加入NaOH溶液(2N，3mL)，CH2Cl2萃取。用濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值約為3。用CH2Cl2萃取(3×15mL)，合并有機(jī)相，無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，蒸干得到無(wú)色固體62.1mg，收率81.3％。
第二部分抑制蛋白酶體活性測(cè)定 蛋白酶體抑制活性 本方法利用熒光底物多肽Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(簡(jiǎn)寫(xiě)Suc-LLVY-AMC，Suc表示琥珀?；珹MC表示7-酰胺-4-甲基香豆素)在蛋白酶體作用下會(huì)發(fā)生水解，釋放出具有熒光的AMC(Ex380nm，Em460nm)的原理，通過(guò)改變待測(cè)化合物濃度，測(cè)得不同濃度藥物作用后的蛋白酶體催化底物得到的產(chǎn)物熒光值判斷藥物對(duì)酶的抑制程度，從而計(jì)算藥物對(duì)蛋白酶體抑制的IC50值。
本實(shí)驗(yàn)所用的蛋白酶體為人紅細(xì)胞20S蛋白酶體，酶、熒光底物及測(cè)試緩沖液均購(gòu)自biomol公司。實(shí)驗(yàn)體系為100ul，其中含有蛋白酶體90μl(0.2μg)，底物10μl，其終濃度為50μM，藥物(抑制劑)0.1μl，其終濃度為10-7M～10-11M，實(shí)際配置濃度為10-4M～10-8M。
具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下 1、藥物配置 準(zhǔn)確稱(chēng)量藥物，加入DMSO溶解至10-2M。用移液器吸取10μl加至90μlDMSO得到10-3M，然后從10-3M濃度藥物中吸取10μl加90μlDMSO得到10-4M，同樣方法得到10-5M、10-6M、10-7M、10-8M濃度的藥物。
2、底物制備 將5mg底物Suc-LLVY-AMC(mw763.9)粉末溶解于654μlDMSO中，得到10mM儲(chǔ)備液，-20℃保存，使用時(shí)用緩沖液稀釋20倍，每份樣品中加入10μl，使得反應(yīng)體系中的底物濃度為50μM。
3、反應(yīng)體系制備 將20S蛋白酶體(1μg/μl)以緩沖溶液稀釋成濃度為0.0022μg/μl的溶液，96孔熒光酶標(biāo)板中每孔加入90μl，然后每孔中加入0.1μl待測(cè)樣品，使用已上市藥物萬(wàn)珂為陽(yáng)性對(duì)照藥，同時(shí)空白對(duì)照組及本底對(duì)照組中加入0.1μl DMSO，37℃反應(yīng)20min。反應(yīng)完畢后，每孔加入10μl熒光底物，避光37℃反應(yīng)1小時(shí)，380nm/460nm熒光酶標(biāo)儀(Tecan，Infinite M200)檢測(cè)熒光值。
4、數(shù)據(jù)處理 計(jì)算扣除本底后不同濃度藥物作用下所得產(chǎn)物的熒光值，運(yùn)用SPSS軟件，計(jì)算藥物對(duì)蛋白酶體抑制的IC50濃度。
部分化合物的結(jié)果如下表 其中，Velcade-diol(二醇基萬(wàn)珂)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式
Veilcade(萬(wàn)珂)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式
本發(fā)明化合物的治療劑量可以根據(jù)例如該治療的具體用途，化合物的給藥方式，病人的健康狀況，以及處方醫(yī)生的判斷而改變。藥物組合物中本發(fā)明化合物的比例或濃度將隨多種因素而改變，包括劑量，化學(xué)特性(如疏水性)，以及給藥途徑。例如，本發(fā)明化合物可以提供于含有大約0.1到大約10％w/v化合物的水性生理緩沖液中用于非腸道給藥。一些通常的劑量范圍為每天大約1μg/kg到大約1g/kg體重。在一些實(shí)施方案中，劑量范圍從每天大約0.01mg/kg體重到大約100mg/kg體重。劑量極可能取決于這樣的變量，如疾病或失調(diào)的類(lèi)型和進(jìn)展程度，特定病人的總體健康狀態(tài)，選定的化合物的相對(duì)生物學(xué)功效，賦形劑的配方，及其給藥途徑。有效劑量可以從來(lái)自體外或動(dòng)物模型測(cè)試系統(tǒng)的劑量反應(yīng)曲線推出。
權(quán)利要求
1、一種肽硼酸及其酯類(lèi)化合物，其結(jié)構(gòu)如式I所示，
其中
R1或R2分別獨(dú)立地為取代或非取代的C1～10的烷基、C3～6的環(huán)烷基或雜環(huán)烷基、芐基、萘甲基或吲哚甲基，其中所述的取代基為C1～4的烷基、氰基、羥基、巰基、氨基或鹵素；
Z1或Z2分別獨(dú)立地為羥基、C1～10的烷基、C1～10的烷氧基或芳氧基，或者B、Z1和Z2一起形成含有N、S或O的雜環(huán)基團(tuán)；
Pg為取代或非取代的至少含有一個(gè)不飽和環(huán)的二環(huán)酰基或三環(huán)?；鶊F(tuán)，其中所述的取代基為C1～4的烷基、C1～4的烷氧基、鹵素或C1～4的鹵代烷基。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽硼酸及其酯類(lèi)化合物，其中
R1或R2分別獨(dú)立地為取代或非取代的C1～10的烷基、芐基、萘甲基或吲哚甲基，其中所述的取代基為C1～4的烷基或鹵素。
3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的肽硼酸及其酯類(lèi)化合物，其中
R1為取代或非取代的C1～10的烷基、芐基、1-萘甲基、2-萘甲基或吲哚甲基，其中所述的取代基為C1～4的烷基或鹵素。
4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的肽硼酸及其酯類(lèi)化合物，其中
R2為取代或非取代的C1～10的烷基或芐基，其中所述的取代基為C1～4的烷基或鹵素。
5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽硼酸及其酯類(lèi)化合物，其中
Z1或Z2分別獨(dú)立地為羥基、C1～10的烷基、C1～10的烷氧基或芳氧基，或者B、Z1和Z2一起形成硼酸-α-蒎烷二醇酯。
6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的肽硼酸及其酯類(lèi)化合物，其中
Z1或Z2分別獨(dú)立地為羥基，或者B、Z1和Z2一起形成硼酸-α-蒎烷二醇酯。
7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽硼酸及其酯類(lèi)化合物，其中
Pg為取代或非取代的四氫萘?；?，其中所述的取代基為C1～4的烷基、C1～4的烷氧基、鹵素或C1～4的鹵代烷基。
8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的肽硼酸及其酯類(lèi)化合物，其中
Pg為
R3或R4分別獨(dú)立地為氫、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或三氟甲基。
9、一種權(quán)利要求1所述的肽硼酸及其酯類(lèi)化合物的制備方法，其反應(yīng)路線為
其中R1、R2、Z1、Z2和Pg的定義如權(quán)利要求1所述。
10、權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的肽硼酸及其酯類(lèi)化合物在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種式I結(jié)構(gòu)的硼酸及其酯類(lèi)化合物，R1或R2分別獨(dú)立地為取代或非取代的C1～10的烷基、C3～6的環(huán)烷基或雜環(huán)烷基、芐基、萘甲基或吲哚甲基，其中所述的取代基為C1～4的烷基、氰基、羥基、巰基、氨基或鹵素；Z1或Z2分別獨(dú)立地為羥基、C1～10的烷基、C1～10的烷氧基或芳氧基，或者B、Z1和Z2一起形成含有N、S或O的雜環(huán)基團(tuán)；Pg為取代或非取代的至少含有一個(gè)不飽和環(huán)的二環(huán)?；蛉h(huán)酰基基團(tuán)，其中所述的取代基為C1～4的烷基、C1～4的烷氧基、鹵素或C1～4的鹵代烷基。本發(fā)明還公開(kāi)了其制備方法和在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07F5/00GK101638414SQ20081002281
公開(kāi)日2010年2月3日 申請(qǐng)日期2008年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月30日
發(fā)明者朱永強(qiáng), 欣 趙, 朱新榮, 楊 胡, 剛 吳 申請(qǐng)人:江蘇先聲藥物研究有限公司