專(zhuān)利名稱(chēng)：：用7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的多臂聚合物綴合物治療非霍奇金氏淋巴瘤的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的聚合物前藥(polymericprodrug)治療淋巴瘤的方法。尤其是，本發(fā)明涉及用7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的聚乙二醇綴合物(conjugates)治療非霍奇金氏淋巴瘤的方法。
背景技術(shù)：
：非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)是一類(lèi)與免疫系統(tǒng)(如淋巴細(xì)胞)相關(guān)的癌癥。NHL可能在任何與淋巴系統(tǒng)有關(guān)的器官(如脾、淋巴結(jié)或扁桃體)中發(fā)展。NHL可能在任何年齡發(fā)生，且通常表現(xiàn)為淋巴結(jié)增大、發(fā)熱和體重減輕。NHL通常分為侵襲性的(快速生長(zhǎng))和惰性的(慢速生長(zhǎng))類(lèi)型。NHL也分為B-細(xì)胞或T-細(xì)胞NHL。B-細(xì)胞NHL包括Burkitt's淋巴瘤、彌漫性大B-細(xì)胞淋巴瘤，濾泡淋巴瘤，成免疫細(xì)胞大細(xì)胞淋巴瘤，母體B-成淋巴細(xì)胞淋巴瘤和套細(xì)胞淋巴瘤。T-細(xì)胞NHL包括蕈樣肉芽腫病，間變性大細(xì)胞淋巴瘤和母體T-成淋巴細(xì)胞淋巴瘤。與骨髓或干細(xì)胞移植后的淋巴組織增殖性疾病有關(guān)的淋巴瘤通常為B-細(xì)胞NHL。預(yù)測(cè)和治療依賴(lài)于疾病的階段和類(lèi)型。經(jīng)過(guò)幾年，已經(jīng)建議了一些治療患有非霍奇金氏淋巴瘤的患者的方法。一些嘗試包括基于CPT-11(也稱(chēng)為伊立替康(CPT-ll，Camptosar))的治療。已經(jīng)認(rèn)為這些嘗試的結(jié)果是不成功的。本發(fā)明提供了另一種治療。發(fā)明簡(jiǎn)述在本發(fā)明的一方面中，提供了治療患有非霍奇金氏淋巴瘤的患者的方法。該治療包括向有此需要的患者給藥有效量的式(I)化合物。在本發(fā)明的該方面中，所用的式(I)化合物包括其中9R2、R3和R4獨(dú)立地為OH或(L)邁-D;L為雙功能連接基；D為m為O或正整數(shù)；且n為正整數(shù)；條件是RpR2、R3和R4不全是0H。在本發(fā)明的一些優(yōu)選方面中，n為約28至約341，且優(yōu)選為約227。通過(guò)下述說(shuō)明和附圖，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)將是明顯的。對(duì)于本發(fā)明的目的，術(shù)語(yǔ)〃殘基〃應(yīng)該理解為指化合物的一部分，對(duì)此其為，即7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿、氨基酸等，其在經(jīng)歷與其他化合物的取代反應(yīng)后仍保留。對(duì)于本發(fā)明的目的，術(shù)語(yǔ)〃含聚合物的殘基〃或〃PEG殘基〃應(yīng)該分別理解為是指聚合物或PEG的一部分，其在經(jīng)歷與含7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的化合物反應(yīng)后仍保留。對(duì)于本發(fā)明的目的，術(shù)語(yǔ)〃烷基〃應(yīng)該理解為包括直鏈、支鏈、被取代(如被鹵素-、烷氧基_，、硝基_取代)的(V12烷基但優(yōu)選C卜4烷基、C3—8環(huán)烷基或被取代的環(huán)烷基等。對(duì)于本發(fā)明的目的，術(shù)語(yǔ)〃被取代的〃應(yīng)該理解為包括加入一個(gè)或多個(gè)原子或用一個(gè)或多個(gè)不同的原子替換官能團(tuán)或化合物中所含的一個(gè)或多個(gè)原子。對(duì)于本發(fā)明的目的，被取代的烷基包括羧基烷基、氨基烷基、二烷基氨基、羥基烷基和巰基烷基；被取代的烯基包括羧基烯基、氨基烯基、二烯基氨基、羥基烯基和巰基烯基；被取代的炔基包括羧基炔基、氨基炔基、二炔基氨基、羥基炔基和巰基炔基；被取代的環(huán)烷基包括如4-氯環(huán)己基的基團(tuán)(moieties);芳基包括如萘基的基團(tuán)；被取代的芳基包括如3-溴苯基的基團(tuán)；芳烷基包括如甲苯基的基團(tuán)；雜烷基包括如乙基噻吩的基團(tuán)；被取代的雜烷基包括如3-甲氧基-噻吩的基團(tuán)；烷氧基包括如甲氧基的基團(tuán)；且苯氧基包括如3-硝基苯氧基的基團(tuán)。鹵素應(yīng)該理解為包括氟、氯、碘和溴。對(duì)于本發(fā)明的目的，術(shù)語(yǔ)〃有效量〃禾P"足量"應(yīng)該指實(shí)現(xiàn)所需效果或治療效果的量，該效果是本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解的。圖1圖示說(shuō)明了制備實(shí)施例1-2中所述的四臂聚乙二醇酸的反應(yīng)流程。圖2圖示說(shuō)明了制備實(shí)施例3-7中所述的4臂-PEG-Gly-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)的反應(yīng)流程。圖3表示實(shí)施例10中所述的4臂-PEG-Gly-(7-乙基_10_羥基喜樹(shù)堿)的體外代謝。10圖4表示實(shí)施例12中所述的4臂-PEG-Gly-(7_乙基_10_羥基喜樹(shù)堿)的穩(wěn)定性。圖5表示實(shí)施例12中所述的pH對(duì)于4臂-PEG-Gly-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)穩(wěn)定性的影響。圖6表示實(shí)施例13中所述的4臂-PEG-Gly-(7_乙基_10_羥基-喜樹(shù)堿)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特性。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及治療淋巴瘤的方法。在本發(fā)明的一方面中，提供了治療患有非霍奇金氏淋巴瘤的患者的方法。該方法包括向有此需要的患者給藥有效量的式(I)化合物。在一個(gè)所用的實(shí)施方案中，式(I)化合物具有下述結(jié)構(gòu)':0、(I)射R2、R3和R4獨(dú)立地為OH或(L)邁-D;L為雙功能連接基；D為m為0或正整數(shù)，優(yōu)選為約1至約10，且更優(yōu)選為1;且n為正整數(shù)，優(yōu)選為約28至約341，更優(yōu)選為約114至約227，且最優(yōu)選為約227條件是&、R2、R3和R4不全是0H。在一些優(yōu)選方面，所述治療包括給藥具有式(II)的化合物11給藥量的范圍為約0.3mg/m2體表面/劑至約90mg/m2體表面/劑。更優(yōu)選地，給藥量的范圍為約0.9mg/m2至約30mg/m2。對(duì)于本發(fā)明的目的，劑量應(yīng)該理解為是指7-乙基-io-羥基喜樹(shù)堿的量，而不是給藥的聚合物綴合物的量。在另一方面，本發(fā)明包括式(I)化合物在制備用于有此需要的哺乳動(dòng)物中治療非霍奇金氏淋巴瘤的藥物中的用途。A.多臂聚合物本文所述的化合物的聚合物部分包括多臂PEG's。多臂PEG's描述于NOFCorp.DrugDeliverySystemcatalog,Ver.8，2006年4月中，其內(nèi)容在此引入作為參考。一種尤其優(yōu)選的多臂PEG具有下述結(jié)構(gòu)其中n為正整數(shù)。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，聚合物的聚合度(n)為約28至約341，以提供具有總分子量為約5，OOODa至約60，OOODa的聚合物，且優(yōu)選為約114至約227，以提供具有總分子量為約20，OOODa至約40，OOODa的聚合物。在本發(fā)明一個(gè)尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，n為約227。B.雙功能連接基在本發(fā)明的一些優(yōu)選方面，雙功能連接基包括氨基酸。所述氨基酸選自任何已知的天然L-氨基酸，如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸、精氨酸、組氨酸、脯氨酸和/或它們的組合等。在另一方面，L可以為肽殘基。該肽的大小范圍為約2至約10個(gè)氨基酸殘基。天然氨基酸的衍生物和類(lèi)似物，以及多種已知的非天然氨基酸(D或L)，疏水的或非疏水的，也可以用于本發(fā)明的范圍。簡(jiǎn)單舉例為，氨基酸類(lèi)似物和衍生物包括2-氨基己二酸、3-氨基己二酸、13-丙氨酸、|3-氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、Y_氨基丁酸(piperidinicacid)、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基異丁酸、3-氨基異丁酸、122-氨基庚二酸、2，4-氨基丁酸、鎖鏈素、2，2-二氨基庚二酸、2，3-二氨基丙酸、n-乙基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、3-羥基脯氨酸、4_羥基脯氨酸、異鎖鏈素、別異亮氨酸』-甲基甘氨酸或肌氨酸、N-甲基-異亮氨酸^-N-甲基-賴(lài)氨酸、N-甲基纈氨酸、正纈氨酸、正亮氨酸、鳥(niǎo)氨酸以及其他許多物質(zhì)，它們列于63Fed.Reg.，29620,29622中，在此引入作為參考。一些優(yōu)選的L基團(tuán)包括甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸或肌氨酸。更優(yōu)選地，本發(fā)明化合物包括甘氨酸作為連接基團(tuán)(L)。在本發(fā)明的另一方面中，連接7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿和聚合物的L選自-[c(二o):V(CR22R23)「，-[c(二o):V(CR22R23)t_0_，-[c(二o):V(CR22R23)t_NR26_，-[c(二o):v0(CR22R23)t-，-[c(二o):v0(CR22R23)t0-，-[c(二o):v0(CR22R23)tNR26-，-[c(二o):vNR21(CR22R23)t_，-[c(二o):vNR21(CR22R23)t0-，-[c(二o):vNR21(CR22R23)tNR26-，-[c(二o):v(CR22R230)t_，-[c(二o):)v0(CR22R230)t-，-[c(二o):]vNR21(CR22R230)「，-[c(二o):v(CR22R230)t(CR24R25)y-，-[c(二o)-]v0(CR22R230)t(CR24R25)y-，-[c(二0)]vNR21(CR22R230)t(CR24R25)y-，-[c(二0)]v(CR22R230)t(CR24R25)y0-，-[c(二0)]v(CR22R23)t(CR24R250)y-，-[c(二0)]v0(CR22R230)t(CR2JR25)y0-，-[c(二0)]v0(CR22R23)t(CR24R250)y-，-[c(二0)]VNR21(CR22R230)t(CR24R25)y0_，-[c(二0)]vNR21(CR22R23)t(CR24R250)y_，-[c(二0)]v(CR22R23)t0_(CR28R29)t'_，-[c(二0)]v(CR22R23)tNR26-(CR28R29)t'_，-[c(二0)]V(CR22R23)tS-(CR28R29)t,-，-[c(二0)]v0(CR22R23)t0-(CR2SR29)t'-，-[c(二0)]v0(CR22R23)tNR26-(CR28R29)t'--[c(二0)]v0(CR22R23)tS-(CR28R29)t'_，-[c(二0)]vNR21(CR22R23)t0-(CIWUt'--[c(二0)LNRjCI^iytNI^-(CR28R29)-[c(二0)]vNR21(CR22R23)tS-(CR28R29)t'_-[c(二0)]v(CR22R23CR28R290)tNR26-，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>尺21-129獨(dú)立地選自氫、氨基、被取代的氨基、疊氮基、羧基、氰基、卣素、羥基、硝基、甲硅烷基醚(silylether)、磺酰基、巰基、CH烷基巰基、芳基巰基、被取代的芳基巰基、被取代的C卜6烷硫基、C卜6烷基、C2—6烯基、C2—6炔基、C3-19支鏈烷基、C3—8環(huán)烷基、C卜6被取代的烷基丄2—6被取代的烯基、(:2—6被取代的炔基丄3—8被取代的環(huán)烷基、芳基、被取代的芳基、雜芳基、被取代的雜芳基、C卜6雜垸基、被取代的(V6雜烷基、C卜6烷氧基、芳氧基、C卜6雜垸氧基、雜芳氧基、(V6烷?；⒎蓟驶?、C2—6烷氧基羰基、芳氧基羰基、C2—6烷?；趸?、芳基羰基氧基、C2—e被取代的烷酰基、被取代的芳基羰基、C2—6被取代的烷?；趸⒈蝗〈姆佳趸驶?、c2—6被取代的烷?；趸捅蝗〈姆蓟驶趸?；(t)、(t')和(y)獨(dú)立地選自0或正整數(shù)，優(yōu)選為約1至約10;且(v)為0或1。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，L可以包括0121]-[c(=o):V(CH2)「，0122]-[c(=o):v(CH2)「0-，0123]-[c(=o):v(CH2)「NR26-，0124]-[c(=o):v0(CH2)「，0125]-[c(=o):v0(CH2)t0-，0126]-[c(=o):v0(CH2)tNH-，0127]-[c(=o):VNH(CH2)「，0128]-[c(=o):vNH(CH2)t0-，0129]-[c(=o):vNH(CH2)tNH-，0130]-[c(=o):、.(CH20)t-，0131]-[c(=o):〗v0(CH20)t-，:0132]-[c(=o):]vNH(CH20)t-,:0133]-[c(=o):]v(CH20)t(CH2)y-，:0134]-[c(=o):]v0(CH20)tH2)y-，:0135]-[c(=0)]vNH(CH20)t(CH25)y-，:0136]-[c(=0)]v(CH20)t(CH2)y0-，:0137]-[c(=0)]v(CH2)t(CH20)y-，:0138]-[c(=0)]vO(CH20)t(CH2)y0-，:0139]-[c(=0)]v0(CH2)t(CH20)y-，:0140]-[c(=0)]vNH(CH20)t(CH2)y0-，:0141]-[c(=0)]vNH(CR22R23)t(CH20)y--[c(=0)]v(CH2)t0-(CH2)t'-，-[c(=0)]v(CH2)tNH-(CH2)t'-，-[c(=0)]v(CH2)tS-(CH2)t'_，-[c(=0)]v0(CH2)t0-(CH2)t,-，-[c(=0)]v0(CH2)tNH-(CH2)t'-，-[c(=0)]v0(CH2)tS-(CH2)t'-，-[c(=0)]vNH(CR22R23)t0-(CH2)t-[c(=0)]vNH(CH2)tNH-(CH2)t'--[c(=0)]vNH(CH2)tS-(CH2)t'-，-[c(=0)]v(CH2CH20)tNR26_，-[c(=0)]v(CH2CH20)t-，-[c(=0)]v0(CH2CH20)tNH-，150154]-[c(=0)]v0(CH2CH20)t-，0155]_[c(=0)]vNH(CH2CH20)tNH-，0156]-[c(=0)]vNH(CH2CH20)t-，0157]-[c(=0)]v(CH2CH20)t(CH2)「，0158]-[c(=0)]v0(CH2CH20)t(CH2)「，0159]-[c(=0)]vNH(CH2CH20)t(CH2)y-，0160]-[c(=0)]v(CH2CH20)t(CH2)y0-，0161]-[c(=0)]v(CH2)t(CH2CH20)y-，0162]-[c(=0)]v(CH2)t(CH2CH20)yNH-，0163]-[c(=0)]v0(CH2CH20)t(CH2)y0-，0164]-[c(=0)]v0(CH2)t(CH2CH20)y-，0165]-[c(=0)]v0(CH2)t(CH2CH20)yNH-0166]-[c(=0)]vNH(CH2CH20)t(CH2)y0-0167]-[c(=0)]vNH(CH2)t(CH2CH20)y-，0168]-[c(=0)]vNH(CH2)t(CH2CH20)yNH0169]-[C(=0)]vO(CH2)，、/—(CH2)tO-[C(=0)]vNH(CH2)，《/-(CH2)tO-[C(=0)]vO(CH2)，、/-(CH2)tNH和-[C(=0)]vNH(CH2)，-(CH2)tNH其中(t)、(t')和(y)獨(dú)立地選自O(shè)或正整數(shù)，優(yōu)選為約1至約10;且(v)為0或1。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選方面，所述化合物包括1至IO個(gè)單元的雙功能連接基。更優(yōu)選地，包括1個(gè)單元的雙功能連接基，因此m為1。其它連接基見(jiàn)于Greenwald等人(Bioorganic&MedicinalChemistry,1998，6:551-562)的表1中，其內(nèi)容在此引入作為參考。C.前藥的合成通常，本發(fā)明在治療中使用的前藥通過(guò)下述反應(yīng)制備一或多個(gè)當(dāng)量的活化多臂(multi-arm)聚合物，每個(gè)活性部位與例如一或多個(gè)當(dāng)量的7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿-氨基酸綴合物反應(yīng)，反應(yīng)條件為足以有效引起氨基與聚合物的羧酸反應(yīng)并形成連接。更具體的，本方法可以包括1)提供一當(dāng)量包含可用的20-羥基的7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿和一當(dāng)量或更多的包含可用的羧酸基的雙官能連接基；162)在惰性溶劑例如DCM(或DMF、氯仿、甲苯或其混合物)中在偶聯(lián)劑例如1，(3_二甲基氨基丙基)3-乙基碳二亞胺(EDC)，(或1，3-二異丙基碳二亞胺)(DIPC)，任何適宜的二烷基碳二亞胺，Mukaiyama試劑(例如2_鹵_1_烷基吡啶鎗鹵化物)或丙烷磷酸環(huán)酐(PPACA等)和適宜的堿例如DMAP存在下使兩種反應(yīng)物反應(yīng)形成7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿-雙官能連接基中間體；禾口3)每個(gè)活性部位用一當(dāng)量或更多當(dāng)量所得的具有氨基中間體(例如實(shí)施例6中所用的2當(dāng)量)與一當(dāng)量活化的聚合物(如PEG酸)反應(yīng)，所述反應(yīng)在惰性溶劑例如DCM(或DMF、氯仿、甲苯或其混合物)中在偶聯(lián)劑例如l，(3-二甲基氨基丙基)3-乙基碳二亞胺(EDC)，PPAC(或1，3-二異丙基碳二亞胺)(DIPC)，任何適宜的二烷基碳二亞胺，Mukaiyama試劑(例如2-鹵-l-烷基吡啶鎗鹵化物)或丙烷磷酸環(huán)酐(PPACA)等和適宜的堿例如DMAP存在下進(jìn)行，所述試劑可以從SigmaChemical購(gòu)得或使用已知技術(shù)在(TC到22°C的溫度間合成。在一個(gè)優(yōu)選方面，7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的10-羥基在步驟1)之前被保護(hù)。用于7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的10-羥基的芳香保護(hù)基是優(yōu)選的，因?yàn)槠?-乙基-io-羥基喜樹(shù)堿中間體具有更好的溶解度并可以有效力和有效地純化為高純度形式。例如，包含甲硅烷基(silyl)的保護(hù)基例如叔丁基二苯基氯硅烷基(TBDPSC1)、叔丁基二甲基氯硅烷基(TB匿SC1)和三甲基氯硅烷基(TMSC1)可用于保護(hù)7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的10-羥基。活性聚合物，即包含1-4末端羧酸基的聚合物可通過(guò)例如使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將N0FSunbright類(lèi)型或其它具有末端0H基的支鏈聚合物轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的羧酸衍生物而制備。參見(jiàn)實(shí)施例1-2以及共同轉(zhuǎn)讓的(commonlyassigned)美國(guó)專(zhuān)利5，605，976，在此引入作為參考。第一和第二偶聯(lián)劑可以是相同或不同的。優(yōu)選的雙官能連接基的例子包括甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、肌氨酸等。或者可以使用其它合成而不用過(guò)多的實(shí)驗(yàn)。根據(jù)本發(fā)明，給藥的化合物包括17<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>尤其優(yōu)選的治療包括給藥具有下述結(jié)構(gòu)的化合物其中聚合物的所有四臂均通過(guò)甘氨酸與7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿軛合，且聚合物部分具有的分子量為約40,000道爾頓。D.組合物/制劑包含本發(fā)明聚合物綴合物的藥物組合物可以通過(guò)本領(lǐng)域已知方法制備，例如使用多種已知的混合、溶解、制粒、研磨、乳化、膠囊化、加入(entr即ping)或凍干方法。組合物可與一種或多種包含賦形劑和輔料的生理可接受載體一起制劑，所述載體有助于將活性化合物加工成可用于醫(yī)藥的制劑。適宜的制劑取決于所選的給藥途徑。本發(fā)明的許多方面中優(yōu)選胃腸外途徑。對(duì)于注射，非限制性地包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)和皮下注射，本發(fā)明化合物可以在水性溶液中配制，優(yōu)選在生理相容的緩沖液例如生理鹽水緩沖液或極性溶劑，包括但不限于吡咯烷酮或二甲亞砜中配制。本文所述的化合物還可配制為用于胃腸外給藥，例如通過(guò)大量推注或連續(xù)輸液。用于注射的制劑可以單位劑型存在，例如在安瓿或多劑量容器中。有用的組合物包括但不限于在油性或水性溶媒中的懸浮劑、溶液或乳劑，還可包括添加劑(adjuncts)例如助懸劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。用于胃腸外給藥的的藥物組合物包括水溶形式的水性溶液，該水溶形式例如但非限制的為活性化合物的鹽(優(yōu)選)。另外，活性化合物的懸浮液可以在親脂性溶媒中制備。適宜的親脂性溶媒包括脂肪油例如芝麻油、合成脂肪酸酯例如油酸乙酯和三酸甘油酯，或材料例如脂質(zhì)體。水性注射懸浮液可包含增加懸浮液粘度的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉鹽、山梨糖醇或者右旋糖酐。任選的，懸浮液還可包含適宜的穩(wěn)定劑和/或增加化合物溶解度的試劑以制備高濃度溶液。或者，活性成分可以是粉末形式以在使用前與適宜的溶媒，例如無(wú)菌、無(wú)熱原的水配制。對(duì)于口服給藥，化合物可通過(guò)將活性物質(zhì)與本領(lǐng)域已知的藥學(xué)可接受的載體組合配制。這些載體能使本發(fā)明化合物配制為片劑、丸劑、錠劑(lozenges)、糖衣丸(dragees)、膠囊、液體、凝膠劑、糖漿、糊劑、漿液、溶液、懸浮劑、濃溶液和用于稀釋在患者飲用水中的懸浮劑、用于稀釋在患者食物中的預(yù)混合劑等，用于患者口服攝取。用于口服的藥物制劑可以使用固體賦形劑、可選地研磨所得混合物，和將混合物制粒，隨后如果需要加入其它適宜輔料得到片劑或糖衣芯而制備。特別的，有用的賦形劑是，填充劑如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇，纖維素制品例如玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉和馬鈴薯淀粉及其他原料例如明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基-甲基纖維素、羧基-甲基纖維素鈉、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，還可加入崩解劑，例如交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、或者海藻酸。還可使用鹽，例如海藻酸鈉鹽。對(duì)于吸入給藥，本發(fā)明化合物可以使用加壓包裝或噴霧器和適宜的推進(jìn)劑，以氣霧劑噴霧形式方便地遞送?；衔镞€可以使用例如常規(guī)栓劑基質(zhì)例如可可脂或其它甘油酯，配制為直腸組合物例如栓劑或灌腸劑。除了前述制劑，化合物還可制劑為儲(chǔ)庫(kù)制品(d印otpr印aration)。這樣的長(zhǎng)效制劑可以通過(guò)植入(例如皮下或肌內(nèi))或肌肉注射給藥。對(duì)于這一給藥途徑，本發(fā)明的化合物可以與適宜的聚合的或疏水材料(例如在乳劑中與藥理學(xué)上可接受的油)、與離子交換樹(shù)脂配制或作為微溶衍生物如非限制性的微溶鹽。還可使用其它的遞送體系例如脂質(zhì)體和乳劑。另外，化合物可使用持續(xù)釋放(sustained-release)系統(tǒng)，例如包含治療劑的固體疏水聚合物的半滲透基質(zhì)。已經(jīng)制備出多種持續(xù)釋放材料，且為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。持續(xù)釋放的膠囊可以根據(jù)其化學(xué)性質(zhì)，持續(xù)數(shù)周至超過(guò)100天釋放化合物。根據(jù)特定化合物的化學(xué)性質(zhì)和生物穩(wěn)定性，還可采用其它的穩(wěn)定策略。E.劑量治療有效量指有效預(yù)防、減輕或改善易被7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿影響的病癥的化合物的量。治療有效量的確定是本領(lǐng)域技術(shù)人員所具有的能力，尤其是在本文所公開(kāi)內(nèi)20容的基礎(chǔ)上。對(duì)于本發(fā)明的方法使用的任何化合物，治療有效量可以由體外試驗(yàn)開(kāi)始推定。隨后可以配制供動(dòng)物模型使用的劑量以實(shí)現(xiàn)包括有效劑量的循環(huán)濃度范圍。這樣的信息隨后可用于更加精確地確定用于患者的劑量。本文描述的化合物的毒性和治療效力可以使用本領(lǐng)域熟知的方法通過(guò)在細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中的標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法來(lái)測(cè)定。當(dāng)然劑量也可以根據(jù)劑型和給藥途徑而變化。醫(yī)師根據(jù)患者的情況可選擇具體的制劑、給藥途徑和劑量。然而通常，用于全身遞送的本發(fā)明化合物的優(yōu)選劑量范圍是大約1到大約lOOmg/kg/周且優(yōu)選大約2到大約60mg/kg/周。在一個(gè)優(yōu)選方案中，本發(fā)明的治療包括以下述量給藥本文所述的化合物約0.3mg/m2體表面/劑(dose)至約90mg/m2體表面/劑。更優(yōu)選地，本文所述的化合物的量的范圍為約0.9mg/m2體表面/劑至約30mg/m2體表面/劑。治療方案可以基于每天給藥一次單劑量給藥或分成多劑量給藥，其可以作為多周治療方案的一部分。精確的劑量將依賴(lài)于病況的階段和嚴(yán)重程度，腫瘤對(duì)聚合物前藥組合物的敏感性，和所治療的患者的個(gè)體特征，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員理解的。還應(yīng)理解所述治療將給藥1天或多天直到達(dá)到所需的臨床結(jié)果。在一些優(yōu)選方面，所述治療方案包括給藥量范圍為每周約lmg/m2體表面/劑至約16mg/m2體表面/齊U，持續(xù)3周，然后1周不治療，且重復(fù)約3個(gè)周期。每3周的給藥量的范圍為約1.25mg/m2體表面/劑至約45mg/m2體表面/劑?；蛘撸o藥的化合物可以基于體重。因此，該量的范圍為約0.lmg/kg體重/劑至約30mg/kg體重/齊U，優(yōu)選為約0.3mg/kg至約10mg/kg。具體劑量如給藥10mg/kg，q2dx5給藥方案(多劑量)或30mg/kg，單劑量給藥方案。在本發(fā)明所有給藥聚合物綴合物的方面中，所述劑量基于7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的量，而不是所給藥的聚合物綴合物的量。本發(fā)明的其它方面包括將本文所述的化合物與其它抗癌治療組合，實(shí)現(xiàn)協(xié)同作用或其它益處。F.非霍奇金氏淋巴瘤的治療本發(fā)明提供了治療淋巴瘤的方法。在一個(gè)優(yōu)選方面，本發(fā)明提供了治療患有非霍奇金氏淋巴瘤的患者的方法。對(duì)于本發(fā)明的目的，"治療"或"治愈"應(yīng)該理解為指抑制、減輕、緩解和預(yù)防腫瘤生長(zhǎng)、腫瘤負(fù)荷和轉(zhuǎn)移，腫瘤消退，或預(yù)防治療完成后的患者中腫瘤的復(fù)發(fā)和/或新生瘤生長(zhǎng)。被治療的非霍奇金氏淋巴瘤可以包括攻擊性的(aggressive)(快速生長(zhǎng))和惰性的(indolent)(慢速生長(zhǎng))類(lèi)型。或者，非霍奇金氏淋巴瘤可包括B-細(xì)胞或T-細(xì)胞NHL。B-細(xì)胞NHL的非限制性實(shí)例包括Burkitt's淋巴瘤、彌漫性大B-細(xì)胞淋巴瘤(diffuselargeB-celllymphoma)，濾泡淋巴瘤(follicularl卿homa)，成免疫細(xì)胞大細(xì)胞淋巴瘤(imm皿oblasticlargecelllymphoma)，母體B_成淋巴細(xì)胞淋巴瘤(precursorB-l卿hoblasticlymphoma)、套細(xì)胞淋巴瘤(mantlecelllymphoma)、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(chronicl卿hocyticleukima)((XU/小淋巴細(xì)胞淋巴瘤(smalllymphocyticlymphoma)(SLL)(chroniclymphocyticleukima)、結(jié)節(jié)夕卜邊緣區(qū)域B_細(xì)胞淋巴瘤_粘21液_相關(guān)的淋巴組織(extranodalmarginalzoneB—celllymphoma_mucosa_associatedl卿hoidtissue)(MALT)淋巴瘤、結(jié)節(jié)邊緣區(qū)域B-細(xì)胞淋巴瘤(nodalmarginalzoneB-celllymphoma)、脾邊緣區(qū)域B_細(xì)胞淋巴瘤(splenicmarginalzoneB-celllymphoma)、原發(fā)性縱隔B-細(xì)胞淋巴瘤(primarymediastinalB-celllymphoma)、淋巴質(zhì)槳細(xì)胞淋巴瘤(l卿hoplasmocyticlymphoma)、毛細(xì)胞白血病(hairycellleukemia)、和原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)淋巴瘤(primarycentralnervoussystem(CNS)lymphoma)。T-細(xì)胞NHL包括蕈樣肉芽腫病(mycosisfungoides)，間變性大細(xì)胞淋巴瘤(anaplasticlargecelllymphoma)、血管免疫母細(xì)胞T_細(xì)胞淋巴瘤(angioi匪noblasticT-celllymphoma)、結(jié)節(jié)夕卜自然殺傷/T_細(xì)胞淋巴瘤(extranodalnaturalkiller/T-celllymphoma)、腸病型T-細(xì)胞淋巴瘤(enteropathytypeT-celllymphoma)、皮下脂膜炎樣T-細(xì)胞淋巴瘤(subcutaneouspanniculitis-likeT-celllymphoma)和母體T-成淋巴細(xì)胞淋巴瘤(precursorT-lymphoblasticlymphoma)。其它非霍奇金氏淋巴瘤也在本發(fā)明的范圍內(nèi)，且對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是明顯的。在其它方面，所述治療包括與骨髓或干細(xì)胞移植后的淋巴組織增殖性疾病相關(guān)的淋巴瘤，如B-cellNHL。實(shí)施例提供下述實(shí)施例用于進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不是為了以任何方式限制本發(fā)明的有效范圍。實(shí)施例中所引的帶下劃線和黑體的數(shù)字對(duì)應(yīng)于圖1-2中所示的的數(shù)字?！惴椒ㄋ蟹磻?yīng)均在干燥氮?dú)饣驓鍤夥障逻M(jìn)行。使用商業(yè)試劑而沒(méi)有進(jìn)一步的純化。所有PEG化合物使用前在真空下干燥或從甲苯中共沸蒸餾。除非另有說(shuō)明,CNMR圖譜在75.46MHz使用VarianMercury300NMR光譜儀，且使用氖代氯仿和甲醇作為溶劑得到?；瘜W(xué)位移(S)從四甲基硅烷(TMS)低場(chǎng)以百萬(wàn)分之一(卯m)為單位報(bào)道。HPLC方法反應(yīng)混合物，以及中間體和終產(chǎn)物的純度通過(guò)BeckmanCoulterSystemGoldHPLC儀監(jiān)領(lǐng)"使用ZOBAX300SBC8反相柱(150x4.6mm)或PhenomenexJupiter300AC18反相柱(150x4.6mm)用多波長(zhǎng)UV檢測(cè)器，使用10_90%乙腈在0.05%三氟乙酸(TFA)中的梯度，流速為lmL/分鐘)。實(shí)施例1.4Qk4臂-PEG-tBu酯(化合物2):4°k4臂-PEG-0H(12.5g，1當(dāng)量)與220mL甲苯共沸移除35mL甲苯/水。將溶液冷卻至30°C，并加入1.OM叔丁醇鉀的叔丁醇(3.75mL，3當(dāng)量x4=12當(dāng)量)溶液?；旌衔镉?(TC攪拌30分鐘，然后加入溴乙酸叔丁酯(0.975g，4當(dāng)量x4=16當(dāng)量)。反應(yīng)于3(TC保持1小時(shí)，然后冷卻至25°C。將150mL的乙醚(ether)緩慢加入至沉淀的產(chǎn)物中。將所得混懸液冷卻至17t:，并于17t:保持半小時(shí)。過(guò)濾粗產(chǎn)物，且濕濾餅用乙醚洗滌2次(2x125mL)。將分離的濕濾餅溶于50ml的DCM中，且產(chǎn)物用350ml乙醚沉淀，并過(guò)濾。濕濾餅用乙醚洗滌2次(2x125mL)。產(chǎn)物在真空下于4(TC干燥(產(chǎn)率=98%，12.25g)。13CNMR(75.4MHz，CDC13):S27.71,68.48-70.71(PEG)，80.94，168.97.實(shí)施例2.4°k4臂-PEG酸(化合物3):將40k4臂-PEG-tBu酯(化合物2，12g)溶于120mL的DCM中，然后加入60mL的TFA?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?小時(shí)，然后真空下于35t:移除溶劑。所得油狀殘余物溶于37.5mL的DCM中。粗產(chǎn)物用375mL乙醚沉淀。濕濾餅溶于30mL的0.5%NaHC03中。產(chǎn)物用DCM22萃取2次(2x150ml)。合并的有機(jī)層經(jīng)2.5g的MgS04干燥。真空下于室溫移除溶劑。所得殘余物溶于37.5mL的DCM中，且產(chǎn)物用300mL乙醚沉淀，并過(guò)濾。濕濾餅用乙醚洗滌2次(2x125ml)。產(chǎn)物在真空下于40。C干燥(產(chǎn)率=90%，10.75g)。13CNMR(75.4MHz，CDC13):S67.93-71.6(PEG)，170.83.實(shí)施例3.TBDPS-(10)-(7_乙基_10_羥基喜樹(shù)堿)(化合物5):向7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿(化合物4，2.0g，5.lOmmol，l當(dāng)量)在100mL無(wú)水DCM中的混懸液中加入E^N(4.3mL，30.58mmol，6當(dāng)量)和TBDPSC1(7.8mL，30.58mmol，6當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物加熱回流過(guò)夜，然后用0.2N的HC1溶液(2x50mL)、飽和NaHC03溶液(100mL)和鹽水(lOOmL)洗滌。有機(jī)層經(jīng)MgS(^干燥，過(guò)濾，并真空蒸發(fā)。殘余物溶于無(wú)水DCM中，并通過(guò)加入己烷進(jìn)行沉淀。重復(fù)用DCM/己烷進(jìn)行沉淀以除去過(guò)量TBDPSC1。過(guò)濾固體，并真空干燥得到2.09g產(chǎn)物。(65%產(chǎn)率)。丄HNMR(300MHz，CDCl3):S0.90(3H，t，J=7.6Hz)，1.01(3H，t，J=7.3Hz)，1.17(9H，s)，1.83—1.92(2H，m)，2.64(2H，q，6.9Hz)，3.89(1H，s，OH)，5.11(2H，s)，5.27(1H，d，J=16.1Hz)，5.72(1H，d，J=16.4Hz)，7.07(2H，d，J=2.63Hz)，7.36-7.49(7H，m)，7.58(1H，s)，7.75-7.79(4H，m)，8.05(1H，d，J=9.4Hz).13CNMR(75.4MHz，CDC13):S7.82，13.28，19.52,22.86,26.48,31.52,49.23,66.25,72.69，97.25，110.09，117.57，125.67，126.57，127.65，127.81，130.02，131.69，131.97，135.26，143.51，145.05，147.12，149.55，149.92，154.73，157.43，173.72.實(shí)施例4.TBDPS-(10)-(7_乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)_(20)-Gly-Boc(化合物6):向(TC的TBDPS-(10)-(7-乙基_10_羥基喜樹(shù)堿)(化合物5，3.78g，5.99mmo1，1當(dāng)量)和Boc-Gly-OH(l.57g，8.99mmol，1.5當(dāng)量)在100mL無(wú)水DCM中的溶液中加入EDC(l.72g，8.99,1，1.5當(dāng)量)和D證(329mg，2.69,1,0.45當(dāng)量)。反應(yīng)混合物于(TC攪拌，直到HPLC表明起始物料完全消失(約1小時(shí)45分鐘)。有機(jī)層用0.5%NaHC03溶液(2x50mL)、水(lx50mL)、0.1N的HC1溶液(2x50mL)和鹽水(lx50mL)洗滌；并經(jīng)MgS(^干燥。過(guò)濾并真空蒸發(fā)后，得到4.94g粗產(chǎn)物(定量產(chǎn)率)。粗固體沒(méi)有進(jìn)一步純化即用于下一步反應(yīng)。力NMR(300MHz，CDC13):S0.89(3H，t，J=7.6Hz)，0.96(3H，t，J=7.5Hz)，1.18(9H，s)，1.40(9H，s)，2.07—2.29(3H，m)，2.64(2H，q，7.5Hz)，4.01—4.22(2H，m)，5.OO(IH，brs)，5.01(2H，s)，5.37(lH，d，J=17.OHz)，5.66(1H，d，J=17.OHz)，7.08(1H，d，J=2.34Hz)，7.16(1H，s)，7.37—7.50(7H，m)，7.77(4H，d，J=7.6Hz)，8.05(1H，d，J=9.4Hz).13CNMR(75.4MHz，CDC13):S7.52，13.30，19.50,22.86,26.45,28.21，31.64,42.28,49.14,67.00,76.65,79.96,95.31，110.13，118.98，125.75，126.45，127.68，127.81，130.03，131.54，131.92，135.25，143.65，144.91，145.19，147.08，149.27，154.75，155.14，157.10，166.98，169.17.實(shí)施例5.TBDPS-(10)-(7_乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)_(20)-GlyHC1(化合物7):向TBDPS-(10)-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)_(20)-Gly-Boc(化合物6，lg，1.27mmol)在5mL無(wú)水二噁烷中的溶液中加入5mL的4M的HC1在二噁烷中的溶液。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢柚钡紿PLC表明起始物料完全消失(1小時(shí))。將反應(yīng)混合物加入至50mL乙醚中，并過(guò)濾所得固體。將固體溶于50mL的DCM中，并用鹽水(通過(guò)加入飽和NaHC03溶液將pH調(diào)節(jié)至2.5)洗滌。有機(jī)層經(jīng)MgS04干燥，過(guò)濾并真空蒸發(fā)。殘余物溶于5mL的DCM，并通過(guò)加入50mL乙醚沉淀。過(guò)濾得到770mg(84%產(chǎn)率)終產(chǎn)物。力NMR(300MHz，23CDC13):S0.84(3H，t，J=7.6Hz)，1.05(3H，t，J=7.3Hz)，1.16(9H，s)，2.15—2.30(3H，m)，2.59(2H，q，7.6Hz)，4.16(1H，d，J=17.9Hz)，4.26(1H，d，J=17.9Hz)，5.13(2H，s)，5.46(1H，d，J=17.0Hz)，5.60(1H，d，J=17.OHz)，7.11(1H，d，J=2.34Hz)，7.30(1H，s)，7.40-7.51(6H，m)，7.56(1H，dd，J=2.34，9.4Hz)，7.77(4H，dd，J=7.6，1.6Hz)，7.98(IH，d，J=9.1Hz).13CNMR(75.4MHz，CDCl3):S8.09，13.72，20.26，23.61，26.94，31.83，41.01，50.71，67.62，79.51，97.03，111.65，119.69，127.13，128.97，128.99，129.11，131.43，131.96，133.00，133.03，136.51，145.62，145.81，147.24，148.29，150.58，156.27，158.68，167.81，168.34.實(shí)施例6.4°k4臂_PEG-Gly-(20)-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)_(10)-TBDPS(化合物8):向40k4臂-PEGCOOH(化合物3，1.4g，0.036,1，1當(dāng)量)在14mL無(wú)水DCM中的溶液中加入TBDPS-(10)-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)-(20)-GlyHC1(化合物7，207mg，0.29,1，2.0當(dāng)量，每個(gè)活性位點(diǎn))、DMAP(175mg，1.44,1，10當(dāng)量)和PPAC(O.85mL的50%EtOAc溶液，1.44mmol，10當(dāng)量)。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，然后真空蒸發(fā)。所得殘余物溶于DCM中，且產(chǎn)物用乙醚沉淀并過(guò)濾。殘余物用DMF/IPA重結(jié)晶得到產(chǎn)物(1.25g)。13CNMR(75.4MHz，CDC13):S7.45，13.20，19.39，22.73，26.42，31.67，40.21，49.01，66.83，95.16，110.02，118.83，125.58，126.40，127.53，127.73，129.96，131.49，131.76，131.82，135.12，143.51，144.78，145.13，146.95，149.21，154.61，156.92，166.70，168.46，170.30.實(shí)施例7.4°k4臂-PEG-Gly(20)-(7_乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)(化合物9):向化合物4°k4臂-PEG-Gly-(20)-(7_乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)_(10)-TBDPS(化合物8，1.25g)中加入TBAF(122mg，0.46,1，4當(dāng)量)在THF和0.05M的HC1溶液(12.5mL)的l:l混合物中的溶液。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后用DCM萃取2次。合并的有機(jī)相經(jīng)MgS04干燥，過(guò)濾并真空蒸發(fā)。殘余物溶于7mL的DMF中，并用37mL的IPA沉淀。過(guò)濾固體，并用IPA洗滌。重復(fù)用DMF/IPA的進(jìn)行沉淀。最后將殘余物溶于2.5mL的DCM中，并通過(guò)加入25mL乙醚進(jìn)行沉淀。過(guò)濾固體，并于4(TC在真空中干燥過(guò)夜(860mg)。13CNMR(75.4MHz，CDC13):S7.48，13.52，22.91，31.67，40.22，49.12，66.95，94.82，105.03，118.68，122.54，126.37，128.20，131.36，142.92，144.20，144.98，147.25，148.29，156.44，156.98，166.82，168.49，170.39。該NMR數(shù)據(jù)表示沒(méi)有PEG-COOH的信號(hào)，表明所有的COOH均已經(jīng)反應(yīng)。通過(guò)熒光監(jiān)測(cè)測(cè)定時(shí)，發(fā)現(xiàn)負(fù)載為3.9，這與7-乙基-lO-羥基喜樹(shù)堿在聚合物的4個(gè)支鏈上均完全負(fù)載一致。以大得多的規(guī)模重復(fù)該實(shí)驗(yàn)得到一致的結(jié)果。生物學(xué)數(shù)據(jù)實(shí)施例8.毒性數(shù)據(jù)使用裸小鼠研究軛合四臂PEG的7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的最大耐受劑量(MTD)。監(jiān)測(cè)小鼠14天的死亡率和疾病信號(hào)，且當(dāng)體重減少>治療前的體重的20%時(shí)處死。表1表示化合物9(單劑量和多劑量給藥)的最大耐受劑量。對(duì)小鼠隔天給藥多劑量給藥的每個(gè)劑量，持續(xù)10天，然后再觀察4天，因此總共14天。表1.在裸小鼠中的MTD數(shù)據(jù)24<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>單劑量給藥時(shí)，發(fā)現(xiàn)4臂-PEG-Gly-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)(化合物9)的MTD為30mg/kg，當(dāng)多劑量給藥(q2dx5)時(shí)為10mg/kg。實(shí)施例9.在非霍奇金氏淋巴瘤細(xì)胞中的細(xì)胞毒性細(xì)胞毒性表示每種化合物的體外抗腫瘤能力。使用MTS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PEG-Gly-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)(化合物9)和CPT-ll的體外細(xì)胞毒性。于37t:將細(xì)胞用藥物孵育72小時(shí)。孵育后，加入MTS染料，并于490nm檢測(cè)形成的有色產(chǎn)物(甲腈)?；衔?和CPT-ll的IC5。值表示化合物9與CPT-ll相比，具有高得多的對(duì)被測(cè)NHL細(xì)胞的體外抑制。在Raji和DaudiBurkitt's淋巴瘤細(xì)胞中化合物9的IC50為2至20nM，且比CPT-ll有效約30至50倍。實(shí)施例10.體外代謝在大鼠肝細(xì)胞中觀察PEG-Gly_(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)綴合物(化合物9)的體外代謝。于PH7.5，37t:將化合物9與大鼠肝細(xì)胞孵育2小時(shí)。如圖3所示，7-乙基-10-羥基-喜樹(shù)堿和7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿-葡糖苷酸(7-乙基-10-羥基-喜樹(shù)堿-G)為確認(rèn)的主要代謝產(chǎn)物，這與已知的7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的體內(nèi)代謝途徑一致。實(shí)施例11.PEG綴合物的性質(zhì)表2表示PEG-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)綴合物在鹽水溶液中的溶解度?；衔?表現(xiàn)出高達(dá)相當(dāng)于4mg/mL的7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的良好溶解性。在人血漿中，7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿從PEG綴合物中穩(wěn)定釋放22至52分鐘的倍增時(shí)間(doublingtime)，且如下述實(shí)施例12所述釋放表現(xiàn)出pH和濃度依賴(lài)。表2.PEG-7-乙基_10_羥基喜樹(shù)堿綴合物的性質(zhì)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>a7_乙基-10-羥基喜樹(shù)堿在鹽水中不溶bPEG綴合物半衰期7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿從綴合物中的形成速率室溫下PEG-Gly-7-乙基_10_羥基喜樹(shù)堿綴合物在鹽水中和其它水性介質(zhì)中表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性，持續(xù)時(shí)間高達(dá)24小時(shí)。實(shí)施例12.濃度和pH對(duì)穩(wěn)定性的影響使用基于UV的HPLC方法監(jiān)測(cè)大鼠和人血槳中的水穩(wěn)定性和水解性質(zhì)。室溫下將4臂PEG-Gly-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)綴合物(化合物9)與每個(gè)樣品孵育5分鐘。PEG-7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿綴合物在緩沖液中的穩(wěn)定性是pH依賴(lài)性的。圖4表示4臂PEG-Gly-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)在多種樣品中的穩(wěn)定性。圖5表示7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿從PEG-Gly-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)中的釋放速率隨pH升高而增加。實(shí)施例13.藥物代謝動(dòng)力學(xué)向無(wú)腫瘤的Balb/C小鼠單次(single)注射20mg/kg的4臂PEG-Gly-(7_乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)綴合物。在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死小鼠，并通過(guò)HPLC分析血漿中完整的綴合物和釋放的7-乙基-10-羥基-喜樹(shù)堿。使用非代謝區(qū)分析(non-compartmentalanalysis)(WinNonlin)完成藥物代謝動(dòng)力學(xué)分析。詳見(jiàn)表3。表3.藥物代謝動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>如圖6中所示，7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的聚乙二醇化產(chǎn)生更長(zhǎng)周期的半衰期和對(duì)于天然藥物7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的高暴露(e鄧osure)。觀察到4臂PEG-Gly-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)綴合物的肝腸循環(huán)。PEG-Gly-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)在小鼠中的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特性是雙相性的，在起始2小時(shí)期間表現(xiàn)出快速血漿分布相，在隨后18-22小時(shí)表現(xiàn)出對(duì)于綴合物的終末消除半衰期，伴隨地在18-26小時(shí)表現(xiàn)出對(duì)于7-乙基-io-羥基喜樹(shù)堿的終末消除半衰期。而且，在大鼠中研究了4臂PEG-Gly-(7-乙基-10-羥基-喜樹(shù)堿)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特性。在大鼠中，使用的劑量水平為3、10和30!1^/1^(相應(yīng)于7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)。在大鼠中的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特性與在小鼠中的一致。在大鼠中，4臂PEG-Gly_(7-乙基_10_羥基喜樹(shù)堿)表現(xiàn)出從循環(huán)中雙相清除，在大鼠中消除半衰期為12-18小時(shí)。從4臂PEG-Gly-7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿綴合物中釋放的7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的表觀消除半衰期為21-22小時(shí)。在大鼠中，最大血漿濃度(Cmax)和曲線下面積(AUC)以劑量依賴(lài)的方式增加。在小鼠或大鼠中從4臂PEG-Gly綴合物中釋放的7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的表觀半衰期明顯比報(bào)道的從CPT-11中釋放的7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的表觀半衰期更長(zhǎng)，且從4臂PEG-Gly-(7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿)中釋放的7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的暴露明顯比報(bào)道的從CPT-11中釋放的7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的暴露更高。在大鼠中，母體化合物的清除率為0.35mL/hr/kg。估算的母體化合物的穩(wěn)態(tài)分布體積(Vss)為5.49mL/kg。在大鼠中，釋放的7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的清除率為131mL/hr/kg。在大鼠中，估算的釋放的7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的Vss為2384mL/kg。在小鼠和大鼠中觀察到釋放的7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的肝腸循環(huán)。實(shí)施例14.體內(nèi)數(shù)據(jù)_在Raji人Burkitt's淋巴瘤異種移植的小鼠模型中的效果在RajiBurkitt's淋巴瘤異種移植的小鼠中，檢測(cè)實(shí)施例7的化合物9的抗腫瘤效果。通過(guò)靜脈注射2.5x106人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞(Raji)，在SCIDCB17小鼠中建立散布的異種移植腫瘤。然后將小鼠隨機(jī)分到各個(gè)檢測(cè)組(每組10只小鼠)。在使用化合物9治療組中，在第1天以單劑量靜脈注射30mg/kg體重的化合物9。在用CPT-ll治療的小鼠中，注射60mg/kg體重的CPT-ll。注射細(xì)胞1天后開(kāi)始治療。在多劑量給藥方案中，靜脈注射10mg/kg化合物9和40mg/kg的CPT-ll，每組q2dx5。對(duì)照組使用鹽水。在所有情況中，給藥的化合物9的量均是基于7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的量，而不是給藥的聚合物綴合物的量。每天監(jiān)測(cè)動(dòng)物的任何疾病信號(hào)、一般行為的變化和存活。也監(jiān)測(cè)體重。處死表現(xiàn)出開(kāi)放性壞死損傷的帶有腫瘤的小鼠。也人性化的處死體重減輕超過(guò)20%的小鼠。對(duì)于所有的治療組，監(jiān)測(cè)小鼠的腫瘤生長(zhǎng)和存活。研究后，所有小鼠通過(guò)吸入(A安樂(lè)死。治愈率的結(jié)果和延長(zhǎng)壽命(ILS)的結(jié)果見(jiàn)于表4。表4.治療效果<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>結(jié)果表明，在單劑量治療中用化合物9治療的小鼠具有50%的治愈率。在多劑量治療中，用化合物9治療的小鼠表現(xiàn)出90%的治愈率。在單劑量或多劑量治療中均沒(méi)有小鼠用CPT-ll治愈。對(duì)于實(shí)施例的目的，"治愈"應(yīng)理解為治療完成后總共觀察100天沒(méi)有觀察到任何腫瘤信號(hào)。該結(jié)果表明本文所述的化合物具有治療患有非霍奇金氏淋巴瘤(如Burkitt's淋巴瘤)的患者的用途。該結(jié)果也表示本文所述的化合物能夠替代基于CPT-ll的治療。實(shí)施例15.體內(nèi)數(shù)據(jù)-在Daudi人Burkitt's淋巴瘤異種移植的小鼠模型中的效果還在DaudiBurkitt's淋巴瘤異種移植的小鼠中檢測(cè)化合物9的抗腫瘤效果。通過(guò)靜脈注射2.5x106人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞(Daudi)，在SCIDCB17小鼠中建立散布的異種移植腫瘤。然后將小鼠隨機(jī)分到各個(gè)檢測(cè)組(每組10只小鼠)。注射腫瘤細(xì)胞后1天開(kāi)始早期處理治療(earlytreatment)。注射腫瘤細(xì)胞后7天開(kāi)始晚期治療(delayedtreatment)。在用化合物9的治療組中，在第1天(早期治療)或第7天(晚期治療)以單劑量靜脈注射30mg/kg體重的化合物9。在用CPT-ll治療的小鼠中，注射60mg/kg體重的CPT-ll。對(duì)照組小鼠給藥鹽水。每天監(jiān)測(cè)動(dòng)物的任何疾病信號(hào)、一般行為的變化和存活。還監(jiān)測(cè)體重。處死表現(xiàn)出開(kāi)放性壞死損傷的帶有腫瘤的小鼠。也人性化的處死體重減輕超過(guò)20%的小鼠。對(duì)于所有的治療組，監(jiān)測(cè)小鼠的腫瘤生長(zhǎng)和存活。研究后，所有小鼠通過(guò)吸入(A安樂(lè)死。治愈率的結(jié)果和延長(zhǎng)壽命(ILS)的結(jié)果見(jiàn)于表5。表5.治療效果組單劑量-早期治療單劑量-晚期治療治愈(％)ILS(%)治愈(％)ILSI(%)化合物9100—90—CPT-ll06600在單劑量早期治療組中，用化合物9治療的小鼠具有100%治愈率。在晚期單劑量治療中，用化合物9治療的小鼠也表現(xiàn)出90%治愈率。用CPT-ll治療的小鼠沒(méi)有治愈。該結(jié)果表明本文所述的化合物具有在非霍奇金氏淋巴瘤的各種階段治療患有非霍奇金氏淋巴瘤的患者的用途。28權(quán)利要求式(I)化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于在有此需要的哺乳動(dòng)物中治療非霍奇金氏淋巴瘤，其中，所述式(I)化合物包含其中R1、R2、R3和R4獨(dú)立地為OH或(L)m-D；L為雙功能連接基；D為m為0或正整數(shù)；且n為正整數(shù)；條件是R1、R2、R3和R4不全是OH。F2007800343014C00011.tif,F2007800343014C00012.tif2.權(quán)利要求l的用途，其中提供的式(I)化合物的量的范圍為約0.3mg/mM本表面/劑至約90mg/m2體表面/劑。3.權(quán)利要求2的用途，其中所述量的范圍為約0.9mg/m2體表面/劑至約30mg/m2體表面/劑。4.權(quán)利要求l的用途，其中根據(jù)給定的方案提供所述式(I)化合物，所述方案為每周給藥lmg/m2體表面/劑至約16mg/m2體表面/齊U，持續(xù)3周，然后1周不進(jìn)行治療，并重復(fù)約3個(gè)周期。5.權(quán)利要求4的用途，其中提供的化合物的量的范圍為每3周約1.25mg/m2體表面/劑至約45mg/m2體表面/劑。6.權(quán)利要求1的用途，其中L為氨基酸或氨基酸衍生物，其中所述氨基酸衍生物選自2-氨基己二酸、3-氨基己二酸、e-丙氨酸、e-氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、Y-氨基丁酸、6-氨基己酸、2_氨基庚酸、2-氨基異丁酸、3-氨基異丁酸、2_氨基庚二酸、2，4-氨基丁酸、鎖鏈素、2，2-二氨基庚二酸、2，3-二氨基丙酸、11-乙基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、3-羥基脯氨酸、4_羥基脯氨酸、異鎖鏈素、別異亮氨酸、^甲基甘氨酸、肌氨酸、N-甲基-異亮氨酸^-N-甲基-賴(lài)氨酸J-甲基纈氨酸、正纈氨酸、正亮氨酸和鳥(niǎo)氨酸。7.權(quán)利要求6的用途，其中L為甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸或肌氨酸。8.權(quán)利要求6的用途，其中L為甘氨酸。9.權(quán)利要求l的用途，其中L選自-[c(=0)]v(CR22R23)t-，-[c(=0)]v(CR22R23)t-0-，-[c(=0)]v(CR22R23)t-NR26-，-[c(=0)]v0(CR22R23)t-，-[c(=0)]v0(CR22R23)t0-，-[c(=0)]v0(CR22R23)tNR26-，-[c(=0)]vNR21(CR22R23)t-，-[c(=0)]vNR21(CR22R23)t0-，-[c(=0)]vNR21(CR22R23)tNR26-，-[c(=0)]v(CR22R230)「，-[c(=0)]v0(CR22R230)t-，-[c(=0)]vNR21(CR22R230)t-，-[c(=0)]v(CR22R230)t(CR24R25)y-，-[c(=0)]v0(CR22R230)t(CR24R25)y-，-[c(=0)]vNR21(CR22R230)t(CR24R25)y-，-[c(=0)]v(CR22R230)t(CR24R25)y0-，-[c(=0)]v(CR22R23)t(CR24R250)y-，-[c(=0)]v0(CR22R230)t(CR24R25)y0-，-[c(=0)]v0(CR22R23)t(CR2JR250)y-，-[c(=0)]VNR21(CR22R230)t(CR24R25)y0_，-[c(=0)]VNR21(CR22R23)t(CR24R250)y-，-[c(=0)]v(CR22R23)t0-(CR28R29)t'-，-[c(=0)]v(CR22R23)tNR26-(CR28R29)t,-，-[c(=0)]v(CR22R23)tS-(CR28R29)t'-，-[c(=0)]v0(CR22R23)t0-(CR28R29)t'-，-[c(=0)]v0(CR22R23)tNR26-(CR28R29)t,--[c(=0)]v0(CR22R23)tS-(CR28R29)t'-，-[c(=0)]VNR21(CR22R23)t0-(CR28R29)t,--[c(=0)]VNR21(CR22R23)tNR26_(CR28R29)t-[c(=0)]VNR21(CR22R23)tS-(CR28R29)t.--[c(=0)]v(CR22R23CR28R290)tNR26_，-[c(=0)]v(CR22R23CR28R290)t-，-[c(=0)]v0(CR22R23CR28R290)tNR26-，-[c(=0)]v0(CR22R23CR28R290)t-，-[c(=0)]VNR21(CR22R23CR2SR290)tNR26-，-[c(、=0)]vNR21(CR22R23CR28R290)「，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中R21-R29獨(dú)立地選自氫、氨基、被取代的氨基、疊氮基、羧基、氰基、卣素、羥基、硝基、甲硅烷基醚、磺?；?、巰基、C卜6烷基巰基、芳基巰基、被取代的芳基巰基、被取代的C卜6烷硫基、(V6烷基、c2—6烯基、c2—6炔基、c3—19支鏈烷基、c3—8環(huán)烷基、cv6被取代的烷基、c2—6被取代的烯基、C2—e被取代的炔基、C3—8被取代的環(huán)烷基、芳基、被取代的芳基、雜芳基、被取代的雜芳基、(V6雜烷基、被取代的c卜6雜烷基、cv6烷氧基、芳氧基、(V6雜烷氧基、雜芳氧基、c2—6烷酰基、芳基羰基、(V6烷氧基羰基、芳氧基羰基丄2—6烷?；趸⒎蓟驶趸鶃A2—e被取代的烷?；⒈蝗〈姆蓟驶?、C2—e被取代的烷?；趸?、被取代的芳氧基羰基、C2—6被取代的烷?；趸捅蝗〈姆蓟驶趸?；(t)、(t')和(y)獨(dú)立地選自0或正整數(shù)；且(v)為0或1。10.權(quán)利要求1的用途，其中m為約1至約10。11.權(quán)利要求l的用途，其中m為約1。12.權(quán)利要求1的用途，其中n為約28至約341。13.權(quán)利要求1的用途，其中n為約114至約227。14.權(quán)利要求1的用途，其中n為約227。15.權(quán)利要求1的用途，其中所述化合物選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>16.權(quán)利要求1的用途，其中所述化合物為17.式(n)化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于在有此需要的哺乳動(dòng)物中治療非霍奇金氏淋巴瘤，其中所述式(II)化合物包含其中，提供的所述化合物的量的范圍為約0.3mg/m2體表面/劑至約90mg/m2體表面/劑；且n為約227。18.權(quán)利要求17的用途，其中提供的所述化合物的量的范圍為約0.9mg/mM本表面/劑至約30mg/mM本表面/劑。19.權(quán)利要求17的用途，其中根據(jù)給定的方案提供的所述化合物，所述方案為每周約lmg/m2體表面/劑至約16mg/m2體表面/齊U，持續(xù)3周，然后1周不進(jìn)行治療，并重復(fù)約3個(gè)周期。20.權(quán)利要求19的用途，其中提供所述化合物的量的范圍為每3周約1.25mg/m2體表面/劑至約45mg/m2體表面/齊U。全文摘要本發(fā)明涉及治療非霍奇金氏淋巴瘤。本發(fā)明包括7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的聚合物前藥用于所需要的哺乳動(dòng)物的用途。文檔編號(hào)C07D491/22GK101707888SQ200780034301公開(kāi)日2010年5月12日申請(qǐng)日期2007年8月17日優(yōu)先權(quán)日2006年9月15日發(fā)明者普賈·薩普拉申請(qǐng)人:安佐制藥股份有限公司