專利名稱：：一種腺嘌呤雙膦酸鹽及其制備方法和其在藥物制劑中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種新的雙膦酸鹽及其制備方法和其在藥物制劑中的應(yīng)用。技術(shù)背景雙膦酸鹽類(bisphosphates)藥物是近20年來發(fā)展起來的抗代謝性骨病的一類新藥，是一種焦磷酸鹽類似物，是將后者中的P-O-P鍵用P-C-P鍵代替，用于治療骨質(zhì)疏松癥，變形性骨炎，以及多發(fā)性骨髓瘤(MM)、惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移引起的高鈣血癥和骨痛癥等各種骨代謝性疾病。特別是適于治療"以骨量減少和骨結(jié)構(gòu)破壞為特征而導(dǎo)致骨脆性和骨折率增加"的骨質(zhì)疏松癥。最新研究表明，雙膦酸類藥物還可以通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤生長因子的釋放.，影響腫瘤細(xì)胞粘附、侵襲和活力等機(jī)制，從而發(fā)揮抗腫瘤的作用。目前臨床應(yīng)用的雙膦酸鹽類藥物有以下四種第一代雙膦酸類藥物Etidronate(依屈膦酸鈉)、ciodronate(氯屈膦酸鈉)、第二代雙膦酸類藥物pamidronate(帕屈膦酸鈉，簡稱aPD)、第三代雙膦酸類藥物zoledronate(cGP一42446)。這些藥物雖然在治療各種骨代謝性疾病上發(fā)揮了重要作用，但在臨床應(yīng)用中都發(fā)現(xiàn)其存在一定的不足之處。如每天口服Etidronate無臨床效果，每天口服clodronate確實(shí)減少了溶骨性病灶的發(fā)生，但對骨痛、病理性骨折發(fā)生率無明顯效果。aPD口服藥物的低吸收率。Zoledronate尚待進(jìn)一步的臨床驗(yàn)證。本發(fā)明的目的就是提供一種新的罕膦酸鹽，同時(shí)提供一種該鹽的的制備方法和其在藥物制劑中的應(yīng)用，以期為臨床用藥提供更多、更好的用藥選擇。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明的提供新的雙膦酸鹽為腺嘌呤雙膦酸鹽，其化合物的結(jié)構(gòu)為式(I)或式(n)。VH2NH^
發(fā)明內(nèi)容其中式(I)化合物的化學(xué)名稱為[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1_羥基-膦酰乙基]膦酸(以下簡稱化合物I)。其中式(n)化合物的化學(xué)名稱為[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-卜羥基-膦酰丙基]膦酸(以下簡稱化合物II)。本發(fā)明的提供腺嘌呤雙膦酸鹽的制備方法如下其化合物I的制備方法.*包括以下步驟(a)在室溫條件下，腺嘌呤加入有機(jī)溶劑(二甲基甲酰胺)，加熱至80-100。C后，加入無水碳酸鈉反應(yīng)后，加入一氯乙酸乙酯，生成(6-氨基-嘌呤-9-基)-乙酸乙酯。(b)(6-氨基-嘌昤-9-基)-乙酸乙酯與鹽酸反應(yīng)，生成(6-氨基-嘌呤-9-基)-乙酸。(c)在亞磷酸介質(zhì)中加入(6-氨基-嘌呤-9-基)-乙酸反應(yīng)后，加入三氯化磷，在酸性條件下，反應(yīng)生成[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-l-羥基-膦酰乙萄膦酸。(d)[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙蜀膦酸加入堿液生成[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-l-羥基-膦酰乙基]膦酸鹽。其中的堿液可以是氫氧化鈉溶液，也可以是碳酸鈉溶液?；衔颕的合成路線為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其化合物II的制備方法包括以下步驟(a)腺嘌呤在無水乙醇、苯混合介質(zhì)中(其混合比例不需嚴(yán)格限定，一般約為l:8),加熱蒸餾，加入金屬鈉后，緩慢滴加丙烯酸乙酯，加熱回流，將反應(yīng)液蒸餾濃縮，收集3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-丙酸乙酯；(b)將3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-丙酸乙酯加入鹽酸溶液反應(yīng)后，加入固體氫氧化鈉中和至pH約為34，收集3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-丙酸；(c)在亞磷酸介質(zhì)中加入3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-丙酸，反應(yīng)后加入三氯化磷，生成3-[(6-氨基-嘌呤-9-基)-l-羥基-膦酰丙基]膦酸；(d)3-[(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸加入堿液生成3-[(6-氨基-嘌呤_9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸鹽。其中的堿液可以是氫氧化鈉溶液，也可以是碳酸鈉溶液?；衔颕I的合成路線為現(xiàn)己研究的雙膦酸分子，結(jié)構(gòu)中具有大量的環(huán)狀側(cè)鏈，其中包括含芳香環(huán)、五元雜環(huán)、六元雜環(huán)及少量稠環(huán)，但含腺嘌呤的雙膦酸鹽化合物至今未見報(bào)道。腺嘌呤是由含4個(gè)N原子的稠雜環(huán)嘌呤及6位側(cè)鏈氨基組成，其自身具有生物活性，本發(fā)明設(shè)計(jì)合成以腺嘌呤為側(cè)鏈取代基的雙膦酸化合物，在其雜環(huán)的9位連接垸酸，然后將其膦酸化而得到含腺嘌呤的新的雙膦酸化合物。實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明化合物在體外具有較強(qiáng)抑制羥磷灰石溶解的活性，其對磷酸^有很強(qiáng)的親和性，該化合物通過吸附于骨骼中羥磷灰石晶體上，抑制結(jié)晶及其前體特質(zhì)的形成、生長和溶解。它可長期滯留在骨骼中，抑制羥磷灰石結(jié)晶吸收比抑制其形成、生長需要量低很多，且抑制破骨細(xì)胞比抑制成骨細(xì)胞的所需量低很多，故小劑量即可抑制骨質(zhì)吸收產(chǎn)生療效，作用持久，不影響骨組織鈣化。本發(fā)明化合物亦能減少破骨細(xì)胞的分化與動(dòng)員，并影響其與骨表面的結(jié)合過程。實(shí)驗(yàn)研究還證明本發(fā)明化合物具有體外抑制瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)瘤細(xì)胞凋亡的作用。這些均為本發(fā)明化合物用于制備治療各種骨代謝性疾病藥物制劑以及抗癌藥物制劑中的應(yīng)用提供了佐證。本發(fā)明化合物I或II用于制備治療各種骨代謝性疾病藥物制劑以及抗癌藥物制劑。本發(fā)明化合物I或II可經(jīng)口服或不經(jīng)口服給藥，給藥量因藥物不同而各有不同，對成年人來說，每天l—-500mg比較合適。經(jīng)口服給藥時(shí)，首先以該化合物為活性成分與常規(guī)的藥用輔劑如賦形劑、崩解劑、黏合劑、潤滑劑、抗氧化劑、包衣劑、著色劑、芳香劑、表面活性劑等混合，將其制成顆粒劑、膠囊劑、片劑的等形式給藥。非經(jīng)口服給藥時(shí)可以注射液、輸液劑或栓劑等形式給藥。制備上述制劑時(shí)，可使用常規(guī)的制劑技術(shù)。通過下面的實(shí)驗(yàn)，說明本發(fā)明化合物具有雙磷酸鹽樣活性。本發(fā)明所合成的化合物體的體外抑制羥磷灰石溶解活性試驗(yàn)(1)巴比妥緩沖溶液的配制取KC1、巴比妥適量，加水適量，超聲溶解，KOH調(diào)PH值至7.0，即得含巴比妥0.01M，KC10.155M的巴比妥緩沖溶液。(2)羥磷灰石處理取羥磷灰石適量置于馬福爐中90(TC烤15h后，冷卻過夜后，再置于50(TC馬福爐中烤15h，冷卻后，稱其重減輕了8.37%。(3)羥磷灰石復(fù)合物制備分別取3份經(jīng)高溫烤過的羥磷灰石，每份150mg分別置于8份500ml巴比妥緩沖溶液中(KOH調(diào)pH7.4)，磁力攪拌下平衡24h后將空白對照組經(jīng)微孔濾膜過濾，收集固體，低溫千燥，即為羥磷灰石空白對照，其余2份中分別[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-l-羥基-膦酰乙基]膦酸(A)及[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-l-羥基-膦酰丙基]膦酸(B),其重量為磷占羥磷灰石總磷的5%,磁力攪拌下平衡2h后，經(jīng)微孔濾膜過濾，收集固體，低溫干燥，即得羥磷灰石復(fù)合物。(4)羥磷灰石復(fù)合物溶解精稱上述各組羥磷灰石復(fù)合物及空白對照各10份于50ml的三角瓶中，每份6mg，每份加入7.5ml巴比妥緩沖溶液，置于KS型康氏振蕩器上振蕩，分別在5min，10min,15min，20min，30min，45min，60min，90min，120min，24h，從每組中各取出1份，0.45jim的微孔濾膜過濾，濾液用干燥的試管收集，待測。(5)濾液中鈣測定精取各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的羥磷灰石復(fù)合物溶解液的濾液各0.5ml,空白對照組取0.3ml，加入lml二甲酚橙溶液，氨-氯化銨緩沖液5ml，十六垸基三甲基溴化銨溶液2ml，重蒸水稀釋至刻度，搖勻，在604.4nm下測定吸光度值，計(jì)算濾液中鈣離子濃度，結(jié)果見表l。表l:經(jīng)化合物l、U處理后的羥磷灰石復(fù)合物溶解液中鈣離于濃度(mM)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>(6)濾液中磷測定精取各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的羥磷灰石復(fù)合物溶解液的濾液各5ml，空白對照組取3ml，置10ml容量瓶中，加鉬酸銨-硫酸溶液2ml，放置15min后，加米吐爾lml，40'C水浴放置i5min，加入醋酸鈉溶液5ml，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，在710nm下測定吸光度值，計(jì)算濾液中磷濃度，結(jié)果見表2。表2:經(jīng)化合物I、II處理后的羥磷灰石復(fù)合物溶解液中磷濃度(mM)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>濾液中鈣、磷濃度積-將上述表l、2鈣和磷濃度相乘求得鈣、磷濃度積，其結(jié)果見表3。表3經(jīng)化合物I、II處理后的羥磷灰石復(fù)合物溶解液中鈣磷濃度積((mM)、i(T3)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>上述試驗(yàn)表明本發(fā)明所合成的化合物在體外具有較強(qiáng)抑制羥磷灰石溶解的活性。本發(fā)明所合成的化合物I和化合物II上市的雙膦酸藥物體外抑制羥磷灰石溶解的活性對比試驗(yàn)1儀器與試藥JB-1型攪拌器(上海雷磁儀器廠新涇分廠)，KS型康氏振蕩器(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)，PHS-2C型精密酸度計(jì)(上海雷磁儀器廠)，島津UV-2201紫外分光光度計(jì)?；衔颕、化合物II、唑來膦酸、伊班膦酸為河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院提供，阿侖膦酸、帕米瞵酸、依替膦酸為河北醫(yī)科大學(xué)藥物化學(xué)教研室提供，羥磷灰石為生化試劑BR(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，碳酸鈣、二甲酚橙、十六烷基三甲基溴化銨、氯化銨、氨水、磷酸二氫鉀、亞硫酸氫鈉、對甲氨基酚硫酸鹽、乙酸鈉、鉬酸銨、氯化鉀、亞硫酸鈉、硫酸均為分析純，巴比妥為化學(xué)純。2方法雙膦酸類化合物活性測定2.1巴比妥緩沖溶液的配制取KCL、巴比妥適量，加水適量，超聲溶解，KOH調(diào)PH值至7.0，即得含巴比妥0.01M，KCL0.155M的巴比妥緩沖溶液。2.2羥磷灰石處理取羥磷灰石適量置于馬福爐中90(TC烤15h后，冷卻過夜后，再置于50(TC馬福爐中烤15h，冷卻后，稱其重減輕了8.37%。2.3羥磷灰石復(fù)合物制備分別取8份經(jīng)高溫烤過的羥磷灰石，每份150mg分別置于8份500ml巴比妥緩沖溶液中(KOH調(diào)pH7.4)，磁力攪拌下平衡24h后將空白對照組經(jīng)微孔濾膜過濾，收集固體，低溫干燥，即為羥磷灰石空白對照，其余7份中分別加入唑來膦酸、伊班膦酸、阿侖膦酸、帕米瞵酸、依替瞵酸、化合物I及化合物II，其重量為磷占羥磷灰石總磷的5%，磁力攪拌下平衡2h后，經(jīng)微孔濾膜過濾，收集固體，低溫干燥，即得羥磷灰石復(fù)合物。2.4羥磷灰石復(fù)合物溶解精稱上述各組羥磷灰石復(fù)合物及空白對照各10份于50ml的三角瓶中，每份6mg，每份加入7.5ml巴比妥緩沖溶液，置于KS型康氏振蕩器上振蕩，分別在5min，10min，15min,20min，30min，45min，60min,90min，120min，24h,從每組中各取出l份，0.45pm的微孔濾膜過濾，濾液用干燥的試管收集，2.5濾液中鈣測定精取各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的羥磷灰石復(fù)合物溶解液的濾液各0.5mi，空白對照組取0.3ml，加入lml二甲酚橙溶液，氨-氯化銨緩沖液5ml，十六垸基三甲基溴化銨溶液2ml，重蒸水稀釋至刻度，搖勻，在604.4nm下測定吸光度值，計(jì)算濾液中鈣離子濃度，結(jié)果見表3。2.6濾液中磷測定精取各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的羥磷灰石復(fù)合物溶解液的濾液各5ml,空白對照組取3ml，置10ml容量瓶中，加鉬酸銨-硫酸溶液2ml，放置15min后，加米吐爾lml,40"水浴放置15min，加入醋酸鈉溶液5ml，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，在710nm下測定吸光度值，計(jì)算濾液中磷濃度，結(jié)果見表4。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果表3處理后的羥磷灰石復(fù)合物溶解液中鈣離子濃度((mM)時(shí)間啤來膦伊班膦阿侖膦帕米膦依替瞵空白對<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表4處理后的羥磷灰石復(fù)合物溶解液中中磷濃度:(mM)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>將上述鈣和磷濃度相乘求得鈣、磷濃度積，其結(jié)果見表5。表5(mM)2xl(T1)時(shí)間唑來膦伊班膦阿侖膦帕米膦依替膦空白對BA(min)酸酸酸酸酸昭"、、510.5610.27.153.293.313.037.9579.431014.9913.S88.786.026.633.819.8192.671521.0817.5911.116.778.664.3111.0697.942024.3620.661〗.879.6211.045.7912.71102.03530,7724.9113.2712.3916.536.4314.75115.34834.9829.5116.2913.9218.8411.6715.68126.36938.232.9717.8415.1423.2912.6219.26137.39441.6534.6423.5616.6325.1714.4419.94144.012046.6839.9827.0619.7628.8415.3522.77153.3上述試驗(yàn)表明本發(fā)明所合成的化合物I和化合物II與上市雙膦酸藥物及空白比較，其在體外具有較強(qiáng)抑制羥磷灰石溶解的活性，其中化合物I抑制羥磷灰石溶解的活性與阿侖膦酸相當(dāng)，化合物II抑制羥磷灰石溶解的活性與帕米膦酸相當(dāng)。本發(fā)明所合成的化合物I和化合物II具有抑制骨溶的能力。目前，已上市的雙膦酸藥物，主要是用P-C-P鍵代替了焦磷酸鹽類似物中的P-O-P鍵，使其能夠緊密地吸附在骨的羥磷灰石的表面，且不被焦磷酸酯酶降解，同時(shí)雙膦酸鹽的P-C-P鍵結(jié)構(gòu)特征決定了它具有抑制骨吸收的活性，其磷酸根上的氧原子能與鈣離子熬合形成二配位體而發(fā)揮其生理活性。用于治療骨質(zhì)疏松癥，變形性骨炎，惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移引起的高鈣血癥和骨痛癥等骨代謝性疾病。本發(fā)明所合成的化合物I和化合物II同樣具有P-C-P鍵，而試驗(yàn)也表明其同時(shí)含有的腺嘌呤結(jié)構(gòu)，使其更具藥理活性。故以本發(fā)明所合成的化合物I和化合物II為活性成分制備成的藥物，可用于治療各種骨代謝性疾病。本發(fā)明所合成的化合物體外抑制瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)瘤細(xì)胞凋亡作用的試驗(yàn)。(1)方法1)甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法測定人胃癌細(xì)胞株SGC-7901各組的增殖情況，以確定半數(shù)抑制濃度(ICso)。1.1正常對照組、溶劑對照組、藥物實(shí)驗(yàn)組；實(shí)驗(yàn)藥物化合物I，其濃度分別為卯、120、150、180、21(Himol/L。1.2ICs。的確定分別將上述各組細(xì)胞株于藥物作用72h后測定光密度(OD或吸光度)值,計(jì)算細(xì)胞生長抑制率，根據(jù)IC5o=Lg-l[Xm-I(Ep-0.5)],確定IC50(A:150nmol/L)。2)分別選取三個(gè)不同濃度，A:90pmol/L、150nmol/L、210pmol/L作用于人胃癌細(xì)胞株SGC-790172h，收集細(xì)胞，用于流式細(xì)胞檢測。3)選取化合物IIC5。濃度的藥物作用于人胃癌細(xì)胞株SGC-7901分別于24h、48h、72h收集細(xì)胞。4)檢測指標(biāo)流式細(xì)胞定量檢測技術(shù)(FCM)檢測藥物作用24h、48h、72h,細(xì)胞周期變化和三個(gè)不同濃度藥物作用72h后細(xì)胞凋亡率的變化。(2)結(jié)果1)化合物I對人胃癌細(xì)胞株SGC-7901增殖的影響化合物I可抑制人胃癌細(xì)胞株SGC-7卯l增殖(PO.05),溶劑對照組與空白對照組細(xì)胞未見明顯變化，結(jié)果見表6。其ICs。為150^miol丄"。表6.人胃癌細(xì)胞株SGC-7901抑制率分析±sn=3)組別24hOD"0抑制率％48hOD570抑制率％72hOD570抑制率％對照組0.240±0.033—0.418±0.074—0.651±0.071—溶劑組0.232±0雄3.330.402±0.0813.830.622±0.0524.46A的濃度1000.229±0.0634.590.366±0.06612.450.543±0.05617.591200.192±0.08520.00*0.292±0.06230.15*0.382±0.04941.33*1500.181±0.02!24.590.256±0.03140.20*0.302±0.04653.61"1800.137±0.02842.92**0.182±0.09756.450.238±0.07963.45**2100.106±0.02155.84**0.129±0.10369.140.160±0.03476.43***:與對照組比較P<0.05，**:與對照組比較P〈0.01(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果化合物I可誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901凋亡,凋亡率明顯高于對照組,差異顯著(PO.05);藥物實(shí)驗(yàn)組人胃癌細(xì)胞株SGC-7901的DNA直方圖二倍體峰前可見特征性的凋亡細(xì)胞亞二倍體峰(見圖1、圖2)，對照組未見凋亡峰(P<0.05)，提示化合物I可促進(jìn)胃癌細(xì)胞株凋亡。圖h為對照組人胃癌細(xì)胞株SGC-7901細(xì)胞DNA直方圖。圖2:為15(^mol丄-l化合物I作用72h后人胃癌細(xì)胞株SGC-7901的DNA直方圖?；衔颕同時(shí)對于人胃癌細(xì)胞株SGC-7901的生長周期有影響，可以將細(xì)胞阻滯于S期。與對照組相比，有顯著性差異(P-0.05)，結(jié)果見表7。表7.藥物作用后SGC-7901細(xì)胞周期分析(3F士sn-3)組別S(%)G2/M(%)Go/G,(0/0)對照組23.20±6.8513.50±2.4663.20±20.0溶劑組化合物I的濃度(u24.90±6.8914.30±2.5072h60.80±19.19050.02±0.97*9.92±0.5636.03±0.82*15056.65±2.81*2.71±0.49*42.4±0,9821064.23±2.51**4.56±0.03*51.60±1.61時(shí)間(化合物I的濃度150umol丄—1)24h37.37±0.66*5.07±0.2657.56±2.0548h49.20±1,10*12.10±0.53*43.60±1.5372h54.23±1.54**1.96土0,12**52.80±.22*:與對照組比較P<0.05，**:與對照組比較P〈0.01本發(fā)明所合成的化合物II體外抑制瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)瘤細(xì)胞凋亡作用的試驗(yàn)方法與上述方法相同，試驗(yàn)結(jié)果也基本相同。目前醫(yī)學(xué)界普遍認(rèn)為，大多數(shù)抗癌藥物，如拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、烷化劑、抗代謝藥物和激素詰抗劑等之所以能夠殺傷癌細(xì)胞，其根本原因在于這些藥物可以在不同類型的癌細(xì)胞中誘導(dǎo)其凋亡。許多研究者的實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，細(xì)胞凋亡參與了癌癥的起始過程，并對癌的發(fā)生起負(fù)調(diào)控作用，即凋亡抑制促進(jìn)癌的發(fā)生發(fā)展。本發(fā)明化合物可明顯誘導(dǎo)人癌細(xì)胞凋亡，且可影響癌細(xì)胞的生長周期，將細(xì)胞阻滯于s期。因此，有理由認(rèn)為本發(fā)明化合物可在制備抗癌藥物制劑中得到應(yīng)用。通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，并不茵此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍中。具體實(shí)施方式-實(shí)施例1化合物本發(fā)明化合物I的合成(a)(6-氨基-嘌呤-9-基>乙酸乙酯的合成將腺嘌呤(10.8g，0.08mol)置于四口瓶中，力隊(duì)DMF100ml，力D^至IOO'C,腺嘌呤不溶，降至室溫后，加入無水Na2C03(8.2g，0.08mol)，IO(TC反應(yīng)30min后，降至80。C，緩慢滴加一氯乙酸乙酯(17ml，0.16mol)。滴畢，保持溫度在8(TC攪拌反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)過程，8h后，冷卻后，抽濾，得深黃色固體，經(jīng)紅外燈干燥后，固體總量為19g。(6-氨基-嘌呤-9-基)-乙酸乙酯的精制取(6-氨基-嘌呤-9-基)-乙酸乙酯的粗品8g,加入乙醇200ml，加熱至沸，趁熱過濾除去醇不溶物。濾液中加入適量活性炭，加熱回流約15min后，趁熱過濾，濾液室溫冷卻，析出白色片狀結(jié)晶，收率73.7%，熔點(diǎn)為221225°C。'H-NMR(溶劑CD3C00D):S:1.3041.332(3H，t，J=7、7,2"-H),4,302~4.344(2H，q，J=7、7、7,1"-H)，8.401(1H，s，8-H)，8.477(1H，s,2-H)。"C-NMR(溶劑CD3COOD):5:14.619(2"-C)，21.100(溶劑峰)，46.530(r，-C)，64.761(2'-C)，119.260(5-C)，146,203(4-C)，147.540(8-C)，150.249(2-C)，152.304(6-C),170.077(l，-C)，177.963(溶劑峰)。(b)(6-氨基-嘌呤-9-基)-乙酸的合成將(6-氨基-嘌呤-9-基)-乙酸乙酯(1.9g，0.0086mol)置于圓底燒瓶中，加入2moi/L的鹽酸溶液20ml，回流，析出白色固體，反應(yīng)3h后，將析出的白色固體濾出，20ml蒸餾水分三次洗滌，即得產(chǎn)物(6-氨基-嘌呤-9-基)-乙酸，加2%^20)3溶液25ml溶解，過濾，滴加1。/。HCl溶液使之pH約1~2,放置過夜，過濾，20ml蒸餾水洗滌三遍，紅外燈下干燥后得產(chǎn)品重1.5g，收率90%，其熔點(diǎn)大于300。C。'H-NMR(D2。隱Na2C03溶液)&4.64(2H，S，2'-H)，4.80(溶劑峰)，7.88(1H，S，8-H)，7.93(1H，S,2-H)。13C-畫R(D20-Na2C03溶液)S:49.46(2，-C)，166.42(l，-C)，120.56(5-C)，145.51(4畫C)，151.39(8-C)，154.98(2-C)，157.89(6-C)，176.95(Na2C。3峰)(c)[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-l-羥基-膦酰乙基]膦酸的合成將適量亞磷酸置于四口瓶中，加熱至12(TC融化，并使水分揮發(fā)后，加入(6-氨基-嘌呤-9-基)-乙酸(2g，0.01moO，保持溫度約120°C，使其溶解并反應(yīng)30min，反應(yīng)物變成油狀，粘稠后，降溫至80。C，緩慢滴加三氯化磷2.4ml(0.03mol),保持滴加溫度約80。C,充分?jǐn)嚢?，使反?yīng)物粘稠、膨脹、固化。逐漸升溫至10(TC，沸水浴保溫反應(yīng)10h后，加蒸餾水20ml溶解后，加活性炭適量，加熱回流15min后，稍冷過濾，濾液加熱回流過夜，析出白色固體，抽濾，濾餅用2WNa2CO3溶液50ml加熱溶解，過濾，滴加稀鹽酸使之pH約為1，放置過夜，過濾沉淀，50ml蒸餾水洗滌三遍，紅外燈下干燥后得產(chǎn)物2.00g，。收率58.8%，熔點(diǎn)243248°C。(d)[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸加入碳酸鈉溶液生成[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸鹽。化合物I結(jié)構(gòu)驗(yàn)證本品為白色晶體，鉬蘭法鑒定呈藍(lán)色，示有磷元素。FAB質(zhì)譜圖中，[M+l]+峰為340.2，減去-一個(gè)質(zhì)子的原子量，正好與本發(fā)明合成的化合物的分子量相吻合，高分辨EI質(zhì)譜給出化合物的[M+l]+峰實(shí)測值340.02099，計(jì)算值340.14796，根據(jù)貝農(nóng)(Beynon)表給出的可能的化合物組成及本化合物的其他結(jié)構(gòu)特征，判斷分子式為C7Hn07N5P2，因此化合物的分子量為339.01304，分子式為C7H"07N5P2。IR圖中，1220cm"為P-0伸縮振動(dòng)引起的吸收峰，1080、1060cm"為C-P的對稱和不對稱伸縮振動(dòng)，表明結(jié)構(gòu)中含有P-C-P鍵；化合物的紫外光譜圖與腺嘌呤的紫外光譜圖基本一致；IR圖中，在氨基的特征峰區(qū)有峰，1700、1650、1600、1550cnT'為嘌呤環(huán)的骨架振動(dòng)引起的吸收帶；"C-NMR譜中154.670、148.232、120.505、157.894、153.277處的化學(xué)位移對應(yīng)著嘌呤環(huán)碳的化學(xué)位移，分別為2、4、5、6、8位上的碳原子的化學(xué)位移，根據(jù)這些信息可以判斷新化合物結(jié)構(gòu)中有腺嘌呤結(jié)構(gòu)。鉬藍(lán)顯色實(shí)驗(yàn)鑒別本品，結(jié)果呈藍(lán)色，表明本品結(jié)構(gòu)中含有磷元素；IR圖中，1220em"為PO伸縮振動(dòng)引起的吸收峰，1080、1060cm"為C-P的對稱和不對稱伸縮振動(dòng)，表明結(jié)構(gòu)中含有P-C-P鍵；'H-NMR譜中，4.596—4.633的dd峰，實(shí)際計(jì)算其偶合常數(shù)J,.5、9.0。據(jù)此可以判斷新化合物結(jié)構(gòu)中有P-C-P鍵。據(jù)文獻(xiàn)記載，氫與五價(jià)磷的偶合常數(shù)勺HP為3.015Hz，碳與五價(jià)磷的偶合常數(shù)'Jcp為100150Hz。本品實(shí)測的偶合常數(shù)^H產(chǎn)9.5、9.0及、Jcp-131.37、131.25Hz，據(jù)此可以判斷本法明化合物結(jié)構(gòu)中磷為五價(jià)，含有兩個(gè)磷酸基團(tuán)。在IR圖中，1490、141011'1出現(xiàn)-€^2-變形振動(dòng)的特征吸收峰；'H-NMR譜中，4.596-4.633出現(xiàn)dd峰，應(yīng)為亞甲基的氫與鄰位碳上的兩個(gè)P偶合而分裂成三重峰；"C-NMR圖中，52.374處的峰為亞甲基的峰，據(jù)此可以判斷本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)中含有亞甲基。綜上所述，通過四大光譜確證，該化合物的結(jié)構(gòu)為實(shí)施例2化合物II的合成(a)3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-丙酸乙酯的合成將腺嘌呤(10.8g，0.08mol)、絕對乙醇(280ml)、苯(34ml)置于三口瓶中，加熱蒸餾，收集了約93ml餾份后，加入金屬鈉(80mg)，無氣泡產(chǎn)生后，緩慢滴加丙烯酸乙酯25.6ml，滴畢，加熱回流，TLC監(jiān)測反應(yīng)過程，反應(yīng)10h后，將反應(yīng)液蒸餾濃縮，析出白色固體，冷卻，抽濾，乙醇重結(jié)晶，收集產(chǎn)品，重17.7g,收率94,1%，熔點(diǎn)164166。C,文獻(xiàn)[8]167~168°。。'H德R(溶劑CD3COOD)S:1.189~1.217(t，J=7、7,2"-H)，4.12卜4.163(q，J=7、7、7，l"-H)3.0703.095(t,J=6.5、6，3，-H)，4.636~4.661(t，J=6.5、6，2，-H)，2.0962.109(溶劑CD3COOD)，5.075(溶劑CD3COOD)，8.415(s，8隱H)，8.471(s，2-H〉。13C-NMR(溶劑CD3COOD):S:14.526(s，2"-C)，20.786~21.414(m，溶劑峰)，35.225(s，2，-C)，41.429(s，3,曙C)，63.423(s，l"-C)，119.332(s，5誦C)，146.087(s，4-C),147.089(s，8-C)，149.930(s，2-C)，152.105(s，6-C)，174.095(s，l,-C)，178.010(溶劑峰)(b)3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-丙酸的合成將3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-丙酸乙酯(2.35g，0.01mo1)置于圓底燒瓶中，加入3moI/L的鹽酸溶液64ml，回流4h后，冷卻，加入固體NaOH中和至pH約為3，析出針狀晶體，冷藏，完全析出后，抽濾，沉淀加水25ml，滴加2n/。Na2CCb溶液(25ml)溶解，過濾，滴加"/。HCl溶液使之pH約3，放置過夜，過濾，20ml蒸餾水洗滌三遍，紅外燈下干燥后得產(chǎn)品重1.5g，收率72%，熔點(diǎn)257259。C，文獻(xiàn)[8為284288。C。'H-NMR(溶劑D20):5:2.446~2.473(t，J=7、7，3'-H)，4.046~4.074(t，J=7、6.5，2'函H)，4.797(溶劑峰)，7.714(s，8-C)，7.746(s,2-C)。13C-NMR(溶劑D2(D):S:39.886(2'-C)，44,005(3，-C)，120.706(5-C)，144.883(4-C)，150.918(8-C)，154.728(2-C)，157.755(6腸C)，181.695(r-c)。(c)[3-(6-氨基-嘌呤-9-基>1-羥基-膦酰丙基]膦酸的合成將4.3g亞磷酸(0.04mol)置于四口瓶中，加熱至100'C使其熔化，加入3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-丙酸(4.lg，0.02mol),加熱完全溶解，并反應(yīng)30min，反應(yīng)物變成油狀后，降溫至85'C，緩慢滴加三氯化磷8ml(0.06mol)，保持滴加溫度約80'C，攪拌，使反應(yīng)物粘稠、膨脹、固化。逐漸升溫，沸水浴保溫反應(yīng)10h后，加蒸餾水40ml溶解后，過濾，濾液中加入適量活性炭，加熱回流15min后，稍冷過濾，濾液加熱回流過夜。析出白色固體，抽濾，濾餅用l%Na2C03溶液50ml,加熱溶解，過濾，滴加稀鹽酸使之pH約為1，放置過夜，過濾沉淀，50ml蒸餾水洗滌三遍，紅外燈下干燥后得產(chǎn)物3.85g,收率56.8%,熔點(diǎn)240242'C。(d)3-[(6-氨基-嘌呤-9-基)-l-羥基-膦酰丙基]膦酸加入氫氧化鈉溶液生成3-[(6-氨基-嘌呤-9_基)-l-羥基-膦酰丙基]膦酸鹽?；衔颕I結(jié)構(gòu)驗(yàn)證本發(fā)明化合物II為白色晶體，鉬蘭法鑒定呈藍(lán)色，示有磷元素。FAB質(zhì)譜圖中，[M+l]+峰為354.0，HRESI+給出化合物的[M+l]+峰實(shí)測值354.03484，計(jì)算值354.17463，根據(jù)貝農(nóng)(Beynon)表給出的可能的化合物組成及本化合物的其他結(jié)構(gòu)特征，判斷化合物II的分子式為C諷307N5P2，分子量為353.16668?；衔颕I結(jié)構(gòu)中有腺嘌呤結(jié)構(gòu)化合物的紫外光譜圖與腺嘌呤的紫外光譜圖基本一致；IR圖中，在氨基的特征峰區(qū)有峰，1700、1650、1600、1550cm"為嘌呤環(huán)的骨架振動(dòng)引起的吸收帶；|30畫11譜中，154.515、145.346、120.717、157.651、151.141對應(yīng)著嘌呤環(huán)的化學(xué)位移，分別為2、4、5、6、8位碳原子的化學(xué)位移，據(jù)此可以判斷化合物II結(jié)構(gòu)中有腺嘌呤結(jié)構(gòu)?；衔颕I結(jié)構(gòu)中有P-C:P鍵鉬藍(lán)比色實(shí)驗(yàn)鑒別化合物II，結(jié)果呈藍(lán)色，表明化合物II結(jié)構(gòu)中含有磷元素;IR圖中，1220cm"為P-O伸縮振動(dòng)引起的吸收峰，1080、1040為C-P的對稱和不對稱伸縮振動(dòng)，表明結(jié)構(gòu)中含有P-C-P鍵；。C-NMR譜中77.946處的峰發(fā)生分裂，分裂成三重峰，實(shí)際計(jì)算得其偶合常數(shù)分別為J-134.892、132.629Hz，據(jù)此說明化合物II中含P-C-P鍵，C與兩個(gè)P偶合而分裂分裂成三重峰?；衔颕I結(jié)構(gòu)中含有兩個(gè)磷酸基團(tuán)(P為V價(jià))化合物II實(shí)測的偶合常數(shù)'Jcp與文獻(xiàn)中五價(jià)磷偶合常數(shù)相吻合，據(jù)此可以判斷新化合物結(jié)構(gòu)中磷為五價(jià)，含有兩個(gè)磷酸基團(tuán)?；衔颕I結(jié)構(gòu)中有兩個(gè)亞甲基IR圖中，1490、1420cm"出現(xiàn)-CH2-變形振動(dòng)的特征吸收峰；13C-NMR圖中，39.202、44.124兩處的峰，分別為兩個(gè)亞甲基碳2，-C、3，-C的峰，因此可以判斷新化合物結(jié)構(gòu)中含有兩個(gè)亞甲基。綜上所述，通過四大光譜確證，化合物II的結(jié)構(gòu)為制劑實(shí)施例3按照本領(lǐng)域己知的方法制備片劑，每片含有下述成分:OH化合物I乳糖硬脂酸鎂聚乙烯比咯垸酮50mg60mg3mg120mg制劑實(shí)施例4按照本領(lǐng)域已知的方法制備膠囊劑，每個(gè)膠囊中含有下述成分:硬脂酸鎂lmg聚乙烯比咯垸酮B0mg制劑實(shí)施例5按照本領(lǐng)域已知的方法制備注射劑，2ml溶液中含有下述成分:化合物II100mg注射用水2ml。權(quán)利要求1、一種腺嘌呤雙膦酸鹽，其特征在于該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如以下式(I)或式(II)2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為(I)的腺嘌呤雙膦酸鹽的制備方法，其特征在于它包括以下步驟a、在室溫條件下，腺嘌呤加入二甲基甲酰胺，加熱至80-IOO'C后，加入無水碳酸鈉反應(yīng)后，加入一氯乙酸乙酯，生成(6-氨基-嘌呤-9-基)-乙酸乙酯；b、(6-氨基-嘌呤-9-基)-乙酸乙酯與鹽酸反應(yīng)，生成(6-氨基-嘌呤-9-基)-乙酸；c、在亞磷酸介質(zhì)中加入(6-氨基-嘌呤-9-基)-乙酸反應(yīng)后，加入三氯化磷，生成[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙蜀膦酸；d、[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸加入堿液生成[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-l-羥基-膦酰乙基]膦酸鹽。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為(II)的腺嘌呤雙膦酸鹽的制備方法，其特征在于它包括以下步驟a、腺嘌呤在無水乙醇、苯混合介質(zhì)中，加熱蒸餾，加入金屬鈉后，緩慢滴加丙烯酸乙酯，加熱回流，將反應(yīng)液蒸餾濃縮，收集3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-丙酸乙酯；b、將3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-丙酸乙酯加入鹽酸溶液反應(yīng)后，加入固體氫氧化鈉中和至pH約為3"4，收集3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-丙酸；c、在亞磷酸介質(zhì)中加入3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-丙酸，反應(yīng)后加入三氯化磷，生成3-[(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙蜀膦酸；d、3-[(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸加入堿液生成3-[(6-氨基-嘌呤一9-基)-l-羥基-膦酰丙基]膦酸鹽。4、化合物I在制備治療骨代謝性疾病藥物制劑中的應(yīng)用。5、化合物I在制備抗癌藥物制劑中的應(yīng)用。6、化合物II在制備治療骨代謝性疾病藥物制劑中的應(yīng)用。7、化合物II在制備抗癌藥物制劑中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種新的腺嘌呤雙膦酸鹽及其的制備方法和其在制備治療骨代謝性疾病藥物制劑中的應(yīng)用。該化合物為[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸鹽和3-[(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸鹽。該化合物可用于治療骨質(zhì)疏松癥，變形性骨炎，惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移引起的高鈣血癥和骨痛癥等骨代謝性疾病，它同時(shí)具有抗癌作用。文檔編號C07F9/6561GK101157703SQ200710185250公開日2008年4月9日申請日期2007年11月16日優(yōu)先權(quán)日2007年11月16日發(fā)明者李立更,曄蔣,蔡太梅,韓彩麗申請人:河北醫(yī)科大學(xué)