專(zhuān)利名稱(chēng)：：無(wú)糖產(chǎn)物和使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及產(chǎn)物和方法的發(fā)現(xiàn)，該產(chǎn)物和方法有助于活體綴合碳水化合物成分病癥的診斷和治療，該活體綴合碳水化合物可引起細(xì)胞機(jī)能陣礙和細(xì)胞死亡.
背景技術(shù)：
：過(guò)去，關(guān)于細(xì)胞機(jī)能陣礙、細(xì)胞死亡和特殊疾病狀態(tài)的很多表面上看來(lái)無(wú)關(guān)的觀察結(jié)果不被理解也無(wú)法被理解，現(xiàn)在，由于本發(fā)明的方法和組合物而能夠被理解了，本發(fā)明第一次定義了無(wú)糖病理學(xué)的狀態(tài)與后果、它的產(chǎn)物以及用于它的檢測(cè)與治療的產(chǎn)物與方法.
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明在一方面提供了肽，特別是無(wú)糖(aglyco)10B的肽成分，它們是負(fù)責(zé)機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別抗原的致免疫表位.本發(fā)明在這方面的一個(gè)實(shí)施方案提供了分離的復(fù)合糖，其中包含至少一種與序列1或序列2所列氨基酸序列締合的碳水化合物.這些無(wú)糖10B的肽成分可在體內(nèi)產(chǎn)生無(wú)糖10B的特異性抗體，抗無(wú)糖10B(抗致惡性素抗體).本發(fā)明在這方面的另一個(gè)實(shí)施方案中，肽各自或聯(lián)合包括在治療組合物中，用于在必要時(shí)增加患者抗致惡性素抗體的濃度.本發(fā)明在另一方面提供了防止或抑制流感病毒顆粒附著于患者細(xì)胞的方法，包括給患者治療有效劑重的復(fù)合糖，從而與所述流感病毒顆粒結(jié)合，防止或抑制該顆粒附著于細(xì)胞受體.本發(fā)明在另一方面提供了治療精神分裂癥的方法，包括在必要時(shí)給患者治療有效刑量的D-葡糖胺-HCl,從而增加所述患者腦復(fù)合糖的濃度.本發(fā)明在另一方面提供了抗具有序列2氨基酸序列的肽的單克隆抗體和抗無(wú)糖蛋白IOB的單克隆抗體.本發(fā)明在另一方面提供了診斷患者與癌癥形成有關(guān)的慢性病毒性疾病的方法，包括通過(guò)檢測(cè)患者異常升高的抗無(wú)糖蛋白10B抗體水平來(lái)檢測(cè)向惡性細(xì)胞的轉(zhuǎn)化.困1是顯示精神分裂癥與非精神分裂癥患者中神經(jīng)氨酸、己糖胺和己糖數(shù)量的條狀困.圖2是不同年齡健康個(gè)體中存在的抗致惡性素抗體的數(shù)量圖.圖3是健康個(gè)體和患有各種形式癌癥的個(gè)體中抗致惡性素抗體數(shù)量的散點(diǎn)圖.困4是在乳腺癌患者中，在惡性腫瘤期間和癌癥治療數(shù)年后觀測(cè)到的抗致惡性素抗體數(shù)量的散點(diǎn)圖.圖5是用抗致惡性素抗體進(jìn)行免疫染色的惡性細(xì)胞的照片組合.圖6是顯示抗致惡性素抗體對(duì)小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的體外抑制作用的條狀圖.圖7是良性增生、炎癥和癌癥中抗致惡性素抗體濃度的條狀圖.圖8A和8B是注射12聚體(iner)合成肽后在兔體內(nèi)產(chǎn)生的抗致惡性素抗體數(shù)量的條狀圖.圖9A和9B是注射16聚體合成肽后在兔體內(nèi)產(chǎn)生的抗致惡性素抗體數(shù)量的條狀困.具體實(shí)施例方式本發(fā)明的方法和組合物來(lái)自無(wú)糖復(fù)合物病理學(xué)的研究結(jié)果.本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，復(fù)合糖的碳水化合物成分與脂質(zhì)或蛋白質(zhì)共價(jià)結(jié)合形成復(fù)合糖，該成分有助于細(xì)胞的穩(wěn)定性、細(xì)胞的受體與識(shí)別功能和細(xì)胞成分的保護(hù)作用，免受天然與外來(lái)物質(zhì)的損害，當(dāng)這些正常的碳水化合物成分濃度降低或結(jié)構(gòu)改變時(shí)，這里一起定義為"無(wú)糖狀態(tài)"和"無(wú)糖病理學(xué)"，這些碳水化合物的穩(wěn)定性、受體識(shí)別與保護(hù)功能減少或喪失，導(dǎo)致細(xì)胞機(jī)能陣礙和細(xì)胞死亡，所致疾病狀態(tài)因細(xì)胞機(jī)能障礙或細(xì)胞死亡的位置而異.這里顯示的證據(jù)表明，這些例如在神經(jīng)系統(tǒng)中的疾病狀態(tài)是細(xì)胞機(jī)能障礙或細(xì)胞死亡(即細(xì)胞缺失)的結(jié)果.這樣的疾病狀態(tài)包括但不限于癡呆，例如精神分裂癥(早發(fā)性癡呆)，和腦腫瘤，以及帕金森綜合征和阿爾茨海默病.糖蛋白IOB是人腦中一種正常的250KD膜成分.這種復(fù)合糖業(yè)已顯示參與鴿腦中的訓(xùn)練過(guò)程.業(yè)已假定，在腦成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中，細(xì)胞分裂接觸抑制作用的明顯喪失伴隨無(wú)限制增殖，10B的結(jié)構(gòu)可能已有所改變.的確，人們發(fā)現(xiàn)10B的結(jié)構(gòu)在腦成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中明顯改變碳水化合物基團(tuán)在數(shù)量上減少大約50、并存在異質(zhì)性的喪失.正常10B中，有九種不同的破水化合物成分；腫瘤10B(無(wú)糖10B)中，減少至五或六種.此外，IOB的蛋白質(zhì)部分過(guò)度產(chǎn)生或過(guò)度表達(dá)七至十倍.星形細(xì)胞素(astrocytin)是賦予從腦肺瘤10B裂解下來(lái)的10KD肽的名稱(chēng).從生長(zhǎng)在組織培養(yǎng)物中的成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞分離到星形細(xì)胞素的等價(jià)物，致惡性素，證實(shí)它與星形細(xì)胞素具有非常密切的結(jié)構(gòu)相關(guān)性.之所以稱(chēng)為致惡性素，是因?yàn)樵诮M織培養(yǎng)物中這種肽的表達(dá)、及其在每mg可提取的膜蛋白中的濃度隨每單位時(shí)間細(xì)胞分裂速率的增加而增加.認(rèn)識(shí)素M是富含谷氨酸和天冬氨酸的10kD癌多肽抗原，已經(jīng)從MCF7惡性乳腺細(xì)胞中分離得到.這種多肽與已經(jīng)從神經(jīng)膠質(zhì)性腦胂瘤中分離到的致惡性素(Glu13，Asp9，His2)有關(guān).抗認(rèn)識(shí)素M,抗致惡性素的IgM自身抗體已經(jīng)從人血清中分離得到，以鼠單克隆抗體形式產(chǎn)生，通過(guò)用抗原體外作用于人淋巴細(xì)胞而產(chǎn)生人型單克隆抗體，還已經(jīng)從惡性細(xì)胞中分離到，該惡性細(xì)胞是通過(guò)洗脫和免疫吸附于固定純化抗原，在手術(shù)和尸體解剖時(shí)得到的.美國(guó)的三家獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室和英國(guó)的三家醫(yī)院與一家實(shí)驗(yàn)室，有數(shù)百名醫(yī)師參加了一項(xiàng)歷時(shí)20年的隨機(jī)主要為盲法的研究，研究證明，血清中抗致惡性素(抗無(wú)糖10B)的濃度，以"g/ml計(jì)，(1)在30~70歲間的正常健康無(wú)腫瘤攜帶人群中，每10年適度增加，癌癥的危險(xiǎn)隨之增加(p〈.001;N-1972)(圖1),(2)在高危癌癥家族至今尚未明顯受累的成員中、增加得更早而且更顯著，(p〈.001;N-1106)(困l和2)，和(3)在人血清中的濃度在發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化為臨床乳腺癌的數(shù)周內(nèi)顯著增加，但(在不變量的意義上)不是特征性的，因?yàn)樗诔晒χ委煹娜齻€(gè)月內(nèi)恢復(fù)正常，并在成功治療后維持在正常范圍內(nèi)甚至長(zhǎng)達(dá)27年(困2和3)(p<.001;首次測(cè)定時(shí)的假陽(yáng)性和假陰性〈59i，重復(fù)測(cè)定時(shí)〈1V,N-600).頸部的活組織檢查可以提供從發(fā)育異常轉(zhuǎn)化為完全侵襲性癌癥階段的病理學(xué)證振.同時(shí)伴有抗致惡性素濃度的顯著上升.手術(shù)摘除后，抗致惡性素在三個(gè)月內(nèi)恢復(fù)正常.圖2和3顯示這些改變?cè)陔p方向上都是有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的顯著變化(P〈.001).血清抗致惡性素抗體的定量測(cè)定因此受到關(guān)注，作為非侵入性生物標(biāo)記物，可用于表示乳腺癌化學(xué)預(yù)防試驗(yàn)的成功結(jié)果.另外，純化的抗致惡性素抗體由于其在致惡性素表位已經(jīng)暴露的細(xì)胞膜的熒光與其它色原染色中已經(jīng)證明其特異性，在個(gè)體和計(jì)算機(jī)細(xì)胞計(jì)數(shù)中適合于單獨(dú)使用，或者用作前發(fā)育異?；蚧诎l(fā)育異常的替代終點(diǎn)生物標(biāo)記物的一組試驗(yàn)的一部分.與病理學(xué)過(guò)程的關(guān)系抗致惡性素(抗無(wú)糖10B)是一種抑制性轉(zhuǎn)化抗體已經(jīng)經(jīng)歷惡性轉(zhuǎn)化的人細(xì)胞可能經(jīng)過(guò)數(shù)年時(shí)間增殖才成為臨床上的癌癥，也可能從不，如果增殖的抑制作用是免疫過(guò)程，這一點(diǎn)已經(jīng)建立起理論，并且諸如在AIDS等免疫缺陷性病癥中癌癥的發(fā)生率升高也已經(jīng)提示了這一點(diǎn)，但在人類(lèi)腫瘤中沒(méi)有直接證據(jù)提示存在這樣一種免疫過(guò)程，而且反應(yīng)機(jī)理也是未知的.除了上述性質(zhì)以外，抗致惡性素還顯示出與患者存活有定量關(guān)系.體外，抗原純化的人抗致惡性素可以無(wú)論細(xì)胞類(lèi)型而與癌細(xì)胞結(jié)合，以不飽和量存在于手術(shù)或尸體解剖時(shí)摘除的癌細(xì)胞上，對(duì)惡性神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞具有細(xì)胞毒性(困4，k和1),在每孔微微克抗體的濃度下對(duì)小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)具有抑制作用(圖5).腦中復(fù)合糖的作用和抗糖蛋白10B特異性抗體在多種疾病狀態(tài)中存在的發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致了與疾病狀態(tài)有關(guān)的特異性無(wú)糖10B肽和抗這些無(wú)糖肽的抗體的進(jìn)一步發(fā)現(xiàn).上述關(guān)于糖蛋白10B的作用、無(wú)糖病理學(xué)與抗原性無(wú)糖肽和抗這些肽的抗體的發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致了某些慢性病毒感染、病毒安全屏陣與病毒性癌發(fā)生之間關(guān)系的完全意外的發(fā)現(xiàn)，以及對(duì)諸如AIDS和乙型或丙型肝炎等慢性病毒感染早期檢測(cè)和用疫苗進(jìn)行治療的新方法的發(fā)現(xiàn).這項(xiàng)工作也實(shí)現(xiàn)了用于檢測(cè)和治療各種受到無(wú)糖病理學(xué)影響的病癥的方法.本發(fā)明在一方面，可以應(yīng)用如下無(wú)糖病理學(xué)產(chǎn)物診斷神經(jīng)病學(xué)病癥1)直接測(cè)定神經(jīng)系統(tǒng)復(fù)合糖的結(jié)構(gòu)改變，這種改變產(chǎn)生新的無(wú)糖產(chǎn)物；或2)因?yàn)楸景l(fā)明的新型無(wú)糖產(chǎn)物可以充當(dāng)抗原，所以可以測(cè)定機(jī)體對(duì)該新型無(wú)糖抗原產(chǎn)物而產(chǎn)生的新抗體產(chǎn)物.這些無(wú)糖細(xì)胞抗原產(chǎn)物完全不同于正常細(xì)胞成分，因此機(jī)體把該新型無(wú)糖產(chǎn)物識(shí)別為外來(lái)物，并產(chǎn)生針對(duì)它們的抗體.這些抗體對(duì)細(xì)胞具有有害或不可取的作用，導(dǎo)致細(xì)胞死亡(例如在正常發(fā)育的腦中，這是不可取的；但在腦腫瘤中，這種結(jié)果是可取的).通過(guò)直接測(cè)量或測(cè)定針對(duì)它們的抗體而對(duì)這些無(wú)糖產(chǎn)物進(jìn)行鑒定是病癥診斷的輔助或基礎(chǔ)，也是治療的基腦中流感病毒的復(fù)合糖受體一"糖誘斜"復(fù)合糖的一種功能是充當(dāng)流感病毒與腦中靶向細(xì)胞附著的受體.當(dāng)流感病毒接近該細(xì)胞時(shí)，它特異性地附著于位于細(xì)胞膜中的復(fù)合糖受體.在腦中，一種含有神經(jīng)氛酸的復(fù)合糖充當(dāng)受體.神經(jīng)氨酸被一種特異性流感病毒蘇、即神經(jīng)氨酸苷酶從該受體裂解下來(lái).在一種這樣的受體、即腦神經(jīng)節(jié)苷脂復(fù)合糖的情況下，神經(jīng)氨酸的裂解使病毒與己糖胺接觸，后者是使DNA從病毒排出的強(qiáng)力誘導(dǎo)劑，并允許病毒DNA轉(zhuǎn)移進(jìn)入腦細(xì)胞內(nèi)(Bogoch等《病毒學(xué)》7，161-165,(1959)).在防御時(shí)，作為病毒靶向的細(xì)胞釋放含有神經(jīng)氛(唾液)酸的小分子量物質(zhì)唾液應(yīng)答素(sialoresponsins)(Bogoch等《自然>〉195，180(1962))，后者據(jù)信充當(dāng)病毒困套，從而防止病毒附著和進(jìn)入細(xì)胞.所產(chǎn)生的唾液應(yīng)答素濃度與病毒的血細(xì)胞凝集濃度有關(guān).本方法和組合物應(yīng)用了這種關(guān)于復(fù)合糖在病毒感染中的作用的知識(shí).含有神經(jīng)氨酸-己糖胺連接的復(fù)合糖或產(chǎn)物、或任何其它被病毒識(shí)別為受體的復(fù)合糖或結(jié)構(gòu)相似單元均可用作流感和其它病毒或其它利用這種或相似構(gòu)型作為受體的感染的預(yù)防性或治療性團(tuán)套.因此本發(fā)明在一方面，將這些無(wú)糖圍套經(jīng)口、經(jīng)皮、全身(例如靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi))、或作為具腔或呼吸道噴霧劑、或通過(guò)任何其它方式給藥，使病毒和團(tuán)套能夠在病毒第一次感染細(xì)胞或在離開(kāi)原始耙向細(xì)胞后感染其它細(xì)胞之前彼此接觸.因此，本發(fā)明在這方面提供了防止或抑制流感病毒感染及其后果、即神經(jīng)4^酸喪失的方法.精神分裂癥中的流感病毒感染、腦細(xì)胞損失和神經(jīng)氨酸與己糖胺無(wú)糖產(chǎn)物缺乏由發(fā)育中的腦流感病毒感染引起的細(xì)胞損傷或細(xì)胞死亡據(jù)信可導(dǎo)致神經(jīng)元病癥，例如精神分裂癥，或者在其致病中起一定作用.以前的定童神經(jīng)化學(xué)研究提示，神經(jīng)氨酸和己糖胺是復(fù)合糖細(xì)胞內(nèi)識(shí)別"符號(hào)后(sign-post)"系統(tǒng)的一部分，該系統(tǒng)形成承擔(dān)正常腦發(fā)育和行為的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，最近，精神分裂癥腦的組織學(xué)研究揭示，神經(jīng)元組織破壞業(yè)已提示是由發(fā)育損傷導(dǎo)致的.現(xiàn)在，流行病學(xué)研究提示，產(chǎn)前感染含有神經(jīng)氨酸苷酶的流感病毒有易患精神分裂癥的傾向.此外，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，腦脊液中綴合的神經(jīng)氨酸和己糖胺的濃度在精神分裂癥患者中定量降低.從最近的流行病學(xué)觀察結(jié)果可知，在母親妊娠的中間三個(gè)月感染流感病毒的個(gè)體(Callaghan等《柳葉刀》》337，1248-1250(1991))和患有高頻神經(jīng)節(jié)苷脂與其它糖脂病癥的人群Uahav等《美國(guó)精神病學(xué)雜志》143(10),1249-1254(1986))中，精神分裂癥出現(xiàn)的頻率增加.組織學(xué)研究證明在精神分裂癥腦中有神經(jīng)元細(xì)胞損失和神經(jīng)元組織破壞(F.E.Bloom,《普通精神病學(xué)文獻(xiàn)》50,224-227(1993)),神經(jīng)氨酸被流感病毒酶、神經(jīng)氨酸苷酶(涎酶)從其綴合物中除去，可能對(duì)未成熟腦中的神經(jīng)元細(xì)胞識(shí)別分子造成損傷.上述最近的流行病學(xué)和組織學(xué)發(fā)現(xiàn)與定量神經(jīng)化學(xué)數(shù)據(jù)有關(guān)，這些數(shù)據(jù)顯示，精神分裂癥患者的腦脊液(CSF)中神經(jīng)氨酸和己糖胺綴合物的實(shí)際濃度降低了(S.Bogoch《美國(guó)精神病學(xué)雜志》114,172，(1957)).而且，對(duì)腦中復(fù)合糖(糖脂、糖蛋白)識(shí)別物質(zhì)所進(jìn)行的有關(guān)工作(S.Bogoch《美國(guó)化學(xué)協(xié)會(huì)雜志》79，3286,(1957))得出了神經(jīng)元連接性和神經(jīng)系統(tǒng)成熟的"符號(hào)后"假說(shuō)(S.Bogoch《記憶的生物化學(xué)；腦類(lèi)粘蛋白功能探索》牛津大學(xué)出版社1968).以前已經(jīng)證明，存在于神經(jīng)系統(tǒng)中的復(fù)合糖是識(shí)別物質(zhì)(S.Bogoch《美國(guó)化學(xué)協(xié)會(huì)雜志》79，3286,(1957);S.Bogoch《生物化學(xué)雜志》68，319-324，(1958)).腦神經(jīng)節(jié)苷脂的結(jié)構(gòu)首先被測(cè)定后，神經(jīng)節(jié)苷脂顯示體外既充當(dāng)流感病毒的受體，也充當(dāng)刺激蛤心臟和平滑肌的效應(yīng)器.腦內(nèi)另外給予的神經(jīng)節(jié)苷脂體內(nèi)充當(dāng)"圏套"，抑制腦神經(jīng)元被流感病毒感染.人腦糖蛋白已經(jīng)可以大量分離、區(qū)分和對(duì)其碳水化合物成分進(jìn)行部分特征鑒定.復(fù)合糖已經(jīng)顯示存在于突觸膜中，參與哺乳動(dòng)物神經(jīng)發(fā)育和鴿子的訓(xùn)練與學(xué)習(xí)任務(wù).神經(jīng)系統(tǒng)中復(fù)合糖的"符號(hào)后"功能在發(fā)育成熟過(guò)程中和在體驗(yàn)中都是建立神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的先決條件.業(yè)已顯示精神分裂癥患者CSF中綴合的神經(jīng)氨酸和己糖胺比其它精神病患者和正常人顯著減少(S.Bogoch《自然〉〉184，1628-1629(1959)).這種減少與疾病的嚴(yán)重性有定量比例關(guān)系，并且隨著臨床狀態(tài)的改善而朝正常值增加(Bogoch等《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》264，251-258(1961)),本發(fā)明提供了精神分裂癥和其它無(wú)糖蛋白濃度升高的醫(yī)學(xué)疾患的有益治療.在治療精神分裂癥的本方法中，復(fù)合糖的濃度升高，患者腦中無(wú)糖蛋白的量減少.在治療精神分裂癥的本方法中，將神經(jīng)氨酸和己糖胺前體D-葡糖胺-HCl給予精神分裂癥患者，以改善這些患者的精神病狀態(tài).確切地說(shuō)，給予約50-500mgD-葡糖胺-HCl、優(yōu)選約100250mgD-葡糖胺-HCl/天、最優(yōu)選約200mgD-葡糖胺-HCl/天，通過(guò)升高腦中糖蛋白濃度和降低腦無(wú)糖濃度，而改善精神分裂癥患者的總體臨床健康水平.阿爾茨海默病中的無(wú)糖產(chǎn)物阿爾茨海默病是神經(jīng)細(xì)胞損失的毀滅性消耗病，表現(xiàn)為認(rèn)知障礙，主要為早期記憶喪失.某些淀粉樣蛋白前體蛋白(APP)衍生物是這種疾病特征性異常腦沉積的元兇.盡管APP已知是一種糖蛋白，不過(guò)對(duì)APP中的碳水化合物還沒(méi)有引起關(guān)注.由于本發(fā)明的原因，無(wú)糖產(chǎn)物可以這樣檢測(cè)(1)直接對(duì)腦脊液中碳水化合物組分減少了的APP衍生物加以分離和特征鑒定，和/或(2)間接對(duì)患者血清中的抗無(wú)糖APP抗體加以檢測(cè)和量化.腦中早期前淀粉樣蛋白沉積物已在出現(xiàn)神經(jīng)原纖維纏結(jié)、即神經(jīng)細(xì)胞破壞的產(chǎn)物前顯現(xiàn)，并顯示參與阿爾茨海默斑塊的"成熟".這些前淀粉樣蛋白沉積物象成熟斑塊一樣含有Ab肽，它是39-42個(gè)氨基酸殘基長(zhǎng)的APP降解產(chǎn)物.由前淀粉樣蛋白向成熟的淀粉樣蛋白斑塊的轉(zhuǎn)變是可能的，因?yàn)樵谔剖暇C合征患者腦中出現(xiàn)變性軸突之前，前淀粉樣蛋白沉積物可以存在數(shù)年，前淀粉樣蛋白沉積可能更易治療，即在發(fā)生神經(jīng)細(xì)胞損傷之前，可將之溶解排泄.給予二苯乙內(nèi)酰脲(DPH)能夠提供對(duì)抗斑塊進(jìn)一步蓄積的保護(hù)作用，本發(fā)明證明它升高腦中與蛋白質(zhì)結(jié)合的己糖濃度.DPH可經(jīng)肌內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)對(duì)患者給藥，給藥刑量在約每天0.5~2mg/kg體重的范閨內(nèi)，給藥持續(xù)時(shí)間視需要而定.結(jié)果是患者腦內(nèi)與蛋白結(jié)合的己糖量增加.本發(fā)明的另一方面，在腦腫瘤和其它疾病狀態(tài)下，腦復(fù)合糖的碳水化合物成分濃度降低，通過(guò)給予某些藥物例如二苯乙內(nèi)跣脲(DPH)，可以朝正常濃度升高.DPH的給約刑量范圍約為0.5-2mg/kg體重，優(yōu)選約為lmg/kg體重，即使在沒(méi)有肺瘤的情況下，也升高與腦蛋白結(jié)合的己糖濃度.因此在本發(fā)明的這種實(shí)施方案中，提供了腦或其它惡性腫瘤的治療方法，該方法包括給予治療有效刑量的DPH，該劑量可引起患者復(fù)合糖水平升高.約lmg/kg/天給藥數(shù)天足以升高腦復(fù)合糖濃度至正?；蚪咏５乃?治療可以持續(xù)必要的時(shí)間，優(yōu)選直到惡性腫瘤體積縮小或完全消失時(shí)為止.其它導(dǎo)致新無(wú)糖抗原暴露并導(dǎo)致無(wú)糖抗體產(chǎn)生的疾患實(shí)例是帕金森氏病和多發(fā)硬化，本發(fā)明的方法應(yīng)當(dāng)適用于這些和其它病癥，既適用于腦也適用于其它器官，既適用于診斷也適用于治療.無(wú)糖抗原肽和抗無(wú)糖肽抗體無(wú)糖腦糖蛋白10B及其特異性抗體(單克隆或多克隆)是在腦腫瘤和其它惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)的兩種無(wú)糖產(chǎn)物.無(wú)糖IOB是從正常糖蛋白10B中除去碳水化合物后得到的.無(wú)糖10B和若干無(wú)糖10B片段的氨基酸結(jié)構(gòu)已經(jīng)通過(guò)若干獨(dú)立的方法加以測(cè)定.無(wú)糖10B肽已經(jīng)被若干方式消化為有用的12聚體和16聚體肽片段，它們已經(jīng)顯示具有抗原性.抗無(wú)糖IOB抗體是IgM型的，可導(dǎo)致細(xì)胞死亡.純化無(wú)糖10B的三種肽成分的氨基酸序列通過(guò)碘代苯甲酸與胰蛋白酶水解、埃德曼降解、自動(dòng)水解與微波水解和質(zhì)譜法加以測(cè)定.盡管清楚地了解這些肽是無(wú)糖10B的成分，但最初并不知道這些肽是否是實(shí)際意義上的免疫表位(免疫學(xué)上的活性抗原片段).現(xiàn)已測(cè)定，兩個(gè)較長(zhǎng)的序列代表免疫表位，負(fù)責(zé)被機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別并由此在體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗體、即抗無(wú)糖10B(抗致惡性素抗體).為了確認(rèn)這個(gè)事實(shí)，無(wú)糖10B序列的知識(shí)已被用于體外合成相同序列的合成肽.將這些合成肽注射給動(dòng)物，這些動(dòng)物產(chǎn)生特異性抗致惡性素抗體、即抗無(wú)糖IOB，這一點(diǎn)已應(yīng)用固定完整無(wú)糖IOB通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)免疫吸附技術(shù)進(jìn)行過(guò)驗(yàn)證.因此，無(wú)糖IOB是抗原，這些肽片段是真正的表位，用于抗無(wú)糖IOB(抗致惡性素抗體)的產(chǎn)生和結(jié)合.這些合成肽在注射給動(dòng)物時(shí)，可誘導(dǎo)抗致惡性素抗體濃度升高，因此嚴(yán)格地確認(rèn)，天然生物無(wú)糖物質(zhì)亊實(shí)上參與人類(lèi)腫瘤中發(fā)現(xiàn)的免疫應(yīng)答.另外，這些合成肽作為合成疫苗，可用于提高機(jī)體自身的抗致惡性素抗體濃度.以前已經(jīng)確認(rèn)，血清中抗致惡性素抗體濃度與癌癥患者存活長(zhǎng)短有定童關(guān)系，已經(jīng)生產(chǎn)出合成抗癌疫苗.在很多不同細(xì)胞類(lèi)型的常見(jiàn)惡性腫瘤中都觀察到抗無(wú)糖蛋白10B抗體(抗無(wú)糖10B或抗致惡性素)的絕對(duì)濃度升高，例如肺、乳腺、結(jié)腸等的癌癥.抗體的增加說(shuō)明無(wú)糖病理學(xué)是普遍存在的病理學(xué)現(xiàn)象，并不限于腦.抗無(wú)糖10B濃度升高的檢測(cè)是一種有用的惡性腫瘤診斷方法.無(wú)糖產(chǎn)物和方法用于病毒性疾病的早期診斷和治療，該病毒被保護(hù)在細(xì)胞內(nèi)的安全屏障中若干病毒，例如乙型肝炎和丙型肝炎病毒，感染后可引起肝細(xì)胞癌，再如HIV,可導(dǎo)致AIDS和若干惡性腫瘤的頻率增加，它們都部分地耐受通過(guò)給予抗病毒制劑而進(jìn)行的診斷和治療，這是因?yàn)椴《揪窒拊诩?xì)胞內(nèi)，處于慢性潛伏狀態(tài)，已知稱(chēng)為細(xì)胞內(nèi)的安全屏陣.因此，盡管已有大量有效的抗病毒制劑，例如用于HIV的抗蛋白酵，能夠滅活或破壞存在于細(xì)胞外液中的HIV病毒，但它們不能根除體內(nèi)所有病毒，因?yàn)橛行┎《敬嬖谟诩?xì)胞安全屏陣內(nèi)，例如在淋巴細(xì)胞內(nèi).因此，盡管現(xiàn)在通過(guò)抗病毒制劑治療可達(dá)到血液的無(wú)病毒狀態(tài)，但當(dāng)這些治療停止后，安全屏障內(nèi)的病毒經(jīng)常迅速地釋放到細(xì)胞外，進(jìn)入血流，并感染新的細(xì)胞.因此，這些潛伏的病毒可以在任意時(shí)間復(fù)制并釋放進(jìn)入細(xì)胞外液，感染其它細(xì)胞，最終戰(zhàn)勝宿主.病毒利用安全屏障的另一個(gè)例子是，乙型或丙型肝炎病毒以在肝、淋巴細(xì)胞或其它細(xì)胞中持續(xù)潛伏或慢性感染達(dá)很多年，通過(guò)既定的病毒致癌作用，導(dǎo)致肝細(xì)胞癌.由乙型或丙型肝炎致癌作用所導(dǎo)致的癌癥通常經(jīng)過(guò)數(shù)年才達(dá)到臨床可檢測(cè)的狀態(tài)，在本發(fā)明之前沒(méi)有辦法更早地檢測(cè)惡性細(xì)胞，從而更早地治療癌癥.現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，這些病毒安全屏障可以比以前的檢測(cè)方法提前數(shù)年被檢測(cè)到.被感染細(xì)胞向惡性(永生)狀態(tài)的轉(zhuǎn)化是頻繁的，也許需要方法以建立和維持病毒安全屏障，因此，甚至在感染后的前幾年，這些安全屏障也能夠通過(guò)給予無(wú)糖IOB或無(wú)糖IOB合成抗原表位(疫苗)或抗無(wú)糖10B產(chǎn)物(抗體)加以破壞(治療)肝內(nèi)癌發(fā)生是人乙型或丙型肝炎病毒感染的既定后果(據(jù)估計(jì)，該病毒在美國(guó)的感染人群超過(guò)li，在亞洲為2X),但是肝細(xì)胞癌(HCC)存在與否的檢測(cè)僅在該惡性腫瘤生長(zhǎng)的晚期才是可能的(通常在最初的病毒感染之后10至25年).這種檢測(cè)借助于標(biāo)記物例如甲胎蛋白、去-Y-凝血酶原和血小板衍生的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子水平，或者借助掃描技術(shù)分辨可以看見(jiàn)的癌(0.5-lcm,代表數(shù)十億細(xì)胞)，但所有的方法也僅在疾病晚期才是完全有效的，此時(shí)其它惡性腫瘤跡象也已經(jīng)在臨床上表現(xiàn)出來(lái).向惡性腫瘤的轉(zhuǎn)化包括細(xì)胞的永生化，使細(xì)胞永遠(yuǎn)存活，也不分裂.這種情況為病毒創(chuàng)造穩(wěn)定的細(xì)胞屏陣.在惡性腫瘤進(jìn)展的第二階段，細(xì)胞分裂增加(增殖)，這提供了在本發(fā)明之前的唯一跡象，說(shuō)明第一階段的轉(zhuǎn)化在事實(shí)上已經(jīng)發(fā)生了.不幸的是到那時(shí)候(10~25年后)，增殖階段產(chǎn)生臨床可檢測(cè)到的肺瘤，例如臨床上明顯的肝細(xì)胞癌，成功治療該惡性肺瘤是極其困難的.本發(fā)明中，存在于肝惡性腫瘤中惡性轉(zhuǎn)化早期階段的特異性無(wú)糖應(yīng)答提供了早期檢測(cè)的可能.而且，由于所檢測(cè)的無(wú)糖改變的性質(zhì)，本發(fā)明方法提供了新穎的潛伏性病毒感染的特異性治療.通過(guò)患者血液中特異性無(wú)糖產(chǎn)物增加的檢測(cè)，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞向惡性狀態(tài)轉(zhuǎn)化比以前所認(rèn)為的要早發(fā)生數(shù)十年一在感染后的前幾年內(nèi).病毒性無(wú)糖病癥的診斷和治療本發(fā)明提供了肝細(xì)胞癌和其它癌癥的早期檢測(cè)和治療方案.在病毒性無(wú)糖病癥的診斷和治療中，可以采用單獨(dú)的下列通用程序，或者與其它已知的治療方法聯(lián)合應(yīng)用，或者用于病毒檢測(cè)，該檢測(cè)可用于早期治療(在臨床癌癥清晰可見(jiàn)之前)已經(jīng)轉(zhuǎn)化為惡性狀態(tài)的細(xì)胞以及破壞病毒感染動(dòng)物的細(xì)胞內(nèi)安全屏陣.a)通過(guò)熟知的標(biāo)準(zhǔn)程序診斷諸如乙型或丙型肝炎或HIV等病毒性病癥或其它慢性病毒感染，例如通過(guò)現(xiàn)在常用的既定方法測(cè)童對(duì)抗病毒蛋白質(zhì)的特異性血清抗體；b)可以通過(guò)下列實(shí)施例所述程序測(cè)定血清中升高的抗致惡性素抗體水平證實(shí)轉(zhuǎn)化(惡性、永生)細(xì)胞的存在；c)可以進(jìn)行患者血液中病毒基線(預(yù)處理)濃度的測(cè)定(例如血清中特異性病毒RNA的定量測(cè)定，例如HIV-1RNA測(cè)定法)；d)可以進(jìn)行血液和其它體液中無(wú)糖10B或其片段肽的存在和濃度的測(cè)定，其片段肽例如無(wú)糖10B"碘肽"和"胰蛋白醉肽"(見(jiàn)實(shí)施例)；e)注射一種或多種根據(jù)本發(fā)明的合成肽疫苗，優(yōu)選為皮下注射，注射量例如約為50~200微克，優(yōu)選約為100微克，重復(fù)注射，例如但不限于每14天，或由主治醫(yī)師確定的其它適合時(shí)間，直到通過(guò)血清中的定量測(cè)定觀察到抗致惡性素抗體達(dá)到最大增重時(shí)為止；f)通過(guò)本領(lǐng)域既定的方法施行抗病毒化學(xué)療法(例如蛋白酶抑制劑，阿昔洛韋)，以破壞或中和已經(jīng)從細(xì)胞內(nèi)安全屏障釋放到細(xì)胞外的病毒；g)血液中的病毒濃度可以再次按照程序c)(預(yù)處理)加以測(cè)定(后處理)，h)無(wú)糖IOB或其片段肽的存在和濃度按照程序d)加以測(cè)定.i)程序a)至h)可以重復(fù)進(jìn)行直到下列指標(biāo)提示所有轉(zhuǎn)化的惡性細(xì)胞都被破壞時(shí)為止，這在最后一次疫苗注射后大約90-120天按照程序b)，血清中的抗致惡性素抗體恢復(fù)至正常水平(低于135|ig/ml);根據(jù)程序c)的測(cè)定結(jié)果，病毒沒(méi)有進(jìn)一步釋放進(jìn)入血液；如程序d)所示，無(wú)糖IOB或其片段肽不存在，這些都說(shuō)明，轉(zhuǎn)化的惡性細(xì)胞(含有無(wú)糖抗原產(chǎn)物)不再存在于體內(nèi).j)可以驗(yàn)證在上述治療結(jié)束時(shí)不存在轉(zhuǎn)化為惡性腫瘤的細(xì)胞，并且惡性細(xì)胞的細(xì)胞增殖程度可以在上述治療過(guò)程中這樣加以目測(cè)、定量和監(jiān)測(cè)將與99锝或其它適合的放射體綴合的抗致惡性素抗體通過(guò)靜脈內(nèi)方式給藥，用(計(jì)數(shù)器進(jìn)行記錄，例如在乙型或丙型肝炎的情況下記錄肝中惡性細(xì)胞群的數(shù)量和體積，其體積小于用非特異性掃描技術(shù)所檢測(cè)到的結(jié)果，再如在HIV感染和AIDS的情況下記錄淋巴結(jié)、脾和腦.k)任何頑固的病毒安全屏陣都可以通過(guò)抗致惡性素抗體或任意其它優(yōu)先破壞惡性細(xì)胞的胂瘤化療藥物加以治療.類(lèi)似地，下面是在臨床癌癥清晰可見(jiàn)之前或在惡性腫瘤病程中用于已經(jīng)轉(zhuǎn)化為惡性狀態(tài)的細(xì)胞的早期治療、破壞或滅活的程序，其中該轉(zhuǎn)化劑不是病毒.可以采用下列步驟或部分步驟的任意組合.這些步猓和方法可以與其它已知的檢測(cè)和治療癌癥的方法聯(lián)合使用.a)通過(guò)測(cè)定血清中升高的抗致惡性素抗體水平測(cè)定轉(zhuǎn)化(惡性、永生)細(xì)胞的存在；b)測(cè)定血液和/或其它體液中無(wú)糖10B或其片段肽的存在和濃度；C)注射一種或多種根據(jù)本發(fā)明的合成肽疫苗，優(yōu)選為皮下注射，注射量例如約為50~200微克，優(yōu)選約為100微克，重復(fù)注射，例如但不限于每14天，直到通過(guò)血清中的定量測(cè)定觀察到抗致惡性素抗體達(dá)到最大增量時(shí)為止；d)無(wú)糖10B或其片段肽的存在和濃度按照程序b)和/或通過(guò)測(cè)定血清中升高的抗致惡性素抗體水平加以測(cè)定；e)程序a)至d)可以重復(fù)進(jìn)行直到下列指標(biāo)提示所有轉(zhuǎn)化的惡性細(xì)胞都被破壞時(shí)為止，這在最后一次疫苗注射后大約90~120天按照程序b)，血清中的抗致惡性素抗體恢復(fù)至正常水平(低于135pg/ml);按照程序d)，無(wú)糖10B或其片段肽不存在，這些都說(shuō)明，轉(zhuǎn)化的惡性細(xì)胞(含有無(wú)糖抗原產(chǎn)物)不再存在于體內(nèi)；f)可以驗(yàn)證在上述治療結(jié)束時(shí)不存在轉(zhuǎn)化為惡性腫瘤的細(xì)胞，并且惡性細(xì)胞的細(xì)胞增殖程度可以在上述治療過(guò)程中這樣加以目測(cè)、定量和監(jiān)測(cè)將與99锝或其它適合的放射體綴合的抗致惡性素抗體通過(guò)靜脈內(nèi)方式給藥，用(照相機(jī)進(jìn)行記錄；g)任何頑固的惡性細(xì)胞通過(guò)抗致惡性素抗體或任意其它優(yōu)先破壞惡性細(xì)胞的腫瘤化療藥物加以治療.實(shí)施例實(shí)施例1我們?cè)谶@里所闡述的雙盲研究證明，與非精神分裂癥的精神病患者相比，精神分裂癥的CSF中綴合的神經(jīng)氨酸和己糖胺減少，19名患者中，有兩名患者因?yàn)榕R床診斷不明確而被排除在外.其余17名患者，如果臨床上符合，則被稱(chēng)為"精神分裂癥"(N-ll)，若診斷不是精神分裂癥，則稱(chēng)為"非精神分裂癥"的其它精神病(N-6).這些診斷是在仔細(xì)的臨床準(zhǔn)備下提出的，包括由已經(jīng)完成最少三年的精神病住院醫(yī)師培訓(xùn)的精神病專(zhuān)家收集患者的全程病史，以及用精神病特征量表(Campbell等《美國(guó)精神病學(xué)雜志》123,952-962(1967))評(píng)價(jià)精神狀態(tài)，所有診斷經(jīng)過(guò)高級(jí)精神病學(xué)專(zhuān)家的確認(rèn).提供17名患者的腰穿CSF標(biāo)本，各為5-18ml，編號(hào)，沒(méi)有臨床信息.將每份樣本凍干，在0-5TC下徹底地對(duì)蒸餾水透析(玻璃紙孔徑約為MW12000道爾頓)，以除去游離的神經(jīng)氨酸和游離的己糖，不可透析的部分一式兩份，通過(guò)比阿耳氏苔黑酚和硫代巴比妥酸(TBA)法定量分析綴合的神經(jīng)氨酸，綴合的己糖胺和綴合的己糖已如前迷(s.Bogoch《生物化學(xué)雜志》235，16-20(1960)).所有樣本的神經(jīng)化學(xué)試驗(yàn)都完成后，解密患者的標(biāo)識(shí)碼.盡管樣本量小，雙尾t檢驗(yàn)顯示精神分裂癥組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著低的綴合的神經(jīng)氨酸濃度(p〈.025)和綴合的己糖胺濃度(p〈.006)，而綴合的己糖濃度不低.81.8X精神分裂癥患者中綴合的神經(jīng)氨酸值低于7.5Mg/mlCSF，而83.3X非精神分裂癥患者中綴合的神經(jīng)氛酸值高于7.5Mg/mlCSF.用三名患者重復(fù)試驗(yàn)，一名非精神分裂癥和兩名精神分裂癥患者，他們分隔數(shù)周抽取CSF，神經(jīng)化學(xué)分析結(jié)果與隨機(jī)雙盲樣本的相似.不過(guò)，用TBA法測(cè)定綴合的神經(jīng)氨酸是不可靠的(Bogoch等《自然》195,180(1962)).應(yīng)當(dāng)強(qiáng)調(diào)的是，在本項(xiàng)和所有以前進(jìn)行的體外和體內(nèi)研究中，只有綴合的、而不是游離的神經(jīng)氨酸對(duì)精神分裂癥具有生物學(xué)活性或起皺性(creased)因此，由以前的神經(jīng)化學(xué)數(shù)據(jù)得出正常的"符號(hào)后"假說(shuō)，但是復(fù)合糖的病理學(xué)性質(zhì)直到本發(fā)明之前還不被人所理解.作為復(fù)合糖的神經(jīng)氨酸和己糖胺的濃度降低的意義以前還不被人所理解.由病毒或其它急性或慢性原因引起的這些復(fù)合糖在分娩前或分娩后的減少是精神分裂癥發(fā)病機(jī)理中的關(guān)鍵，這一點(diǎn)僅在現(xiàn)在才被認(rèn)識(shí)到.綜合考慮在妊娠中間三個(gè)期間，流感病毒感染與精神分裂癥頻率之間關(guān)系的流行病學(xué)證據(jù)，腦細(xì)胞損失和結(jié)構(gòu)破壞的組織學(xué)證據(jù)，以及復(fù)合糖中神經(jīng)氨酸和己糖胺濃度定量降低的直接證據(jù)，得出了本項(xiàng)無(wú)糖病理學(xué)發(fā)現(xiàn)。實(shí)施例2給精神分裂癥患者應(yīng)用神經(jīng)氨酸和己糖胺前體，產(chǎn)生改善作用.將D-葡糖胺HC1每天200mg經(jīng)口給予住院的慢性精神分裂癥患者，連續(xù)30天.應(yīng)用精神病學(xué)特征等級(jí)量表以及全面的臨床觀察，檢測(cè)改善作用的有無(wú).一半以上的患者有良好反應(yīng)，不存在亊與愿違的反應(yīng).實(shí)施例3鴒子在訓(xùn)練過(guò)程中，腦復(fù)合糖己糖和"C-葡萄糖的摻入增加.比較靜息和在Skinner箱內(nèi)訓(xùn)練的鴿子的腦的(a)復(fù)合糖己糖的絕對(duì)量和(b)摻入腦復(fù)合糖的"C-葡萄糖.<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>將小鼠分成兩組，一半皮下接種腦室管膜瘤，另一半不接種.這兩組各自再分成兩組.一半每天接受lmg/kg體重的皮下注射DPH,另一半不接受DPH,僅注射鹽水.在室管膜瘤充分生長(zhǎng)到將要破裂皮膚表面時(shí)處死動(dòng)物.在DPH給藥的情況下腫瘤的生長(zhǎng)顯著減少.收集每個(gè)亞組的腦，同實(shí)施例3提取與蛋白質(zhì)結(jié)合的己糖，得到下列結(jié)果.肺瘤腦中與蛋白質(zhì)的己糖，以蛋白質(zhì)的x表示沒(méi)有給予DPH給予DPH不存在4.6,5.57.9,8.0存在2.6,2.36.8,7.0無(wú)論腫瘤是否存在，給予DPH都引起腦中與蛋白質(zhì)結(jié)合的己糖濃度升高.實(shí)施例5無(wú)糖產(chǎn)物的體外合成12聚體與16聚體的合成肽我們體外合成了測(cè)定的兩個(gè)無(wú)糖IOB序列(實(shí)施例8)，即12聚體的"胰蛋白酵肽"GLSDGSNTESDI和16聚體的"碘肽"YKAGVAFLHKKNDIDE.在Genosys肽合成設(shè)備中，采用Abacus系統(tǒng)高偶聯(lián)效率的標(biāo)準(zhǔn)Fmoc化學(xué)方法，結(jié)合氨基酸的TBTU活化，與非溶脹性恒定體積的PEG聚苯乙烯樹(shù)脂偶聯(lián)，該樹(shù)脂有助于維持高濃度的活化氨基酸，以驅(qū)使每個(gè)偶聯(lián)反應(yīng)進(jìn)行完全.產(chǎn)品的純化采用C8柱，用100iA至20XA:B洗脫.A是0.1X三象乙酸(TFA)的蒸憤水溶液.B是0.1TFA的乙猜溶液.收集所有的峰.洗脫液在220nm下讀數(shù)，純化標(biāo)準(zhǔn)如下峰組分用質(zhì)謙法測(cè)量(Perspective生產(chǎn)的Maldi-TOF),進(jìn)行HPLC(PerspectiveBiosystems生產(chǎn)的BioCad)以確保純度>95、每種肽用質(zhì)詳法和分析性HPLC進(jìn)行分析，以確認(rèn)肽的結(jié)構(gòu)，然后再次進(jìn)行制備性HPLC，分離所需的峰，終產(chǎn)物再次用反相HPLC和質(zhì)謙法分析，得到肽的最終純度.在12聚體肽和16聚體肽的情況下，合成肽的序列分別確認(rèn)為正是用無(wú)糖10B的質(zhì)譜法所測(cè)定的序列，即"胰蛋白蘇肽"和"碘肽".實(shí)施例6合成的無(wú)糖12聚體與16聚體肽是體內(nèi)和體外產(chǎn)生抗無(wú)糖產(chǎn)物的疫苗在無(wú)糖10B中所測(cè)定的肽序列是用于抗致惡性素抗體產(chǎn)生的真正表位的證據(jù)a)12聚體合成肽第l天，測(cè)定兩只3~9月齡，以前沒(méi)有經(jīng)過(guò)注射的新西蘭白兔#508和#507血清抗致惡性素抗體的基線濃度后，給每只兔子皮下注射100微克12聚體合成肽GLSDGSNTESDI，該肽是體外合成的，并與KLH(鑰孔狀透明血清蛋白)佐劑和弗羅因德氏佐劑綴合.在第14天和笫42天，進(jìn)行相同肽的加強(qiáng)注射.從動(dòng)物耳動(dòng)脈放血，通過(guò)前述標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定抗致惡性素抗體濃度，如困6所示；也就是說(shuō)，抗體被免疫吸附到完整的、固定的無(wú)糖10B(致惡性素)上，后者是從生長(zhǎng)在組織培養(yǎng)基中的惡性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞中分離得到的.在笫21天、第26天和第55天對(duì)兔血清進(jìn)行抗體測(cè)定.兩只(2/2)兔子都產(chǎn)生了超過(guò)未注射基線血清水平的抗致惡性素抗體.圖7A顯示f508兔每次放血時(shí)的抗致惡性素抗體濃度，既有快結(jié)合抗體(F-TAG，空心柱)，也有慢結(jié)合抗體(S-TAG,實(shí)心柱).我們看到S-TAG濃度增加到最大量時(shí)大約是基線水平的七倍.圖7B顯示W(wǎng)07兔每次放血時(shí)的抗致惡性素抗體濃度，既有快結(jié)合抗體(F-TAG，空心柱)，也有慢結(jié)合抗體(S-TAG，實(shí)心柱).我們看到S-TAG濃度與基線水平相比，增加大約三倍，F(xiàn)-TAG濃度與基線水平相比，增加大約五倍.困7B還顯示了莽507兔笫26天放血和#508兔較少程度第21天放血表明的事實(shí)，即F-TAG的增加在S-TAG濃度的最大增加之前.這種先于S-TAG增加的F-TAG增加與體外觀察結(jié)果相同，該結(jié)果觀察了完整的無(wú)糖10B誘導(dǎo)組織培養(yǎng)物中所分離的淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗致惡性素抗休(《癌癥的檢測(cè)和預(yù)防》12:313-320,1988).給兔子注射合成肽表位重復(fù)出現(xiàn)這種現(xiàn)象進(jìn)一步確認(rèn)這樣的事實(shí)，合成肽確實(shí)復(fù)制抗致惡性素抗體的產(chǎn)生并釋放進(jìn)入血清.除了產(chǎn)生新穎的合成產(chǎn)物以外，這些合成肽在注射給動(dòng)物時(shí)誘導(dǎo)高濃度抗致惡性素抗體產(chǎn)生的事實(shí)確立了天然生物無(wú)糖物質(zhì)事實(shí)上參與在人癌癥中所發(fā)現(xiàn)的免疫應(yīng)答(見(jiàn)困6).正如以前左1988年的一項(xiàng)研究(《癌癥的檢測(cè)和預(yù)防》〉12:313-320，1988)中所測(cè)定的，對(duì)抗無(wú)糖10B的抗致惡性素抗體是IgM型的，沒(méi)有或幾乎沒(méi)有IgG型.在現(xiàn)在的研究中，將全合成的抗原、即12聚體的合成肽注射給兔子，單獨(dú)測(cè)定所產(chǎn)生的抗體，以測(cè)定是否IgG是更普遍的.于是也用醃聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)測(cè)定抗肽抗體效價(jià)，其中游離的合成16聚體肽結(jié)合在固相中(lMg/ml).結(jié)果以血清稀釋度的倒數(shù)表示，OD405為0.2.利用生物素標(biāo)記的抗兔IgG、HRP-SA綴合物和ABTS進(jìn)行檢測(cè).兩只兔子#507和#508注射后的IgG水平與注射前沒(méi)有區(qū)別一都低于50.不過(guò)，參見(jiàn)下列16聚體合成肽的結(jié)果.b)16聚體合成肽類(lèi)似地在第l天，測(cè)定兩只3~9月齡，以前沒(méi)有經(jīng)過(guò)注射的新西蘭白兔#505和#506血清抗致惡性素抗體的基線濃度后，給每只兔子皮下注射100微克16聚體合成肽YKAGVAFLHKKNDIDE，該肽如下所述體外合成，并與KLH(鑰孔狀透明血清蛋白)佐劑和弗羅因德氏佐刑綴合.在笫14天和笫42天，進(jìn)行相同肽的加強(qiáng)注射.從動(dòng)物耳動(dòng)脈放血，通過(guò)如圖6所示的標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定抗致惡性素抗體濃度.也就是說(shuō)，抗體被免疫吸附到完整的、固定的無(wú)糖10B(致惡性素)上，后者是從生長(zhǎng)在組織培養(yǎng)基中的惡性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞中分離得到.在第21天、第26天和第55天對(duì)兔血清進(jìn)行抗體測(cè)定.兩只(2/2)兔子都產(chǎn)生了另外的抗致惡性素抗體.關(guān)于16聚體的合成肽，圖8A顯示脊505兔每次放血時(shí)的抗致惡性素抗體濃度，既有快結(jié)合抗體(F-TAG,空心柱)，也有慢結(jié)合抗體(S-TAG，實(shí)心柱).我們看到S-TAG濃度增加了，但沒(méi)有圖7A或7B中12聚體合成肽增加的那么多.圖8B顯示f506兔每次放血時(shí)的抗致惡性素抗體濃度，既有快結(jié)合抗體(F-TAG，空心柱)，也有慢結(jié)合抗體(S-TAG,實(shí)心柱).我們看到S-TAG濃度增加了大約2.5倍.類(lèi)似地，用12聚體合成肽或16聚體合成肽誘導(dǎo)在組織培養(yǎng)基中體外分離的淋巴細(xì)胞，用量為I-IOmg/ml，以復(fù)制抗致惡性素抗體.在這種產(chǎn)生作用中，刺激性肽是合成的12聚體或16聚體肽，而不是完整的無(wú)糖IOB，我們所用的方法見(jiàn)《癌癥的檢測(cè)和預(yù)防》12:313-320,1988.正如以前在1988年的一項(xiàng)研究中所測(cè)定的，若"生物學(xué)"完整的無(wú)糖10B是抗原，則體內(nèi)和體外產(chǎn)生的抗致惡性素抗體都是IgM型的，沒(méi)有或幾乎沒(méi)有1￡^_.在現(xiàn)在的研究中，將全合成的抗原、即16聚體的合成肽注射給兔子，單獨(dú)測(cè)定所產(chǎn)生的抗體，以測(cè)定是否存在IgG.于是也用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)測(cè)定抗肽抗體效價(jià)，其中游離的合成16聚體肽結(jié)合在固相中(lMg/邁l).結(jié)果以血清稀釋度的倒數(shù)表示，0D405為0.2.利用生物素標(biāo)記的抗兔IgG、HRP-SA綴合物和ABTS進(jìn)行檢測(cè).與用12聚體合成肽所得結(jié)果相反，關(guān)于16聚體合成肽，兩只兔子#507和#508注射后的IgG水平上升到非常高的水平.#507和#508兔的注射前水平都低于50;#507兔笫26天水平為18031，#508兔為71326;#507和#508兔第55天水平都超過(guò)204800.因此，通過(guò)16聚體合成肽的注射，不僅產(chǎn)生IgM型產(chǎn)物，而且已經(jīng)產(chǎn)生了IgG型抗致惡性素抗體.由于以前注射"生物學(xué)"完整的無(wú)糖10B給動(dòng)物和淋巴細(xì)胞的組織培養(yǎng)基都總是產(chǎn)生IgM型抗致惡性素抗體，而且從人血清中分離的人抗體也是IgM型的，因此假定這種抗體不轉(zhuǎn)化為IgG型，與大多數(shù)、但不是全部抗體的情況相同.因此通過(guò)16聚體合成肽的注射而產(chǎn)生的IgG型抗致惡性素抗體是一種新型抗體.IgG型優(yōu)于IgM型，因?yàn)镮gG型分子量更小(150000對(duì)900000道爾頓)，因此將比IgM型更容易進(jìn)入細(xì)胞外與細(xì)胞內(nèi)間隙.這與抗體的掃描和治療用途都有關(guān)，而且抗體可以單獨(dú)使用或者作為化療藥物的栽體.實(shí)施例7抗致惡性素抗體的正常濃度與升高濃度范圍的確定升高的抗體僅與惡性轉(zhuǎn)變有關(guān)在上述研究的繼續(xù)和擴(kuò)展研究中，有9873名個(gè)體，包括健康對(duì)照、醫(yī)學(xué)病癥、乳腺癌和其它與細(xì)胞類(lèi)型無(wú)關(guān)的常見(jiàn)癌癥，向惡性狀態(tài)的轉(zhuǎn)變已經(jīng)顯示與在數(shù)天內(nèi)增加134jig/ml以上)的特異性抗體、即血清抗致惡性素抗體(AMAS)濃度有關(guān)，濃度用免疫吸附法對(duì)抗固定化無(wú)糖10B抗原測(cè)定(正常水平為0~134pg/ml血清).這些水平已經(jīng)在本研究中得到證實(shí).如困10所示，在炎癥狀態(tài)沒(méi)有惡性轉(zhuǎn)化的情況下不發(fā)生抗致惡性素抗體濃度的增加；在沒(méi)有轉(zhuǎn)化的純?cè)鲋碃顟B(tài)，如在良性腫瘤中，也沒(méi)有抗致惡性素抗體濃度的增加.困6顯示，在并非惡性或終末期的早期活動(dòng)型臨床癌癥中，濃度増加超過(guò)正常水平僅發(fā)生于惡性轉(zhuǎn)化，如圖6(原發(fā)性)肝癌和其它癌癥.由于癌細(xì)胞膜糖蛋白10B的碳水化合物單元喪失而發(fā)生這種免疫應(yīng)答，結(jié)果潛在的肽表位暴露，這些表位被識(shí)別為外來(lái)物質(zhì)，隨后產(chǎn)生抗致惡性素抗體.困6中包括正常個(gè)體的結(jié)果，作為肝炎/肝硬化結(jié)果的對(duì)照.困6顯示了在美國(guó)和亞洲個(gè)體中測(cè)定的抗無(wú)糖10B抗體(抗致惡性素抗體)濃度.美國(guó)和亞洲健康對(duì)照出現(xiàn)"假陽(yáng)性"(上升)的比例分別為4.5X和8X，相形之下，發(fā)現(xiàn)抗致惡性素抗體濃度增加超過(guò)134jig/ml的比例，在乙型或丙型肝炎/肝炎后肝硬化患者中為35.5、在慢性乙型或丙型肝炎病毒感染繼發(fā)的明確臨床癌癥患者中為75X(有些可能是終末期，于是抗體減少)，其它癌癥為95X.由于全部對(duì)照組個(gè)體隨機(jī)散布于肝炎病例中，并采取育法測(cè)定，因此對(duì)照組與肝炎病例之間的差異是非常顯著的(p〈.001).由于這種抗體濃度在很多其它病毒病癥，其它炎癥，其它感染性或醫(yī)學(xué)病癥，或者與肝炎、肝硬化或惡性胂瘤無(wú)關(guān)的健康對(duì)照中不增加，因此可以得出結(jié)論，如其他腫瘤一樣，所觀察到的抗致惡性素抗體增加意味著惡性細(xì)胞的存在.因此，乙型或丙型肝炎陽(yáng)性個(gè)體抗致惡性素抗體濃度的測(cè)定(1)使人病毒致癌發(fā)生的早期階段檢測(cè)成為可行，(2)使乙型或丙型肝炎病毒感染中進(jìn)行惡性轉(zhuǎn)變比先前可能更早的檢測(cè)和治療成為可行.此外，惡性腫瘤表位的序列已經(jīng)通過(guò)水解和質(zhì)譜法加以測(cè)定，并合成.這些合成的肽作為疫苗，可用于增加對(duì)癌細(xì)胞特異性的免疫應(yīng)答。這些肽已經(jīng)顯示可以增加抗致惡性素抗體的濃度，該抗體在皮下注射后，在微微克(費(fèi)摩爾)每癌細(xì)胞劑量下具有細(xì)胞毒性(困5),類(lèi)似地，在AIDS患者中出現(xiàn)臨床癌癥之前很久就已觀察到這種血清抗無(wú)糖10B(抗致惡性素)抗體濃度上升超過(guò)134Mg/m1.因此得出結(jié)論，早期惡性轉(zhuǎn)化提示細(xì)胞的永生化已經(jīng)發(fā)生了，從而成為HIV病毒的安全屏陣.因此，這些安全屏陣可以象治療乙型或丙型肝炎一樣加以治療.實(shí)施例8大量人群血液和其它體液中12聚體與16聚體肽的定量測(cè)定的自動(dòng)化方法以前沒(méi)有描述過(guò)12聚體與16聚體肽表位的常規(guī)定重測(cè)定方法，事實(shí)上也沒(méi)有適合于診斷用途的血液或其它體液中完整無(wú)糖10B抗原常規(guī)定量測(cè)定方法，更沒(méi)有適用于大量人群的方法.目前可用于血液中抗原測(cè)定的方法例如使用腫瘤標(biāo)記物CEA、PSA和CA125，不是非?？煽?，實(shí)際應(yīng)用也有限，因?yàn)樗鼈兊贸龃罅考訇幮院图訇?yáng)性結(jié)果.例如，前列腺特異性產(chǎn)物釋放進(jìn)入血清的PSA假陽(yáng)性率范圍為15X~70%，反映了良性前列腺増生或運(yùn)動(dòng)，而不是前列腺癌.數(shù)以千計(jì)的實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行測(cè)定時(shí)很少進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間的質(zhì)量控制，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果沒(méi)有可比性.因此，需要發(fā)明新的更加可靠的方法，適合于大量人群，經(jīng)濟(jì)實(shí)用.此外，因?yàn)檠蹇怪聬盒运乜贵w濃度測(cè)定的使用作為惡性或終末期癌癥診斷的輔助手段不是很有效，因?yàn)榇藭r(shí)抗體的免疫應(yīng)答失敗而且已知在疾病晚期更常發(fā)生抗原釋放進(jìn)入血液，所以，測(cè)定釋放進(jìn)入血液的抗原的方法更加有用，但是直到本發(fā)明以前還沒(méi)有可以利用的方法.下列方法可用于無(wú)糖10B的12聚體與16聚體肽(抗原)的測(cè)定，此外還可用于血液或其他細(xì)胞外液中任何已知的腫瘤標(biāo)記物或任何其它可檢測(cè)產(chǎn)物.可用于該方法的是一種試刑盒，含有(l)無(wú)菌的、帶條形碼的、帶刻度的、塑料收集吸移管，具有膨大的頭部，包括可壓縮的球("球部")和帶刻度的透明錐形莖("莖部")，直徑約0.1~0.3mm,長(zhǎng)約310cm，例如由CorningSamco制造的轉(zhuǎn)移吸移管.吸移管蓬部?jī)?nèi)壁涂有抗致惡性素抗體、蛋白醃抑制劑和抗凝劑；(2)無(wú)菌的柳葉刀，用于刺破手指取一滴血；和(3)申請(qǐng)表.將一滴血吸入吸移管尖，將試劑盒郵寄到指定的實(shí)驗(yàn)室.所收集和運(yùn)送的試刑盒優(yōu)選為足夠小的，以便裝入大約4x9-10英寸的帶條形碼的商業(yè)信封內(nèi).淦有抗體、蛋白酶抽制劑和抗凝劑的收集吸移營(yíng)的制備將吸移管涂以抗致惡性素抗體，優(yōu)選借助吸移管頭的可壓縮球部從溶液儲(chǔ)液器("抗體儲(chǔ)液器")中吸取吸移管莖部全長(zhǎng)的溶液，該溶液含有約200pg/ml的抗致惡性素抗體加蛋白酶抑制劑(例如，每50ml一片BoehringerMannheim"完全"蛋白酶抑制刑，其中還含有EDTA抗凝劑)，使溶液留在吸移管內(nèi)，優(yōu)選過(guò)夜，以便抗體能夠吸附于吸移管壁.然后排出溶液.該制備過(guò)程可以通過(guò)儀器("自動(dòng)吸移管裝填-排放器")自動(dòng)進(jìn)行，其中，每支吸移管莖頂部被擠壓夾垂直固定，一系列吸移管就這樣保持在適當(dāng)?shù)奈恢?，儀器內(nèi)還含有兩個(gè)水平金屬條，大約l/4英寸厚，l英寸寬，吸移管頭排列在它們之間.通過(guò)同時(shí)移動(dòng)兩個(gè)水平金屬條，擠壓吸移管頭部的可壓縮球部，排出吸移管的內(nèi)容物.通過(guò)分開(kāi)兩個(gè)水平金屬條，放松吸移管頭部的可壓縮球部，從浸在儲(chǔ)液器液體中的吸移管尖將儲(chǔ)液器液體吸入吸移管莖部.將溶液排放到儲(chǔ)液器后，將吸移管內(nèi)壁風(fēng)干，方法是在沒(méi)有儲(chǔ)液器的存在下，反復(fù)自動(dòng)地?cái)D壓和釋放可壓縮球部，使空氣吸入和吹出吸移管尖，直到吸移管干燥為止.填裝一系列吸移管后測(cè)定儲(chǔ)液器液體的濃度；如果儲(chǔ)液器內(nèi)抗體濃度低于100Mg/ml，那么向儲(chǔ)液器溶液中加入抗體和蛋白蘇抑制刑，使?jié)舛戎匦逻_(dá)到大約200pg/ml.吸移管裝填-排放器整體能夠傾斜大約45度，以便在一種位置時(shí)將吸移管尖放入儲(chǔ)液器，在另一種位置時(shí)將吸移管尖放入另一個(gè)儲(chǔ)液器或廢液排放容器或空氣中.用子實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的樣本獲得和運(yùn)送在血液樣本的情況下，試劑盒優(yōu)選含有至少一支涂過(guò)溶液的吸移管、柳葉刀和申請(qǐng)表，申請(qǐng)表含有吸取血液和運(yùn)送給實(shí)驗(yàn)室的要求，以及醫(yī)師的姓名和地址，以便實(shí)驗(yàn)室將測(cè)定結(jié)果發(fā)送給醫(yī)師.個(gè)人可以填好申請(qǐng)表，放入郵件.仔細(xì)地洗手，刺破指尖，然后壓縮吸移管頭的球部，將血液吸入吸移管莖尖.然后將樣本郵寄給實(shí)驗(yàn)室.在除血液以外的體液樣本情況下，試劑盒內(nèi)可以包括特別的要求.12聚體與16聚體肽的實(shí)驗(yàn)室定量測(cè)定實(shí)驗(yàn)室收到試劑盒后，進(jìn)行下列常規(guī)操作，不過(guò)技術(shù)人員在必要時(shí)可以進(jìn)行修改(1)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)員將每支吸移管在自動(dòng)吸移管裝填-排放器中按順序夾好；(2)用條形碼讀數(shù)器自動(dòng)記錄每支吸移管的條形碼數(shù)，輸入對(duì)自動(dòng)吸移管裝填-排放器進(jìn)行操作的計(jì)算機(jī)(測(cè)定結(jié)果也列在該數(shù)字下)；(3)技術(shù)員將每支吸移管內(nèi)的血液體積和所有申請(qǐng)表數(shù)據(jù)記錄在計(jì)算機(jī)中的條形碼數(shù)下；(4)血液通過(guò)自動(dòng)吸移管裝填-排放器排放到廢液容器(儲(chǔ)液器A)中；(5)自動(dòng)吸移管裝填-排放器自動(dòng)從另一個(gè)儲(chǔ)液器(儲(chǔ)液器B)中吸取蜂酸鹽緩沖鹽水(PBS)，洗滌吸移管內(nèi)壁兩次，每次洗液自動(dòng)排放到廢液容器(儲(chǔ)液器A)中，方法是將自動(dòng)吸移管裝填-排放器交替傾斜45度，以便吸移管尖交替與廢液容器和含有磷酸鹽緩沖鹽水的儲(chǔ)液器接近；(6)將抗致惡性素抗體從另一個(gè)儲(chǔ)液器(儲(chǔ)液器C)中吸入吸移管，保持與吸移管壁接觸兩小時(shí)，然后排放到廢液容器(儲(chǔ)液器A)中；(7)吸移管再次用PBS洗滌兩次，同上步驟(5);(8)將大約100|Lig/ml的與抗人抗體，例如羊或兔抗人抗體結(jié)合的發(fā)光發(fā)射體，例如吖啶鋪醋吸入吸移管，保持與吸移管壁接觸30分鐘；(9)按照上步(5)將吸移管用褲酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌兩次；(10)用發(fā)光計(jì)測(cè)重所發(fā)射的光，將發(fā)光計(jì)旋轉(zhuǎn)調(diào)整到適當(dāng)?shù)奈恢?，使其接收發(fā)光的端口指向吸移管的莖部；和(ll)每支吸移管的發(fā)光結(jié)果以發(fā)光單位計(jì)數(shù)，通過(guò)相同操作測(cè)定基于已知量的12聚體與16聚體肽的等摩爾混合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線，由該曲線經(jīng)過(guò)計(jì)算將發(fā)光結(jié)果轉(zhuǎn)化為肽的微克數(shù)，結(jié)果對(duì)每支吸移管內(nèi)最初血液體積進(jìn)行修正，打印出來(lái)和/或傳送到任意的電子數(shù)據(jù)儲(chǔ)存文檔中.家用試劑盒或者，尤其對(duì)于日常監(jiān)測(cè)血液或其他體液(下稱(chēng)"血液")抗12聚體與16聚體肽抗體濃度來(lái)說(shuō)，不用將血液郵寄給實(shí)驗(yàn)室，向個(gè)人或有能力的親屬提供用于在家中進(jìn)行測(cè)定的設(shè)備和指導(dǎo)，發(fā)光計(jì)的讀數(shù)不被個(gè)人觀測(cè)到，而是通過(guò)國(guó)際互連網(wǎng)或其它電子裝置自動(dòng)傳送給實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)師.于是，個(gè)人通過(guò)電子方式輸入申請(qǐng)表信息，通過(guò)電子方式讀取和輸入吸移管內(nèi)血液體積，將裝有血液的吸移管放入水箱(0~5TC)(不冷凍)約兩個(gè)小時(shí)，取出吸移管，將血液排放到將要郵寄給實(shí)驗(yàn)室的、拉鎖密封的塑料廢液容器中，用所提供的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌吸移管兩次，PBS排放到廢液容器中，將大約100pg/ml的與抗人抗體，例如羊或兔抗人抗體結(jié)合的發(fā)光發(fā)射體，例如但不限于吖淀鎩醋吸入吸移管，保持與吸移管壁接觸30分鐘.將吸移管內(nèi)容物排放到廢液容器中，吸移管用PBS洗滌兩次，PBS也排放到廢液容器中.將吸移管插入發(fā)光計(jì)數(shù)，測(cè)量所發(fā)射的光.每支吸移管的結(jié)果以發(fā)光單位計(jì)，通過(guò)國(guó)際互聯(lián)網(wǎng)或其它電子裝置自動(dòng)傳送給實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)師，通過(guò)相同操作測(cè)定基于已知重的抗致惡性素抗體的標(biāo)準(zhǔn)曲線，由該曲線經(jīng)過(guò)計(jì)算將發(fā)光結(jié)果轉(zhuǎn)化為抗致惡性素抗體蛋白的微克數(shù)，結(jié)果對(duì)吸移管內(nèi)最初血液體積進(jìn)行修正，打印出來(lái)和/或傳送到任意的電子數(shù)據(jù)儲(chǔ)存文檔中.實(shí)施例9大量人群血液和其它體液中抗12聚體與16聚體肽特異性抗體的定量測(cè)定的自動(dòng)化方法現(xiàn)在可用于測(cè)定抗這兩種肽抗體(抗致惡性素抗體)的方法盡管小心操作，是定量和可靠的，但在實(shí)際應(yīng)用卻明顯受限，因?yàn)樗鼈冃枰厥獾墓茏佑糜谖『瓦\(yùn)送，需要實(shí)驗(yàn)室、靜脈切開(kāi)者或醫(yī)師從靜脈采集血樣，需要用于凝血、冷凍離心、立即在干水上運(yùn)送過(guò)夜的操作一所有這些都費(fèi)時(shí)，或者在大多數(shù)地區(qū)不易獲得，并且價(jià)格昂貴.另外，目前的試刑制備方法是用生物學(xué)方法從生長(zhǎng)在組織培養(yǎng)基中的惡性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞產(chǎn)生的共價(jià)結(jié)合的致惡性素，經(jīng)提取、分離、純化和與溴乙酰纖維素共價(jià)結(jié)合得到的——立即用昂貴的、手工的、非自動(dòng)化的6小時(shí)免疫吸附法測(cè)定，該方法按照標(biāo)準(zhǔn)要求更多的人員訓(xùn)練，并在操作中需要極其仔細(xì)小心.因此，適合于大量人群的經(jīng)濟(jì)實(shí)用的新方法是必要的.在抗體的吸取、運(yùn)送和立即測(cè)定時(shí)，采取大多數(shù)上迷預(yù)防措施以避免由于在抗體吸附管內(nèi)貯存血清或在低于-7or:的溫度下貯存超過(guò)8小時(shí)而發(fā)現(xiàn)的損失或再現(xiàn)性(《癌癥的檢測(cè)和預(yù)防》11:100,1987).現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，這些昂責(zé)和費(fèi)時(shí)的預(yù)防措施不便普及，但如果在含有抗凝劑和蛋白蘇抑制刑的容器內(nèi)收集和運(yùn)送全血，并且肽或抗體分別用與發(fā)光底物結(jié)合的肽抗體自動(dòng)測(cè)定，那么這些措施是不必要的.本發(fā)明提供一種價(jià)格適宜的抗致惡性素抗體的測(cè)試方法，適用于大量人群.下列方法用于抗12聚體與16聚體合成肽(抗原)抗體的一般測(cè)定，此外還能用于血液或其它細(xì)胞外液中的任何其它抗體的測(cè)定，下列試劑盒可用于進(jìn)行該搮作，它含有(l)無(wú)菌的、帶條形碼的、帶刻度的、塑料收集吸移管，具有膨大的頭部，包括可壓縮的球("球部")和帶刻度的透明錐形莖("莖部")，直徑約0.1~0.3mm，長(zhǎng)約3~10cm，例如由CorningSamco制造的轉(zhuǎn)移吸移管.吸移管莖部?jī)?nèi)壁涂有12鏈節(jié)和16鏈節(jié)合成肽等摩爾混合物、蛋白酶抑制刑和抗凝劑；(2)無(wú)菌的柳葉刀，用于刺破手指取一滴血；和(3)申請(qǐng)表.將一滴血吸入吸移管尖，將試劑盒郵寄到指定的實(shí)驗(yàn)室.所收集和運(yùn)送的試劑盒是足夠小的，以便裝入大約4x9-10英寸的帶條形碼的商業(yè)信封內(nèi)。涂有12聚體與16聚休合成肽、蛋白酶抑制劑和抗凝劑的收集吸移營(yíng)的制備將吸移管涂以12聚體與16聚體合成肽的等摩爾混合物("肽")，優(yōu)選借助吸移管頭的可壓縮球部從溶液儲(chǔ)液器("肽儲(chǔ)液器")中吸取吸移管莖部全長(zhǎng)的溶液，該溶液含有約200Mg/ml的l2聚體與16聚體合成肽的一種或等摩爾混合物，加蛋白酶抑制劑(例如，每50ml—片BoehringerMannheim"完全"蛋白酶抑制刑，其中還含有EDTA抗凝刑)，使溶液留在吸移管內(nèi)，優(yōu)選過(guò)夜，以便抗體能夠吸附于吸移管壁.然后排出溶液.該制備過(guò)程可以通過(guò)儀器("自動(dòng)吸移管裝填-排放器")自動(dòng)進(jìn)行，其中，每支吸移管莖頂部被擠壓夾垂直固定，一系列吸移管就這樣保持在適當(dāng)?shù)奈恢?，儀器內(nèi)還含有兩個(gè)水平金屬條，大約l/4英寸厚，l英寸寬，吸移管頭排列在它們之間.通過(guò)同時(shí)移動(dòng)兩個(gè)水平金屬條，擠壓吸移管頭部的可壓縮球部，排出吸移管的內(nèi)容物.通過(guò)分開(kāi)兩個(gè)水平金屬條，放松吸移管頭部的可壓縮球部，從浸在儲(chǔ)液器液體中的吸移管尖將儲(chǔ)液器液體吸入吸移管莖部.將溶液排放到儲(chǔ)液器后，將吸移管內(nèi)壁風(fēng)干，方法是在沒(méi)有儲(chǔ)液器的存在下，反復(fù)自動(dòng)地?cái)D壓和釋放可壓縮球部，使空氣吸入和吹出吸移管尖，直到吸移管干燥為止.填裝一系列吸移管后測(cè)定儲(chǔ)液器液體的濃度；如果儲(chǔ)液器內(nèi)抗體濃度低于100pg/ml，那么向儲(chǔ)液器溶液中加入抗體和蛋白酶抑制劑，使?jié)舛戎匦逻_(dá)到大約200Mg/ml.吸移管裝填-排放器整體能夠傾斜大約45度，以便在一種位置時(shí)將吸移管尖放入儲(chǔ)液器，在另一種位置時(shí)將吸移管尖放入另一個(gè)儲(chǔ)液器或廢液排放容器或空氣中.用千實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的樣本獲得和運(yùn)送在血液樣本的情況下，試刑盒優(yōu)選含有至少一支涂過(guò)溶液的吸移管、柳葉刀和申請(qǐng)表，申請(qǐng)表含有吸取血液和運(yùn)送給實(shí)驗(yàn)室的要求，以及醫(yī)師的姓名和地址，以便實(shí)驗(yàn)室將測(cè)定結(jié)果發(fā)送給醫(yī)師.個(gè)人可以填好申請(qǐng)表，放入郵件.仔細(xì)地洗手，刺破指尖，然后壓縮吸移管頭的球部，將血液吸入吸移管莖尖.然后將樣本郵寄給實(shí)驗(yàn)室.在除血液以外的體液樣本情況下，試刑盒內(nèi)可以包括特別的要求.抗無(wú)糖10B12聚體與16聚體肽抗體的實(shí)驗(yàn)室定量測(cè)定實(shí)驗(yàn)室收到試劑盒后，(1)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)員將每支吸移管在自動(dòng)吸移管裝填-排放器中按順序夾好；(2)用條形碼讀數(shù)器自動(dòng)記錄每支吸移管的條形碼數(shù)和所有申請(qǐng)表數(shù)據(jù)，輸入對(duì)自動(dòng)吸移管裝填-排放器進(jìn)行操作的計(jì)算機(jī)(測(cè)定結(jié)果也列在該數(shù)字下)；(3)技術(shù)員將每支吸移管內(nèi)的血液體積記錄在計(jì)算機(jī)中的條形碼數(shù)下；(4)血液通過(guò)自動(dòng)吸移管裝填-排放器排放到廢液容器(儲(chǔ)液器A)中；(5)自動(dòng)吸移管裝填-排放器自動(dòng)從另一個(gè)儲(chǔ)液器(儲(chǔ)液器B)中吸取磷酸鹽緩沖鹽水(PBS),洗滌吸移管內(nèi)壁兩次，每次洗液自動(dòng)排放到廢液容器(儲(chǔ)液器A)中，方法是將自動(dòng)吸移管裝填-排放器交替傾斜45度，以便吸移管尖交替與廢液容器和含有砩酸鹽緩沖鹽水的儲(chǔ)液器接近；(6)將抗致惡性素抗體從另一個(gè)儲(chǔ)液器(儲(chǔ)液器C)中吸入吸移管，保持與吸移管壁接觸兩小時(shí)，然后排放到廢液容器(儲(chǔ)液器A)中；(7)吸移管再次用PBS洗滌兩次，同上步驟(5);(8)將大約100jjg/ml的與抗人抗體，例如羊或兔抗人抗體結(jié)合的發(fā)光發(fā)射體，例如吖啶鋪醋吸入吸移管，保持與吸移管壁接觸30分鐘；(9)按照上步(5)將吸移管用礴酸鹽援沖鹽水(PBS)洗滌兩次；(10)用發(fā)光計(jì)測(cè)量所發(fā)射的光，將發(fā)光計(jì)旋轉(zhuǎn)調(diào)整到適當(dāng)?shù)奈恢?，使其接收發(fā)光的端口指向吸移管的莖部；和(11)每支吸移管的發(fā)光結(jié)果以發(fā)光單位計(jì)數(shù)，通過(guò)相同操作測(cè)定基于已知量抗致惡性素抗體的標(biāo)準(zhǔn)曲線，由該曲線經(jīng)過(guò)計(jì)算將發(fā)光結(jié)果轉(zhuǎn)化為肽的微克數(shù)，結(jié)果對(duì)每支吸移管內(nèi)最初血液體積進(jìn)行修正，打印出來(lái)和/或傳送到任意的電子數(shù)據(jù)儲(chǔ)存文檔中.家用試劑盒或者，尤其對(duì)于日常監(jiān)測(cè)血液或其他體液(下稱(chēng)"血液")抗12聚體與16聚體肽抗體濃度來(lái)說(shuō)，不用將血液郵寄給實(shí)驗(yàn)室，向個(gè)人或有能力的親屬提供用于在家中進(jìn)行測(cè)定的設(shè)備和指導(dǎo)，發(fā)光計(jì)的讀數(shù)不被個(gè)人觀測(cè)到，而是通過(guò)國(guó)際互連網(wǎng)或其它電子裝置自動(dòng)傳送給實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)師.于是，個(gè)人通過(guò)電子方式輸入申請(qǐng)表信息，通過(guò)電子方式讀取和輸入吸移管內(nèi)血液體積，將裝有血液的吸移管放入冰箱(0~5"C)(不冷凍)約兩個(gè)小時(shí)，取出吸移管，將血液排放到將要郵寄給實(shí)驗(yàn)室的、拉鎖密封的塑料廢液容器中，用所提供的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌吸移管兩次，PBS排放到度液容器中，將大約100pg/ml的與抗人抗體，例如羊或兔抗人抗體結(jié)合的、發(fā)光發(fā)射體、例如但不限于吖咬銻SS吸入吸移管，保持與吸移管壁接觸30分鐘.將吸移管內(nèi)容物排放到廢液容器中，吸移管用PBS洗滌兩次，PBS也排放到廢液容器中.將吸移管插入發(fā)光計(jì)，測(cè)量所發(fā)射的光.每支吸移管的結(jié)果以發(fā)光單位計(jì)數(shù)，通過(guò)國(guó)際互聯(lián)網(wǎng)或其它電子裝置自動(dòng)傳送給實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)師，通過(guò)相同操作測(cè)定基于已知量的抗致惡性素抗體的標(biāo)準(zhǔn)曲線，由該曲線經(jīng)過(guò)計(jì)算將發(fā)光結(jié)果轉(zhuǎn)化為抗致惡性素抗體蛋白的微克數(shù)，結(jié)果對(duì)吸移管內(nèi)最初血液體積進(jìn)行修正，打印出來(lái)和/或傳送到任意的電子數(shù)據(jù)儲(chǔ)存文檔中.實(shí)施例10無(wú)糖10B的結(jié)構(gòu)A.無(wú)糖10B的碘代苯甲酸水解之后進(jìn)行埃德曼降解，得到具有下列序列的肽("碘肽")YKAGVAFLHKKNDIDE氨基酸殘基編號(hào)12345678910111213141516B.質(zhì)詳法之后利用PerkinElmerSciex儀器公司的MacBioSpecSoftwareManual013048-A,PESCIEX進(jìn)行計(jì)算，得到肽YKAGVAFLHKKNDIDE的下列性質(zhì)N-端基團(tuán)氬C-端基團(tuán)游離酸MH+單同位素質(zhì)量"1847.9656amuHPLC指數(shù)=43,40MH+平均質(zhì)量-1849.0998amuBullftBreese值"80等電點(diǎn)(pl)-8.0元素組成C"HmN"O"C.質(zhì)詳法上述1A中通過(guò)碘代苯甲酸水解得到的"碘肽"的序列獨(dú)立通過(guò)無(wú)糖10B片段質(zhì)詳法加以確認(rèn)，該片段是通過(guò)如下所述溶液中的無(wú)糖10B和固定在溴乙酰纖維素上的無(wú)糖10B(無(wú)糖10BC或A10BC)的四種不同酸水解而得到的.這些水解作用產(chǎn)生13種重疊的水解片段(其中下面兩個(gè)6-10和6-12是用兩種不同的水解方法得到的).這些重疊片段一起獨(dú)立確認(rèn)了"碘肽"YKAGVAFLHKODIDE的肽序列如下.<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>,氨基酸的標(biāo)準(zhǔn)字母代碼如下Y-酪氨酸；K-賴(lài)氨酸；A-丙氨酸；G-甘氨酸；V-纈氨酸；F-苯丙氨酸；L-亮氨酸；H-組氡酸；N-天門(mén)冬酰胺；D-天門(mén)冬氨酸；I-異亮氨酸；E-谷氨酸.()-與片段N-端和C-端氨基酸連接的氨基酸."溶液中的完整無(wú)糖10B是強(qiáng)酸，等電點(diǎn)約為2.7，置于室溫下數(shù)小時(shí)或0-5TC下更長(zhǎng)時(shí)間可自動(dòng)水解.C.無(wú)糖10B的狹蛋白酶水解之后進(jìn)行埃德曼降解，得到具有下列序列的肽("胰蛋白酶肽")GLSDGSNTESDI氨基酸殘基編號(hào)123456789101112D.無(wú)糖IOB水解片段質(zhì)詳法之后利用PerkinElmerSciex儀器公司的MacBioSpecSoftwareManual013048-A,PESCIEX進(jìn)行計(jì)算，得到"胰蛋白酶肽"GLSDGSNTESDI的下列性質(zhì)N-端基團(tuán)氫C-端基團(tuán)游離酸MH+單同位素質(zhì)量-1194.5U6amuHPLC指數(shù)-O.70MH+平均質(zhì)量-1195.1817amuBull&Breese值-2690等電點(diǎn)(pl)".4元素組成C"H"N"O"E.質(zhì)讒法上述2C中通過(guò)胰蛋白酶水解得到的"胰蛋白酶肽"的序列獨(dú)立通過(guò)無(wú)糖10B片段質(zhì)譜法加以確認(rèn)，該片段是通過(guò)如下所述溶液中的無(wú)糖IOB和固定在溴乙酰纖維素上的無(wú)糖10B(無(wú)糖10BC或AIOBC)的四種不同酸水解而得到的.這些水解作用產(chǎn)生7種重疊的水解片段，這些重疊片段獨(dú)立確認(rèn)了"胰蛋白醃肽〃(G)LSDGSNTESD(1)的肽序列的2-11殘基如下.<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>*氨基酸的標(biāo)準(zhǔn)字母代碼如下G-甘氨酸；L-亮氨酸；S-絲氡酸；D-天門(mén)冬氨酸；N-天門(mén)冬酰胺；T-蘇氨酸；E-谷氨酸；I-異亮氨酸."溶液中的完整無(wú)糖IOB是強(qiáng)酸，等電點(diǎn)約為2.7，在室溫下數(shù)小時(shí)或0-5匸下更長(zhǎng)時(shí)間可自動(dòng)水解.F.無(wú)糖10B的CNBr水解之后進(jìn)行埃德曼降解，得到具有下列序的二肽("CNBr肽")MD氨基酸殘基編號(hào)12G.無(wú)糖1OB中，存在色基("發(fā)色團(tuán)")，使無(wú)糖1OB的濃溶液(>100Mm/ml)微呈黃色，并顯示如圖5所示的吸收光謙.在整個(gè)純化階段，包括高效液相色謙法在內(nèi)，發(fā)色團(tuán)都保留在無(wú)糖IOB中.通過(guò)排空和熱密封含有無(wú)糖10B溶液的玻璃管，用氮取代氧，則無(wú)糖10B溶液變?yōu)樯罹G色.若玻璃管敞開(kāi)在空氣中，則溶液立即回復(fù)為黃色.由于從氣合狀態(tài)的黃色轉(zhuǎn)變?yōu)槿睔鉅顟B(tài)的深綠色、再回到氧合狀態(tài)的黃色是可逆的轉(zhuǎn)變，僅與氣的存在或不存在有關(guān)，因此得出結(jié)論，顏色改變是發(fā)色團(tuán)的可逆性氧化-還原性質(zhì).H.克隆無(wú)糖IOB的基因通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法，無(wú)糖IOB以及具有完整氨基酸序列的10B的基因利用上述"硪肽"或上述"胰蛋白酶肽"或二者加以衍生，以構(gòu)建正常和轉(zhuǎn)化神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞文庫(kù)的RNA和cDNA探針.無(wú)糖10B和糖蛋白10B的基因整體或其結(jié)構(gòu)片段可以用作疫苗.另外，完整的基因或其部分可被引入各種熟知的表達(dá)系統(tǒng)，以產(chǎn)生完整的IOB糖復(fù)合蛋白或無(wú)糖10B，這些產(chǎn)物可作為疫苗用于患者或動(dòng)物，以產(chǎn)生抗完整分子或其片段的特異性抗體.由于已知糖蛋白IOB參與所有動(dòng)物的認(rèn)識(shí)和認(rèn)知訓(xùn)練，因此能夠通過(guò)給藥來(lái)改善動(dòng)物和人的認(rèn)知功能.序列表<110>Bogoch,SamuelBogoch,Elenore<120>無(wú)糖產(chǎn)物和使用方法<130>0942S/"S7S2<140><"1><150><151>03/1",7551998-09-04<150><1S1>08/19B,1391994-02-17<160>2<170>PatentlnVer.'2<210><211><212<213>PRT人<220><223>腦神經(jīng)膠質(zhì)癌<400>TyrLysAlaGlyValAlaPheLeuHisLysLysAsnAsplieAspGluIS1015<210><212:>213>12PRT人<220><223>腦神經(jīng)膠質(zhì)痏"00>2GlyLeuSerAspGlySerAsnThrGluSerAsplie1510權(quán)利要求1、一種分離的復(fù)合糖，包含至少一種碳水化合物部分，該部分與具有序列2的氨基酸序列的肽共價(jià)結(jié)合。2、具有序列2的氨基酸序列的分離的肽.3、權(quán)利要求1的分離的復(fù)合糖或權(quán)利要求2的分離的肽在制備用于抑制或防止流感病毒顆粒附著于人類(lèi)患者細(xì)胞的藥物中的用途.4、權(quán)利要求3的用途，其中該復(fù)合糖包含神經(jīng)氨酸-己糖胺鍵.5、權(quán)利要求3的用途，其中該患者處于妊娠的笫一個(gè)或第二個(gè)三月期.6、治療有效劑量的D-葡糖胺-HCl在制備用于治療有需要的患者的精神分裂癥的藥物中的用途.7、權(quán)利要求6的用途，其中所述治療有效劑量為約每天50~500mg。8、權(quán)利要求6的用途，其中所述治療有效劑量為約每天200mg.9、一種純化的單克隆抗體，該抗體特異性識(shí)別具有序列2的氨基酸序列的肽.10、一種純化的單克隆抗體，該抗體特異性識(shí)別無(wú)糖蛋白10B.11、用于增加有需要的患者抗致惡性素抗體濃度的治療組合物，包含一種肽，選自序列2的肽、無(wú)糖蛋白IOB及其組合.12、治療有效劑量的選自序列2的肽、無(wú)糖蛋白IOB及其組合的肽在制備用于治療有需要的患者的慢性病毒感染的藥物中的用途.13、權(quán)利要求12的用途，其中該慢性病毒感染是HIV.14、無(wú)糖蛋白IOB在制備用于診斷患者的與慢性病毒性疾病有關(guān)的癌癥的試劑盒中的用途.15、權(quán)利要求14的用途，其中與慢性病毒性疾病有關(guān)的癌癥是肝癌。16、包含純化抗體的治療組合物，該抗體特異性識(shí)別一種肽，該肽選自序列2的肽、無(wú)糖蛋白IOB及其組合.17、治療有效劑量的二苯乙內(nèi)酰脲在制備用于治療有需要的患者的腦腫瘤的藥物中的用途.18、權(quán)利要求17的用途，其中該治療有效劑量為約0.5~2mg/kg體重，19、用于測(cè)定存在于患者血液中的無(wú)糖蛋白IOB抗原性表位濃度的試劑盒，包含至少一支血液收集管或吸移管和抗致惡性素抗體.20、根據(jù)權(quán)利要求19的試劑盒，其中所述抗體是包被在試管或吸移管內(nèi)表面上的.21、用于測(cè)定存在于患者血液中的抗致惡性素抗體濃度的試劑盒，包含至少一支血液收集管或吸移管和具有序列2的氨基酸序列的肽.22、權(quán)利要求21的試劑盒，其中該肽是包被在試管或吸移管內(nèi)表面上的，23、分離的核酸，編碼包含序列2的氨基酸序列的肽.全文摘要本發(fā)明涉及無(wú)糖產(chǎn)物和使用方法。公開(kāi)了復(fù)合糖、含有該復(fù)合糖的治療組合物和使用該復(fù)合糖的治療方法。確切地說(shuō)，提供了無(wú)糖10B的肽成分，它是致免疫表位，負(fù)責(zé)抗原被免疫系統(tǒng)識(shí)別。這些復(fù)合糖可用于預(yù)防流感病毒與細(xì)胞結(jié)合、治療精神分裂癥和診斷與癌癥形成有關(guān)的慢性病毒性疾病。文檔編號(hào)C07K1/00GK101096382SQ20071010877公開(kāi)日2008年1月2日申請(qǐng)日期1999年8月30日優(yōu)先權(quán)日1998年9月4日發(fā)明者埃倫諾爾S·博戈奇,塞繆爾·博戈奇申請(qǐng)人:塞繆爾·博戈奇;埃倫諾爾·S·博戈奇