專利名稱：一種富集孕婦血漿中胎兒游離dna的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的試劑及使用該試劑富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的方法。
背景技術(shù)：
目前，產(chǎn)前診斷主要是利用胎兒的組織來(lái)檢測(cè)一些遺傳性疾病，這對(duì)于預(yù)防及控制新生兒發(fā)病率及死亡率具有十分重要的臨床意義。然而，損傷性的診斷如羊水和絨毛膜穿刺等方法都有機(jī)會(huì)對(duì)胎兒和孕婦造成一定的危害。因此，這些方法通常僅用于那些懷疑懷有遺傳性疾病胎兒的高風(fēng)險(xiǎn)孕婦。鑒于損傷性產(chǎn)前診斷的局限性，故非損傷產(chǎn)前性診斷的方法，具有極大的發(fā)展空間和潛力。其中，母親與胎兒之間存在細(xì)胞相互滲透的現(xiàn)象已為研究所證實(shí)，而孕婦血液中的胎兒細(xì)胞為有效地進(jìn)行非損傷性診斷，提供了有價(jià)值的遺傳物質(zhì)。然而孕婦血液中的胎兒細(xì)胞數(shù)量極少，使其在臨床應(yīng)用中受到一定的限制。后又在孕婦的血漿和血清中發(fā)現(xiàn)了游離胎兒DNA，檢測(cè)這類胎兒DNA，無(wú)疑是一種既安全又準(zhǔn)確的非損傷性診斷方法為產(chǎn)前診斷開創(chuàng)了一個(gè)新的領(lǐng)域。但母血中胎兒DNA含量較低，而且受到母親強(qiáng)大DNA背景的影響使目前的基于胎兒游離DNA的進(jìn)行產(chǎn)前診斷方面的研究大多局限在父系遺傳病方面。從孕婦血漿中提取高濃度的胎兒DNA，是一項(xiàng)有利于臨床意義深遠(yuǎn)的工作。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的試劑及使用該試劑富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的方法，它涉及DNA富集試劑的組分及使用該試劑富集胎兒DNA的方法。本發(fā)明富集胎兒DNA的試劑價(jià)格低廉，易獲得，富集方法操作簡(jiǎn)便、快捷，經(jīng)過(guò)該方法處理后明顯提高了孕婦血漿中胎兒DNA的提取含量。本發(fā)明胎兒DNA富集試劑包括0.5M EDTA(pH＝8.0)和分析純甲醛。用該試劑富集胎兒游離DNA的具體操作方法為取孕婦外周血3-5ml，加入EDTA和分析純甲醛，使其終濃度分別為0.5M和1ml/L。在24小時(shí)內(nèi)，室溫下1600g離心10分鐘。將血漿轉(zhuǎn)移至一新的離心管中，重復(fù)上述步驟，該血漿可用于后續(xù)試驗(yàn)或-80度凍存保存隨時(shí)使用。經(jīng)過(guò)上述處理后的樣品可直接用于各種品牌或是實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法的DNA提取。
具體實(shí)施例選取2005年1月到2005年10月孕中期產(chǎn)婦30例，分別取外周血6ml。其中3ml，用本發(fā)明的方法處理后使用qiagen全血DNA提取試劑盒提取DNA.取孕婦外周血3-5ml，加入EDTA和分析純甲醛，使其終濃度分別為0.5M和1ml/L。在24小時(shí)內(nèi)，室溫下1600g離心10分鐘。將血漿轉(zhuǎn)移至一新的離心管中，重復(fù)上述步驟，該血漿用qiagen提取試劑盒提取DNA.另3ml直接使用qiagen提取試劑盒提取DNA。
采用熒光定量PCR方法，擴(kuò)增SRY基因，以獲得胎兒DNA在孕婦血漿中總DNA的相對(duì)濃度。未經(jīng)富集DNA處理組，相對(duì)濃度為6.10％。處理組，相對(duì)濃度為18.54％。
我們的處理方法，明顯的提高了孕婦血漿中胎兒DNA的提取濃度。
權(quán)利要求
1.一種富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的試劑包括0.5M EDTA(pH＝8.0)和分析純甲醛。
2.使用該試劑富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的方法，具體操作方法為取孕婦外周血3-5ml，加入EDTA和分析純甲醛，使其終濃度分別為0.5M和1ml/L。在24小時(shí)內(nèi)，室溫下1600g離心10分鐘。將血漿轉(zhuǎn)移至一新的離心管中，重復(fù)上述步驟，該血漿可用于后續(xù)試驗(yàn)或-80度凍存保存隨時(shí)使用。經(jīng)過(guò)上述處理后的樣品可直接用于各種品牌或是實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法的DNA提取。
全文摘要
富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的試劑及使用該試劑富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的方法，它涉及DNA富集試劑的組分及使用該試劑富集胎兒DNA的方法。本發(fā)明胎兒DNA富集試劑包括0.5M EDTA(pH＝8.0)和分析純甲醛。用該試劑富集胎兒游離DNA的具體操作方法為取孕婦外周血3－5ml，加入EDTA和分析純甲醛，使其終濃度分別為0.5M和1ml/L。在24小時(shí)內(nèi)，室溫下1600g離心10分鐘。將血漿轉(zhuǎn)移至一新的離心管中，重復(fù)上述步驟，該血漿可用于后續(xù)試驗(yàn)或－80度凍存保存隨時(shí)使用。經(jīng)過(guò)上述處理后的樣品可直接用于各種品牌或是實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法的DNA提取。本發(fā)明富集胎兒DNA的試劑價(jià)格低廉，易獲得，富集方法操作簡(jiǎn)便、快捷，經(jīng)過(guò)該方法處理后明顯提高了孕婦血漿中胎兒DNA的提取含量。
文檔編號(hào)C07H21/00GK101016562SQ20061001315
公開日2007年8月15日 申請(qǐng)日期2006年2月8日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月8日
發(fā)明者陳熹 申請(qǐng)人:陳熹