一種從血漿中提取人血白蛋白提高得率的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物制藥，特別是一種從血漿中提取人血白蛋白提高得率的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 人血白蛋白是人體血液中最主要的一種功能性蛋白質(zhì)，其主要的生理功能為調(diào)節(jié) 人體滲透壓和新陳代謝中物質(zhì)運(yùn)輸，在治療因燒傷等原因引起了體液大量流失方面具有非 常重要的作用，此外，人血白蛋白還起著營養(yǎng)供給、運(yùn)輸及解毒和對(duì)其它血漿蛋白的膠體保 護(hù)和穩(wěn)定的作用。
[0003] 目前世界上各血液制品生產(chǎn)廠家大多采用低溫乙醇法生產(chǎn)人血白蛋白，此類技 術(shù)為低溫乙醇分級(jí)沉淀技術(shù)，通過有效控制蛋白質(zhì)沉淀的五個(gè)因素：PH值、溫度、蛋白質(zhì)濃 度、離子強(qiáng)度、乙醇濃度來逐級(jí)沉淀血漿中的不同蛋白質(zhì)，一般分離人血白蛋白的步驟為先 從血漿中去除組分I，再去除組分11+111，然后去除組分IV，最后沉淀提取組分V即人血白 蛋白。在原材料血漿日益緊張的今天，盡管各個(gè)生產(chǎn)企業(yè)采取了各種方法提高收率，比如 合并血漿時(shí)沖洗各種與之接觸的器皿；或用大量的平衡液沖洗濾板等等措施，從而降低各 個(gè)過程的損失提高收率，但這些措施僅是從減少損失的前提下進(jìn)行的，而且操作麻煩，成本 高。因此，如何有效解決從血漿中提高回收人血白蛋白得率是本領(lǐng)域技術(shù)人員非常關(guān)心，需 要解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種從血漿中提 取人血白蛋白提高得率的方法，可有效解決既從血漿中提取回收人血白蛋白和提高得率的 問題。
[0005] 本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，該方法包括以下步驟：血漿的合并與融化、組分 I+II+III的制作和壓濾、組分IV的制作和壓濾、組分V的制作和壓濾、組分V沉淀溶解過 濾、組分V(簡稱FV)精制純化、超濾透析濃縮、配制、巴氏滅活、除菌灌裝、孵放和檢定，所述 的組分IV的制作和壓濾，在制備的組分I+II+III上清液中按體積比加入1/10體積的(TC 生理鹽水，用pH4. 0醋酸緩沖液調(diào)整溶液pH值至5. 80?5. 90,加入-15°C以下的體積濃度 為95%乙醇，使最終乙醇體積濃度達(dá)到40%，其它步驟均與現(xiàn)有技術(shù)相同或相近似，由此可 知，本發(fā)明的創(chuàng)新之處核心在于組分IV的制作和壓濾。
[0006] 本發(fā)明采用上述技術(shù)方案，首先由于在FI+II+III上清液中提高了溶液的Na+濃 度，增加人血白蛋白的溶解性；其次因降低溶液的蛋白含量，從而減少了人血白蛋白的共 沉，降低了損失，因此在人血白蛋白關(guān)鍵步驟組分IV制作中使得人血白蛋白收率得以大大 提高，再者將FI沉淀并入FII+III-塊提取，減少了步驟，從而減少了一步損失，是生產(chǎn)工 藝更加流暢簡潔，并且提高了人血白蛋白得率，經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益巨大。
【附圖說明】
[0007] 圖1為本發(fā)明的工藝流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0008] 以下結(jié)合工藝流程圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說明。
[0009] 由附圖給出，本發(fā)明在實(shí)施中，是由以下步驟給出： (1) 、血漿的合并與融化：破袋后并入清潔的融漿罐內(nèi)，開啟融漿罐，攪拌及融漿溫控 器，在水溫< 35 °C，使融漿罐內(nèi)血漿融化，溫度保持在0 °C?4°C; (2) 、組分I+II+III的制作和壓濾分離：計(jì)量合并后血漿體積，用pH4. 0醋酸緩沖液 調(diào)節(jié)混合血漿pH值6. 85?6. 95,打開循環(huán)冷卻系統(tǒng)給血漿降溫，待血漿降溫至0°C后，加 入-15°C以下的95%(V/V)的乙醇；加入乙醇速度彡60L/h，使制品最終乙醇濃度達(dá)到20% (v/v)，在加入乙醇過程中，溫度始終不得高于(TC，最終血漿溫度控制在-5. 0?-5. 5°C，乙 醇加完后繼續(xù)攪拌2小時(shí)以上，保持溶液pH為6. 85?6. 95 ;再向每千升溶液中加入硅藻土 和珍珠巖各2?4kg，攪拌均勻（一般攪拌30分鐘)，在溫度-4. 5°C?-5. 5°C、壓力0. 20MPa 下壓濾，用潔凈壓縮冷空氣吹出壓濾機(jī)中殘留液體，再用20% (v/v)的乙醇組分I+II+III (又稱FI+II+III)平衡液沖洗，沖洗液并入到濾液，得到組分I+II+III上清液； 20% (v/v)的乙醇組分I+II+III平衡液是由95% (v/v)的乙醇210L、枸櫞酸鈉3. 8Kg、NaCl4. 6Kg、加注射用水至1000L制成，用pH4. 0HAc-NaAc緩沖液調(diào)整平衡液pH為6. 85? 6. 95,平衡液溫度-4. 5?-5. 5°C; (3) 、組分IV的制作和壓濾分離：步驟（2)制備的組分I+II+III上清液中按體積比 加入1/10體積的(TC生理鹽水，用pH4. 0醋酸緩沖液調(diào)整溶液pH值至5. 80?5. 90,加 入-15°C以下的95% (v/v)乙醇，使乙醇濃度達(dá)到體積比40% (v/v)，加乙醇速度<80L/h， 在加入乙醇過程中溫度控制在-2. (TC以下，邊加乙醇邊降溫，使組分I+II+III上清液最終 溫度控制在-5. 0?-5. 5°C，乙醇加畢繼續(xù)攪拌2小時(shí)，保持pH為5. 80?5. 90 (否則應(yīng)矯 正至此范圍內(nèi)）;向每千升溶液中加入硅藻土和珍珠巖各2?4kg，攪拌30分鐘后開始?jí)簽V， 壓濾的過程中，工作壓力控制在0. 2MPa之內(nèi)，濾液溫度控制在-4. 5°C?-5. 5°C，壓濾后，用 潔凈壓縮冷空氣吹出壓濾機(jī)中殘留液體，再用40%乙醇組分IV平衡液沖洗，沖洗液并入到 濾液中，得組分IV上清液(又稱FIV上清液）； 所述的40%乙醇組分IV平衡液是由95%乙醇溶液420L、枸櫞酸鈉3.OKg和NaCl4.OKg加注射用水至1000L制成，用pH4.OHAc-NaAc緩沖液調(diào)整平衡液pH5. 80?5. 90，溫 度-4. 5。。?5. 5。。； (4) 組分FV制作與分離：步驟（3)制備的IV上清液用2mol/LHAc-40%乙醇（v/v)溶 液緩慢調(diào)整pH值為4. 75?4. 85,滴加時(shí)速度小于200ml/min，邊加邊降溫，最終溫度控制 在-8?-9°C，滴加完畢后繼續(xù)攪拌1小時(shí)，保持pH為4. 75?4. 85 (否則應(yīng)矯正至此范圍 內(nèi)），靜置2小時(shí)以上壓濾，壓濾過程中，工作壓力0. 20MPa，濾液溫度控制在-5. (TC以下，壓 濾后，用提前預(yù)冷的潔凈壓縮空氣吹出壓濾機(jī)內(nèi)的殘留液，收集沉淀，得組分V; 所述的40%乙醇（v/v)組分V平衡液是由95%乙醇（v/v)420L加注射用水至1000L攪 拌均勻制成，降溫至-8?_9°C; (5) 組分V精制純化： ①組分V沉淀用5倍體積（V/V)的8%乙醇（v/v)溶液攪拌溶解，沉淀完全溶解后，測量 組分V溶液pH為4. 50?4. 70,在溫度-2. 5?-3. 5°C繼續(xù)攪拌2?3小時(shí)，壓濾； ②壓濾：壓濾過程中攪拌不停，壓濾完后，用低溫冷空氣吹出濾器內(nèi)液體，至出氣泡后 停止，再用組分V平衡液沖洗濾板，沖洗液并入到過濾液中得到純化液； 所述的組分V平衡液為質(zhì)量濃度12%的乙醇溶液pH值4. 50?4. 70,降溫 至-2. 5 ?-3. 5。。； (6) 超濾： ① 攪拌：用IM碳酸氫鈉調(diào)整純化液pH值至7. 0?7. 2 ; ② 將純化液超濾濃縮至蛋白濃度100?150g/L，用5倍的9g/L的氯化鈉溶液等體積透 析，再用3倍的注射用水透析得到白蛋白原液，將白蛋白原液超濾濃縮至蛋白質(zhì)含量210g/ L以上，用注射用水洗滌超濾膜，收集洗膜液，并入上述白蛋白原液中即為人血白蛋白原液 (取樣進(jìn)行原液檢測）； (7) 半成品配制： 測定人血白蛋白原液中蛋白質(zhì)含量，按每克蛋白質(zhì)160毫摩爾稱取辛酸鈉，按每克蛋 白質(zhì)120?130毫摩爾稱取氯化鈉，稱取后用注射用水溶解，加入人血白蛋白原液，再將人 血白蛋白原液稀釋至蛋白質(zhì)濃度195?200g/L，用pH4. 0醋酸緩沖液或lmol/L碳酸氫鈉調(diào) 整pH值6. 8?7. 0 ; (8) 巴氏滅活分裝孵化： 將步驟（7)制備的蛋白質(zhì)濃度195?20