專利名稱：用含3到5個碳原子的酮糖生產(chǎn)交聯(lián)蛋白的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)交聯(lián)蛋白的方法，根據(jù)該方法，交聯(lián)劑為含3到5個碳原子的酮糖。
本發(fā)明也涉及一種用至少一個含3到5個碳原子的酮糖交聯(lián)用于開發(fā)動物食品、用于生產(chǎn)涂層、包衣或粘合劑的成膜組合物以及用于制備可生物降解或可再生利用的蛋白質(zhì)材料的蛋白質(zhì)的生產(chǎn)方法。
為實現(xiàn)本發(fā)明目的，術(shù)語“含3到5個碳原子的酮糖”是指選自二羥基丙酮(或1，3-二羥基-2-丙酮)、赤蘚酮糖、木酮糖和核酮糖的酮糖。
本發(fā)明更特別地涉及二羥基丙酮用于交聯(lián)蛋白質(zhì)的用途。
此外，術(shù)語“蛋白-交聯(lián)劑”或“蛋白-鞣劑”是指與所述蛋白能夠形成氫鍵、配位鍵、共價鍵或離子鍵從而降低其可消化性和水溶性的化合物。
通常將蛋白交聯(lián)劑概括為三個主要類別。
第一類由礦物鞣質(zhì)組成，例如二-、三-或多價的陽離子鹽，例如鉻、鋁、鐵、鋅、銅、鈷、鈦、鋯、硅和銫鹽。
礦物鞣質(zhì)在堿性介質(zhì)中尤為有效。在其堿形式下，這些多價金屬鹽與蛋白質(zhì)的某些氨基酸的游離羧基官能團牢固地結(jié)合。
它們的應(yīng)用領(lǐng)域主要是可降解的或可再生的蛋白材料的鞣制的應(yīng)用，特別用于通過鞣革組成獸皮真皮的膠原生產(chǎn)革制品。
該操作的目的是將皮轉(zhuǎn)化成革制品，也就是說，通過減損微生物侵襲膠原纖維的可能性來將易腐爛的材料轉(zhuǎn)化成不易腐爛的材料。
在占世界上鞣制皮革近乎90％的鉻制革情況下，鉻化合物通過形成復(fù)合物接在蛋白質(zhì)上-或與所述蛋白質(zhì)的氨基鏈上的游離羧基結(jié)合；-或者，通過硫酸鹽、甲酸鹽或草酸鹽基團，與所述蛋白質(zhì)的氨基鏈上的游離胺官能團結(jié)合。
然后通過鉻化合物發(fā)生交聯(lián)化，也即是兩個或更多個肽鏈結(jié)合。
這些礦物鞣質(zhì)特別有效，但卻產(chǎn)生大量對環(huán)境有侵害作用的廢物。
有時礦物鞣質(zhì)以鋅鹽或其它陽離子鹽形式也被用于開發(fā)動物食品的鞣蛋白的領(lǐng)域。由于能對動物造成毒性作用，人們避免大量消費這類的鞣蛋白。
第二類鞣質(zhì)由合成鞣質(zhì)組成，例如表氯醇樹脂、聚酰胺-胺-表氯醇樹脂、聚乙烯亞胺樹脂以及如二苯基甲烷二異氰酸酯的異氰酸酯樹脂。
它們的應(yīng)用領(lǐng)域主要是膠或粘結(jié)劑的應(yīng)用，特別是木膠或用于波紋紙板的膠。
第三類鞣質(zhì)由醛類鞣質(zhì)組成，更具體地為甲醛、乙二醛(草酸基)或者戊二醛，及其以各種縮合物形成出售的商業(yè)衍生物。
醛類鞣質(zhì)通過共價鍵結(jié)合到蛋白質(zhì)上，主要是生成縮合產(chǎn)物。二次縮合反應(yīng)也可能導(dǎo)致交聯(lián)產(chǎn)物的形成。
通常，這些縮合產(chǎn)物得自交聯(lián)劑上的羰基官能團與所述蛋白質(zhì)上某些氨基酸的氨基官能團(尤其是賴氨酸的ε-氨基官能團)縮合形成亞胺的反應(yīng)。
醛類鞣質(zhì)特別被應(yīng)用于三個主要的應(yīng)用領(lǐng)域。
第一個應(yīng)用領(lǐng)域是蛋白質(zhì)材料的制備，例如自牛奶酪蛋白、玉米蛋白、膠原蛋白、大豆蛋白、從屠宰場而來的血液以及明膠，大多通常是與甲醛交聯(lián)化來制備皮革、模壓制品、紡織纖維、藥物或食品膠囊、照像底片、機動車零件和按鈕。
對于皮革制品來說，醛試劑的鞣革化通過在醛類鞣質(zhì)的基團與多肽鏈上至少兩個基團之間形成鍵來鞏固膠原的結(jié)構(gòu)。這樣就能獲得特定的皮革。
第二個應(yīng)用領(lǐng)域是蛋白質(zhì)的鞣革化以生產(chǎn)涂層、包衣或粘合劑的成膜組合物。
用途一般表現(xiàn)為自明膠、自血蛋白、自魚蛋白、自牛奶酪蛋白或者自植物蛋白制成粘合劑，例如用來粘結(jié)紙、紙板、微粒、木或者其它材料，通常將甲醛或乙二醛加進去以提高膠粘接頭的防水和防濕性，也提高其粘附性能。
第三個應(yīng)用領(lǐng)域是蛋白質(zhì)的鞣革化以開發(fā)食品，尤其是反芻動物的食品，用來生產(chǎn)“抗性”蛋白。
抗性蛋白是經(jīng)改性而使其較少被瘤胃中某些微生物酶降解的蛋白質(zhì)。
然而，在通過瘤胃之后，當(dāng)?shù)竭_(dá)皺胃和小腸時這些蛋白質(zhì)再次具有合乎要求的消化性。事實上，酸性pH和消化酶使這些蛋白質(zhì)離解從而使得它們再次可利用。
因而該制革過程使得反芻動物所攝取的食物被更好地消化，改善畜牧績效水準(zhǔn)(提高肉和牛奶的產(chǎn)量)。
然而，在這三個應(yīng)用領(lǐng)域方面，所使用的醛類鞣質(zhì)的主要缺點是它們的高毒性。
由于蟻醛非常高的反應(yīng)性，通常最常用的醛之一就是蟻醛(通用名也稱甲醛)。現(xiàn)在，由于其在環(huán)境溫度下呈氣態(tài)，該化學(xué)試劑列入對操作最有毒性和最有危險性的醛類鞣質(zhì)當(dāng)中。
在反芻動物的食品領(lǐng)域，為了修補有活性但也有毒性物質(zhì)的這種用途，人們已經(jīng)提議，例如在專利EP284548中，依靠一類特定的醛，舉例來說，醛糖，來進行制革反應(yīng)。
這些醛糖為木糖、核糖、甘露糖、乳糖以及葡萄糖。這些分子是無毒的，不像通常使用的醛類鞣質(zhì)。
然而，那份專利的教導(dǎo)卻揭示了為獲得該專利創(chuàng)造者所稱的“早期的”美拉德縮合反應(yīng)產(chǎn)物而不是要“中間的”美拉德產(chǎn)物，很好地控制該制革反應(yīng)是必要的。
也要必需選取所謂“正統(tǒng)的”食物，也就是食物中存在的一類具有游離胺官能團的蛋白質(zhì)相對于總蛋白質(zhì)的比例為1.5-1。
最后，必需在pH小于4下水解縮合產(chǎn)物并限制其中還原糖的百分比。
因此，EP284548專利中所披露的方法是太費力的，因而不能實現(xiàn)。
EP284548專利除提及醛糖外，在該專利申請中還提及一個酮糖。這就是果糖。
然而，鑒于其介于葡萄糖和甘露糖之間的中間還原性能，該含6個碳原子的酮糖僅僅是提及而已。EP284548專利僅僅是列舉了這個酮糖，沒有真真地推薦它。所述方法沒有使用其它的酮糖。
并且，據(jù)申請公司所知，其它的帶有酮官能基的糖的潛能和化學(xué)反應(yīng)性從來就不是本發(fā)明所涉及活性的領(lǐng)域的探索主題。
糖族中最簡單的酮糖是二羥基丙酮(或DHA)，也被稱作1，3-二羥基-2-丙酮，其為分子式CH2OH-CO-CH2OH化合物。
除了其在化妝部門的用途外，其改變皮膚表皮顏色的特性適于外用(“自己燙金”的效果)-單獨被使用或與赤蘚酮糖一起被使用-DHA因其抗氧化性、氣味-抑制性以及殺菌性(抗菌效果以及抗菌和抗真菌效果)而尤為出名。
DHA與丙酮酸的混合物尤其受到推薦，特別是用來確保肝臟和脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)含量的代謝控制。通過這種方式，然后才能控制哺乳動物中的脂質(zhì)/蛋白質(zhì)平衡。
這種用途是，例如，美國專利4351835中披露的，通過口服丙酮酸酯和DHA來防止哺乳動物的體重增加，或者美國專利4415575中披露，服用該藥物可提升動物中蛋白質(zhì)的濃度。
為闡明DHA另一為人所熟知的性能，也就是對令人不快的氣味的抑制效果，專利申請JP507803披露了DHA在阻止油或脂肪氣味散發(fā)中的用途。
DHA的殺菌作用，例如在專利CA1054434中披露了這部分作用。其用作食品添加劑，特別是在環(huán)境溫度下，通過將食品與DHA接觸而保藏食品(魚、肉、水果、蔬菜等)。
至于含4-5個碳原子的酮糖(也就是赤蘚酮糖、核酮糖或木酮糖)，不像DHA，根據(jù)文獻資料，似乎還沒對其內(nèi)在特性進行研究。
據(jù)申請公司所知，目前，后述分子僅被用作具有附加價值的產(chǎn)品的合成中間體，例如它們相應(yīng)的氫化產(chǎn)品(赤蘚糖醇、核糖醇、阿拉伯糖醇和木糖醇)。
綜上所述，可以得知，現(xiàn)在交聯(lián)劑的代用品還沒令人滿意，特別是礦物鞣質(zhì)、合成鞣質(zhì)以及醛類鞣質(zhì)的代用品，其生產(chǎn)和應(yīng)用簡單，并與常規(guī)的鞣劑相比具有同等的、或者甚至是改善的效力。
因此，值得本申請公司贊揚的是，經(jīng)漫長而沉悶的研究，他們提議用至少一種含3到5個碳原子的酮糖作為蛋白交聯(lián)劑的代用品。
在現(xiàn)有技術(shù)中，沒有任何提示含3到5個碳原子的酮糖可能適于鞣革蛋白以及可能替代所有的或者某些常見蛋白交聯(lián)劑的用途，特別是用于動物食品、生產(chǎn)涂層、包衣或粘合劑的成膜組合物以及制備可生物降解的或可再生的蛋白質(zhì)材料的蛋白質(zhì)制革領(lǐng)域。
所述的蛋白質(zhì)選自包括來自動物組織、牛奶或血液的蛋白質(zhì)，尤其如酪蛋白、明膠或膠原；來自谷類的蛋白質(zhì)，尤其如玉米、小麥或大米蛋白質(zhì)；來自高蛋白植物的蛋白質(zhì)，尤其如豌豆、紫花苜蓿、羽扇豆、大麥、小米或高粱的蛋白質(zhì)；來自油質(zhì)植物的蛋白質(zhì)，尤其如大豆蛋白，例如豆餅、油菜籽或亞麻蛋白質(zhì)，例如油菜籽餅、向日葵、落花生或者棉花蛋白質(zhì)；來自植物塊莖的蛋白質(zhì)，尤其如來自馬鈴薯或來自木薯的蛋白質(zhì)。
在本專利申請中，“來自動物組織的蛋白質(zhì)”是指來自除人以外的任何動物的組織的蛋白質(zhì)。
根據(jù)有利的實施方案，所述蛋白質(zhì)選自包括來自谷類的蛋白質(zhì)，尤其如玉米、小麥或大米蛋白質(zhì)；來自高蛋白植物的蛋白質(zhì)，尤其如豌豆、紫花苜蓿、羽扇豆、大麥、小米或高粱的蛋白質(zhì)；來自油質(zhì)植物的蛋白質(zhì)，尤其如大豆蛋白，例如豆餅、油菜籽或亞麻蛋白質(zhì)，例如油菜籽餅、向日葵、落花生或者棉花蛋白質(zhì)；來自植物塊莖的蛋白質(zhì)，尤其如來自馬鈴薯或來自木薯的蛋白質(zhì)。
優(yōu)選地，被至少一種含3到5個碳原子的酮糖完全地或部分地替代的交聯(lián)劑選自礦物鞣質(zhì)、合成鞣質(zhì)或醛類鞣質(zhì)。
根據(jù)本發(fā)明，含3到5個碳原子的酮糖選自二羥基丙酮、赤蘚酮糖、核酮糖和木酮糖，并優(yōu)選二羥基丙酮。
本申請公司已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，用作交聯(lián)劑代用品的含3到5個碳原子的酮糖的反應(yīng)性取決于其分子量(也即其碳原子數(shù))。這樣，被選取的酮糖被劃分為最強反應(yīng)性類(含3個碳原子的DHA)到最弱反應(yīng)性類(含5個碳原子的木酮糖和核酮糖)。
因而，將依據(jù)所需要的交聯(lián)度或者所要應(yīng)用的領(lǐng)域來選取一種或其它的酮糖。
根據(jù)含3到5個碳原子酮糖的第一個應(yīng)用方法，本申請公司已證實這樣的酮糖能有效地適于并且可被推薦用于動物食品的交聯(lián)蛋白，尤其是反芻動物食品或者寵物食品，或者水產(chǎn)業(yè)食品。
這些蛋白質(zhì)能特別選自動物蛋白、谷蛋白、來自高蛋白植物的蛋白、來自油質(zhì)植物的蛋白和來自植物塊莖的蛋白，尤其如豆餅、油菜籽餅、亞麻餅、牛奶蛋白、豌豆蛋白、紫花苜蓿蛋白、向日葵蛋白、羽扇豆蛋白、落花生蛋白、棉花蛋白、大麥蛋白、小米蛋白以及高粱蛋白、玉米蛋白、小麥(尤其是谷蛋白)蛋白以及大米蛋白，以及馬鈴薯和木薯蛋白。
四種含3到5個碳原子的酮糖中的每一種均可以無區(qū)別地用作醛類鞣質(zhì)的替代劑。
然而，本申請公司推薦，優(yōu)選使用DHA作為甲醛的替代品，用于開發(fā)動物食品、尤其反芻動物食品或?qū)櫸锸称坊蛩a(chǎn)業(yè)食品上的蛋白質(zhì)制革。
DHA作為醛類鞣劑代用品的選擇本身就值得注意，因為據(jù)申請公司的廣泛調(diào)研，DHA從未被披露用于開發(fā)畜牧食品蛋白質(zhì)的制革。
事實上，蛋白的交聯(lián)化在這兒直接獲得抗性蛋白，其是在瘤胃中很少溶解和很少可生物利用的蛋白質(zhì)，反之，到目前為止，DHA僅僅由于其自身-燙金特性而被使用。
必須指出的是，本發(fā)明沒有涉及常規(guī)用于化妝品中、或甚至有時在例如糖尿病并發(fā)癥的病理過程或蛋白老化中被提及的DHA的交聯(lián)性能。
申請公司已經(jīng)證實，與他們所制備的天然蛋白相比較，用DHA處理而得到的抗性蛋白縮合物顯示出改性的氨基酸，具體而言是一些具有游離胺官能團的氨基酸例如賴氨酸、精氨酸、谷氨酸以及天冬酰胺酸。
申請公司發(fā)現(xiàn)，所述氨基酸在蛋白質(zhì)中以單個、或甚兩倍與DHA縮合物的改性產(chǎn)品的形式存在。
例如，DHA優(yōu)選與賴氨酸和精氨酸縮合而形成亞胺。兩倍縮合物能產(chǎn)生交聯(lián)化產(chǎn)物。
此外，申請公司證實，DHA羰基官能團的α-位羥基通過與末端氨基酸縮合導(dǎo)致得到亞胺，該亞胺能與所述酸的羧基官能團環(huán)化，從而形成δ-內(nèi)酯。
申請公司進行的甲醛改性蛋白質(zhì)的對比研究也顯示，在組成所述蛋白質(zhì)的所有氨基酸當(dāng)中，酪氨酸趨向于被甲醛縮合反應(yīng)改性，而賴氨酸和精氨酸則不被改性。
不拘于任何理論的束縛，明顯地，正是酮糖與氨基酸的游離胺官能團、尤其是賴氨酸和精氨酸類型(對于油菜籽和豆餅)以及谷氨酸類型(對于小麥谷蛋白)的游離胺官能團的縮合反應(yīng)，才可能解釋本發(fā)明的蛋白質(zhì)縮合物所顯示的對所述蛋白質(zhì)經(jīng)歷的酶和微生物侵襲的抗性，例如在瘤胃中。
事實上，與這些氨基酸縮合能夠通過空間位阻或者通過所述蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的局部改造而阻止降解酶接近蛋白質(zhì)。
選自豆餅、油菜籽餅、亞麻餅、牛奶蛋白、豌豆蛋白以及小麥(谷蛋白)蛋白的蛋白質(zhì)尤其適于與DHA鞣革化。
根據(jù)含3到5個碳原子酮糖的第二個應(yīng)用方法，申請公司已顯示所述酮糖可以有利地替代用于交聯(lián)蛋白質(zhì)的常用試劑，該交聯(lián)蛋白質(zhì)用于制備涂層、包衣或粘合劑的成膜組合物這些蛋白質(zhì)可以是選自谷、塊莖、油質(zhì)植物、高蛋白植物、牛奶、血液以及動物組織的蛋白質(zhì)，優(yōu)選酪蛋白、明膠、玉米蛋白以及高蛋白植物分離物。
申請公司也推薦優(yōu)選地使用DHA。事實上，DHA無論在中性或堿性pH中，甚至是在環(huán)境溫度下，都表現(xiàn)出顯著的蛋白不溶性和交聯(lián)作用，后面還將對此加以例證。由此，在調(diào)整其防水性同時，使提高蛋白質(zhì)薄膜的機械性能也變得可能。
申請公司也希望強調(diào)，DHA的交聯(lián)作用隨著時間而增進，該特性已得到證實。
因此，DHA尤為適用于特定的應(yīng)用領(lǐng)域，而不像甲醛那樣，由于其瞬間的交聯(lián)性導(dǎo)致粘性很快增加。
由此，DHA的慢反應(yīng)活性使得可以預(yù)見DHA在形成用于制備具有或多或少水溶性的包裝袋、保護劑、包衣和表面膜組合物中的用途。
它們可以是用于去污劑領(lǐng)域(粉末、芳香劑、酶的涂層等)、紙表面處理領(lǐng)域(紙、紙板等)、冶金領(lǐng)域(金屬片等)、建筑領(lǐng)域(水泥或顏料的涂層、防亂畫的薄膜等)、農(nóng)業(yè)領(lǐng)域(種子的包衣、肥料或者植保產(chǎn)品的緩釋形式等)、獸醫(yī)領(lǐng)域(維生素和微量元素的包衣等)、藥學(xué)領(lǐng)域(活性成分的包衣和膠囊)或者食品領(lǐng)域(阻擋層、可食用層、食物產(chǎn)品的包裝，尤其熟食產(chǎn)品和糖果產(chǎn)品)的組分。
它們還可以是用于制備需要非常好的防水性和/或杰出的粘附性的粘合劑(礦物或有機粒子凝聚粘結(jié)劑、顏料粘結(jié)劑、墻紙粘合劑、標(biāo)簽粘合劑、木材粘合劑、軟木塞粘合劑、纖維材料的粘合劑)的組分。
尤其是，根據(jù)本發(fā)明獲得的涂層、包衣或粘合劑的成膜組合物可以包括各種添加劑，例如增塑劑、保存劑、抗氧化劑、疏水劑、防蝕劑、著色劑、香味劑以及活性成分。
根據(jù)含3到5個碳原子酮糖的第三個應(yīng)用方法，申請公司證實了交聯(lián)蛋白用于制備可生物降解或可再生的蛋白質(zhì)材料例如塑料薄膜、皮革制品、紡織纖維、明膠膠囊、膠囊或者蛋白食物組合物的可行性。
蛋白質(zhì)可被有利地選自來自谷類、塊莖、油質(zhì)植物、高蛋白植物、牛奶、血液和動物組織的蛋白質(zhì)，優(yōu)選膠原、酪蛋白、明膠、玉米蛋白以及高蛋白植物分離物。
它們可以是用于包裝工業(yè)(蛋白質(zhì)薄膜)、照像工業(yè)、制藥工業(yè)(膠囊和明膠膠囊)、橡膠工業(yè)(輪胎添加劑)、紡織工業(yè)(蛋白纖維)以及塑料工藝(模壓或擠壓物體)的組分。
此外，對于鞣化皮革，申請公司最特別地推薦使用DHA作為礦物鞣質(zhì)例如鉻或者醛類鞣質(zhì)例如甲醛的代用品。含4-5個碳原子的其它酮糖盡管其反應(yīng)性小，也可以被應(yīng)用。
根據(jù)本發(fā)明，用含3到5個碳原子的酮糖交聯(lián)蛋白，按以下一系列的步驟進行，其為1)將蛋白質(zhì)與至少一種含3到5個碳原子的酮糖接觸，以酮糖的干重相對于要處理的粗蛋白的干重計，所述酮糖的濃度為0.5-20％，優(yōu)選為0.5-10％，并更優(yōu)選為0.5-5％，2)維持蛋白質(zhì)與酮糖之間接觸大于幾分鐘的一段時間，優(yōu)選10-60分鐘之間，優(yōu)選時間30分鐘，溫度在20-105℃之間，優(yōu)選在35-105℃之間，3)回收所獲得的交聯(lián)蛋白。
無論所選用的含3到5個碳原子酮糖的種類、所要處理的蛋白質(zhì)以及想要應(yīng)用的領(lǐng)域，上述基本過程都有效。
然而，申請公司建議，根據(jù)預(yù)定的交聯(lián)度，依所選用的酮糖的功能團，調(diào)整時間/溫度對，這將在后面進行描述和例舉。
對于用于動物食品的蛋白質(zhì)與DHA的交聯(lián)化，申請公司建議，在該方法的第一步中，例如將蛋白質(zhì)和DHA接觸，其中以DHA的干重相對于要處理的粗蛋白的干重計，DHA濃度為0.5-10％，優(yōu)選為0.5-5％。
這樣被接觸的蛋白質(zhì)特別地選自豆餅、油菜籽餅、亞麻餅、豌豆蛋白、可溶的谷蛋白、天然的小麥谷蛋白以及抗乳血清，這將在后面進行舉例。
在挑選的攪拌器或者捏和機中進行接觸的溫度更特別地是45-100℃，持續(xù)30分鐘。
根據(jù)本發(fā)明，該本領(lǐng)域?qū)@樣獲得的與DHA革化的蛋白質(zhì)的分析，按照-可溶性氮/總氮的濃度，表示成％/干重，其反應(yīng)了未與DHA反應(yīng)的蛋白質(zhì)部分，用在評論La ache Laitière[乳牛]中，R.VERITE和D.DEMARQUILLY所著的題為Qualitédes matières azotées des aliments pour ruminants[反芻動物食物中含氮物質(zhì)的質(zhì)量]，出版INRA 1978年第154頁所述的方法測定。
-總氨基酸成分，用申請公司開發(fā)的方法測定。
該測定總氨基酸成分的方法包括24小時酸解蛋白質(zhì)，和在離子交換樹脂柱上通過高壓液相色譜分析釋放的氨基酸。
對于蛋白質(zhì)的水解，在14ml的6N HCl中，首先要稱算含2.8mg氮的樣品的重量。
然后將14ml的6N HCl加到所述重量的樣品中，混合物在真空下放置5分鐘。
待關(guān)閉試管之后，在115℃下放置24小時。
加入1ml的10mM的用作洗脫對照的正亮氨酸(Sigma公司所售)，通過燒結(jié)玻璃過濾冷卻過的溶液。
將濾液回收于250ml的圓底燒瓶中，在+4℃蒸發(fā)至干燥。殘余物用100ml的水洗滌并接著被蒸至干，并隨后用50ml的水反復(fù)洗滌兩次并再次蒸干。
最后，將干燥的殘余物回收于50ml的鋰Li280緩沖液(LC技術(shù)公司所售)中。
在陽離子交換柱(Pickering公司的標(biāo)準(zhǔn)號0353150柱子)上，通過HPLC進行色譜分析。
柱子用100ul的標(biāo)準(zhǔn)氨基酸溶液(Sigma公司所售，號AAS18)和20ul的正亮氨酸溶液進行校正。
將100ul的水解過的蛋白質(zhì)溶液注入到所述的柱子中，用茚三酮溶液以0.3ml/min速度洗脫氨基酸。
在570nm紫外檢測氨基酸，在得到的色譜圖上鑒別并定量氨基酸。
這一點將在后面進行舉例，對已被或未被DHA處理過的豆餅的總氨基酸成分進行測定，將其與用甲醛處理的所述豆餅的總氨基酸成分進行比較。
至于含4-5個碳原子的其它酮糖可用作相同應(yīng)用的蛋白質(zhì)的鞣劑的代用品的用途，通過在80℃溫度下測定木酮糖和核酮糖對賴氨酸的反應(yīng)性進行了證實，這也將在后面進行舉例說明。
對于用于制備薄膜的蛋白質(zhì)與DHA的交聯(lián)化，特別是對于酪蛋白、明膠或高蛋白植物分離物的交聯(lián)化，申請公司建議，所述方法的第一步中，將蛋白質(zhì)與DHA接觸，其中以DHA的干重相對于要處理的粗蛋白的干重計，DHA濃度為1-10％，更優(yōu)選為1-5％。
在環(huán)境溫度下進行接觸若干分鐘，這樣獲得的革化蛋白質(zhì)按照粘合劑粘性、不溶解作用以及所獲得薄膜的性能(尤其是機械抗性)進行分析，這一點將在后面進行舉例說明。
至于與DHA革化的皮革制品的制備，上面所述的步驟1-3系列也是適用的。
在閱讀下面所述的非限制性實施例時，本發(fā)明其它的特點和優(yōu)點將呈現(xiàn)出來。
實施例1用豆餅(Uneal公司所售)、油菜籽餅(Moulins Delsalle生產(chǎn))、豌豆蛋白(Cosucra公司所售，商標(biāo)PisaneHD)、可溶性谷蛋白(申請公司所售，商標(biāo)VitenCWS)、天然小麥谷蛋白(申請者公司所售，商標(biāo)Viten)以及抗乳血清蛋白(Armor蛋白質(zhì)公司所售，商標(biāo)Protarmor865)生產(chǎn)出與二羥基丙酮革化的6種蛋白質(zhì)縮合物。
DHA可以用純的(Sigma公司所售)，或者以微生物發(fā)酵上清液形式而直接被使用，其是從甘油的二酯副產(chǎn)品生產(chǎn)出(“工業(yè)”DHA)。
如果選用純的DHA，所述DHA首先被稀釋于水中以致最終的DHA/蛋白質(zhì)比例對應(yīng)于所要的值。
其通常為10-25％固體的溶液。
為以單體形式使其穩(wěn)定，DHA溶液被放置30分鐘。用0.1N氫氧化鈉調(diào)pH到6。
在捏和機中，在100℃下預(yù)熱蛋白質(zhì)30分鐘，加入DHA，使混合物混勻，在95-100℃溫度下，蛋白質(zhì)與DHA再接觸30分鐘。
表I中的結(jié)果可評價DHA的不溶特性，其是通過測定用DHA干重/所要處理的蛋白質(zhì)干重為1、2.5和5％量的DHA制革后的6種蛋白質(zhì)縮合物的可溶性氮/總氮的比率而得。
表I
DHA的量越高，可溶性氮/總氮的比率越低，但在1％的量下就已經(jīng)取得了顯著的效果。
豆餅與甲醛鞣制的比較試驗顯示，在1％DHA的量下處理所實現(xiàn)的蛋白質(zhì)不溶性效果，與1％甲醛的量下所獲得的效果相等。
因此，DHA是甲醛的代用品，對用于反芻動物食物的制革蛋白而言，無論它們的特性如何，其完全有效。
為研究溫度和接觸時間的影響，對油菜籽餅和豆餅進行平行試驗。
試驗顯示即使在環(huán)境溫度下也易于發(fā)生該反應(yīng)，在最初接觸的10分鐘內(nèi)就出現(xiàn)顯著的結(jié)果。
也要指出的是，大豆要比油菜籽具有更好的反應(yīng)性。
下面的表II提供了測定的天然蛋白質(zhì)(以大豆和油菜籽作為例子)的氨基酸結(jié)果，隨后是用1％的DHA處理過的蛋白質(zhì)的測定結(jié)果。
表II
豆餅蛋白和油菜籽蛋白與1％DHA的制革導(dǎo)致了賴氨酸的含量降低了10.8％(在大豆情況下)和12.7％(在油菜籽情況下)，并且精氨酸的含量降低了9.9％(在大豆情況下)和16.9％(在油菜籽情況下)，上述跡象還表明這些蛋白質(zhì)與DHA縮合的反應(yīng)更具體地是針對構(gòu)成多肽鏈的上述兩種氨基酸的游離胺官能團。
通過比較，甲醛與大豆蛋白的縮合反應(yīng)主要發(fā)生在肽鏈酪氨酸殘基。這樣就顯示，DHA像甲醛一樣容易地與用于反芻動物食品的蛋白質(zhì)結(jié)合，其反應(yīng)性與甲醛相等，從而減少過程的毒性。
實施例2為測定這樣得到的蛋白質(zhì)的抵抗度，用α-淀粉酶(Solvay Enzymes公司所售的Solvay Amylase-LF60)、纖維素酶(Genencor公司出售的Spezyme CP)和胃蛋白酶(Sigma公司售的Pepsine P-7000)的組合物一起消化DHA處理過的或未處理過的實施例1中的大豆餅。
該體外試驗可評估該制革反應(yīng)的效力和通過瘤胃后的蛋白質(zhì)可利用性。該胃蛋白酶消化也能模擬胃中的pH和酶降解。
因此為了評估，平行地進行了兩組消化試驗-第一組用兩種酶(AC方案)，也即α-淀粉酶和纖維素酶，以測定該制革反應(yīng)的效力(蛋白質(zhì)對瘤胃酶的抗性)；-第二組用三種酶(ACP方案)，也即α-淀粉酶、纖維素酶和胃蛋白酶(胃蛋白酶消化反映革化蛋白質(zhì)通過瘤胃后在胃中的消化率，這兒)。
按照下列方案進行革化或非革化蛋白質(zhì)的酶消化試驗1)稱出2.5g的干燥產(chǎn)品；2)加入pH4的25ml 0.075N HCl；3)在環(huán)境溫度下攪拌混合物1小時(如有必要的話，pH調(diào)到4)；4)加200ul的α-淀粉酶(60000MWU/ml.min)和200ul的纖維素酶(90GCU/ml)；5)在40℃水浴中，混合物攪拌放置3小時；6)加入pH1.2的25ml 0.075N HCl；7)攪拌混合物，檢驗pH(如有必要的話，pH調(diào)到1.5)；8)在該步中，加入500ul濃度為5g/l的剛配制的胃蛋白酶(在ACP方案的情況下)；9)然后將混合物置于40℃水浴中，不斷攪拌20小時；10)收集消化物質(zhì)，經(jīng)沉析分離，兩次收取15ml的上清液，在4000rpm下進行離心20分鐘；11)回收上清液，冷凍后貯藏。
通過分析經(jīng)三硝基苯磺酸(TNBS)處理過的蛋白質(zhì)的伯胺基的方法測定蛋白質(zhì)的水解度。
該方法包括-向250ul的待測樣品中加250ul的5％SDS(十二烷基硫酸鈉)；-混合物在50℃下放置30分鐘；
-加入pH為8.2的2ml磷酸鹽緩沖液；-加2ml的1％TNBS；-將混合物在50℃水浴中放置1小時；-加4ml的0.1M鹽酸；-將混合物在環(huán)境溫度下放置30分鐘；-取250ul，在340nm處讀取分光光度計；用10mM亮氨酸制得標(biāo)準(zhǔn)曲線。
樣品酶消化結(jié)果可表示為以mMol/l或％表示的亮氨酸等價物(LE)的濃度(相對于天然蛋白質(zhì)，TNBS響應(yīng)下降)。
下表III給出按實施例1所述的方法用不同劑量的DHA(1和2.5％)處理過的大豆餅所得到的消化值。
表III
需要指出，DHA的量越高，α-淀粉酶和纖維素酶消化豆餅的靈敏性越低(這反映在瘤胃中好的保護性)，而同時，胃蛋白酶的靈敏性好，其反映令人滿意的生物可利用性(通過瘤胃之后)。
在1％的DHA劑量下，革化蛋白實質(zhì)上沒被消化(％響應(yīng)值從62.2％到62％)。然而，加入胃蛋白酶使得所述蛋白質(zhì)的可利用度超過85％。
然而，應(yīng)該指出的是，2.5％的DHA劑量具有相當(dāng)可觀的保護效力，因為用胃蛋白酶處理后，僅57.5％的蛋白質(zhì)是可利用的。
因此，選用1％的DHA劑量用于反芻動物食品的蛋白質(zhì)的革化。
用油菜籽餅獲得了相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果，其顯示于下表IV中。
表IV
由此確認(rèn)，用DHA鞣革化的方法對大豆餅要比對油菜籽餅更加有效(參照實施例1的結(jié)論之一)。
實施例3本例子中，用添加了胰蛋白酶(自牛胰腺得到的胰蛋白酶T 8003，Sigma公司出售)的實施例2酶組合物消化DHA處理過的或未處理過的實施例1的大豆餅。
胰蛋白酶的生物體外試驗可模擬小腸中酶對通過胃之后的DHA處理過的或未處理過的蛋白餅的作用。
因此為了評估，平行地進行了三組消化試驗-第一組用兩種酶(AC方案)，也即α-淀粉酶和纖維素酶，以測定該制革反應(yīng)的效力(蛋白質(zhì)對瘤胃酶的抗性)；-第二組用三種酶(ACP方案)，也即α-淀粉酶、纖維素酶和胃蛋白酶；-第三組用四種酶(ACPT方案)，也即α-淀粉酶、纖維素酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶；按照實施例2的方案進行革化或非革化蛋白質(zhì)的酶消化試驗，直到步驟8。
步驟9和后面的步驟為9)將混合物置于40℃水浴中，并持續(xù)攪拌18小時；10)用4N的氫氧化鈉將混合物調(diào)至pH7.5；11)加500ul濃度5g/l的胰蛋白酶(蛋白質(zhì)的具體活性為10000U/mg)；12)攪拌混合物6小時；13)收集消化物質(zhì)，經(jīng)沉析分離，兩次收取15ml的上清液，在4000rpm下進行離心20分鐘；14)回收上清液，冷凍后貯藏。
還是通過分析實施例2中的三硝基苯磺酸(TNBS)處理過的蛋白質(zhì)的伯胺基的方法測定蛋白質(zhì)的水解度。樣品酶消化結(jié)果可表示為以mMol/l表示的亮氨酸等價物(LE)的濃度。
下表V給出按實施例1所述的方法用不同劑量的DHA(1和10％)處理過的大豆餅所得到的消化值。
表V
用油菜籽餅獲得相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果，其列于下表VI。
表VI
需要注意的是，淀粉酶和纖維素酶消化(AC方案)對油菜籽和大豆蛋白的游離胺官能團作用較小。因而該消化不可能恢復(fù)DHA革化過的蛋白質(zhì)。因此這些蛋白質(zhì)仍達(dá)不到瘤胃中(纖維素酶活性在瘤胃中是重要的)蛋白質(zhì)的胃蛋白酶和蛋白酶消化有效地釋放其它的胺官能團。因此，由大豆和油菜籽蛋白的DHA-制革法組成的反應(yīng)是可逆反應(yīng)，其能確保所述蛋白質(zhì)在胃和小腸中的生物利用性。
在實施例2中已指出，大豆蛋白較油菜籽蛋白更容易為所用的酶復(fù)合物所消化。
最后，所獲得的結(jié)果表明，用超過5％DHA的制革，該反應(yīng)的效力不再增大。
制革與胃蛋白酶和胰島素消化之間的折衷點在1％和2.5％的DHA之間。
實施例4
至于酪蛋白，用下列方法測定DHA的交聯(lián)作用首先制備普通的酪蛋白粘合劑，接著，所述粘合劑通過澆鑄來制備薄膜。
1)制備酪蛋白粘合劑的過程制備含15％酪蛋白H固體(SVPC公司出售)的液體溶液。
加200g/l的氫氧化鈉調(diào)pH至9、加熱到50℃以及在1000rpm轉(zhuǎn)速下攪拌20分鐘，得到完全溶解的溶液。
該溶液冷卻至環(huán)境溫度，加或者不加含50％固體的溶液形式的DHA，調(diào)pH到7.5或者到9(97％純度的DHA，Sigma公司出售的)。
在pH函數(shù)下，布氏粘度計測定DHA(50％溶液中含5％，也即相對于粗酪蛋白的2.5％干重)處理過的或者未處理過的酪蛋白粘合劑的結(jié)果，在下表中給出。
表VII顯示了沒有DHA情況下，不同pH下粘合劑的粘度測定值。
表VIII顯示了在pH7.5或者pH9時用2.5％的DHA處理過的粘合劑的粘度測定結(jié)果。
表VII
表VIII
*未測定在pH9時，加入含50％固體的5％DHA(2.5％干重/酪蛋白)，導(dǎo)致了粘合劑粘度非常明顯的逐步增加。
在pH7.5時，粘度增加慢，但顯著。
比較起來，等量甲醛的加入導(dǎo)致粘合劑實質(zhì)上瞬間地結(jié)成固體。
這些試驗證實了通過DHA使酪蛋白隨著時間逐步交聯(lián)的效果，在環(huán)境溫度下，其在pH9時要比pH7.5時作用更迅速。
2)用澆鑄制得酪蛋白薄膜的制備過程用Sheen 1102設(shè)備，通過澆鑄(平鋪在支撐體上)制備酪蛋白薄膜，厚度700um，接著，在20℃和65％相對濕度下慢慢干燥24小時。
下面的表IX給出所得的薄膜的特性。
表IX
由于薄膜在生物殺傷劑的存在下在水中超過一周時間仍保持不變，所以在pH7.5或者9時，含有2.5％干重/酪蛋白的DHA的薄膜的抗水性特別地好。這樣，DHA的加入賦予薄膜優(yōu)良的抗水性還同時改善其機械性能。
在這方面，應(yīng)該要提的是，甲醛的添加是不可能制造出這樣的薄膜，因為粘合劑的粘性瞬間增加的太大。
實施例5通過用本申請公司開發(fā)的測定可溶物質(zhì)含量的方法來檢測DHA使酪蛋白不溶的效果。
其包括將200ml的軟水加到一400ml大口杯中，在磁力攪拌下，向其中精確放入5g的待測樣品。
用磁力攪拌器攪拌15分鐘，使混合物勻質(zhì)化，然后在5500rpm下離心15分鐘。取25ml的上清液，放入配衡結(jié)晶器中。
將所述結(jié)晶器放在600瓦微波下10分鐘和900瓦微波下5分鐘，直至樣品完全脫水。然后放入干燥器中冷卻至環(huán)境溫度。重新稱重干燥器，記錄殘余物的質(zhì)量m。
可溶物質(zhì)含量(Csm)，以產(chǎn)品重量的百分比表示，由下列計算公式給出Csm＝(m×200×100)/(25×3)。
下表X給出了用含15％固體的酪蛋白溶液，按照實施例3所提供的條件，在環(huán)境溫度下通過澆鑄制得的酪蛋白薄膜的溶解性結(jié)果。
表X
在超過0.5％干重/酪蛋白的數(shù)量下使用DHA，酪蛋白薄膜的水溶性下降。為制得實質(zhì)上水不溶的薄膜，優(yōu)選其量為2.5％。
實施例6用豌豆蛋白分離物(Cosucra公司出售，商標(biāo)PisaneHD)的水溶液對甘露醇的包衣片劑(本申請公司出售，商標(biāo)PearlitolDC)進行試驗。
制備三組蛋白質(zhì)水溶液，其在環(huán)境溫度下具有500mPa.s的粘度值(在布氏粘度計上測得)-第一，在50℃時，將12g干重的PisaneHD，用100g的水分散，調(diào)最終的pH值至9.7(溶液A)；-第二，在50℃時，將12g干重的PisaneHD和1.2g的具有50％固體的DHA水溶液，用100g的水分散，調(diào)最終的pH值至9.7(溶液B)；-第三，在50℃時，將12g干重的PisaneHD、1.2g的具有50％固體的DHA水溶液和2.4g的甘油，用100g的水分散，調(diào)最終的pH值至9.7(溶液C)；通過噴霧法，用這些溶液來包衣，在Erweka包衣盤中放入200g的甘露醇片，在30rpm轉(zhuǎn)速下旋轉(zhuǎn)，在65℃溫度下，不斷地向里脈沖通入干空氣。
溶液的流速為在45分鐘內(nèi)完成包衣。最終形成的干蛋白質(zhì)包衣約占片劑最初重量的9％。
將7.5g的片劑放入45.5g的軟水中，進行機械攪拌，一段時間后測定水中出現(xiàn)的固體(以白利糖度表示)，測得甘露醇通過蛋白質(zhì)包衣的釋放速度。
所獲得的結(jié)果列于下表XI。
表XI
需要指出，經(jīng)片劑溶解的甘露醇釋放與未包衣的片劑和用無DHA的PisaneHD豌豆蛋白溶液包衣的片劑之間相似。
另一方面，用包含DHA的溶液B或溶液C包衣的片劑，甘露醇明顯表現(xiàn)出低的釋放，特別是在包含DHA結(jié)合甘油包衣的情況下。
上述溶液B和C適合于制造包衣，用于食品產(chǎn)品、植保產(chǎn)品(基于殺蟲劑、殺昆蟲劑、除草劑、殺真菌劑等)、獸醫(yī)產(chǎn)品、藥學(xué)產(chǎn)品、或者別的工業(yè)產(chǎn)品(基于酶、著色劑、殺生物劑等)，以獲得緩釋形態(tài)、防老化保護劑(紫外、氧化、溫度、水解等)或者具有改善的感官特性(光澤、顏色等)的組合物。
實施例7通過檢測核酮糖和木酮糖與用于反芻食物的蛋白質(zhì)的一個最具反應(yīng)活性的氨基酸賴氨酸，與谷氨酸比較起來，的反應(yīng)性來測定核酮糖和木酮糖的“制革”性能。
通常，通過醛與賴氨酸的ε-氨基結(jié)合獲得制革作用。然后用席夫堿，其產(chǎn)生可容易檢測的黃色。
一段時間后，用下列方法測定反應(yīng)介質(zhì)的染色情況-制備10ml的各為1M的核酮糖、木酮糖、賴氨酸和谷氨酸的軟水溶液，pH為6；-將5ml的氨基酸和5ml的待測酮糖加到一試管中；-混勻所得的混合物，將其放入80℃的油浴中以進行反應(yīng)；-在+4℃下終止反應(yīng)。
下表XII給出了核酮糖和木酮糖與賴氨酸和谷氨酸縮合反應(yīng)的動力學(xué)，以420nm處的吸光度表示結(jié)果，來反映獲得的染色情況。
作為對照產(chǎn)品，平行地進行賴氨酸與果糖縮合的比較試驗、核酮糖和木酮糖與對照氨基酸-谷氨酸的縮合試驗。
表XII
結(jié)果顯示，核酮糖和木酮糖也是蛋白質(zhì)保護的優(yōu)良鞣劑。
然而，應(yīng)該指出，游離氨基酸形成的復(fù)合物的動力學(xué)非常迅速，因為在反應(yīng)開始15分鐘之內(nèi)就出現(xiàn)了初步的縮合產(chǎn)物。
結(jié)果也顯示，果糖是差的鞣劑，其完全不適于本發(fā)明所針對的應(yīng)用領(lǐng)域。
因此，對用于動物食品的、或者用于制備成膜組合物的、或者可生物降解的或可再利用的物質(zhì)的蛋白質(zhì)來說，含5個碳原子的酮糖具有足夠的反應(yīng)性來有效的制革。
實施例8進行蝦類食品生產(chǎn)試驗，用木酮糖或者DHA代替尋常的尿素-甲醛(美國，IL，Joliet，Agresearch有限公司出售的Maxibond化合物)進行蛋白質(zhì)的制革。
下表XIII給出這樣制得的5份食品中的成分(以％重量/重量表示)含量(按3kg成分的總重量計算百分比)。
表XIII
要指出的是，2號食物是與Maxibond革化，3號食物是與木酮糖革化，4號食物是與DHA革化，5號食物是未革化的對照食物。
1號食物是與Maxibond革化的對照食物，其不含任何谷蛋白。
按照以下程序制得食物1)粉末狀的成分(也即小麥面粉、谷蛋白、魚肉、圓豆餅以及按規(guī)則的Maxibond)用Hobart行星式混合器以速度1混合3分鐘；2)加入大豆油和卵磷脂；3)混合物用Hobart行星式混合器以速度1勻質(zhì)化3分鐘；4)將混合物放入95℃的烤箱中，直至混合物的溫度達(dá)到80℃；5)在80℃下，將木酮糖或DHA溶解于水中；6)以需要的比例加入如此溶解過的木酮糖或DHA；7)混合物用Hobart混合器以速度1混合5分鐘；8)在低溫條件下，在下表XIV給出的條件下在Buhler單螺旋擠壓機上，組織化所獲得的混合物。
9)然后將該擠壓物在80℃的烤箱中干燥將近15小時。
表XIV
該組合物的特性以及如此制得的擠壓物的特性列于下表XV中。
表XV
*Nd＝未測定如預(yù)料中的，非革化的5號食物不穩(wěn)定；在海水中其迅速瓦解。
另一方面，與用尿素-甲醛革化的食物相比較，用木酮糖或DHA革化的食物顯示出顯著的穩(wěn)定性能。
而且，申請公司觀測到，1號和4號食物具有等同的抗水性。
由此能夠推定，DHA或者木酮糖能有利的代替更有毒性的鞣劑，例如尿素-甲醛，用于水產(chǎn)業(yè)應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.一種交聯(lián)蛋白質(zhì)的方法，其交聯(lián)劑為含3到5個碳原子的酮糖，并且所述蛋白質(zhì)選自來自動物組織、來自牛奶或來自血液的蛋白質(zhì)，尤其如酪蛋白、明膠或膠原；來自谷類的蛋白質(zhì)，尤其如玉米、小麥或大米蛋白質(zhì)；來自高蛋白植物的蛋白質(zhì)，尤其如豌豆、紫花苜蓿、羽扇豆、大麥、小米或高粱的蛋白質(zhì)；來自油質(zhì)植物的蛋白質(zhì)，尤其如大豆蛋白，例如豆餅、油菜籽或亞麻蛋白質(zhì)，例如油菜籽餅、向日葵、落花生或者棉花蛋白質(zhì)；來自植物塊莖的蛋白質(zhì)，尤其如來自馬鈴薯或來自木薯的蛋白質(zhì)。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白質(zhì)選自來自谷類的蛋白質(zhì)，尤其如玉米、小麥或大米蛋白質(zhì)；來自高蛋白植物的蛋白質(zhì)，尤其如豌豆、紫花苜蓿、羽扇豆、大麥、小米或高粱的蛋白質(zhì)；來自油質(zhì)植物的蛋白質(zhì)，尤其如大豆蛋白，例如豆餅、油菜籽或亞麻蛋白質(zhì)，例如油菜籽餅、向日葵、落花生或者棉花蛋白質(zhì)；來自植物塊莖的蛋白質(zhì)，尤其如來自馬鈴薯或來自木薯的蛋白質(zhì)。
3.一種交聯(lián)蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，所述方法包括1)將蛋白質(zhì)與至少一種含3到5個碳原子的酮糖接觸，以酮糖的干重相對于要處理的粗蛋白質(zhì)的干重計，所述酮糖的濃度為0.5-20％，優(yōu)選為1-10％，并更優(yōu)選為1-5％，2)維持蛋白質(zhì)與酮糖之間接觸大于幾分鐘的一段時間，優(yōu)選10-60分鐘之間，優(yōu)選為30分鐘，溫度在20-105℃之間，優(yōu)選在35-105℃之間，3)和回收所獲得的交聯(lián)蛋白。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于，所述含3到5個碳原子的酮糖選自二羥基丙酮、赤蘚酮糖、核酮糖和木酮糖，并優(yōu)選二羥基丙酮。
5.與含3到5個碳原子的酮糖交聯(lián)而得的蛋白質(zhì)，其可按照權(quán)利要求1-4任一項制得。
6.如權(quán)利要求5所述的交聯(lián)蛋白質(zhì)的用途，用于動物食物，尤其是反芻動物或者寵物的食物，或者用于水產(chǎn)業(yè)。
7.如權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于，所述交聯(lián)蛋白質(zhì)代替用礦物鞣質(zhì)處理過的蛋白質(zhì)，尤其如用鋅鹽鞣制的蛋白質(zhì)。
8.如權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于，所述交聯(lián)蛋白質(zhì)代替用醛類鞣質(zhì)處理過的蛋白質(zhì)，尤其如用甲醛、乙二醛或者戊二醛鞣制的蛋白質(zhì)，更尤其是用甲醛鞣制的蛋白質(zhì)。
9.如權(quán)利要求5所述的交聯(lián)蛋白質(zhì)的用途，用于制備涂層、包衣或粘合劑的成膜組合物。
10.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述交聯(lián)蛋白質(zhì)代替用合成鞣質(zhì)鞣制的蛋白質(zhì)，尤其如用表氯醇樹脂、聚酰胺-胺-表氯醇樹脂、聚乙烯亞胺樹脂或者異氰酸酯樹脂鞣制的蛋白質(zhì)。
11.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述交聯(lián)蛋白質(zhì)代替用醛類鞣質(zhì)鞣制的蛋白質(zhì)，尤其如用甲醛、乙二醛或者戊二醛鞣制的蛋白質(zhì)，更尤其是用甲醛鞣制的蛋白質(zhì)。
12.如權(quán)利要求5所述的交聯(lián)蛋白質(zhì)的用途，用于制備可生物降解的或者可再利用的蛋白質(zhì)材料，例如塑料薄膜、皮革制品、紡織纖維、明膠膠囊、膠囊、或者蛋白質(zhì)食物組合物。
13.如權(quán)利要求12所述的用途，其特征在于，所述交聯(lián)蛋白質(zhì)代替用礦物鞣質(zhì)鞣制的蛋白質(zhì)，尤其如鉻鞣制的蛋白質(zhì)。
14.如權(quán)利要求12所述的用途，其特征在于，所述交聯(lián)蛋白質(zhì)代替用醛類鞣質(zhì)鞣制的蛋白質(zhì)，尤其如用甲醛、乙二醛或者戊二醛鞣制的蛋白質(zhì)，更尤其是用甲醛鞣制的蛋白質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種交聯(lián)蛋白質(zhì)的方法，其交聯(lián)劑為含3到5個碳原子的酮糖，所述蛋白質(zhì)選自來自動物組織、來自牛奶或來自血液的蛋白質(zhì)，尤其如酪蛋白、明膠或膠原；來自谷類的蛋白質(zhì)，尤其如玉米、小麥或大米蛋白質(zhì)；來自高蛋白植物的蛋白質(zhì)，尤其如豌豆、紫花苜蓿、羽扇豆、大麥、小米或高粱的蛋白質(zhì)；來自油質(zhì)植物的蛋白質(zhì)，尤其如大豆蛋白，例如豆餅、油菜籽或亞麻蛋白質(zhì)，例如油菜籽餅、向日葵、落花生或者棉花蛋白質(zhì)；來自植物塊莖的蛋白質(zhì)，尤其如來自馬鈴薯或來自木薯的蛋白質(zhì)。
文檔編號C07K14/435GK1660886SQ200410103260
公開日2005年8月31日 申請日期2004年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月16日
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