專利名稱：可可茶提取物用于制備預(yù)防及改善疲勞及其臨床癥狀的藥物及食品的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然植物提取及應(yīng)用領(lǐng)域，尤其是涉及可可茶提取物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
物質(zhì)文明和精神文明急速發(fā)展的今天，人們?cè)诓粩嘟邮苄率挛锏耐瑫r(shí)也感受并正在承受來自過去未曾有過的各種新的精神壓力。有人夸張的概括知識(shí)爆炸的現(xiàn)代社會(huì)是一個(gè)精神壓力的時(shí)代，實(shí)際上這個(gè)說法也并不過分。一般所說的現(xiàn)代人疲勞多半是指精神壓力或精神疲勞。過去，作為一般意義上的疲勞多指疲勞感、倦怠感及食欲不振等身心狀態(tài)，同時(shí)也包括精神疲勞引起的睡眠障礙、意欲低下等多種臨床癥狀的一種廣泛概括。傳統(tǒng)的抗疲勞多從改善身體疲勞、食欲不振、營養(yǎng)缺損等方面著想，以提供營養(yǎng)補(bǔ)充劑為主。市售體育飲料一般是采用補(bǔ)充發(fā)汗后失去的維生素、氨基酸及礦物質(zhì)為主，而不能直接預(yù)防或減輕疲勞。實(shí)際目前消費(fèi)的強(qiáng)壯劑一般也多是采用維生素或氨基酸為原料。但是，強(qiáng)壯劑、體育飲料等營養(yǎng)劑對(duì)精神疲勞引起的神經(jīng)損傷誘發(fā)的各種臨床癥狀的確難以發(fā)揮治療效果。
“病從氣來”，盡管是人們經(jīng)常可以聽到的這一句傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中的經(jīng)典概述，但真正理解這句話的含意還應(yīng)該說是通過近年來科學(xué)研究所作出的解釋?，F(xiàn)在，人們已充分認(rèn)識(shí)到精神疲勞是可以引起多種生活習(xí)慣病的。一般認(rèn)為疲勞是由身體在接受各種刺激或精神壓力后所產(chǎn)生的緊張、不安、恐怖等的生理反應(yīng)。疲勞除對(duì)一些刺激原的特定反應(yīng)外，也存在生理上的共通反應(yīng)。如交感神經(jīng)—副腎髓質(zhì)系統(tǒng)或下垂體—副腎皮質(zhì)系統(tǒng)興奮時(shí)誘發(fā)腎上腺素分泌，使血壓上升，脈搏、呼吸頻率增加等，當(dāng)然精神疲勞也會(huì)促進(jìn)副腎皮質(zhì)釋放氫化可的松(cortisol)。這些反應(yīng)實(shí)際上也是身體的一種適應(yīng)性防御表現(xiàn)或稱疲勞反應(yīng)。概括的說，精神壓力通過作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，影響視丘下部繼發(fā)的各種適應(yīng)性防御反應(yīng)。身體的疲勞反應(yīng)一般是通過兩種途徑體現(xiàn)一種是通過交感神經(jīng)系統(tǒng)末梢釋放去甲腎上腺素(noradrenaline)或刺激副腎髓質(zhì)分泌腎上腺素(adrenalin)發(fā)揮作用；另一種疲勞情況傳導(dǎo)通路是通過視丘下部釋放促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin-releasing hormone)刺激下垂體分泌促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone，ACTH)，并作用于副腎皮質(zhì)促進(jìn)氫化可的松分泌來完成的。過去，人們常常使用人參等滋養(yǎng)強(qiáng)壯劑、vitaminE等抗氧化劑及營養(yǎng)補(bǔ)充劑作為抗疲勞劑使用。盡管上述方法對(duì)于改善精神疲勞確有一定療效，但最適宜的方法應(yīng)該說還是緩解精神緊張和抗不安。目前，臨床上廣泛使用的安眠藥或苯二氮卓(benzodiazepine)類鎮(zhèn)靜藥用于緩解精神疲勞，但這些藥物具有一定的副作用和依賴性而限制其使用范圍。
近年來的研究證明，精神疲勞作用交感神經(jīng)刺激腦廣泛部位釋放中樞神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素(noradrenaline)，并引起不安、緊張等精神癥狀。此外，也作用視丘下部促進(jìn)副腎皮質(zhì)釋放促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin-releasing factor)和增加下垂體、副腎皮質(zhì)分泌促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)。當(dāng)然交感神經(jīng)也分布在副腎髓質(zhì)，因此精神疲勞也會(huì)刺激腎上腺素(adrenalin)釋放入血液中。可以想象隨著疲勞的程度加深，持續(xù)時(shí)間增長，無疑會(huì)影響到身體很多臟器，結(jié)果引起像消化性潰瘍、虛血性心臟病、腦血管損害、高血壓、高脂血癥等癥狀，也會(huì)誘發(fā)或增加神經(jīng)癥、抑郁癥(depression)等的發(fā)病率。因此精神疲勞也被認(rèn)為是生活習(xí)慣病的起因之一。精神疲勞帶給人體的不健康因素，一般認(rèn)為是因體內(nèi)動(dòng)態(tài)平衡(homeostasis)被破壞所至。這可能也正是傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的病因論中所經(jīng)常提到的“病從氣來”的理由所在。精神疲勞誘發(fā)各種臨床癥狀的應(yīng)對(duì)方法過去多數(shù)采用對(duì)癥治療或使用安眠藥及抗不安劑。安眠藥用于一時(shí)性改善身心狀態(tài)，緩解疲勞。抗不安藥的一般臨床效果是緩和、改善身心損害引起的不安感、緊張感，睡眠、意識(shí)水平低下?，F(xiàn)在，廣泛使用的鎮(zhèn)靜藥苯二氮卓類藥物多數(shù)具有副作用，連用后中斷時(shí)又多會(huì)出現(xiàn)反跳現(xiàn)象及臨床依賴性，所以不宜頻繁使用?？梢哉f，藥物應(yīng)該僅作為改善或治療不安等神經(jīng)癥狀一種輔助手段，而且僅適合最必要、最少量、最短期間的使用。確切說鎮(zhèn)靜藥物或安眠藥難以稱為理想的抗疲勞劑。而人們更需要的是一種無催眠作用，無肌肉松弛作用，不產(chǎn)生健忘、耐性、依賴性等副作用的可以日常飲用，可以有效保持生物體動(dòng)態(tài)平衡，有效防止疲勞，改善身心狀態(tài)的健康飲料或健康食品。
茶的故鄉(xiāng)在中國南部，其根據(jù)之一是中國南部自然生長著多種多樣的雜種及變種的野生茶。一般人們知道，茶葉(Camellia sinensis L.O.Kuntze)是茶科茶屬植物的一種。早在1753 Carl von Linne已將茶葉記載為Thea sinensis L.。1887年Carl Ernst Otto Kuntze又將茶葉命名為Camellia sinensis(L.)O.Kuntze。之后，人們又不斷在茶屬植物中發(fā)現(xiàn)新品種，目前總數(shù)已超過200余種。1984年Chang & Bertholomew又將茶科植物再次分類。現(xiàn)在，茶葉歸屬于Camellia屬。根據(jù)Chang & Bertholomew在1984的分類Camellia屬又分Protocamellia、Camellia、Thea、及Metacamellia的4個(gè)亞屬。Thea亞屬中又包括Corallina、Brachyandra、Longipedicellata、Chrysantha、Calpandria、Thea、Longissima及Glaberrima組。其中Thea組中又有Quinquelocularis、Pentastylae、Gymnogyne及Sinensis 4個(gè)系。在Sinensis系中除傳統(tǒng)茶葉(Camellia sinensis)之外，還有C.pubicosta、C.angustifolia、C.fangchensis、C.ptilophylla及C.parvisepala等植物，可可茶(Camellia ptilophylla Chang)則是其中的一種。在植物分類上，可可茶是傳統(tǒng)茶葉(Camellia sinensis)的近緣種植物，被人們發(fā)現(xiàn)后又稱為新種茶。根據(jù)近年的調(diào)查結(jié)果，野生可可茶主要自然生長在廣東省龍門地區(qū)的狹窄范圍內(nèi)，長期以來為當(dāng)?shù)厝送ㄟ^殺青、半發(fā)酵、發(fā)酵等不同制茶方法制成綠茶、烏龍茶及紅茶等茶葉用于日常飲用。至今為止沒有發(fā)現(xiàn)飲用可可茶的副作用及不安感的現(xiàn)象。長期以來當(dāng)?shù)厝艘矊⒖煽刹栌米鹘】挡鑱盹嬘?，可可茶可以說是一種飲用安全的日常飲料?？煽刹璧闹饕卣鞑煌趥鹘y(tǒng)茶葉中的甲基黃嘌呤(methyxanthine)類代謝途徑。茶葉中由可可堿轉(zhuǎn)化為咖啡堿時(shí)需要一種可可堿氮-甲基轉(zhuǎn)移酶(theobromine 1N-methyltranserase)的作用，而可可茶因缺少傳統(tǒng)茶中所含有的該酶而使其嘌呤生物堿(purine alkaloids)的代謝停止在可可堿階段而不能生成咖啡堿(Biosynthesis and Metabokism ofPurine Alkaloids in Leaves of Cocoa Tea(Camellia ptilophylla)J.Plant Res.，111599-604，1998)。又因其茶中含有可可(cacao)中(或日常食用chocolate)的主要活性成分可可堿，所以被稱為可可茶(cocoa tea)。由于可可堿是一種在咖啡堿化學(xué)結(jié)構(gòu)的1位上不存在甲基的化合物，在活性上表現(xiàn)出與咖啡堿不同的生理作用，如對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的緩解作用，一些鎮(zhèn)靜活性等。因此，可可茶又被稱作睡前可以飲用的休息茶。實(shí)際上，野生可可茶含有微量的咖啡堿，但經(jīng)過本發(fā)明人的多年研究，現(xiàn)在已培育出完全無咖啡堿的純種可可茶。由于可可茶不含咖啡堿，所以也適用于老年、孕婦、兒童、胃腸功能低下或心臟不健康等人的飲用。近年來有關(guān)可可茶的生產(chǎn)動(dòng)向?yàn)檠芯空呒捌髽I(yè)所關(guān)注。
近年來，人們非常關(guān)心對(duì)天然物質(zhì)生理活性的研究，特別是對(duì)茶類所具有生物功能更為關(guān)注。人類飲茶已有數(shù)千年的歷史。自古以來茶葉的各種健康功效早以為人們所知，茶葉的健康功效一般被認(rèn)為是來自多酚及咖啡堿的生物活性。人們知道咖啡堿具有促進(jìn)身體新陳代謝，提高大腦集中注意力，增加工作能力等活性?？Х葔A也是一種臨床用藥物，主要用于嗜睡、倦怠、腎性浮腫、偏頭痛、高血壓性頭痛等癥狀的改善。“喝杯茶提提神”是人們經(jīng)常聽到的一句話，實(shí)際上也是來自對(duì)茶葉中咖啡堿藥理作用的一種心理期待。人們知道，作為生命單位的細(xì)胞在接受各種情況刺激時(shí)相應(yīng)做出各種生物反應(yīng)。細(xì)胞所從事生理活動(dòng)，實(shí)際是一種細(xì)胞內(nèi)各種各樣的酶促反應(yīng)過程。當(dāng)然，酶促反應(yīng)過程是在一定的啟動(dòng)因子控制下進(jìn)行，并不是在盲目的反應(yīng)。環(huán)磷酸腺苷(Adenosine 3’，5’-cyclicmonophosphate，cAMP)則是細(xì)胞啟動(dòng)因子控制系統(tǒng)之一。腺苷酸環(huán)化酶(Adenylate cyclase)又稱為3’，5’-環(huán)磷酸腺苷合成酶(3’，5’-cyclic AMPsynthetase)是cAMP-啟動(dòng)因子控制系統(tǒng)的最初反應(yīng)酶。腺苷酸環(huán)化酶(Adenylate cyclase)的活化促進(jìn)cAMP合成及細(xì)胞內(nèi)的cAMP濃度上升的同時(shí)，一個(gè)激酶(cAMP依賴性蛋白激酶)活化，并與其他酶磷酸化(phosphorylation)結(jié)合的同時(shí)，啟動(dòng)因子開始啟動(dòng)。這種擔(dān)當(dāng)細(xì)胞內(nèi)信息遞質(zhì)的化學(xué)物質(zhì)又被稱作第二信使(second messenger)。當(dāng)然，細(xì)胞內(nèi)也存在一種名為磷酸二酯酶(phosphodiesterases)的cAMP分解酶。咖啡堿抑制磷酸二酯酶，減少細(xì)胞內(nèi)部cAMP分解，增加細(xì)胞內(nèi)的cAMP濃度，活化細(xì)胞內(nèi)的各種酶促反應(yīng)。此外，咖啡堿及黃嘌呤(xanthin)類化合物對(duì)腺苷(adenosine)受體的直接阻斷作用也是這類化合物的藥理作用之一。
很多研究已證明，腺苷在腦內(nèi)蓄積會(huì)引起嗜睡，睡眠時(shí)腺苷被腦細(xì)胞重新回收，使腦內(nèi)腺苷水平降低又使人恢復(fù)清醒?？Х葔A作用于腺苷受體，競(jìng)爭(zhēng)性抑制腺苷與受體結(jié)合。實(shí)際上，咖啡堿對(duì)大腦并無興奮作用，而這種作用多是來自腦細(xì)胞不能接受腺苷的作用而引起的。當(dāng)然，咖啡堿抑制腺苷受體，會(huì)使大腦的內(nèi)源性谷氨酸鹽(glutamine)、多巴胺(dopamine)、endorphin等興奮作用活性物質(zhì)處為優(yōu)勢(shì)，而使中樞處于興奮狀態(tài)。正是根據(jù)這個(gè)原因，咖啡堿的興奮作用受到大腦中固有多巴胺等內(nèi)源性中樞性遞質(zhì)的作用范圍的限制。對(duì)咖啡因的輕度依賴性，實(shí)際是一種習(xí)慣性，一種個(gè)人嗜好。再有，喝茶利尿是個(gè)常識(shí)。其根據(jù)是咖啡堿阻斷腎臟的腺苷受體，影響腎血流量。所以有人根據(jù)這個(gè)原理通過飲茶來改善腎性浮腫。
正是這樣，咖啡堿作用于神經(jīng)突觸(synapse)，結(jié)果可以提高中樞神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能及增加反應(yīng)能力，改善嗜睡及倦怠感?？Х葔A也可以促進(jìn)腎上腺素分泌，刺激大腦增強(qiáng)注意力及記憶能力。也有一些研究證明咖啡因促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂肪酸作為能量源游離，提高運(yùn)動(dòng)持久力?？Х葔A對(duì)血管的作用也是因作用血管部位不同而不同，咖啡堿擴(kuò)張腦血管，有利于改善偏頭痛及高血壓性頭痛。此外，咖啡堿也直接作用于骨骼肌，增強(qiáng)肌肉收縮力，減輕疲勞。
咖啡堿是一種白色粉末，微針狀結(jié)晶(水合物)或六角柱狀結(jié)晶(非水合物)狀化合物。無味、口感苦澀。咖啡因微溶于水，但隨溫度上升溶解度增加，例如，溶解1g咖啡因在常溫需46ml水，80℃降至5.5ml，而用沸水則僅需在1.5ml?？Х葔A對(duì)熱穩(wěn)定，熔點(diǎn)為238℃，升華溫度在178℃。咖啡因的分子式為C8H10N4O2，分子量為194.19?？Х葔A分子內(nèi)因含有非氨基酸性氮原子，故又被稱作植物生物堿。此外，咖啡因分子的基本骨架是由含有碳分子、氮分子的6元環(huán)并5元環(huán)構(gòu)成，因此其學(xué)名又稱這類化合物為嘌呤生物堿?？Х葔A的嘌呤環(huán)上含有2個(gè)氧原子和3個(gè)甲基(-CH3)?；瘜W(xué)上將含有2個(gè)氧原子的嘌呤環(huán)物質(zhì)稱為黃嘌呤(xanthin)類化合物，而含有甲基的黃嘌呤類化合物則稱甲基黃嘌呤類化合物?？Х葔A是甲基黃嘌呤類化合物的代表物質(zhì)又名1，3，7-Trimethylxanthin。當(dāng)然，茶堿(theophylline，1，3-Dimethylxanthin)及可可堿(theobromine，3，7-Dimethylxanthin)也同屬于這類化合物。茶葉中含有少量的茶堿，而可可堿則是可可(cacao)豆的主要活性成分。
甲基黃嘌呤類化合物，隨著甲基數(shù)增加，脂溶性也隨之增大，因此更容易通過血腦屏障?？Х葔A的中樞興奮作用也并非僅僅對(duì)健康有益。例如咖啡堿不僅作用于大腦皮質(zhì)，還隨劑量增加作用于延髓誘發(fā)精神不安，大劑量也可以興奮脊髓。過度使用咖啡堿會(huì)引起痙攣或出現(xiàn)肌肉震顫。盡管咖啡堿可以直接作用心肌，增加收縮及心跳數(shù)，增大心血輸出量。但大量使用則會(huì)引起心跳過速或心律不齊。月經(jīng)前后攝取咖啡堿會(huì)增加憂郁、不安感?？Х葔A容易通過胎盤及轉(zhuǎn)移進(jìn)入母乳，所以對(duì)沒有咖啡堿分解酶的胎兒或乳兒來講，咖啡堿在體內(nèi)的代謝時(shí)間比成人要長，負(fù)面影響表現(xiàn)的要多。一些研究證明咖啡堿減少胎盤的血流量而影響胚胎的發(fā)育。臨床醫(yī)生從咖啡堿增加胎兒及乳兒心臟的收縮力等影響上考慮，提倡妊娠及授乳者需控制對(duì)咖啡堿的攝取量。消化性胃潰瘍需減少對(duì)咖啡堿的攝取也為一般人所知。肝功能低下者因咖啡堿的代謝緩慢也有必要對(duì)其攝取進(jìn)行控制。
從飲料中除去咖啡堿的技術(shù)最初是由德國開發(fā)，近年來歐美各國對(duì)不含咖啡堿的咖啡及紅茶的消費(fèi)量大幅上升。有統(tǒng)計(jì)認(rèn)為美國對(duì)不含咖啡堿的咖啡的需求量約占咖啡市場(chǎng)的20％左右。
盡管可可茶的主要成分可可堿與咖啡堿同屬甲基黃嘌呤類化合物，但可可堿對(duì)中樞并不像咖啡堿那樣顯示過強(qiáng)的興奮作用，而是對(duì)中樞神經(jīng)表現(xiàn)為一種緩和作用效果，給人一種平穩(wěn)氣氛。當(dāng)然，可可堿與咖啡堿也有相近的藥理效果，如利尿作用等。此外，可可堿可以降低血壓，有益健康?？煽蓧A的這些作用可能正是人們喜愛可可茶的原因?？煽刹枧c傳統(tǒng)茶葉相同，含有多酚、茶氨酸等活性成分，也可以說可可茶與傳統(tǒng)茶一樣有茶澀、茶甜、茶香。可可茶的特征是含有約3～6％的可可堿。人們知道，可可廣泛消費(fèi)的理由不僅僅其特有的茶澀香，也出自可可保護(hù)身心及陶冶心境方面?？煽傻臐阏莵碜云浠钚猿煞挚煽蓧A。有人調(diào)查自然界中23萬種以上的有花植物中，含有可可堿的植物不到數(shù)十種?？煽刹韬?～6％可可堿，其含量可以說不少于原產(chǎn)于中南美的可可。近年來人們通過對(duì)腦波等研究中證明可可堿不僅可以使人身心更加舒適，也具有提高大腦集中注意力的效果。當(dāng)然，可可堿的利尿、鎮(zhèn)靜、擴(kuò)張血管、促進(jìn)血流、疲勞恢復(fù)及降低血壓效果也早已為人所知?？煽蓧A與咖啡堿的最大不同是不影響人們的睡眠。而且，茶葉的抗氧化作用，抗菌作用，對(duì)血中膽固醇的調(diào)節(jié)等作用更是令人矚目。傳統(tǒng)茶葉提取物及主要活性成分多酚類化合物具有抑制糖吸收作用等已有報(bào)導(dǎo)。盡管可可茶是傳統(tǒng)茶葉的近緣種植物，對(duì)可可茶的抗疲勞活性尚無任何應(yīng)用方面的探討。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明目的在于提供以可可茶(Camellia ptilophylla Chang)提取物及可可茶有效成分為原料，制備的安全性高并可以長期服用，不存在副作用的用于減輕、改善精神疲勞及疲勞引起的抑郁癥(suppression)、不安癥、自律神經(jīng)異?？哼M(jìn)及高血壓等各種臨床癥狀的預(yù)防、改善和治療的藥物的用途。所述的藥物包括有效治療劑量的可可茶提取物，以及藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的另一發(fā)明目的在于提供以可可茶提取物及可可茶有效成分為原料，制備的可用于身心疲勞或疲勞引起的各種臨床癥狀的預(yù)防或改善的健康食品、食品或食品添加劑的用途。本發(fā)明通過對(duì)精神疲勞及疲勞引起的各種臨床癥狀的預(yù)防、改善無疑會(huì)有利于體力恢復(fù)及增強(qiáng)。因此，本發(fā)明提供的可可茶及可可茶有效成分可可堿為原料的健康食品、食品或食品添加劑也可以用于維持、恢復(fù)、增進(jìn)體力及使精神安定的健康食品組成物。
本研究以小鼠的自發(fā)運(yùn)動(dòng)(ambulatory activity)、懸垂實(shí)驗(yàn)(traction test)為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，評(píng)價(jià)可可茶提取物對(duì)小鼠不安的減輕效果及抗疲勞作用。其結(jié)果證明，可可茶提取物對(duì)小鼠行為表現(xiàn)出有意義的生理活性。此外，發(fā)明人也確認(rèn)可可茶活性成分可可堿對(duì)上述實(shí)驗(yàn)具有明顯的藥理效果。同時(shí)發(fā)明人在使用可可茶及活性成分可可堿對(duì)戊巴比妥誘發(fā)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷挠绊懼邪l(fā)現(xiàn)，可可茶具有與傳統(tǒng)茶葉活性成分咖啡堿不同的中樞藥理作用。
本發(fā)明所述的可可茶提取物是采用熱水或水與甲醇、乙醇等低級(jí)醇類、丙酮等極性溶劑的一種或二種以上的任意混合溶劑進(jìn)行提取的。
因?yàn)榭煽刹柚械纳飰A(alkaloid)及兒茶酚類(catechins)都屬于小分子化合物，一般用水提取即可，也可用不同濃度的低級(jí)醇類、丙酮等極性溶劑或任意混合溶劑來提取。在提取時(shí)，隨著醇的添加，可可茶中活性成分的回收率會(huì)有所增加。盡管用水提取效果不如用醇添加提取，但隨著水溫增加，以及提取時(shí)間的延長，也可以達(dá)到與醇提取法相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。因此，對(duì)可可茶中活性成分的提取而言，上述提取方法及其任意組合都可得到本發(fā)明所述的提取物。
鑒于可可茶提取物是以藥劑或飲料作為最終產(chǎn)品開發(fā)，故從安全性角度考慮提取溶劑盡量選擇乙醇為宜。提取時(shí)可可茶與溶劑的比率沒有特定限制，但一般可可茶與溶劑的比例以5∶1～50范圍為宜。本發(fā)明對(duì)提取溫度沒有特定限制，從室溫到溶劑沸點(diǎn)范圍都可適用。當(dāng)然室溫、常壓及在溶劑沸點(diǎn)范圍內(nèi)提取最為理想。提取時(shí)間從10秒到24小時(shí)范圍都可以。在提取可可茶提取物時(shí)，根據(jù)需要也可以在溶劑中添加重碳酸鈉(sodium bicarbonate)、抗壞血酸鈉鹽(sodiumascorbate)等物質(zhì)。這些提取方法不會(huì)影響可可茶本來具有的生物活性。
本發(fā)明提供的可可茶提取物固形劑使用量一般在0.1％至40％(W/W)，因?yàn)橥ǔｏ嬃咸砑訚舛纫话阍?.1％至40％(W/W)范圍較為適宜。在這個(gè)濃度范圍內(nèi)，可可茶提取物適于直接服用，容易被消費(fèi)者接受。當(dāng)然，作為添加物的可可茶提取物隨著加入量的增大，可能會(huì)出現(xiàn)苦澀感覺。其解決辦法可以根據(jù)市場(chǎng)需要及消費(fèi)者的心理要求改換劑型，例如使用片劑、顆粒劑、膠囊劑等劑型。低濃度可可茶提取物溶液可以作為日常飲料提供給消費(fèi)者。
本發(fā)明提供的可可茶及可可茶活性成分，可以用于各種口服劑型投放市場(chǎng)，提供預(yù)防或改善精神疲勞及疲勞引起的各種臨床癥狀為目的的醫(yī)藥品、健康食品、食品或食品添加劑。當(dāng)然，可可茶提取物也可以與常用的賦形劑等醫(yī)藥用擔(dān)體結(jié)合并制劑化。必要時(shí)，也可以添加一些防腐劑、抗氧化劑、色素、甜味劑等制劑添加物用于各種制劑。
比較適宜的可可茶賦形劑，一般考慮有乳糖、白糖、D-甘露醇、淀粉、結(jié)晶纖維素等。潤滑劑一般應(yīng)采用硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石粉等。溶劑通常使用精制水、乙醇、丙二醇等。防腐劑一般采用氯丁醇、芐醇、二羥基乙酸等?？寡趸瘎┩ǔＲ詠喠蛩猁}、抗壞血酸等比較適宜。
本發(fā)明提供的可可茶提取物，可以其原型、提取物或粉末添加到制品中用于口服?？煽刹杼崛∥镆部膳c其它飲料原料結(jié)合制成一定的飲料制品，如可可茶飲料、炭酸飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料、運(yùn)動(dòng)飲料、豆乳等?？煽刹杼崛∥锸称愤€可以考慮制成餅干、巧克力類、糖果類、口香糖類、快餐點(diǎn)心類、果凍點(diǎn)心類、面包、豆腐、酸奶酪等日常食品。
本發(fā)明提供的可可茶及可可茶活性成分作為緩和、改善精神疲勞及疲勞引起的抑郁癥(suppression)、不安癥、自律神經(jīng)異?？惯M(jìn)及高血壓等各種臨床癥狀為目的醫(yī)藥品、健康食品、食品或食品添加劑用于日常生活。可可茶對(duì)郁癥狀、不安癥、自律神經(jīng)異?？哼M(jìn)的預(yù)防、改善作用是通過改善包括中樞作用下的小鼠睡眠、懸垂時(shí)間及自發(fā)運(yùn)動(dòng)頻度的實(shí)驗(yàn)中得以證實(shí)和確認(rèn)的。本發(fā)明提供的可可茶提取物給藥量，根據(jù)使用者相對(duì)健康狀況、年齡、性別及體重等條件也可以選擇，一般成人以60Kg為平均體重，一天中口服可可茶提取物可以考慮在3g至10g范圍內(nèi)，可以分次服用。當(dāng)然10g以上也不存在副作用等問題。
本發(fā)明所述的可可茶提取物含有以下活性成分可可堿(theobromine)、gallogatechin-gallate(GCG)、1，3，4，6-tetragalloyl-glucose(1，3，4，6-GA-glc)及gallogatechin-3，5-digallate(GC-3，5-diGA)。
每克可可茶提取物中，上述活性成分可可堿的含量至少為200mg，GCG、1，3，4，6-GA-glc及GC-3，5-diGA的含量至少為40mg、25mg及100mg。
發(fā)明人首次從可可茶提取物中分離得到三個(gè)成分，經(jīng)核磁共振(NMR)等波譜學(xué)方法測(cè)定化學(xué)結(jié)構(gòu)，確認(rèn)為以下三種已知化合物1)gallogatechin-gallate(GCG)2)1，3，4，6-tetragalloyl-glucose(1，3，4，6-GA-glc)3)gallogatechin-3，5-digallate(GC-35diGA)上述三種成分在傳統(tǒng)茶葉品種中尚無報(bào)道，可能是含量很少或很難檢測(cè)出的。
發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)證明，與咖啡堿相比，可可堿也顯示出一定的中樞喚醒作用傾向?？煽刹杼崛∥锟擅黠@地延長了戊巴比妥誘發(fā)的小鼠睡眠時(shí)間?？煽刹璧倪@一效果可能來自于可可堿以外的成分，并很可能是來自新分離到的上述三種活性成分。
本發(fā)明提供和證明了可可茶及可可茶有效成分可可堿為原料可以用于減輕、改善精神疲勞及疲勞引起的不安癥、自律神經(jīng)異?？哼M(jìn)等多種癥狀的預(yù)防、改善或治療劑。同時(shí)本發(fā)明也提供精神疲勞及疲勞引起的各種臨床癥狀預(yù)防、改善為目的健康食品、食品及食品添加劑。
根據(jù)本發(fā)明所提供的研究結(jié)果證明，含有多酚、可可堿等活性物質(zhì)為主成分的可可茶不僅可以作為嗜好品、食品提供于消費(fèi)市場(chǎng)，也可以作為健康食品及醫(yī)療用品用于改善精神疲勞、抗不安及預(yù)防因身心疲勞引起的各種臨床癥狀。本發(fā)明提供的可可茶因可能改善精神疲勞初期段階的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，因此可以講是一種注重于從根本上對(duì)疲勞的緩和效果。此外，可可茶及其主成分可可堿是具有長期食品經(jīng)驗(yàn)的安全性高的活性成分，可以用于日常飲用，在無意識(shí)中預(yù)防、減輕疲勞、緩和不安等癥狀。特別是腦力及體力作業(yè)前后服用效果更好。本發(fā)明是以可可茶及可可茶有效成分可可堿為原料，提供安全并長期服用可能，不存在副作用的減輕、改善精神疲勞及疲勞引起的抑郁癥、不安癥、自律神經(jīng)異?？哼M(jìn)及高血壓等各種臨床癥狀的預(yù)防、改善和治療劑。當(dāng)然可可茶及可可茶有效成分可可堿為原料也可作為健康食品、食品或食品添加劑用于身心疲勞或疲勞引起的各種臨床癥狀的預(yù)防或改善。本發(fā)明通過對(duì)精神疲勞及疲勞引起的各種臨床癥狀的預(yù)防、改善無疑會(huì)有利于體力恢復(fù)及增進(jìn)。因此，本發(fā)明提供的可可茶及可可茶有效成分可可堿為原料的健康食品、食品或食品添加劑也可以用于維持、恢復(fù)、增進(jìn)體力及精神安定的健康食品組成物。由于本發(fā)明提供的可可茶是天然來源物質(zhì)且有長期作為食品的經(jīng)驗(yàn)和不含有咖啡堿等特點(diǎn)。不僅可適用于一般成年人，作為一種作用緩和的健康茶也適用于老年人、兒童及體力低下者。可可茶也可以應(yīng)市場(chǎng)的需要作成綠茶、紅茶及烏龍茶提供于消費(fèi)者。


圖1為可可茶提取物的HPLC分析圖譜。
圖2為小鼠自發(fā)運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果分析圖，圖中1為對(duì)照組，2為給藥咖啡堿10mg/kg，3為給藥可可堿10mg/kg，4為給藥可可茶150mg/kg。
圖3為可可茶對(duì)戊巴比妥誘發(fā)小鼠睡眠時(shí)間的影響結(jié)果分析圖，圖中1為對(duì)照組，2給藥咖啡堿30mg/kg，3為給藥可可堿30mg/kg，4為給藥可可茶150mg/kg，5為給藥可可茶300mg/kg。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明可以通過以下實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說明，但并不僅僅局限于以下實(shí)施例。
實(shí)施例一可可茶提取物的制備取可可茶干燥葉100g，加入90℃熱水2000ml浸提4分鐘。提取液經(jīng)紗布濾過后，將濾液在1000rpm、5分鐘離心分離，回收上清液冷凍干燥即成。可可茶葉的上述冷凍干燥提取物用于本發(fā)明的下列實(shí)施例。
實(shí)施例二可可茶提取物的HPLC分析將上述可可茶提取物配制成1％水溶液后，經(jīng)Sep-PaktC18 Cartridge(5ml，Waters制)吸附過濾，水洗凈后，用乙腈洗脫分離。隨后，將250mg所得分離組分在Develosil C30-UG-5(20mm×250mm，野村化學(xué)制)柱上，在0.05％三氟乙酸(TFA)存在條件下，用5-30％乙腈按線性梯度洗脫方式(5ml/mim，180分鐘，220nm紫外檢測(cè))洗脫分離?；厥盏玫降姆蛛x組分，再用YMC-Pak ODS(20×250mm、YMC制)柱，在0.1％TFA存在下，用20-25％乙腈按線性梯度洗脫方式(6ml/mim、60分鐘，280nm紫外檢測(cè))洗脫精制。結(jié)果如圖1所示，從中分離得到與傳統(tǒng)茶葉不同的三個(gè)組分。
可可茶提取物的HPLC分析條件。層析柱資生堂capcell pak C18(φ4.6mm×150mm)，流動(dòng)相A＝0.05％TFA/水；B＝90％CH3CN/0.05％TFA/水。B5→B35％(13分鐘)，B35％→B70％(7分鐘)，B70％(5分鐘)。檢測(cè)A280nm峰面積定量。PDA 220～500nm檢測(cè)。
從可可茶提取物中分離得到三個(gè)成分，經(jīng)核磁共振(NMR)等波譜學(xué)方法測(cè)定化學(xué)結(jié)構(gòu)，確認(rèn)為以下三種在傳統(tǒng)茶葉品種中含量很少或很難檢測(cè)出的已知化合物gallogatechin-gallate(GCG)、1，3，4，6-tetragalloyl-glucose(1，3，4，6-GA-glc)及gallogatechin-3，5-digallate(GC-35diGA)。
左側(cè)為EGCG的結(jié)構(gòu)式 右側(cè)為gallogatechin-gallate(GCG)的結(jié)構(gòu)式傳統(tǒng)茶主要含有EGCG。
1，3，4，6-tetragalloyl-glucose(1，3，4，6-GA-glc)的結(jié)構(gòu)式 gallogatechin-3，5-digallate(GC-3，5-diGA)的結(jié)構(gòu)式實(shí)施例一所得到的可可茶提取物中各成分的含量如下Theobromine 278.75EGC 43.25(+)C 62.75EC 14.50EGCG 37.25GCG 199.001，3，4，6-GA-glc54.75GC-3，5-diGA 32.50
由于用水提取、用醇提取、用其他極性溶劑提取，或者混合法提取，每克可可茶提取物中，上述活性成分GCG、1，3，4，6-GA-glc及GC-3，5-diGA的含量有或多或少的差別，但發(fā)明人的不同實(shí)驗(yàn)多次表明，活性成分GCG、1，3，4，6-GA-glc及GC-3，5-diGA的含量至少為40mg、25mg及100mg。
實(shí)施例三小鼠自發(fā)運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)(ambulatory activity test)使用7周齡雄性ICR小鼠(由日本CLEA公司購入)。小鼠在室溫(23±1～2℃)、濕度55±5％、換氣回?cái)?shù)12～15回/時(shí)，照明時(shí)間12小時(shí)/日(上午7點(diǎn)開燈，下午7點(diǎn)關(guān)燈)；固形飼料CE-2(CLEA公司)；自由飲水的飼養(yǎng)條件下預(yù)備飼養(yǎng)1周后進(jìn)行試驗(yàn)。本發(fā)明使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物運(yùn)動(dòng)量測(cè)定裝置(LaboratoryAmbulometer MODEL SMA-10 O’HARA & Co.，Ltd.(Quantitative analysis ofthe effects of lithium on the reverse tolerance and the c-Fos expressioninduced by methamphetamine in mice.Brain Research Protocols.411-18，1999.))測(cè)定小鼠自發(fā)運(yùn)動(dòng)量。檢體給藥30分鐘前將小鼠放置在實(shí)驗(yàn)裝置內(nèi)適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境，并記錄每10分鐘的合計(jì)自發(fā)運(yùn)動(dòng)量。小鼠經(jīng)30分鐘的適應(yīng)后，不同濃度的檢樣以0.1ml/10g量經(jīng)口給藥。給藥后每10分鐘為記錄單位計(jì)算小鼠自發(fā)運(yùn)動(dòng)量，連續(xù)測(cè)定120分鐘。對(duì)照組小鼠經(jīng)口給藥同容量水。每實(shí)驗(yàn)組使用小鼠10只。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，于對(duì)照組小鼠相比給于咖啡堿的小鼠的自發(fā)運(yùn)動(dòng)顯著增加。而給與可可堿的小鼠自發(fā)運(yùn)動(dòng)于對(duì)照組小鼠相比無顯著變化，給與可可茶提取物的小鼠的自發(fā)運(yùn)動(dòng)有一定的減少傾向。
實(shí)施例四小鼠懸垂實(shí)驗(yàn)(traction test)使用7周齡雄性ICR小鼠(日本CLEA公司購入)，小鼠在室溫23±1～2℃、濕度55±5％、換氣次數(shù)12～15回/小時(shí)，照明時(shí)間12小時(shí)間/日(上午7點(diǎn)開燈，下午7點(diǎn)關(guān)燈)，固體飼料CE-2(CLEA公司)，自由飲水的飼養(yǎng)條件下預(yù)備飼養(yǎng)1周后進(jìn)行試驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)方法每實(shí)驗(yàn)組使用小鼠10只，檢體經(jīng)口給藥30分鐘后開始試驗(yàn)。懸垂實(shí)驗(yàn)是將小鼠前肢懸掛在直徑2mm、長50cm、平行高度50cm的金屬線上，測(cè)定小鼠的懸垂時(shí)間。結(jié)果如表一所示表一咖啡堿、可可堿及可可茶提取物對(duì)小鼠懸垂時(shí)間(秒)的影響

結(jié)果證明，與咖啡堿給藥后引起小鼠的不安相比，可可堿對(duì)懸垂時(shí)間無明顯的效果，可可茶提取物給藥小鼠的懸垂時(shí)間有一定的延長傾向。
實(shí)施例五可可茶對(duì)戊巴比妥誘發(fā)小鼠睡眠時(shí)間的影響使用7周齡雄性ICR小鼠(由日本CLEA公司購入)，小鼠在室溫23±1～2℃、濕度55±5％、換氣次數(shù)12～15回/小時(shí)、照明時(shí)間12小時(shí)/日(上午7點(diǎn)開燈，下午7點(diǎn)關(guān)燈)，固體飼料CE-2(CLEA公司)，自由飲水的飼養(yǎng)條件下進(jìn)行1周預(yù)備飼養(yǎng)后，進(jìn)行試驗(yàn)。每實(shí)驗(yàn)組使用小鼠10只，各檢體在50mg/kg戊巴比妥靜脈注射30分鐘前經(jīng)口給藥。記錄小鼠的正向反射作為睡眠時(shí)間，分析咖啡堿、可可堿及可可茶提取物對(duì)苯巴比妥誘發(fā)小鼠睡眠時(shí)間的影響。
結(jié)果如圖3所示，證明對(duì)照組小鼠睡眠時(shí)間為36.57±0.5分，30mg/kg咖啡堿給藥的小鼠睡眠時(shí)間為30.19±0.23分，咖啡堿縮短小鼠的睡眠時(shí)間，對(duì)戊巴比妥誘發(fā)小鼠睡眠時(shí)間顯示出一定的喚醒促進(jìn)作用。與咖啡堿相比可可堿也顯示出一定的中樞喚醒作用傾向。但可可茶提取物則明顯的延長了戊巴比妥誘發(fā)的小鼠睡眠時(shí)間(*P＞0.05，by student t-test)?？煽刹璧倪@一效果可能來自于可可堿以外的成分。很可能是來自新分離到的上述三種活性成分。
權(quán)利要求
1.可可茶提取物用于制備預(yù)防及改善疲勞及其臨床癥狀的藥物的用途。
2.可可茶提取物用于制備預(yù)防及改善疲勞及其臨床癥狀的食品的用途。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的可可茶提取物含有活性成分可可堿，每克可可茶提取物中可可堿的含量至少為200毫克。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的可可茶提取物含有活性成分gallogatechin-gallate，即GCG，每克可可茶提取物中GCG的含量至少為40毫克。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的可可茶提取物含有活性成分1，3，4，6-tetragalloyl-glucose，即1，3，4，6-GA-glc，每克可可茶提取物中1，3，4，6-GA-glc的含量至少為25毫克。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的可可茶提取物含有活性成分gallogatechin-3，5-digallate，即GC-3，5-diGA，每克可可茶提取物中GC-3，5-diGA的含量至少為100毫克。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的可可茶提取物是采用熱水或水與低級(jí)醇類、極性溶劑的一種或二種以上的任意混合溶劑進(jìn)行提取的。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于所述的可可茶提取物在提取時(shí)，在溶劑中添加重碳酸鈉和/或抗壞血酸鈉鹽。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述的藥物包括有效治療劑量的可可茶提取物，以及藥學(xué)上可接受的載體。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于所述的可可茶提取物的固形劑使用量為0.1％至40％重量比。
全文摘要
本發(fā)明公開了可可茶提取物及其活性成分用于制備預(yù)防及改善疲勞及其臨床癥狀的藥物及食品的應(yīng)用。本發(fā)明是基于可可茶提取物及可可茶有效成分可可堿在小鼠自發(fā)運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)、睡眠實(shí)驗(yàn)及懸垂實(shí)驗(yàn)中顯示有意義的效果中得以確認(rèn)和證明的。
文檔編號(hào)C07H1/08GK1562281SQ20041002672
公開日2005年1月12日 申請(qǐng)日期2004年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月1日
發(fā)明者栗原博, 姚新生, 葉創(chuàng)興 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)