專(zhuān)利名稱(chēng)：從生物物質(zhì)中提取大環(huán)內(nèi)酯的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從生物物質(zhì)，特別是發(fā)酵液中提取大環(huán)內(nèi)酯，例如他克莫司的方法。
背景技術(shù)：
大環(huán)內(nèi)酯是含有一個(gè)或多個(gè)脫氧糖作為取代基的多元內(nèi)酯環(huán)。紅霉素、阿奇霉素和克拉霉素是具有抑菌和/或殺菌活性的大環(huán)內(nèi)酯。
他克莫司(FK 506)也是一種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗菌素，它同時(shí)也是一種免疫抑制劑。它對(duì)于T淋巴細(xì)胞具有選擇性的抑制效果，比環(huán)孢素更有效。
大環(huán)內(nèi)酯通常是通過(guò)發(fā)酵獲得的，盡管有一些合成路線是已知的。本提取法與先有技術(shù)相比，具有若干優(yōu)點(diǎn)，例如，整個(gè)發(fā)酵液可以用作本方法的原料(″整體發(fā)酵液法″)，使用疏水性提取溶劑獲得有效的提取收率，留下大部分水溶性雜質(zhì)，并且一步脫除菌絲體。在25℃以上的溫度和減壓下減壓濃縮使得在不發(fā)生他克莫司的沉淀或分解的情況下獲得高的溶劑蒸發(fā)速率。本發(fā)明另外的優(yōu)點(diǎn)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將顯而易見(jiàn)。
發(fā)明概述一方面，本發(fā)明涉及一種獲得大環(huán)內(nèi)酯，特別是他克莫司的方法，其包括如下步驟用疏水性提取溶劑，特別是其中疏水性提取溶劑選自正丁醇，異丁醇，乙酸或甲酸的C2-C6直鏈和支鏈酯，C3-C6直鏈或支鏈脂肪族酮，鹵代甲烷，鹵代乙烷，和在25℃為液體且在大氣壓下的沸點(diǎn)低于約150℃的芳香烴，來(lái)提取含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)，以獲得大環(huán)內(nèi)酯在疏水性提取溶劑中的溶液，其中被提取生物物質(zhì)的pH值為約5.5至約13。
另一方面，本發(fā)明涉及一種獲得大環(huán)內(nèi)酯，特別是他克莫司的方法，其包括如下步驟用疏水性提取溶劑，特別是其中疏水性提取溶劑選自正丁醇，異丁醇，乙酸或甲酸的C2-C6直鏈和支鏈酯，C3-C6直鏈或支鏈脂肪族酮，鹵代甲烷，鹵代乙烷，和在25℃為液體且在大氣壓下的沸點(diǎn)低于約150℃的芳香烴，來(lái)提取含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)，其中提取在約2℃到約70℃，特別是約15℃到約35℃的溫度下進(jìn)行，以獲得大環(huán)內(nèi)酯在疏水性提取溶劑中的溶液。
再一方面，本發(fā)明涉及一種獲得大環(huán)內(nèi)酯，特別是他克莫司的方法，其包括如下步驟用疏水性提取溶劑，特別是其中疏水性提取溶劑選自正丁醇，異丁醇，乙酸或甲酸的C2-C6直鏈和支鏈酯，C3-C6直鏈或支鏈脂肪族酮，鹵代甲烷，鹵代乙烷，和在25℃為液體且在大氣壓下的沸點(diǎn)低于約150℃的芳香烴，來(lái)提取含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)，其中提取在約2℃到約70℃，特別是約15℃到約35℃的溫度，且pH值為約5.5至約13，特別是約7.5至約13的條件下進(jìn)行，以獲得大環(huán)內(nèi)酯在疏水性提取溶劑中的溶液。
再一方面，本發(fā)明涉及一種獲得大環(huán)內(nèi)酯，特別是他克莫司的方法，其包括如下步驟用疏水性提取溶劑，特別是其中疏水性提取溶劑選自正丁醇，異丁醇，乙酸或甲酸的C2-C6直鏈和支鏈酯，C3-C6直鏈或支鏈脂肪族酮，鹵代甲烷，鹵代乙烷，和在25℃為液體且在大氣壓下的沸點(diǎn)低于約150℃的芳香烴，來(lái)提取含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)，其中提取在約2℃到約70℃，特別是約15℃到約35℃的溫度，且pH值為約5.5至約13，特別是約7.5至約13的條件下進(jìn)行，以獲得大環(huán)內(nèi)酯在疏水性提取溶劑中的溶液；濃縮含大環(huán)內(nèi)酯的溶液；用柱色譜處理濃縮后的溶液，得到至少一個(gè)含大環(huán)內(nèi)酯的級(jí)分，其為含大環(huán)內(nèi)酯的溶液；并從溶液中結(jié)晶出大環(huán)內(nèi)酯。
再一方面，本發(fā)明涉及一種獲得大環(huán)內(nèi)酯，特別是他克莫司的方法，其包括如下步驟用疏水性提取溶劑，特別是其中疏水性提取溶劑選自正丁醇，異丁醇，乙酸或甲酸的C2-C6直鏈和支鏈酯，C3-C6直鏈或支鏈脂肪族酮，鹵代甲烷，鹵代乙烷，和在25℃為液體且在大氣壓下的沸點(diǎn)低于約150℃的芳香烴，來(lái)提取含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)，以獲得大環(huán)內(nèi)酯在疏水性提取溶劑中的溶液；將含大環(huán)內(nèi)酯的溶液與提取后的含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)分離；濃縮分離出來(lái)的含大環(huán)內(nèi)酯的溶液；用柱色譜處理濃縮后的溶液，得到至少一個(gè)含大環(huán)內(nèi)酯的級(jí)分，其為含大環(huán)內(nèi)酯的溶液；任選將溶液濃縮；并通過(guò)冷卻，特別是冷卻至約20℃或更低的溫度而從任選濃縮的分離后的溶液中結(jié)晶出大環(huán)內(nèi)酯；并分離結(jié)晶出的大環(huán)內(nèi)酯。
再一方面，本發(fā)明涉及一種獲得大環(huán)內(nèi)酯，特別是他克莫司的方法，其包括如下步驟用疏水性提取溶劑，特別是其中疏水性提取溶劑選自正丁醇，異丁醇，乙酸或甲酸的C2-C6直鏈和支鏈酯，C3-C6直鏈或支鏈脂肪族酮，鹵代甲烷，鹵代乙烷，和在25℃為液體且在大氣壓下的沸點(diǎn)低于約150℃的芳香烴，來(lái)提取含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)，以獲得大環(huán)內(nèi)酯在疏水性提取溶劑中的溶液；將含大環(huán)內(nèi)酯的溶液與提取后的含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)分離；濃縮分離出來(lái)的含大環(huán)內(nèi)酯的溶液；用柱色譜處理濃縮后的溶液，得到至少一個(gè)含大環(huán)內(nèi)酯的級(jí)分，其為含大環(huán)內(nèi)酯的溶液；任選將溶液濃縮；并通過(guò)將濃縮的分離后的溶液與選自乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯、己烷、庚烷、和水的結(jié)晶溶劑混合而從任選濃縮的分離后的溶液中結(jié)晶出大環(huán)內(nèi)酯；并分離結(jié)晶出的大環(huán)內(nèi)酯。
再一方面，本發(fā)明涉及一種獲得大環(huán)內(nèi)酯，特別是他克莫司的方法，其包括如下步驟用疏水性提取溶劑，其中該疏水性提取溶劑選自正丁醇，異丁醇，乙酸或甲酸的C2-C6直鏈和支鏈酯，C3-C6直鏈或支鏈脂肪族酮，鹵代甲烷，鹵代乙烷，和在25℃為液體且在大氣壓下的沸點(diǎn)低于約150℃的芳香烴，來(lái)提取含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)，以獲得大環(huán)內(nèi)酯在疏水性提取溶劑中的溶液，其中所述含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)是從選自筑波鏈霉菌(Streptomyces tsukubaensis)、吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)、和變青鏈霉菌(Streptomyceslividans)的微生物得到的，且其中被提取的生物物質(zhì)的pH值為約5.5至約13。
再一方面，本發(fā)明涉及一種從含他克莫司的生物物質(zhì)獲得他克莫司的方法，其包括如下步驟用選自乙酸正丁酯、乙酸異丁酯、乙酸叔丁酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、甲酸乙酯、丁基甲基酮、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、和甲苯的疏水性提取溶劑，在約2℃到約70℃，特別是約15℃到約35℃的溫度下，在pH值為約5.5到約13，特別是約7.5到約13的條件下，提取含他克莫司的生物物質(zhì)，以獲得他克莫司在疏水性提取溶劑中的溶液，其中所述含他克莫司的生物物質(zhì)是由選自筑波鏈霉菌、吸水鏈霉菌、和變青鏈霉菌的微生物發(fā)酵得到的整體發(fā)酵液；將含他克莫司的溶液與提取后的含他克莫司的生物物質(zhì)分離；濃縮所述含他克莫司的溶液；用柱色譜處理濃縮后的溶液，以得到至少一個(gè)含大環(huán)內(nèi)酯的級(jí)分，其為含大環(huán)內(nèi)酯的溶液；任選將溶液濃縮；并通過(guò)冷卻或?qū)⑵渑c選自乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯、己烷、庚烷、和水的結(jié)晶溶劑混合而從任選濃縮的分離后的溶液中結(jié)晶出他克莫司，由此形成結(jié)晶他克莫司沉淀；并分離出他克莫司。
再一方面，本發(fā)明涉及一種從含他克莫司的生物物質(zhì)獲得他克莫司的方法，其包括如下步驟用乙酸異丁酯，在約2℃到約70℃，特別是約15℃到約35℃的溫度下，提取含他克莫司的生物物質(zhì)，以獲得他克莫司在乙酸異丁酯溶劑中的溶液，其中所述含他克莫司的生物物質(zhì)是由選自筑波鏈霉菌、吸水鏈霉菌、和變青鏈霉菌的微生物發(fā)酵得到的整體發(fā)酵液；將含他克莫司的乙酸異丁酯溶液與提取后的含他克莫司的生物物質(zhì)分離；濃縮所述含他克莫司的乙酸異丁酯溶液；用柱色譜處理濃縮后的溶液，以得到至少一個(gè)含大環(huán)內(nèi)酯的級(jí)分，其為含大環(huán)內(nèi)酯的溶液；任選將溶液濃縮；并通過(guò)將其冷卻到約20℃或更低的溫度，或?qū)⑵渑c選自乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯、己烷、庚烷、和水的結(jié)晶溶劑混合而從任選濃縮的分離后的溶液中結(jié)晶出他克莫司，由此形成結(jié)晶他克莫司沉淀；并分離出他克莫司。
發(fā)明詳述在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種從含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)中獲得大環(huán)內(nèi)酯，優(yōu)選他克莫司(亦稱(chēng)FK 506)的方法，其包括用疏水性提取溶劑從含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)中提取大環(huán)內(nèi)酯以獲得大環(huán)內(nèi)酯在疏水性提取溶劑中的溶液的步驟，由此可獲得大環(huán)內(nèi)酯。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種從含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)獲得大環(huán)內(nèi)酯，優(yōu)選他克莫司的方法，它通過(guò)用疏水性提取溶劑提取所述生物物質(zhì)以獲得大環(huán)內(nèi)酯的溶液，隨后濃縮該溶液，得到濃縮液，由此分離出大環(huán)內(nèi)酯。
含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)是由或通過(guò)使用可產(chǎn)生大環(huán)內(nèi)酯的微生物，例如通過(guò)發(fā)酵或培養(yǎng)等途徑產(chǎn)生大環(huán)內(nèi)酯的細(xì)菌或真菌得到的。微生物的發(fā)酵可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法進(jìn)行，例如參見(jiàn)10Kirk Othmer Encyclopedia of Chemical Technology，361頁(yè)，Surjit S.Sengha的文章，F(xiàn)ermentation，(Jacquiline I.Kroschwitz編，第4版，1993)。
優(yōu)選的含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)是含他克莫司的生物物質(zhì)，特別是可通過(guò)使用產(chǎn)生他克莫司的微生物發(fā)酵而獲得的發(fā)酵液，例如美國(guó)專(zhuān)利4,894,366，5,116,756，5,624,842，5,496,727，和5,622,866中所述的筑波鏈霉菌，其新的突變菌株，吸水鏈霉菌，和變青鏈霉菌。
對(duì)由可產(chǎn)生大環(huán)內(nèi)酯的微生物發(fā)酵產(chǎn)生的發(fā)酵液進(jìn)行過(guò)濾所獲得的菌絲體和濾液同樣也是可用于本發(fā)明實(shí)踐的生物物質(zhì)。未被過(guò)濾或被純化用以分離菌絲體的整體發(fā)酵液，即由可產(chǎn)生大環(huán)內(nèi)酯的微生物發(fā)酵產(chǎn)生的″整體發(fā)酵液″是優(yōu)選用于本發(fā)明實(shí)踐的含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)。當(dāng)使用整體發(fā)酵液時(shí)，本方法可以稱(chēng)為″整體發(fā)酵液法″。
用疏水性提取溶劑提取含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)，這種疏水性提取溶劑是能溶解大環(huán)內(nèi)酯，特別是他克莫司的溶劑，但是它在25℃下僅微溶于水。優(yōu)選的疏水性提取溶劑是乙酸或甲酸的C2-C6直鏈和支鏈酯如乙酸異丁酯，C3-C6直鏈或支鏈脂肪族酮，鹵代甲烷如二氯甲烷，鹵代乙烷如二氯乙烷，和在25℃下液體且在大氣壓下的沸點(diǎn)低于約150℃的芳香烴。正或異丁醇也可以用作疏水性提取溶劑。
優(yōu)選作為疏水性提取溶劑的是乙酸異丁酯，乙酸正丁酯，乙酸叔丁酯，乙酸乙酯，乙酸丙酯，甲酸乙酯，丁基甲基酮(2-己酮)，二氯甲烷，氯仿，四氯化碳，和甲苯。
乙酸乙酯和乙酸異丁酯是特別優(yōu)選的疏水性提取溶劑。
用來(lái)形成大環(huán)內(nèi)酯溶液的提取操作可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的或類(lèi)似的常規(guī)的方法和設(shè)備進(jìn)行。所述方法和設(shè)備的選擇必須只提供適當(dāng)?shù)臄嚢璨⑹沟萌芤耗芘c提取后的含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)分離，或者使得提取混合物轉(zhuǎn)移到分離裝置中。提取可以在約2℃到約70℃之間任何合理而可行的溫度下進(jìn)行，優(yōu)選，提取溫度為約15℃到約35℃。本領(lǐng)域技術(shù)人員將知道如何根據(jù)含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)、疏水性提取溶劑、使用的設(shè)備和溫度來(lái)優(yōu)化提取時(shí)間。提取結(jié)束時(shí)，提取混合物包括大環(huán)內(nèi)酯在疏水性提取溶劑中的溶液以及殘余的提取后的含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，提取在沒(méi)有事先進(jìn)行任何純化處理，例如沒(méi)有過(guò)濾除去菌絲體的生物物質(zhì)如發(fā)酵液上進(jìn)行。在這種情況下，提取被稱(chēng)為整體發(fā)酵液提取。
提取可以在pH值約1到約13之間的任何pH值下進(jìn)行。優(yōu)選，進(jìn)行提取的pH值在約5.5到約13之間，最優(yōu)選約7.5到約13。生物物質(zhì)，特別是發(fā)酵液的pH值可以使用適當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)堿，例如NH4OH、NaOH、KOH、LiOH或Ca(OH)2來(lái)調(diào)節(jié)，這些僅僅是舉例。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在pH值為約5.5到約13的生物物質(zhì)上進(jìn)行提取時(shí)特別有益，尤其是就大環(huán)內(nèi)酯的純度而論。優(yōu)選，pH值是堿性pH，特別是約7.5到約13。
提取后，將大環(huán)內(nèi)酯在疏水性提取溶劑中的溶液與提取混合物分離，并且，在優(yōu)選實(shí)施方案中，濃縮得到濃縮液。分離可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的或類(lèi)似的常規(guī)的方法和設(shè)備完成，例如潷析、分液漏斗分離、和使用液-液-離心分離。
與提取后的含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)分離開(kāi)來(lái)的含大環(huán)內(nèi)酯的溶液經(jīng)濃縮得到濃縮液。濃縮可以在普通大氣壓(本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，這一大氣壓在約760mmHg的均值附近微小變化)下進(jìn)行，或可以借助于例如真空泵或水泵的幫助在減壓下進(jìn)行。濃縮優(yōu)選在約25℃以上的溫度下進(jìn)行。濃縮的進(jìn)行一直到含大環(huán)內(nèi)酯溶液的體積降低到其初始體積的約0.2％-約2.0％或者更低，以得到濃縮的含大環(huán)內(nèi)酯的溶液(″濃縮液″)。粗品他克莫司可以從濃縮液中分離出來(lái)。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，對(duì)濃縮液用硅膠柱色譜進(jìn)行處理。應(yīng)用的色譜法可以參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利4,894,366，其全文在此引入作為參考。
為了進(jìn)行處理，將濃縮液(濃縮的含大環(huán)內(nèi)酯的溶液)裝到硅膠柱上。裝載時(shí)，可以將濃縮液與能溶解大環(huán)內(nèi)酯的溶劑，例如乙酸乙酯結(jié)合并與硅膠成漿。將溶劑從漿液中脫除，得到的硅膠負(fù)載有大環(huán)內(nèi)酯及來(lái)自于濃縮液的其他物質(zhì)。將負(fù)載的硅膠裝入柱的頂部，并且，如果希望的話，使裝填洗脫劑通過(guò)該柱。然后用洗脫劑洗脫該柱。
洗脫劑可以是等組成的(isochratic)，即具有恒定的組成，或洗脫劑的組成在洗脫過(guò)程中可以發(fā)生變化。優(yōu)選的洗脫劑包括乙酸乙酯和己烷的混合物。
收集級(jí)分得到至少一個(gè)含大環(huán)內(nèi)酯的級(jí)分，它是大環(huán)內(nèi)酯在洗脫劑中的溶液。多個(gè)含大環(huán)內(nèi)酯的級(jí)分可以合并成單一的含大環(huán)內(nèi)酯的級(jí)分。對(duì)這種含大環(huán)內(nèi)酯的級(jí)分可以進(jìn)行濃縮，以得到大環(huán)內(nèi)酯的濃縮溶液(濃縮級(jí)分)，由此可結(jié)晶出大環(huán)內(nèi)酯。
大環(huán)內(nèi)酯從優(yōu)選濃縮的含大環(huán)內(nèi)酯的溶液中結(jié)晶(沉淀)出來(lái)。這樣結(jié)晶(沉淀)出來(lái)的大環(huán)內(nèi)酯可以通過(guò)例如過(guò)濾或離心方式分離。結(jié)晶可以通過(guò)將含大環(huán)內(nèi)酯的溶液冷卻到優(yōu)選約20℃或更低的溫度下完成。結(jié)晶也可以通過(guò)將結(jié)晶溶劑與優(yōu)選濃縮的含大環(huán)內(nèi)酯的溶液混合實(shí)現(xiàn)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，混合物隨后在約25℃或更低的溫度下保持約10到約60小時(shí)。典型的保持時(shí)間是48小時(shí)?？捎玫慕Y(jié)晶溶劑包括乙腈，甲醇，乙醇，丙酮，乙醚，乙酸乙酯，己烷，庚烷，和水。
在具體實(shí)施方案中，將含大環(huán)內(nèi)酯的溶液濃縮至干，不進(jìn)行進(jìn)一步冷卻和不使用結(jié)晶溶劑就得到大環(huán)內(nèi)酯。
以下用非限定性實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施。
實(shí)施例1將發(fā)酵液(50毫升)與50毫升乙酸異丁酯混合。用稀硫酸溶液將混合物的pH值調(diào)節(jié)到pH值＝2。攪拌30分鐘之后，分離各相。分離的乙酸異丁酯相(39毫升)在60℃減壓濃縮至干，收率為83％。
實(shí)施例2將發(fā)酵液(50毫升)與50毫升乙酸異丁酯混合。向混合物中加入250毫克硫酸鎂和幾滴稀十二烷基三甲基氯化銨溶液。用稀硫酸溶液將混合物的pH值調(diào)節(jié)到pH值＝4。攪拌30分鐘之后，分離各相。分離的乙酸異丁酯相(44毫升)在70℃減壓濃縮至干，收率為88％。
實(shí)施例3將發(fā)酵液(50毫升)與50毫升乙酸異丁酯混合。向混合物中加入250毫克硫酸鎂和幾滴稀十二烷基三甲基氯化銨溶液。用稀氫氧化鈉溶液將混合物的pH值調(diào)節(jié)到pH值＝8。將混合物加熱到35-40℃。攪拌30分鐘之后分離各相。分離的乙酸異丁酯相(44毫升)在82℃減壓濃縮至干，收率為94％。
實(shí)施例4將發(fā)酵液(50毫升)與50毫升乙酸異丁酯混合。向混合物中加入250毫克硫酸鎂和幾滴稀十二烷基三甲基氯化銨溶液。用稀氫氧化鈉溶液將混合物的pH值調(diào)節(jié)到pH值＝10。將混合物冷卻到15℃。攪拌30分鐘之后分離各相。將乙酸異丁酯相(43毫升)在55℃減壓濃縮至干。收率為92％。
實(shí)施例5
將發(fā)酵液(50毫升)與50毫升乙酸乙酯混合。向混合物中加入250毫克硫酸鎂和幾滴稀十二烷基三甲基氯化銨溶液。用稀硫酸溶液將混合物的pH值調(diào)節(jié)到pH值＝4。攪拌30分鐘之后分離各相。分離的乙酸乙酯相在29℃減壓濃縮至干。收率為92％。
權(quán)利要求
1.一種獲得大環(huán)內(nèi)酯的方法，其包括如下步驟用疏水性提取溶劑提取含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)以得到大環(huán)內(nèi)酯在疏水性提取溶劑中的溶液，其中待提取的含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)的pH值為約5.5至約13。
2.權(quán)利要求1的方法，其中疏水性提取溶劑選自正丁醇，異丁醇，乙酸或甲酸的C2-C6直鏈和支鏈酯，C3-C6直鏈或支鏈脂肪族酮，鹵代甲烷，鹵代乙烷，和在25℃為液體且在大氣壓下的沸點(diǎn)低于約150℃的芳香烴。
3.權(quán)利要求2的方法，其中疏水性提取溶劑選自正丁醇、異丁醇、乙酸正丁酯、乙酸異丁酯、乙酸叔丁酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、甲酸乙酯、丙酮、丁基甲基酮、甲基異丁基酮、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、和甲苯。
4.權(quán)利要求3的方法，其中疏水性提取溶劑是乙酸乙酯、乙酸異丁酯、或其混合物。
5.權(quán)利要求4的方法，其中疏水性提取溶劑是乙酸異丁酯。
6.權(quán)利要求1的方法，其中提取在約2℃到約70℃的溫度下進(jìn)行。
7.權(quán)利要求6的方法，其中提取在約15℃到約35℃的溫度下進(jìn)行。
8.權(quán)利要求1的方法，其中提取的生物物質(zhì)的pH值為約7.5至約13。
9.權(quán)利要求1的方法，其中含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)是從選自筑波鏈霉菌(Streptomyces tsukubaensis)、吸水鏈霉菌(Streptomyceshygroscopicus)、和變青鏈霉菌(Streptomyces lividans)的微生物得到的。
10.權(quán)利要求9的方法，其中含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)是整體發(fā)酵液。
11.權(quán)利要求10的方法，其中大環(huán)內(nèi)酯為他克莫司。
12.權(quán)利要求11的方法，其中生物物質(zhì)的pH值為約7.5至約13。
13.權(quán)利要求12的方法，其中疏水性提取溶劑是乙酸異丁酯。
14.權(quán)利要求1的方法，在提取后還包括如下步驟將含大環(huán)內(nèi)酯的溶液與提取后的含大環(huán)內(nèi)酯的生物物質(zhì)分離，濃縮分離出來(lái)的含大環(huán)內(nèi)酯的溶液，將濃縮后的含大環(huán)內(nèi)酯的溶液裝載到硅膠柱上并用洗脫劑洗脫，得到至少一個(gè)含大環(huán)內(nèi)酯的級(jí)分，其為含大環(huán)內(nèi)酯的溶液，從含大環(huán)內(nèi)酯的溶液中結(jié)晶出大環(huán)內(nèi)酯，并分離結(jié)晶出的大環(huán)內(nèi)酯。
15.權(quán)利要求14的方法，其中通過(guò)濃縮至少一個(gè)為含大環(huán)內(nèi)酯的溶液的含大環(huán)內(nèi)酯的級(jí)分并將濃縮后的溶液冷卻到約25℃或更低的溫度來(lái)進(jìn)行結(jié)晶。
16.權(quán)利要求14的方法，其中通過(guò)將分離后的溶液與結(jié)晶溶劑混合來(lái)進(jìn)行結(jié)晶。
17.權(quán)利要求16的方法，其中結(jié)晶溶劑選自乙腈、甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯、己烷、庚烷、和水。
18.權(quán)利要求17的方法，其中結(jié)晶溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇和水。
19.權(quán)利要求16的方法，其中使分離后的溶液與結(jié)晶溶劑的混合物在約25℃或更低的溫度保持約10-約60小時(shí)。
20.一種從含他克莫司的生物物質(zhì)獲得他克莫司的方法，其包括如下步驟a)用選自正丁醇、異丁醇、乙酸正丁酯、乙酸異丁酯、乙酸叔丁酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、甲酸乙酯、丁基甲基酮、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷和甲苯的疏水性提取溶劑，在約2℃到約70℃的溫度下，在pH值為約5.5到約13的條件下，提取含他克莫司的生物物質(zhì)以獲得他克莫司在疏水性提取溶劑中的溶液，其中所述含他克莫司的生物物質(zhì)是由選自筑波鏈霉菌、吸水鏈霉菌、和變青鏈霉菌的微生物發(fā)酵得到的整體發(fā)酵液；b)將含他克莫司的溶液與提取后的含他克莫司的生物物質(zhì)分離；c)濃縮所述含他克莫司的溶液；d)將濃縮后的含他克莫司的溶液裝載到硅膠色譜柱上并用洗脫劑洗脫該柱，得到至少一個(gè)含他克莫司的級(jí)分，其為含他克莫司的溶液；e)從至少一個(gè)含他克莫司的級(jí)分結(jié)晶出他克莫司，由此形成結(jié)晶他克莫司沉淀；并f)分離出結(jié)晶他克莫司。
21.權(quán)利要求20的方法，其中整體發(fā)酵液的pH值為約7.5至約13。
22.權(quán)利要求20的方法，其中疏水性提取溶劑是乙酸異丁酯。
23.權(quán)利要求20的方法，其中提取在約15℃到約35℃的溫度下進(jìn)行。
24.權(quán)利要求20的方法，其中通過(guò)濃縮至少一個(gè)含他克莫司的級(jí)分并將濃縮后的級(jí)分冷卻到約25℃或更低的溫度來(lái)進(jìn)行結(jié)晶。
25.權(quán)利要求20的方法，其中通過(guò)將至少一個(gè)含他克莫司的級(jí)分與選自乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯、己烷、庚烷、和水的結(jié)晶溶劑混合來(lái)進(jìn)行結(jié)晶。
26.一種從含他克莫司的生物物質(zhì)獲得他克莫司的方法，其包括如下步驟用選自乙酸正丁酯、乙酸異丁酯、乙酸叔丁酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、甲酸乙酯、丁基甲基酮、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳和甲苯的疏水性提取溶劑提取含他克莫司的生物物質(zhì)，其中含他克莫司的生物物質(zhì)為整體發(fā)酵液，含他克莫司的生物物質(zhì)的pH值為約5.5至約13。
27.一種從含他克莫司的生物物質(zhì)獲得他克莫司的方法，其包括如下步驟a)用乙酸異丁酯在約2℃到約70℃的溫度下提取含他克莫司的生物物質(zhì)，以獲得他克莫司在乙酸異丁酯中的溶液，其中所述含他克莫司的生物物質(zhì)是由選自筑波鏈霉菌、吸水鏈霉菌、和變青鏈霉菌的微生物發(fā)酵得到的整體發(fā)酵液；b)將含他克莫司的溶液與提取后的含他克莫司的生物物質(zhì)分離；c)濃縮所述含他克莫司的溶液；d)將濃縮后的含他克莫司的溶液裝載到硅膠色譜柱上并用洗脫劑洗脫，得到至少一個(gè)含他克莫司的級(jí)分，其為含他克莫司的溶液；e)濃縮至少一個(gè)含他克莫司的級(jí)分；f)從濃縮后的級(jí)分結(jié)晶出他克莫司，由此形成結(jié)晶他克莫司沉淀；并g)分離出結(jié)晶他克莫司。
28.權(quán)利要求27的方法，其中含他克莫司的生物物質(zhì)的pH值為約5.5至約13。
29.權(quán)利要求28的方法，其中含他克莫司的生物物質(zhì)的pH值為約7.5至約13。
30.權(quán)利要求27的方法，其中提取溫度為約15℃到約35℃。
全文摘要
提供一種由生物物質(zhì)獲得大環(huán)內(nèi)酯，特別是他克莫司的方法。
文檔編號(hào)C07D267/22GK1649852SQ03807327
公開(kāi)日2005年8月3日 申請(qǐng)日期2003年2月12日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月13日
發(fā)明者V·克里, L·迪克, C·紹博 申請(qǐng)人:特瓦藥廠有限公司