專利名稱：制備和構(gòu)建抗各種已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2β抗體庫(kù)的方法
制備和構(gòu)建抗各種已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2P抗體庫(kù)的方法本發(fā)明涉及防治人類呼吸系統(tǒng)任何急性病毒性傳染病的特效“新式武器"，即全部由專一阻斷病毒——呼吸道靶細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)的抗體組成的、具有特殊功能和用途的"Ab20抗體庫(kù)”的制備和構(gòu)建方法(特別涉及本發(fā)明獨(dú)創(chuàng)性免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù))。
目前呼吸道致命性病毒，如“甲型HlNl流感、非典、禽流感”等病毒或其變異體引起的突發(fā)事件對(duì)世界各國(guó)人民造成了嚴(yán)重危害。其中世界著名“科學(xué)”雜志把攻克“病毒變異”做為生命科學(xué)領(lǐng)域首選世界難題。對(duì)此目前全世界抗病毒研究現(xiàn)狀①無任何特效的抗病毒藥。②尚無任何有希望的抗病毒研究計(jì)劃。本發(fā)明闡述的依據(jù)如下I.師法自然規(guī)律比較本發(fā)明與世界上僅有的兩個(gè)廣譜抗病毒研究LJ001化合物和DRACO化合物在世界抗病毒領(lǐng)域與本發(fā)明相關(guān)的廣譜抗病毒研究中，共有LJ001化合物和DRACO化合物兩個(gè)研究項(xiàng)目，本發(fā)明師法自然規(guī)律以批判性學(xué)術(shù)論點(diǎn)，客觀剖析來自美國(guó)的引起世界震驚的所謂廣譜抗病毒藥物L(fēng)J001化合物和DRACO化合物的研究，并從中找出與本發(fā)明的根本區(qū)別。I. I本發(fā)明對(duì)LJ001化合物批判性學(xué)術(shù)論點(diǎn)和對(duì)其研究的客觀剖析由美國(guó)國(guó)家衛(wèi)生研究所(NIH)提供研究基金，發(fā)表在《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》(PNAS)上一種太令人震驚的新技術(shù)能消滅所有包膜病毒包括艾滋病毒其原理一種化合物(LJ001)，能夠同時(shí)與病毒和被入侵細(xì)胞的包膜上的脂質(zhì)綁定，對(duì)兩者造成損害的不同之處在于，較大的細(xì)胞(與病毒相比)有能力修復(fù)各種各樣定期發(fā)生的損害；而病毒則不能，原因在于病毒脂質(zhì)被LJ001消耗殆盡導(dǎo)致病毒消亡。本發(fā)明認(rèn)為該化合物(LJ001)存在的最大問題是應(yīng)用到人體上，對(duì)免疫系統(tǒng)功能可能造成巨大危害。如正常人體每天都有IO7-IO8的細(xì)胞突變其中的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，還有大量衰老細(xì)胞和正常細(xì)胞的凋亡以及細(xì)胞碎片等
的清除，都與免疫系統(tǒng)(免疫自穩(wěn)和免疫監(jiān)視)識(shí)別和附著以及攝取......抗原呈遞等活
動(dòng)有關(guān)，其作用機(jī)制就是通過特異性和非特異性胞吞作用，通過識(shí)別細(xì)胞膜表面改變性質(zhì)的分子抗原，在內(nèi)吞過程中卷入大量的質(zhì)膜，即使對(duì)外源性或內(nèi)源性非膜物質(zhì)抗原攝取形成吞噬體，也要有免疫細(xì)胞自身膜融合而二者合并。如巨噬細(xì)胞每小時(shí)能內(nèi)化25%膜性物質(zhì)，樹突狀細(xì)胞在MHCl類分子呈遞的細(xì)胞碎片大部分由膜相關(guān)材料組成。另外正常細(xì)胞分裂和增值過程與上述機(jī)制的膜融合過程必有重疊之處，如果該化合物(LJ001)以相同機(jī)理對(duì)兩者(融合和分裂)重疊之處包膜上的脂質(zhì)綁定，對(duì)機(jī)體的危害就更大了，這還不算對(duì)正常細(xì)胞造成的損傷。因此本發(fā)明認(rèn)為僅對(duì)正常人體而言，LJ001化合物對(duì)包膜病毒的作用在理論上同時(shí)阻斷和干擾了整個(gè)人體的正常生理代謝活動(dòng)，因此對(duì)人可能有劇毒。LJ001化合物或許有類似(敵我不分)抗癌化療藥的作用，但毒副作用恐怕更大。盡管質(zhì)疑很多但很遺憾只有本發(fā)明能夠在理論上提出問題所在，并以此提供能夠確證LJ001化合物試驗(yàn)應(yīng)該進(jìn)行的研究方向。I. 2本發(fā)明對(duì)DRACO化合物的批判性學(xué)術(shù)論點(diǎn)和對(duì)其研究的客觀剖析美國(guó)麻省理工學(xué)院研究人員研制出一種全新抗病毒藥物“DRAC0”，發(fā)表于最新一期《科學(xué)公共圖書館綜合卷》上的報(bào)告中寫道，他們測(cè)試15種病毒，發(fā)現(xiàn)DRACO“雙鏈RNA激
活的切冬酶寡聚體"，幾乎可以殺死所有病毒......，啟動(dòng)細(xì)胞自我防御功能抗病毒，可以
通過核糖核酸找到被病毒感染的細(xì)胞，病毒在繁殖中產(chǎn)生特別長(zhǎng)的核糖核酸雙層帶，這樣的結(jié)構(gòu)身體細(xì)胞中一般不會(huì)有。本發(fā)明認(rèn)為病毒在繁殖中產(chǎn)生特別長(zhǎng)的核糖核酸雙層帶，這不能成為問題所在，分子識(shí)別自有其內(nèi)在規(guī)律。外源長(zhǎng)鏈dsRNA通過誘導(dǎo)產(chǎn)生siRNA，同內(nèi)源miRNA的在分子特征、和作用機(jī)理上很相似。二者在介導(dǎo)沉默機(jī)制上有重疊。miRNA在基因組中有固定的基因座位，目前已經(jīng)鑒定了不到I千種人類miRNA影響，并且證實(shí)miRNA有多態(tài)性(類似MHC多樣性和多態(tài)性)。有多個(gè)方面的重要原因可引起miRNA功能的改變，其中影響miRNA形成的相關(guān)基因多態(tài)與突變包括許多蛋白質(zhì)，并參與對(duì)外源dsRNA的識(shí)別。siRNA沒有固定的基因座位是隨機(jī)產(chǎn)生的或者人工設(shè)計(jì)的。miRNA的生理功能在于調(diào)控發(fā)育分化和調(diào)亡。而siRNA抑制轉(zhuǎn)座子活性和病毒感染。因此被稱之為基因組免疫系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)表明病毒感染就可造成細(xì)胞凋亡，其中caspase有關(guān)的凋亡通路至少有3種線粒體，細(xì)胞色素c通路、死亡受體通路和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路(如病毒感染激活干擾素反應(yīng)與死亡受體通路)。盡管目前世界對(duì)DRACO (天龍)化合物的認(rèn)識(shí)僅存在于不利于肝炎病毒攜帶者，但本發(fā)明根據(jù)上述簡(jiǎn)述理論結(jié)合本發(fā)明遵循自然規(guī)律指導(dǎo)專業(yè)知識(shí)的研究結(jié)果，卻產(chǎn)生多個(gè)質(zhì)疑問題認(rèn)為DRACO化合物發(fā)揮廣譜抗病毒作用至少應(yīng)具備和解決以下必備條件或問題1.2.1.首先指出DRACO化合物在細(xì)胞水平上，沒有特異性。即不能區(qū)分病毒感染細(xì)胞和正常細(xì)胞，DRACO化合物作為異物可進(jìn)入機(jī)體任何器官組織的正常細(xì)胞，這本身就孕育著巨大風(fēng)險(xiǎn)。因此其可能帶來的毒副作用類似(敵我不分)抗癌化療藥，這是DRACO化合物存在的最大問題。I. 2. 2.據(jù)文獻(xiàn)如發(fā)現(xiàn)動(dòng)物細(xì)胞質(zhì)內(nèi)部的蛋白質(zhì)群(如RIG-I和MDA5發(fā)揮干擾素效應(yīng))和人干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白3(IFITM3)具有分別感知不同病毒入侵的機(jī)能。DRACO(稱天龍)化合物的發(fā)明，基于變異病毒入侵細(xì)胞內(nèi)而防御蛋白和凋亡蛋白不能識(shí)別該變異病毒核糖核酸序列，因而不能啟動(dòng)細(xì)胞凋亡。那么在病毒變異導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞質(zhì)內(nèi)部的蛋白質(zhì)群整體失效的情況下(I)如何區(qū)分細(xì)胞內(nèi)部蛋白質(zhì)群是因?yàn)椴荒茏R(shí)別變異病毒的特定結(jié)構(gòu)，而不是由于細(xì)胞凋亡紊亂因素，導(dǎo)致不能啟動(dòng)細(xì)胞凋亡的？(2)如果細(xì)胞內(nèi)部蛋白質(zhì)群不能識(shí)別變異病毒的特定結(jié)構(gòu)，又如何能夠識(shí)別相對(duì)應(yīng)同源結(jié)構(gòu)的DRACO化合物？(3)DRACO化合物是如何重新啟動(dòng)已經(jīng)失效的蛋白質(zhì)群？(4)DRACO化合物如何克服克服細(xì)胞凋亡紊亂因素，恢復(fù)細(xì)胞亡通道如caspases通路的？之所以提出這些問題，原因在于生物性物質(zhì)的相互作用是遵循自然規(guī)律的如不同酶與不同特定作用物(化合物或化學(xué)鍵)或其產(chǎn)物的相互作用，都是具有特異性和相對(duì)特異性的，而且是在酶促反應(yīng)中有序發(fā)生的一系列互為因果的演化過程。自然界演化和進(jìn)化規(guī)律告訴我們細(xì)胞內(nèi)不可能出現(xiàn)孤立的僅識(shí)別變異病毒特定結(jié)構(gòu)或外源dsRNA的內(nèi)源蛋白質(zhì)和miRNA，其中伴隨的一定是一系列先后有序相互識(shí)別和相互作用的因素。 對(duì)此本發(fā)明認(rèn)為只有三種可能的解釋其一，個(gè)體細(xì)胞內(nèi)部由于遺傳因素影響，不存在能夠識(shí)別變異病毒核糖核酸雙層帶和相對(duì)應(yīng)DRACO化合物的蛋白質(zhì)群和miRNA。其二，DRACO化合物進(jìn)入病毒感染細(xì)胞特異性識(shí)別變異病毒特定核糖核酸序列(類似抗癌生物療法)，強(qiáng)化了克服凋亡紊亂因素特別是促凋亡分子高表達(dá)和戰(zhàn)勝抗凋亡因素密切相關(guān)。其三，如果細(xì)胞內(nèi)部蛋白質(zhì)群不能識(shí)別變異病毒的特定結(jié)構(gòu)同樣也不能識(shí)別具有同源性的DRACO化合物，在此這種情況下特別要警惕DRACO化合物直接啟動(dòng)細(xì)胞凋亡通路如caspases通路，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。由于三種情況難以辨別，本發(fā)明質(zhì)疑的問題就出在這里，因?yàn)镈RACO化合物的直接啟動(dòng)細(xì)胞凋亡通路的作用對(duì)正常細(xì)胞也造成巨大威脅。
1.2.3.據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道在脊椎動(dòng)物和非脊椎動(dòng)物試驗(yàn)表明外源性dsRNA(雙鏈RNA)其本身就可在哺乳動(dòng)物引起類似病毒入侵的反應(yīng)(病毒感染時(shí)會(huì)出現(xiàn)少量dsRNA)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡(注這與dsRNA在非脊椎動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果不同)。對(duì)人體自身而言DRACO化合物是異物或者是病毒特定分子的模擬物。因此正常細(xì)胞內(nèi)部防御蛋白和凋亡蛋白群是否會(huì)把DRACO化合物也當(dāng)作病毒的dsRNA進(jìn)而導(dǎo)致正常細(xì)胞凋亡？1.2.4.基于《科學(xué)公共圖書館綜合卷》上的報(bào)告病毒感染細(xì)胞內(nèi)，對(duì)變異病毒在繁殖中產(chǎn)生特別長(zhǎng)的核糖核酸雙層帶，在人體內(nèi)無對(duì)此特異性識(shí)別的防御蛋白和凋亡蛋白。既然不能識(shí)別變異病毒特定結(jié)構(gòu)，細(xì)胞內(nèi)部蛋白質(zhì)群又如何能夠與相對(duì)應(yīng)的特異性DRACO化合物相互作用？1.2.5.是否有針對(duì)不同病毒的不同的DRACO化合物系列？如果沒有，又如何解釋DRACO化合物幾乎可以殺死所有病毒的作用條件。(I) DRACO化合物特異性識(shí)別和結(jié)合所有病毒關(guān)鍵部位共同擁有的核苷酸特定序列到底是什么？(2)DRACO化合物如何保障特異性識(shí)別和結(jié)合的質(zhì)量？I. 2. 6. DRACO化合物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)必須是無活性的(類似酶原)，只有特異性識(shí)別和結(jié)合所有病毒共有的同源核苷酸序列后，才能變得有活性(類似酶)，從而使DRACO化合物轉(zhuǎn)變成為與激活和啟動(dòng)有關(guān)細(xì)胞凋亡的一系列過程的關(guān)鍵分子(包括戰(zhàn)勝抗凋亡因素)，才可能導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。那么這一機(jī)制到底是如何發(fā)生的？ DRACO化合物是否具備先后有序的、識(shí)別所有病毒關(guān)鍵部位共同擁有的同源核苷酸序列和啟動(dòng)細(xì)胞凋亡這兩個(gè)特異性功能？又是如何銜接這兩個(gè)特異性功能？不解釋清楚這個(gè)問題，外源DRACO化合物所進(jìn)入的全身正常細(xì)胞都要發(fā)生凋亡。I. 2. 7.據(jù)文獻(xiàn)考證在動(dòng)物腫瘤試驗(yàn)中，dsRNA的首次積聚導(dǎo)致細(xì)胞死亡，dsRNA的第二次出現(xiàn)和外源性未甲基化的質(zhì)粒DNA進(jìn)入細(xì)胞的同時(shí)激活了先天性和獲得性免疫反應(yīng)。人工合成的DRACO化合物非人體自身物質(zhì)，將被機(jī)體多態(tài)性MHC當(dāng)作異?？乖?如質(zhì)粒和病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞方式，只要攜帶或伴有合成某種外源性蛋白質(zhì)，甚至包括自身非完整蛋白質(zhì)中的僅某一段肽鏈)，其中包括正常細(xì)胞和不同APC抗原提呈細(xì)胞的兩類MHC分子作為異?？乖蔬f，同時(shí)被機(jī)體免疫系統(tǒng)所識(shí)別，其結(jié)果體內(nèi)所有內(nèi)含DRACO化合物或其異常衍生物的正常細(xì)胞都會(huì)當(dāng)作異常細(xì)胞遭到免疫系統(tǒng)殺傷。I. 2. 8. DRACO化合物對(duì)處于分裂和增值狀態(tài)的正常細(xì)胞又會(huì)產(chǎn)生什么影響？I. 2. 9. DRACO化合物是否會(huì)對(duì)正常細(xì)胞造成長(zhǎng)期和潛在的影響？I. 2. 10.大自然生物體億萬年進(jìn)化和選擇，人體細(xì)胞內(nèi)都沒有演化出特異性識(shí)別和結(jié)合所有病毒共同擁有的特定核苷酸序列(不僅僅是同源相似性)的化合物，眾所周知病毒和細(xì)菌不同，人體細(xì)胞根本就沒有細(xì)胞壁，因此把DRACO化合物與抗菌素相比，兩者本就不是一個(gè)概念。然而DRACO(稱天龍)化合物卻做到了，不符合自然規(guī)律。由于沒有文獻(xiàn)提出上述理論問題，因此本發(fā)明在理論研究上指出由于DRACO化合物的作用可受到免疫系統(tǒng)免疫應(yīng)答的干擾，所以在體外應(yīng)用同一個(gè)人的各種細(xì)胞，設(shè)置多個(gè)有針對(duì)性的對(duì)照試驗(yàn)，可能會(huì)有助于反應(yīng)DRACO化合物在人體的某種程度的真實(shí)作用。本發(fā)明建議通過常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)(1)以治療劑量的DRACO化合物短期與體外培養(yǎng)的各種不同分化狀態(tài)的正常細(xì)胞相互作用；DRAC0化合物長(zhǎng)期與體外培養(yǎng)的不同分裂和增值狀態(tài)的癌細(xì)胞相互作用，介以觀察DRACO化合物在不同時(shí)間對(duì)處于不同生長(zhǎng)狀態(tài)不同細(xì)胞的作用，觀察有無毒副作用。(2)淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)試驗(yàn)首先將DRACO化合物、DRACO化合物轉(zhuǎn)染或?qū)氲恼＜?xì)胞與自身混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，然后觀察反應(yīng)性T細(xì)胞與刺激細(xì)胞(正常細(xì)胞和不同APC抗原提呈細(xì)胞)相互作用，T細(xì)胞發(fā)生的增殖反應(yīng)情況(體外混合細(xì)胞培養(yǎng))。(3)體外致敏特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞與DRACO化合物轉(zhuǎn)染或?qū)氲淖陨碚＜?xì)胞之間的相互作用，觀察T細(xì)胞活性的誘導(dǎo)及測(cè)定，可客觀反應(yīng)有無自身正常細(xì)胞損傷和死亡情況。(4) DRACO化合物和DRACO化合物轉(zhuǎn)染或?qū)氲恼＜?xì)胞，作為特異性抗原在體外誘導(dǎo)PBMC或其它組織細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的測(cè)定。(5)DRACO化合物和DRACO化合物轉(zhuǎn)染或?qū)氲恼＜?xì)胞與其它免疫細(xì)胞相互作用，如單核一巨噬細(xì)胞細(xì)胞毒效應(yīng)的功能測(cè)定和吞噬功能測(cè)定等以供借鑒。還有其它多種固有免疫和特異免疫試驗(yàn)方法不再列舉。這些試驗(yàn)中的某些試驗(yàn)也可用于LJ001化合物的研究。
綜上所述本發(fā)明預(yù)測(cè)LJ001化合物和DRACO化合物皆不具備可行性，原因就在于這兩種化合物的作用不符合自然規(guī)律，即與億萬年演化過程中漸進(jìn)形成的生物體雙重免役識(shí)別體系的功能相背離。LJ001化合物和DRACO化合物在細(xì)胞水平上沒有分辯病毒感染細(xì)胞和正常細(xì)胞的能力。這兩種化合物或結(jié)合或進(jìn)入正常細(xì)胞，其異物性質(zhì)和其本身的作用就對(duì)正常細(xì)胞孕育著巨大風(fēng)險(xiǎn)或毒副作用，這與本發(fā)明形成根本區(qū)別(注本發(fā)明不接觸正常細(xì)胞)。以事物的兩面性規(guī)律反過來說，如果有了能夠識(shí)別變異病毒感染細(xì)胞的特異性運(yùn)載工具，如特異性免疫脂質(zhì)體或特異性免疫毒素能夠識(shí)別變異病毒感染細(xì)胞，理論和試驗(yàn)表明只要攜帶一個(gè)強(qiáng)大毒性分子就可殺死一個(gè)變異病毒感染細(xì)胞(借鑒生物抗癌療法)，這種方式豈不比攜帶DRACO化合物省事省力多了。生物體對(duì)“自我”與“非我”具有精準(zhǔn)性識(shí)別功能(如識(shí)別僅一個(gè)氨基酸殘基的差異)的雙重免役識(shí)別體系(注世界上沒有任何物質(zhì)或體系具有如此精準(zhǔn)性識(shí)別功能)，其最大特征就是即能在細(xì)胞水平上，也能在分子水平上，清除外源或內(nèi)源的異常生物性物質(zhì)，這與LJ001化合物和DRACO化合物在細(xì)胞水平上沒有分辯病毒感染細(xì)胞和正常細(xì)胞的能力形成鮮明對(duì)比，這就是本質(zhì)的區(qū)別。而且充分體現(xiàn)生物體進(jìn)化和選擇的演化過程遵循著相對(duì)論指導(dǎo)下的事物兩面性和整體與局部相互作用的自然規(guī)律。生物體在億萬年演化過程中漸進(jìn)形成的固有免疫應(yīng)答，如對(duì)病原微生物(尤其是原核生物)表面存在的許多恒定進(jìn)化保守分子(人體沒有)產(chǎn)生的天然免疫，就是進(jìn)化和自然選擇的結(jié)果。在如此漫長(zhǎng)的生物體演化過程中，多少體內(nèi)外生物性物質(zhì)在相互作用，如果真的有很少損傷正常細(xì)胞如類似所謂LJ001化合物和DRACO化合物這種不分“敵我”作用機(jī)理的物質(zhì)，或許早就進(jìn)化出來了。所以本發(fā)明強(qiáng)調(diào)要在大自然規(guī)律指導(dǎo)下結(jié)合相關(guān)專業(yè)進(jìn)行發(fā)現(xiàn)和創(chuàng)造，否則完全可能是花錢費(fèi)力白忙活。2.本發(fā)明理論依據(jù)2. I本發(fā)明間接理論依據(jù)2. I. I制備專一阻斷病毒入侵靶細(xì)胞途徑的“最好抗體“的理論依據(jù)2. I. I. I抗體覆蓋理論指抗體覆蓋率與中和作用的相關(guān)性，如對(duì)狂犬病毒的中和，每個(gè)毒粒200個(gè)以上IgG分子，才能占據(jù)其表面結(jié)構(gòu)(表位)，使之不能與靶細(xì)胞受體相互作用。而對(duì)另一個(gè)狂犬病毒中和逃逸突變株分析發(fā)現(xiàn)，每個(gè)毒粒結(jié)合1000以上的IgG分子，但仍然不能被中和。2. I. I. 2病毒“配體”與靶細(xì)胞“病毒受體”的相互作用理論病毒之所以能夠吸附于細(xì)胞而開始感染，其主要的結(jié)構(gòu)原因是病毒表面結(jié)構(gòu)蛋白的特定位點(diǎn)，能夠以特定的拓?fù)鋵W(xué)性質(zhì)與細(xì)胞表面某種受體發(fā)生相應(yīng)結(jié)合，該結(jié)合使病毒有了借以進(jìn)入細(xì)胞的橋梁。而在病毒感染中，機(jī)體產(chǎn)生的抗病毒特異性抗體之所以能夠抑制病毒的再感染，一條主要原因就是有的抗體可以用特定的對(duì)應(yīng)結(jié)構(gòu)，與病毒表面與受體發(fā)生結(jié)合作用的位點(diǎn)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生特異結(jié)合，從而在拓?fù)鋵W(xué)上阻斷病毒與細(xì)胞受體的結(jié)合，因此終止了病毒對(duì)細(xì)胞的感染，這樣一個(gè)自然的機(jī)理顯然提供了尋找病毒感染治療藥物 (注包括化學(xué)藥品)的理論基礎(chǔ)。2. I. I. 3抗體與病毒的相互作用理論HA蛋白是流感病毒的主要抗原之一，其頭部有5個(gè)抗原位點(diǎn)，分別稱A、B、C、D和E位點(diǎn)，其中B位點(diǎn)為靶細(xì)胞受體結(jié)合位點(diǎn)。在研究病毒特別是HIV-細(xì)胞間相互作用中發(fā)現(xiàn)，除病毒包膜“配體”與靶細(xì)胞“病毒受體”間直接接觸的氨基酸殘基外，其他病毒部位誘生的抗體很難界定是中和性抗體還是非中和性抗體或增強(qiáng)性抗體，原因在于①能被中和的病毒毒株可突變?yōu)閷?duì)同一抗體具有抗性或被此抗體增強(qiáng)的毒株。②用某一毒株免疫個(gè)體產(chǎn)生的抗體可能對(duì)該毒株是中和抗體但對(duì)其他毒株是增強(qiáng)抗體。③明確只誘導(dǎo)中和抗體而不誘導(dǎo)增強(qiáng)抗體的病毒包膜區(qū)是很困難的。最終病毒與抗體相互作用的結(jié)果要取決于產(chǎn)生中和性抗體與增強(qiáng)性抗體之比，即兩者對(duì)病毒總體作用的“凈”效應(yīng)。2. I. I. 4結(jié)論抗體中和病毒的關(guān)鍵，是需要找好中和病毒的位置(作用點(diǎn))，而最好的位置就是病毒一祀細(xì)胞的結(jié)合部位，即病毒“配體”的結(jié)合位點(diǎn)，而針對(duì)病毒“配體”結(jié)合位點(diǎn)的抗體就是最好的抗體。2. I. 2制備和構(gòu)建具有特殊功能和用途“抗體庫(kù)”的理論依據(jù)2. I. 2、I病毒或其變異體入侵人體呼吸道細(xì)胞的全部途徑任何已知或未知的病毒變異如流感病毒血凝素蛋白上一個(gè)氨基酸殘基的變化，就可以使病毒與所結(jié)合的唾液酸受體類型發(fā)生變化。這種變化的實(shí)質(zhì)就是增加入侵呼吸道細(xì)胞的新途徑，特別指出這種新途徑都必須是通過靶細(xì)胞表面相對(duì)應(yīng)的“病毒受體”完成的，而“病毒受體”又是呼吸道靶細(xì)胞表面已知或未知的膜蛋白分子，(蛋白質(zhì)組分)。正由于各種不同類型的“病毒受體”在呼吸道靶細(xì)胞表面的數(shù)量是有限的，所以病毒入侵呼吸道的途徑也是有限的，因此可以說任何病毒通過變異產(chǎn)生的新途徑都隱藏在這些“病毒受體”中。本項(xiàng)目預(yù)期產(chǎn)品一構(gòu)建具有特殊功能和用途的’抗體庫(kù)"，其抗體克隆數(shù)量包括對(duì)應(yīng)病毒入侵靶細(xì)胞全部可能或潛在的入侵途徑，這就是本發(fā)明項(xiàng)目的大框架。2. I. 2. 2結(jié)論構(gòu)建阻斷病毒入侵呼吸道全部途徑的抗體庫(kù)，可能提供了一種解決未知病毒或變異病毒世界難題的最好途徑。2. 2本發(fā)明的直接理論依據(jù)2. 2. I病毒配體——革巴細(xì)胞“受體”相互作用理論實(shí)驗(yàn)證明，病毒感染細(xì)胞的前提是與細(xì)胞表面的受體相結(jié)合，這個(gè)結(jié)合在反映與結(jié)構(gòu)蛋白的空間構(gòu)象與受體空間構(gòu)象之間的生物化學(xué)意義上的配構(gòu)關(guān)系之外，在生物意義上則反映了病毒的組織和細(xì)胞特異嗜性的現(xiàn)象。如果病毒不能進(jìn)入細(xì)胞，或被阻止于吸附細(xì)胞受體之前，則病毒對(duì)宿主細(xì)胞的影響是極小的，而對(duì)病毒一細(xì)胞受體的研究正好提供了這樣一種可能。僅對(duì)本發(fā)明而言，正是這樣的一種類似正常生理配體與受體結(jié)合的細(xì)胞生物效應(yīng)導(dǎo)致病毒進(jìn)入細(xì)胞。更多有關(guān)病毒配體一祀細(xì)胞“受體”相互作用理論與本發(fā)明實(shí)驗(yàn)方案之間的重要關(guān)系，見實(shí)驗(yàn)方案之后的，8.本發(fā)明說明書和實(shí)驗(yàn)方案需要重點(diǎn)說明的幾個(gè)問題2. 2. 2抗體獨(dú)特型與抗獨(dú)特型抗體模擬抗原理論數(shù)字龐大的Id或AId抗體可以摸擬整個(gè)外來抗原世界，這是構(gòu)建“Ab2e抗體庫(kù)”的主要理論基礎(chǔ)。利用這一理論，特別是通過創(chuàng)造性應(yīng)用相關(guān)理論和免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，就可以制備模擬靶細(xì)胞膜表面全部分子的易接觸的空間結(jié)構(gòu)，其中包括模擬全部病毒受體的抗體。另外，不管病毒抗原如何千變?nèi)f化，活的細(xì)胞表面病毒受體是不變的，因此本發(fā)明模擬靶細(xì)胞病毒受體的抗體，就能以“抗體的不變應(yīng)對(duì)病毒抗原的萬變”。而且本發(fā)明理論上推測(cè)，這種抗體本身還可能或多或少預(yù)留著可以結(jié)合病毒變異氨基酸殘基所需的空間位置。而且由于先天免疫耐受的作用，體內(nèi)高親和力的自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞被清除或因個(gè)體發(fā)生早期表現(xiàn)出的獨(dú)特型締合性影響，可能有助于其對(duì)應(yīng)面某些模擬自身的潛在B細(xì)胞克隆(包括本發(fā)明的某些Ab2P抗體產(chǎn)生細(xì)胞)成為優(yōu)勢(shì)克隆。本發(fā)明所述的Abl抗體和Ab2抗體，實(shí)際上就是指事物的兩個(gè)面，任何事物都具有互為對(duì)應(yīng)相互作用的兩個(gè)面，而且在不同生態(tài)環(huán)境下在動(dòng)態(tài)(差異)的相互作用中保持平衡(度)，生物體內(nèi)不同分子生態(tài)環(huán)境下的Abl抗體和Ab2抗體同樣遵循該自然規(guī)律。2. 2. 3多態(tài)性MHC免疫識(shí)別理論多態(tài)性MHC的生物學(xué)功能和意義，決定了不同品系動(dòng)物特別是某些品系動(dòng)物具有更廣和更深的免疫識(shí)別功能，應(yīng)用多態(tài)性MHC免疫識(shí)別理論，同樣是為最大限度增加對(duì)呼吸道上皮細(xì)胞膜表面全部分子易接觸空間結(jié)構(gòu)的免疫識(shí)別，并以此制備模擬靶細(xì)胞全部“潛在病毒受體”的抗體，構(gòu)建Ab20抗體庫(kù)。多態(tài)性MHC免疫識(shí)別理論同樣是構(gòu)建“Ab20抗體庫(kù)”的重要理論基礎(chǔ)。2. 2. 4遺傳因素影響不同個(gè)體免疫系統(tǒng)形成的理論人體內(nèi)T和B細(xì)胞克隆總數(shù)在IO12以上，可以表達(dá)IO12種獨(dú)具識(shí)別特性的抗體分子和T細(xì)胞分子，其特點(diǎn)一個(gè)細(xì)胞(克隆)，一種受體，這是免疫系統(tǒng)對(duì)抗原進(jìn)行精準(zhǔn)識(shí)別的基礎(chǔ)。其機(jī)理在于每個(gè)B細(xì)胞所攜帶Ig基因V. (D). J片斷的重排具有隨機(jī)性和獨(dú)立性，而每個(gè)胸腺細(xì)胞TCR基因重排同樣是一個(gè)完全隨機(jī)和獨(dú)立的過程。因此每個(gè)BCR和TCR均具有獨(dú)特的抗原特異性。例如人免疫球蛋白VH區(qū)多樣性機(jī)理，如包含120個(gè)不同的VH片斷，根據(jù)序列一致性分為(VH1-VH7)共7個(gè)家族。每一家族80%以上同源性。VH基因片斷組成和數(shù)目是高度變化的，人群中沒有個(gè)體含有同樣的VH基因片斷，由此形成每個(gè)個(gè)體所謂的“抗體免疫指紋”。而TCR受遺傳因素影響如MHC多態(tài)性影響，更是如此。另外，妊娠期間，母體IgG通過胎盤傳遞到胎兒，與胎兒自身IgM-V區(qū)相互識(shí)別，對(duì)于胎兒免疫系統(tǒng)的發(fā)育成熟如選擇B細(xì)胞群具有重要作用。2. 2. 5生物體內(nèi)對(duì)“自我”與“非我”具有精準(zhǔn)性識(shí)別功能的雙重免役識(shí)別體系的理論 有關(guān)雙重免役識(shí)別機(jī)制的理論，非常復(fù)雜。很遺憾許多文獻(xiàn)都不清楚生物體內(nèi)對(duì)“自我”與“非我”的識(shí)別是同時(shí)進(jìn)行的，其中伴有“自我”與“非我”識(shí)別過程中的能量累積。簡(jiǎn)單說，就是識(shí)別“自我”加上識(shí)別“非我”所需的能量大于單純識(shí)別“自我”所需的能量，即其中的能量差被識(shí)別，這如同正常體溫者手摸發(fā)燒者可感知其發(fā)熱的道理一樣。通過對(duì)生物體內(nèi)“自我”與“非我”之間差異的精準(zhǔn)性識(shí)別(如識(shí)別僅一個(gè)氨基酸殘基的差異)功能，在細(xì)胞或分子水平上，清除外源或內(nèi)源的異常生物性物質(zhì)。如個(gè)體每天對(duì)產(chǎn)生大量轉(zhuǎn)化細(xì)胞的清除。但本發(fā)明指出不同個(gè)體的“自我”與“非我”雙重免役識(shí)別體系的免疫識(shí)別功能是各不相同的，這正是本發(fā)明最重要的利用之處。2. 2. 6不同分子生態(tài)環(huán)境對(duì)同一個(gè)體或不同個(gè)體免疫系統(tǒng)的影響提出這個(gè)理論旨在說明僅與本發(fā)明相關(guān)的認(rèn)識(shí)，即經(jīng)過特定抗原免疫和未經(jīng)過特定抗原免疫的同一個(gè)體或同一品系動(dòng)物，除反應(yīng)性和親和力以及抗體效價(jià)區(qū)別之外，未必經(jīng)過特定抗原免疫的抗血清就是所需抗特定抗原特定表位的抗體(如腫瘤細(xì)胞免疫),而且識(shí)別抗原表位有限，原因在于優(yōu)勢(shì)克隆的作用。那么未經(jīng)過特定抗原免疫的同一個(gè)體或同一品系動(dòng)物的血清抗體，則可能識(shí)別更多抗原表位這也是區(qū)別。那么不同分子生態(tài)環(huán)境針對(duì)不同個(gè)體免疫系統(tǒng)的影響則更大。其理論豐富而復(fù)雜，但其相互作用機(jī)制都遵循和符合我們?nèi)庋鬯姷降拇笞匀谎莼?guī)律如各種物質(zhì)(包括人)之間相互作用機(jī)制。經(jīng)過免疫的抗血清和未經(jīng)過免疫的血清兩者之間可以互補(bǔ)，這就是本發(fā)明即采用經(jīng)過免疫的抗血清又采用未經(jīng)過免疫的血清的原因。2.3有關(guān)本發(fā)明自命標(biāo)題“Ab2β抗體庫(kù)”的相關(guān)理論問題2. 3. I本發(fā)明提出這個(gè)理論問題的目的在于，⑴.有的教科書根據(jù)Id與抗Id的血清學(xué)反應(yīng)和Ab2功能把Ab2分為α、β、Y和ε四種；也有的教科書直接把Ab2分為Ab2a和Ab2P兩種。本發(fā)明采用后一種教科書Ab2分型模式，S卩抗AblV區(qū)抗原結(jié)合部位即互不決定區(qū)(CDR)的抗體統(tǒng)稱Ab2i3抗體，實(shí)際包括Ab2i3抗體和Ab2 Y抗體，原因在于這樣可以使本發(fā)明說明書標(biāo)題和內(nèi)容簡(jiǎn)單化，易理解不易混淆而且更加說明問題。(2).抗Id抗體模擬抗原的模式包括高變抗Id區(qū)與抗原間的同源性和基于拓?fù)湎嗨菩缘哪M。而且結(jié)構(gòu)上的模擬與功能模擬是一致的，如Abl的相同表位可與兩種無關(guān)的結(jié)構(gòu)結(jié)合，另外模擬的程度也有完全性模擬和部分模擬之分別。(3).針對(duì)抗原結(jié)合部位的AId抗體稱為Ab2y型，其中有一類抗體能模擬外來抗原(內(nèi)在影像)稱為Ab2 0型。(4).Ab2y型和Ab2i3型都能抑制抗原與抗原受體的結(jié)合。2. 3. 2本發(fā)明制備的Ab2 β抗體模擬人類呼吸道上皮細(xì)胞膜表面“病毒受體”既包括結(jié)構(gòu)上的模擬和功能模擬；也包括完全性模擬和部分模擬?？傊槍?duì)抗原結(jié)合部位的AId抗體包括Ab2 Y型和Ab2P型。本發(fā)明需要的只是以各種不同結(jié)構(gòu)、不同方式和不同程度模擬“病毒受體”的抗體，只要能夠與各種人類呼吸道病毒特異性結(jié)合，并且專一阻斷呼吸道病毒一靶細(xì)胞結(jié)合部位的抗體，本發(fā)明統(tǒng)稱Ab2i3抗體，即廣義上的Ab2i3抗體。對(duì)于作為抗原“內(nèi)影像”(internal image)的功能并不需要，反而是有害的。2. 4指導(dǎo)本發(fā)明實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)的綜合理論
本發(fā)明涉及關(guān)鍵詞差異、兩面性、雙重免疫識(shí)別、整體和局部等在唯物辨證理論中的應(yīng)用，唯一目的就是指導(dǎo)本發(fā)明在發(fā)現(xiàn)和創(chuàng)造中必須遵循大自然規(guī)律。首先指出不同人群不同個(gè)體和不同種系不同動(dòng)物免疫系統(tǒng)之間的差異(如MHC多態(tài)性和隨之帶來的淋巴細(xì)胞庫(kù)漏洞以及不同的個(gè)體因遺傳表達(dá)不同的B細(xì)胞庫(kù)和不同的T細(xì)胞庫(kù)等)，正是由于不同個(gè)體具有不同的免疫識(shí)別系統(tǒng)(注特別強(qiáng)調(diào)單指差異不指共有或重疊)，本發(fā)明則指不同個(gè)體的B細(xì)胞庫(kù)和相應(yīng)抗體庫(kù)在識(shí)別各種各樣抗原的克隆之間存在的差異，這導(dǎo)致免疫識(shí)別的方向也會(huì)出現(xiàn)差異。即不同個(gè)體具有不同的對(duì)“自我”與“非我”精準(zhǔn)性識(shí)別功能的免役識(shí)別體系，在與體內(nèi)外不同自然環(huán)境(包括分子生態(tài)環(huán)境)的相互作用中，如人類和動(dòng)物與病原微生物及腫瘤細(xì)胞的相互作用中，決定了人類和動(dòng)物的進(jìn)化及生存的某種特定結(jié)果，理解差異其實(shí)就是理解演化的動(dòng)力。其生物學(xué)功能和意義在于這種差異造就了遺傳易感性各不相同的個(gè)體。正常情況下，個(gè)體死亡或顯示較強(qiáng)的生命力并不重要，重要的是，環(huán)境改變或某些疾病流行時(shí)，總能有一部分個(gè)體因有較強(qiáng)的適應(yīng)能力而生存下來，保證種群不致滅絕。此一時(shí)，某一部分個(gè)體生存力較強(qiáng)；彼一時(shí)，另一部分個(gè)體適應(yīng)好，從而在群體水平賦予物種極大的應(yīng)變能力，以對(duì)付多變的環(huán)境條件，達(dá)到動(dòng)態(tài)中的相對(duì)平衡狀態(tài)，這就是進(jìn)化和自然選擇的結(jié)果。因此理解這種差異和其相應(yīng)免疫應(yīng)答格局的不同模式，就是理解現(xiàn)代免疫學(xué)的精髓和相應(yīng)自然界生物的演化規(guī)律。如對(duì)抗瘧疾的遺傳因素的HLAB53抗原，經(jīng)差異性自然選擇，使B53的頻率由O上升到26. 4% (R比亞)和40% (尼日利亞)。本發(fā)明上述論述既是對(duì)差異作為動(dòng)力闡述，同時(shí)也是對(duì)相對(duì)論指導(dǎo)下整體與局部相互作用的自然規(guī)律闡述，這種辯證思維在后面還要不斷提及。具體到人體內(nèi)T和B細(xì)胞克隆總數(shù)在IO12以上，可以表達(dá)IO12種獨(dú)具識(shí)別特異性的抗體分子和T細(xì)胞分子，而每一個(gè)體都可能有IO7以上表達(dá)不同抗原受體的B細(xì)胞和T細(xì)胞克隆，這就體現(xiàn)了整體與局部的相互作用關(guān)系本發(fā)明與目前全世界抗病毒研究相比，在許多方面諸如事物整體觀和認(rèn)識(shí)論、多學(xué)科交叉指導(dǎo)理論、發(fā)明思維、研究方法、技術(shù)手段等都是截然相反的，這直接導(dǎo)致不同的發(fā)明原理。本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)方案盡可能最大限度集中人和動(dòng)物眾群體免疫系統(tǒng)的綜合力量，即充分利用各不相同的對(duì)“自我”與“非我”具有精準(zhǔn)性識(shí)別功能的免役識(shí)別體系，以求獲得最大程度免疫識(shí)別廣度和深度的優(yōu)勢(shì)效應(yīng)，克服個(gè)體免疫識(shí)別盲區(qū)(如有充分理論依據(jù)說明小鼠源單克隆抗體免疫識(shí)別能力十分有限，而且由于遺傳因素影響每一個(gè)體淋巴細(xì)胞庫(kù)的庫(kù)容量都是既有限度又有差異，另外個(gè)體免疫系統(tǒng)胚胎發(fā)育期因先天免疫耐受造成T細(xì)胞庫(kù)和B細(xì)胞庫(kù)漏洞……等眾多原因)，用以識(shí)別和模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原的不同表位(注還包括本發(fā)明實(shí)驗(yàn)方案的附加產(chǎn)品，即識(shí)別人呼吸道上皮細(xì)胞與相應(yīng)腫瘤細(xì)胞之間微細(xì)差異的特異性抗癌抗體)。這正是以唯物辯證法相對(duì)論指導(dǎo)下的事物兩面性和整體與局部相互作用的思維方式，了解和掌控以及運(yùn)用這種“差異”所帶來的不同免疫反應(yīng)格局，即盡可能最大限度發(fā)揮廣義上的眾群體免疫識(shí)別功能，來彌補(bǔ)個(gè)體免疫識(shí)別功能的不足，這種與眾不同的創(chuàng)造模式奠定了本發(fā)明實(shí)驗(yàn)方案必然成功的基礎(chǔ)。同時(shí)也在不客氣的說明，如果連這些綜合理論都不了解，也就是不了解現(xiàn)代免疫學(xué)原理和相應(yīng)自然規(guī)律的關(guān)系，如果否定這些理論，也就是否定自然界的規(guī)律，。原因在于缺乏辯證思維(注在免疫學(xué)理論和應(yīng)用研究上把相關(guān)研究與相應(yīng)大自然規(guī)律違背或分離的論點(diǎn)屢見不鮮)。這會(huì)導(dǎo)致難以應(yīng)用辯證思維從事物兩面性和整體與局部相互作用等自然規(guī)律角度出發(fā)指導(dǎo)和從事免疫學(xué)研究，因此往往會(huì)得出片面結(jié)論。本發(fā)明完全遵循現(xiàn)代免疫學(xué)原理和自然規(guī)律從事相關(guān)研究，避免走錯(cuò)路。本發(fā)明綜合上述理論指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)，而且從病毒配體一靶細(xì)胞“受體”相互作用理論和抗體獨(dú)特型與抗獨(dú)特型抗體模擬抗原理論中導(dǎo)出如下重要結(jié)論①抗靶細(xì)胞“病毒受體”的抗體，就是模擬病毒配體的抗體；抗病毒配體的抗體，就是模擬靶細(xì)胞“病毒受體”的抗體。②病毒組織嗜性，即組織特異性，決定了呼吸系統(tǒng)主要靶細(xì)胞一上皮細(xì)胞為本發(fā)明的研究對(duì)象。本發(fā)明采用獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，首先制備抗人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同蛋白分子不同抗原決定簇的抗體。然后再利用這些抗體，制備能夠模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同蛋白分子不同表位(注其中包含潛在病毒受體)的抗體，這就是能夠?qū)Ｒ蛔钄嗳魏尾《?--靶細(xì)胞全部結(jié)合位點(diǎn)的抗體。最后由所有這種抗體組成具有特殊功能和用途的“Ab2e抗體庫(kù)”。這樣就可以隨時(shí)從庫(kù)中篩選針對(duì)任何引起呼吸系統(tǒng)急性傳染病的病毒(包括未知病毒)或其變異體的特異性中和抗體了。3.實(shí)驗(yàn)方案 本發(fā)明實(shí)驗(yàn)方案實(shí)施前重點(diǎn)說明和提示(I)本實(shí)驗(yàn)方案屬于生命科學(xué)領(lǐng)域的大工程，整個(gè)實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)和其中的每一步試驗(yàn)，都處在辯證唯物相對(duì)論指導(dǎo)下的事物兩面性和整體與局部相互作用的大框架下，因此絕對(duì)遵循而且絕對(duì)符合現(xiàn)代免疫學(xué)原理和相應(yīng)大自然規(guī)律。(2) —些研究認(rèn)為構(gòu)建天然抗體庫(kù)，庫(kù)容量IO7可覆蓋百分之99%自身抗原決定基，庫(kù)容量超過IO8可得到相對(duì)親和力較高自身抗體，這種研究對(duì)本實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)和試驗(yàn)過程有重要參考價(jià)值。(3)本實(shí)驗(yàn)方案不標(biāo)技術(shù)路線圖，因?yàn)闀?huì)使專業(yè)人士的思維固定化和簡(jiǎn)單化。本實(shí)驗(yàn)方案需要全面、透徹、辯證的思維方可真正理解，特此提示。(4)另外有的內(nèi)容文字重復(fù)，也只是為了復(fù)讀加深記憶和方便理解，特此說明。3. I實(shí)驗(yàn)主要材料如何最大限度的獲取更多不同克隆的人B細(xì)胞和Ab2i3抗體，是本發(fā)明構(gòu)建人源性“Ab2i3抗體庫(kù)”的關(guān)鍵由于人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位成千上萬。而理論依據(jù)每I萬至10萬個(gè)B細(xì)胞中只有一個(gè)針對(duì)特定抗原表位的特異性B細(xì)胞，以此推算大約需10億個(gè)B細(xì)胞，才能篩選出專一識(shí)別人呼吸道上皮細(xì)胞上萬或更多不同表位的特異性B細(xì)胞。實(shí)際上每個(gè)人大約表達(dá)IO7--IO8個(gè)不同的B細(xì)胞克隆(注個(gè)體間都存在克隆差異)，因此僅就個(gè)體而言B細(xì)胞庫(kù)克隆數(shù)量有限。而人每250ml全血含有I千多萬個(gè)B細(xì)胞。本發(fā)明重點(diǎn)關(guān)注呼吸道以有包膜病毒為主，其病毒受體在人呼吸道上皮細(xì)胞表達(dá)十分豐富，這很容易識(shí)別。而呼吸道腺病毒和鼻病毒無包膜，其受體或許表達(dá)并不十分豐富。但為識(shí)別人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面上萬或更多不同抗原表位，其中或許有的抗原濃度很低如每個(gè)細(xì)胞有1000個(gè)抗原分子，因此本實(shí)驗(yàn)方案需要大量不同的B細(xì)胞克隆，唯一目的就是為了不遺漏對(duì)任何呼吸道已知和未知或變異病毒的特異性識(shí)別，這本身就是一個(gè)最需要解決的重要問題。本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)通過兩條極特殊方式可省時(shí)省力獲得數(shù)千人未經(jīng)過免疫的B細(xì)胞克隆途徑和上萬人體內(nèi)全部不同抗體克隆的途徑。3. I. I據(jù)了解很多省市血站或血液中心，把血液通過各種分離機(jī)采集紅細(xì)胞或其它血液成分過程，把其中的白細(xì)胞都丟棄了，因此對(duì)本發(fā)明而言太可惜了。如果通過協(xié)商購(gòu)買數(shù)千人以上獻(xiàn)血者的白細(xì)胞，從中提取純化B細(xì)胞可以達(dá)到IO12以上。天津市屬人工操作論單位賣白細(xì)胞。如果僅針對(duì)人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位為目標(biāo)，那么專一針對(duì)和模擬該目標(biāo)的特異性B細(xì)胞就可達(dá)幾十萬至百萬不同克隆(其中已注意到B細(xì)胞和抗原都會(huì)出現(xiàn)重復(fù)計(jì)算)。以此制備和構(gòu)建全方位模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的“Ab2i3抗體庫(kù)”，其中必然會(huì)得到本發(fā)明所需的全部模擬各種已知和未知或變異的呼吸道上皮細(xì)胞表面“病毒受體”的、具有較高親和力的眾多不同克隆的Ab2i3抗體，這是本發(fā)明構(gòu)建人源性“Ab2i3抗體庫(kù)”的最佳途徑。
3. I. 2如某廠家商品人免疫球蛋白制法取健康獻(xiàn)血員的新鮮血漿或保存期不超過2年的冰凍血漿，可從每批最少應(yīng)由1000名以上健康獻(xiàn)血員的血漿混合，用低溫乙醇蛋白分離法分段沉淀提取免疫球蛋白組分。本發(fā)明如果從不同廠家的不同生產(chǎn)工藝中獲得不同的10個(gè)批次以上(每個(gè)批次購(gòu)買一些)的人免疫球蛋白，就可得到萬人以上體內(nèi)全部不同克隆的各種類型抗體，而且肯定抗體的不同克隆數(shù)量更大于3. I. I……途徑B細(xì)胞的不同克隆數(shù)量。據(jù)本發(fā)明者粗略推算，每毫升血液約含幾億個(gè)抗體分子。本途徑可獲得的抗體數(shù)量和不同克隆的數(shù)量如此眾多，如果僅以針對(duì)人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位為目標(biāo)，那么專一模擬該目標(biāo)的特異性抗體可達(dá)百萬以上不同克隆(其中已注意到抗體和抗原都會(huì)出現(xiàn)重復(fù)計(jì)算)，而且每一單個(gè)克隆的抗體分子數(shù)量也不會(huì)少。其中必然會(huì)得到本發(fā)明所需的全部模擬各種已知和未知或變異的呼吸道上皮細(xì)胞表面“病毒受體”的、具有較高親和力的眾多不同克隆的Ab2i3抗體，這是本發(fā)明制備人源性Ab2i3抗體的最佳途徑。
3. 2第一階段主要實(shí)驗(yàn)步驟3. 2. I全方位抗人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位抗體(Abl抗體)的制備3. 2. I. I通過四種途徑(I)應(yīng)用不同來源保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤細(xì)胞(包括相應(yīng)永生化細(xì)胞)，分別免疫大量不同品系(注包括雜交和野生)的兔子和鼠，從中分別提取兔子和鼠的抗人血清和其純化的總抗體。然后應(yīng)用保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞分別與這些抗人血清和其純化的總抗體相互作用，接著以人呼吸道上皮細(xì)胞吸附其中抗體，即抗人呼吸道上皮細(xì)胞抗體，并采用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)或新方法提取和純化這些抗體，本發(fā)明把這些專一抗人呼吸道上皮細(xì)胞的抗體稱Abl抗體。(2)制備大量不同品系(注包括雜交和野生)未經(jīng)免疫的兔子和鼠以及羊等動(dòng)物血清和從這些動(dòng)物血清中提取純化的總抗體。然后應(yīng)用保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞分別與這些未經(jīng)免疫的兔子和鼠以及羊等動(dòng)物血清和其純化的總抗體相互作用，接著以人呼吸道上皮細(xì)胞吸附其中抗體，即抗人呼吸道上皮細(xì)胞抗體，并采用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)或新方法提取和純化這些抗體，本發(fā)明把這些專一抗人呼吸道上皮細(xì)胞的抗體稱Abl抗體。(3).應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)，從不同品系牛和羊乳汁中提取純化總抗體。然后應(yīng)用保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞分別與這些從不同品系牛和羊乳汁中提取純化的總抗體相互作用，接著以人呼吸道上皮細(xì)胞吸附其中抗體，即抗人呼吸道上皮細(xì)胞抗體，并采用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)或新方法提取和純化這些抗體，本發(fā)明把這些專一抗人呼吸道上皮細(xì)胞的抗體稱Abl抗體。(4)由于這是特殊途徑因此單獨(dú)闡述通過上述3. I. 2途徑可得到萬人體內(nèi)全部不同克隆的抗體。首先應(yīng)用保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞與上述商品化的全部人免疫球蛋白相互作用，并通過常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，提取并純化吸附在人呼吸道上皮細(xì)胞的低親和性和多反應(yīng)性的天然自身抗體(NAA)，即少量的具有天然免疫耐受性質(zhì)的Abl抗體。同時(shí)全部回收(收集并保留)那些不與上皮細(xì)胞相結(jié)合的全部人免疫球蛋白。然后再用相應(yīng)腫瘤細(xì)胞與那些不與上皮細(xì)胞結(jié)合的全部人免疫球蛋白相互作用，從中篩選特異性抗癌抗體。并在吸附特異性抗癌抗體后，最后千萬注意再次全部回收和儲(chǔ)存那些不與腫瘤細(xì)胞相結(jié)合的全部人免疫球蛋白以備制備本發(fā)明所需的Ab2P抗體。本發(fā)明通過上述四種途徑------制備全方位抗人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗
原不同表位的Abl抗體(本發(fā)明稱原始Abl抗體，介以區(qū)別第二階段的人工“Abl抗體庫(kù)”)。3. 2. I. 2附加產(chǎn)品-----特異性抗相應(yīng)人肺腫瘤細(xì)胞Abl抗癌抗體的獲得。特別
重點(diǎn)指出本發(fā)明在該階段試驗(yàn)中存在著毫不費(fèi)力的附加產(chǎn)品(抗癌領(lǐng)域方面)——即應(yīng)用不同來源保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞完全徹底吸附上述四種途徑制備的Abl抗體的試驗(yàn)后，再應(yīng)用相應(yīng)人肺腫瘤細(xì)胞分別與全部回收(收集并保留)沒有結(jié)合 上皮細(xì)胞后所剩下的其它全部抗體相互作用。接著以相應(yīng)人肺腫瘤細(xì)胞吸附其中抗體，即抗人肺腫瘤細(xì)胞抗體，并采用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)或新方法提取和純化這些抗體，本發(fā)明
把這些專一抗人肺腫瘤細(xì)胞抗體，稱特異性Abl抗癌抗體。有充分理論依據(jù)說明------本
發(fā)明已經(jīng)盡可能最大限度集中人和動(dòng)物眾群體免疫系統(tǒng)的綜合力量，以此獲得最大程度免疫識(shí)別廣度和深度的優(yōu)勢(shì)效應(yīng)，即眾多不同的“自我”與“非我”免疫識(shí)別體系，以此克服個(gè)體免疫識(shí)別盲區(qū)(如有充分理論依據(jù)說明鼠源單克隆抗體免疫識(shí)別能力十分有限，而且由于遺傳因素影響每一個(gè)體淋巴細(xì)胞庫(kù)的庫(kù)容量都是既有限度又有差異，另外個(gè)體免疫系統(tǒng)胚胎發(fā)育期因先天免疫耐受造成T細(xì)胞庫(kù)和B細(xì)胞庫(kù)漏洞……等眾多原因)，用以識(shí)別人呼吸道上皮細(xì)胞與相應(yīng)腫瘤細(xì)胞之間的微細(xì)差異(注這本身就是辯證思維相對(duì)論指導(dǎo)下事物兩面性和整體與局部相互作用的大局觀念)。因此通過本階段該方法獲得的抗癌抗體比之目前任何方法獲得的抗癌抗體在精準(zhǔn)性識(shí)別腫瘤細(xì)胞方面都會(huì)更加可靠和更具有可行性(注一般規(guī)律是應(yīng)用同一個(gè)體具有共同起源的人呼吸道上皮細(xì)胞和相應(yīng)人腫瘤細(xì)胞從事上述試驗(yàn)的，這種試驗(yàn)準(zhǔn)確度高。如同一個(gè)體肺癌手術(shù)切除術(shù)后，分離被切除腫瘤組織中的新鮮正常細(xì)胞和新鮮腫瘤細(xì)胞)。3. 2. 2全方位模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位抗體(Ab2i3抗體)的制備3. 2. 2. I. (I)首先通過以下三種途徑獲得大量不同人群的不同個(gè)體和不同種系的不同動(dòng)物(注包括雜交和野生)以及其它不同來源的總抗體。第一途徑應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，分別提取純化大量不同人血清和不同品系(注包括雜交和野生)兔子、鼠和羊等動(dòng)物血清中的總抗體(注未經(jīng)過免疫)。第二途徑應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，分別從牛和羊或人乳汁中提取純化總抗體。第三途徑購(gòu)買正規(guī)市場(chǎng)各種不同來源的商品化人體免疫球蛋白，即通過3. 2. I. I……(4)途徑……最后千萬注意全部回收(收集并儲(chǔ)存)那些不與人呼吸道上皮細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤細(xì)胞相結(jié)合的所有剩余的全部人免疫球蛋白，這才是本發(fā)明制備人源性Ab2i3抗體所需的總抗體的最佳途徑。本發(fā)明通過上述三種途徑可獲得大量不同來源未經(jīng)免疫的人和動(dòng)物總抗體(注內(nèi)含潛在的本發(fā)明所需的Ab2i3抗體。(2).專一篩選結(jié)合Abl抗體抗原結(jié)合位點(diǎn)的Ab2i3抗體應(yīng)用本發(fā)明十分簡(jiǎn)單的獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，分別巧妙處理3. 2. 2. I. (I)三種途徑獲得的大量不同來源未經(jīng)免疫的人和動(dòng)物總抗體與3. 2. I試驗(yàn)制備的總Abl抗體，關(guān)鍵在于解決兩者之間相互作用關(guān)系問題。即通過本發(fā)明獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，分別從上述三種途徑獲得的大量不同來源未經(jīng)免疫的人和動(dòng)物總抗體中，完全徹底清除掉與全部Abl抗體本身的抗原結(jié)合部位不能結(jié)合的任何無關(guān)的抗體，辯證思維就是指完全徹底清除掉那些專門與Abl抗體(非抗原結(jié)合部位)本身其它表位相結(jié)合的抗體。經(jīng)過本發(fā)明這種獨(dú)創(chuàng)性特殊篩選技術(shù)和過程，唯一目的是全部回收(收集和儲(chǔ)存)其它與本發(fā)明相關(guān)的抗體(注內(nèi)含潛在的本發(fā)明所需的Ab2i3抗體)。然后應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)如免疫親和純化技術(shù)第一步，將純化的不同來源的Abl抗體分別與固相基質(zhì)共價(jià)連接，制備Abl抗體親和層析柱。第二步，在3. 2. 2. I(I)和(2)……試驗(yàn)過程，即已經(jīng)完全徹底清除掉與Abl抗體(非抗原結(jié)合部位)的本身其它表位相結(jié)合的無關(guān)抗體后，把全部回收(收集和儲(chǔ)存)的其它與本發(fā)明相關(guān)的總抗體，再分別與Abl抗體親和層析柱相互作用，唯一目標(biāo)是特異性篩選結(jié)合到Abl抗體本身的抗原結(jié)合部位的抗體，即本發(fā)明所需的Ab2P抗體。第三步，從層析柱上洗脫Ab2P抗體。如此經(jīng)過免疫親和純化技術(shù)，分別提取純化來自人源和動(dòng)物源的不同的Ab2 β抗體。3. 2. 2. 2附加產(chǎn)品一一模擬人相應(yīng)肺腫瘤細(xì)胞膜表面特有抗原表位抗體(Ab2 β抗體)的獲得整個(gè)試驗(yàn)過程和應(yīng)用技術(shù)完全同3. 2. 2全方位模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表 面不同抗原不同表位抗體(Ab2i3抗體)的制備試驗(yàn)過程和應(yīng)用技術(shù)，因此不再重復(fù)闡述。制備的模擬人相應(yīng)肺腫瘤細(xì)胞膜表面特有抗原表位的Ab2 β抗體，同樣可通過下面第二階段主要實(shí)驗(yàn)步驟的整個(gè)試驗(yàn)過程和應(yīng)用技術(shù)，獲得Abl抗癌抗體產(chǎn)生細(xì)胞或模擬相應(yīng)癌抗原的Ab2i3抗體產(chǎn)生細(xì)胞。并可通過轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或細(xì)胞工程抗體技術(shù)和基因工程抗體技術(shù)制備工程抗癌抗體，最終走向工程抗癌抗體產(chǎn)業(yè)化之路。由于本發(fā)明目標(biāo)和實(shí)驗(yàn)方案時(shí)間所限，故對(duì)抗癌抗體的制備在此簡(jiǎn)單陳述，并在第二階段主要實(shí)驗(yàn)步驟不再闡述這種附加
女口
廣叩ο3. 2. 3競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)應(yīng)用各種常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)，觀察Ab2 β抗體競(jìng)爭(zhēng)抑制人呼吸道上皮細(xì)胞與Abl抗體結(jié)合的能力，特別是能否全方位阻斷人呼吸道上皮細(xì)胞與Abl抗體的結(jié)合能力(同時(shí)設(shè)置人呼吸道上皮細(xì)胞與Abl抗體結(jié)合的對(duì)照組)，以此判斷本發(fā)明全方位模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的Ab2i3抗體是否還存在“克隆漏洞”，本發(fā)明完全可以通過簡(jiǎn)單的特異性試驗(yàn)彌補(bǔ)這種“克隆漏洞”。3. 2. 4篩選和檢測(cè)引起普通感冒的各種病毒和流感疫苗相互作用的Ab2i3抗體經(jīng)過3. 2. 2全方位模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位抗體(Ab2 β抗體)的制備過程，獲得的全部Ab2i3抗體，其實(shí)質(zhì)就是一個(gè)簡(jiǎn)單的初級(jí)“Ab2i3抗體庫(kù)”?？梢钥隙ù穗A段盡管抗體庫(kù)中每一個(gè)克隆的抗體分子數(shù)量不會(huì)很多，但足以應(yīng)對(duì)試驗(yàn)所需。本發(fā)明從安全角度出發(fā)，通過常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，篩選和檢測(cè)Ab2i3抗體與引起普通感冒的各種病毒和流感減毒活疫苗以及滅活疫苗相互作用(設(shè)置有創(chuàng)意的對(duì)照組)。即通過不同技術(shù)手段檢測(cè)Ab2i3抗體與病毒和疫苗特異性結(jié)合的功能和效果。確證試驗(yàn)成功的最重要標(biāo)志是“Ab2i3抗體庫(kù)”與引起普通感冒的各種病毒和各種流感特定疫苗特異性結(jié)合的范圍越廣說明成功率越高，同時(shí)說明本發(fā)明“Ab2i3抗體庫(kù)”構(gòu)建越完善。如果與上述病毒和疫苗特異性結(jié)合的成功率達(dá)到百分之百，則意味著本發(fā)明“Ab2 β抗體庫(kù)”與未知和變異的致命性呼吸道病毒特異性結(jié)合的成功率也會(huì)極高。當(dāng)然本發(fā)明“Ab2i3抗體庫(kù)”也會(huì)越來越完善。3. 2. 5特異性Ab2 β抗體與引起普通感冒特定病毒的創(chuàng)意性免疫熒光試驗(yàn)無疑，病毒中和試驗(yàn)是鑒定病毒最可靠的方法，重要的是可檢測(cè)特異性抗體阻斷病毒吸附、穿入和脫殼，使其失去感染靶細(xì)胞的能力，從而阻止病毒的增殖(復(fù)制)，而且這在一定程度上也同時(shí)反應(yīng)了機(jī)體抗病毒感染的能力。但需要細(xì)胞培養(yǎng)，需要觀察細(xì)胞病變作用(CPE)，方法較為繁瑣，費(fèi)時(shí)也費(fèi)錢。本發(fā)明如果針對(duì)某一特定病毒的特異性Ab2i3抗體數(shù)量足夠多的話，或者通過“追蹤溯源”再次提取純化該抗體。通過創(chuàng)意性免疫熒光試驗(yàn)同樣可以達(dá)到病毒中和試驗(yàn)的上述目的。采集本實(shí)驗(yàn)方案實(shí)施過程中儲(chǔ)存或提前備好的特定病毒懸液和培養(yǎng)的人呼吸道上皮細(xì)胞后，與本發(fā)明特異Ab2i3抗體三者進(jìn)行相互作用，同時(shí)設(shè)置病毒與培養(yǎng)的人呼吸道上皮細(xì)胞兩者相互作用對(duì)照組，并用抗細(xì)胞內(nèi)特定病毒抗原抗體的免疫熒光間接試驗(yàn)法，以此觀察有或無細(xì)胞內(nèi)熒光顆粒，這會(huì)在較短的時(shí)間得出結(jié)果，理論上達(dá)75% -95%的陽性準(zhǔn)確率，以此加快試驗(yàn)進(jìn)度。當(dāng)然也可采用病毒中和試驗(yàn)，以確保試驗(yàn)精確度。3. 2. 6確證試驗(yàn)證實(shí)本發(fā)明篩選到特異性抗病毒抗體，表明第一階段(時(shí)間3-6個(gè)月)試驗(yàn)成功結(jié)束。3. 2. 7預(yù)期產(chǎn)品:①制備具有不同功能和用途的全部原始Abl抗體和相對(duì)應(yīng)的全部原始Ab2 0抗體。②本實(shí)驗(yàn)方案可毫不費(fèi)力的極可能同時(shí)獲得抗相應(yīng)人肺腫瘤細(xì)胞的特異性抗癌抗體。3. 2. 8第一階段試驗(yàn)(時(shí)間3-6個(gè)月)結(jié)束后，所需經(jīng)費(fèi)70—90萬人民幣，立即向世界各大國(guó)申請(qǐng)關(guān)鍵性發(fā)明專利，在全世界控制實(shí)驗(yàn)方法和主要技術(shù)及市場(chǎng)……3. 3第二階段主要實(shí)驗(yàn)步驟3. 3. I制備和構(gòu)建具有不同特殊功能和用途的“Abl抗體庫(kù)”3. 3. I. I專一篩選能夠結(jié)合Ab2 β抗體本身的抗原結(jié)合位點(diǎn)的特異性B細(xì)胞(I).首先應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，分別提取純化大量不同品系(注包括雜交
和野生)兔子和鼠以及羊等動(dòng)物的B細(xì)胞------主要是未經(jīng)過免疫的B細(xì)胞和第一階段 經(jīng)過多次免疫后純化并儲(chǔ)存的兔子和鼠的B細(xì)胞，其中包括不同器官組織來源及不同途徑來源的B細(xì)胞。(2).通過本發(fā)明十分簡(jiǎn)單的獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，分別巧妙處理3. 3. I. I......
(I)……獲得的兔子和鼠以及羊等動(dòng)物的B細(xì)胞與第一階段獲得的全部Ab2i3抗體，關(guān)鍵在于解決B細(xì)胞和Ab2i3抗體兩者之間相互作用關(guān)系問題。即通過本發(fā)明獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，從這些B細(xì)胞中完全徹底清除掉與Ab2 β抗體本身的抗原結(jié)合部位不能結(jié)合的任何無關(guān)的B細(xì)胞，辯證思維就是指完全徹底清除掉那些專門與Ab2i3抗體(非抗原結(jié)合部位)本身其它表位相結(jié)合的B細(xì)胞。經(jīng)過本發(fā)明這種獨(dú)創(chuàng)性特殊篩選技術(shù)和過程，唯一目的是全部回收(收集并保留)所有剩余的其它與本發(fā)明相關(guān)的B細(xì)胞(注內(nèi)含潛在的本發(fā)明所需的Abl抗體產(chǎn)生細(xì)胞)。(3).即將3. 3. I. I……(2)……唯一目的是全部回收(收集并保留)所有剩余的其它與本發(fā)明相關(guān)的B細(xì)胞并和全部Ab2 β抗體分別分類進(jìn)行相互作用，再通過流式細(xì)胞術(shù)(FCM)或結(jié)合免疫磁性微珠技術(shù)，可更多更快的篩選出專一結(jié)合Ab2 0抗體本身的抗原結(jié)合部位的特異性B細(xì)胞，即本發(fā)明所需的Abl抗體產(chǎn)生細(xì)胞。特別需要指出的是通過流式細(xì)胞術(shù)(FCM)，每個(gè)Abl抗體產(chǎn)生細(xì)胞(特異性B細(xì)胞)，只要有100個(gè)熒光分子就可以檢測(cè)出來。而一個(gè)二抗(IgG分子)可標(biāo)記幾個(gè)一十幾個(gè)熒光素分子，所以只需要20-50個(gè)一抗，就可以把一個(gè)特異性B細(xì)胞(每個(gè)B細(xì)胞表面的BCR有I萬一10萬個(gè))，即本發(fā)明所需的Abl抗體產(chǎn)生細(xì)胞專一篩選出來(據(jù)本發(fā)明者粗略推算，每毫升血液約含幾億個(gè)抗體分子)。因此本發(fā)明任何一種途徑(包括從純化的未經(jīng)免疫的血清總抗體和乳汁總抗體)獲得的純化Ab2P抗體中，每一個(gè)克隆本身的抗體數(shù)量都是足夠流式細(xì)胞術(shù)或結(jié)合免疫磁性微珠技術(shù)，篩選專一結(jié)合相對(duì)應(yīng)的特異性B細(xì)胞試驗(yàn)所用的。否則人體也不可能對(duì)第一次遭遇到的抗原，發(fā)生初始的是由始動(dòng)者DC(而非B細(xì)胞)啟動(dòng)的特異性體液免疫應(yīng)答，這也表明體液特異性抗體數(shù)量足夠結(jié)合初始抗原的(注DC通過受體攝取抗原抗體復(fù)合物介導(dǎo)的內(nèi)化，屬于各種生物大分子內(nèi)化的基本方式)。3. 3. I. 2制備和構(gòu)建具有不同特殊功能和用途的“Abl抗體庫(kù)”的方法和技術(shù)首先將能夠與Ab2 0抗體本身的抗原結(jié)合部位特異性結(jié)合的B細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)并在不同刺激條件下，在特定的不同時(shí)間內(nèi)，通過兩條途徑(I)將體外培養(yǎng)的B細(xì)胞(增值為目的)，通過構(gòu)建噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的兩種不同方式其一為主要方式，即B細(xì)胞內(nèi)PCR(In-CellPCR)裝配技術(shù)一噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，以保證抗體的輕重鏈配對(duì)為體內(nèi)原始配對(duì)的前提下，制備噬菌體Abl抗體(注本發(fā)明不排除伴隨細(xì)胞內(nèi)PCR(In-CellPCR)技術(shù)--噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的不斷進(jìn)步，解決經(jīng)多次免疫產(chǎn)生的千差萬別不同克隆的記憶性B細(xì)胞，最重要“通用引物”設(shè)計(jì)的困難問題，制備輕重鏈配對(duì)為體內(nèi)原始配對(duì)的噬菌體Abl抗體)。其二，即通常的構(gòu)建噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，盡管這種方式獲得的抗體基因是體外的隨機(jī)組合。但由于抗體和抗原結(jié)合的特異性常主要由VH決定，所以本發(fā)明全部特異性B細(xì)胞(Abl抗體產(chǎn)生細(xì)胞)，可在不改變特異性的情況下，使其每一個(gè)特異性的VH與本發(fā)明特異性B細(xì)胞不同的VL進(jìn)行組合(鏈替換)，產(chǎn)生特異性相同而親和力不同的Abl抗體(注不排除某些VH與VL因空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性差和穩(wěn)定性差等原因?qū)е屡鋵?duì)失敗)。因此本發(fā)明可在不改變每一個(gè)B細(xì)胞克隆特異性的情況下找到VH—VL最佳配對(duì)，反而更可能篩選到高親和力的Abl抗體。或許由于類似免疫抗體庫(kù)的原因，但本發(fā)明比免疫抗體庫(kù)更具優(yōu)越性和保障性，即全部由特異性B細(xì)胞克隆組成，如果數(shù)量足夠大而且VH--VL互補(bǔ)性強(qiáng)空間結(jié)構(gòu)十分穩(wěn)定，這會(huì)使原始抗體輕鏈和重鏈配對(duì)極易被恢復(fù)，反而不會(huì)導(dǎo)致高親和力原始Abl抗體丟失。本發(fā)明通過這兩種不同方式(注關(guān)注通用引物和簡(jiǎn)并引物使用的方法)制備噬菌體“Abl抗體庫(kù)”(注需要和具體試驗(yàn)操作者協(xié)商，選擇最適合本發(fā)明的方法和技術(shù))。(2)將體外培養(yǎng)的B細(xì)胞根據(jù)兩種不同用途其一，將體外培養(yǎng)的B細(xì)胞(生產(chǎn)抗體為目的)，通過轉(zhuǎn)化為抗體分泌漿細(xì)胞，獲得分泌性Abl抗體(該途徑雖獲得的每一單個(gè)克隆抗體的數(shù)量較少，但足夠試驗(yàn)所用)，制備原始特異性“Abl抗體庫(kù)”。其二，將體外培養(yǎng)的B細(xì)胞(增值為目的)，作為抗原儲(chǔ)存(注每個(gè)B細(xì)胞膜表面有I萬-10萬個(gè)BCR抗原分子，而且BCR排列方向一致都易接近，區(qū)別抗體作為免疫原)以備免疫不同品系兔子和鼠制備Ab2 0抗體和獲取Ab2 0抗體產(chǎn)生細(xì)胞。通過這兩條途徑盡可能獲得抗人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的全部Abl抗體并以此制備和構(gòu)建初級(jí)具有不同特殊功能和用途的“Abl抗體庫(kù)”3. 3. I. 3在本試驗(yàn)階段存在一個(gè)容易混淆的問題——即本發(fā)明根本就不存在“Ab3抗體庫(kù)”的問題，原因在于本發(fā)明“Abl抗體庫(kù)”的構(gòu)建，并非由Ab2i3抗體作為抗原免疫人和動(dòng)物所獲得Ab3抗體所構(gòu)建。因此本發(fā)明實(shí)驗(yàn)方案既不產(chǎn)生也不存在Ab3抗體，故閱讀本說明書不要把該問題弄混淆。 3. 3. 2制備和構(gòu)建具有不同特殊功能和用途的“Ab2 β抗體庫(kù)”
3. 3. 2. I專一篩選能夠結(jié)合Abl抗體本身的抗原結(jié)合位點(diǎn)的特異性B細(xì)胞(I).首先應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，分別提取純化大量不同人和不同品系(注
包括雜交和野生)兔子以及鼠的的B細(xì)胞------即全部未經(jīng)過免疫和經(jīng)過免疫的不同器 官組織來源及不同途徑來源的B細(xì)胞。其中包括3. 3. I. 2……(2)……其二，將體外培養(yǎng)的B細(xì)胞(增值為目的)，作為抗原(注每個(gè)B細(xì)胞膜表面有I萬-10萬個(gè)BCR抗原分子，而且BCR排列方向一致都易接近，區(qū)別抗體作為免疫原)免疫不同品系兔子和鼠，并提取純化這些經(jīng)過免疫的B細(xì)胞(注其免疫血清內(nèi)含相應(yīng)Ab2 3抗體，可通過第一階段制備的特異性Abl抗體篩選出來，制備原始Ab2 β抗體)。另外本試驗(yàn)重復(fù)指出經(jīng)過3. I實(shí)驗(yàn)主要材料3. I. I途徑……內(nèi)含專一針對(duì)和模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的特異性B細(xì)胞可達(dá)幾十萬至百萬不同克隆，而且已注意到B細(xì)胞和抗原都會(huì)出現(xiàn)重復(fù)計(jì)算。其中必然會(huì)得到本發(fā)明所需的全部模擬各種已知和未知或變異的人呼吸道上皮細(xì)胞表面“病毒受體”的、具有較高親和力的眾多不同克隆的Ab2i3抗體，這是本發(fā)明構(gòu)建人源性“Ab2i3抗體庫(kù)”的最佳途徑。(2).通過本發(fā)明十分簡(jiǎn)單的獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，分別巧妙處理3. 3. 2. I……(I)試驗(yàn)獲得的人和兔子以及鼠的B細(xì)胞與第一階段獲得的全部Abl抗體，關(guān)鍵在于解決B細(xì)胞和Abl抗體兩者之間相互作用關(guān)系問題。即通過本發(fā)明獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù),從這些B細(xì)胞中完全徹底清除掉與Abl抗體本身的抗原結(jié)合部位不能結(jié)合的任何無關(guān)的B細(xì)胞，辯證思維就是指完全徹底清除掉那些專門與Abl抗體(非抗原結(jié)合部位)本身其它表位相結(jié)合的B細(xì)胞。經(jīng)過本發(fā)明這種獨(dú)創(chuàng)性特殊篩選技術(shù)和過程，唯一目的是全部回收(收集并保留)所有剩余的其它與本發(fā)明相關(guān)的B細(xì)胞(注內(nèi)含潛在的本發(fā)明所需的Ab2i3抗體產(chǎn)生細(xì)胞)。(3).即將3.3.2. I……(I)和(2)……唯一目的是全部回收(收集并保留)所有剩余的其它與本發(fā)明相關(guān)的B細(xì)胞并和全部Abl抗體分別分類進(jìn)行相互作用，再通過流式細(xì)胞術(shù)(FCM)或結(jié)合免疫磁性微珠技術(shù)，可更多更快的篩選出專一結(jié)合Abl抗體本身抗原結(jié)合部位的特異性B細(xì)胞，即本發(fā)明所需的Ab2 β抗體產(chǎn)生細(xì)胞。特別需要指出的是通過流式細(xì)胞術(shù)(FCM)，每個(gè)Ab2 β抗體產(chǎn)生細(xì)胞(特異性B細(xì)胞)，只要有100個(gè)熒光分子就可以檢測(cè)出來。而一個(gè)二抗(IgG分子)可標(biāo)記幾個(gè)-十幾個(gè)熒光素分子，所以只需要20-50個(gè)一抗，就可以把一個(gè)特異性B細(xì)胞(每個(gè)B細(xì)胞表面的BCR有I萬一10萬個(gè))，即本發(fā)明所需的Ab2i3抗體產(chǎn)生細(xì)胞專一篩選出來(據(jù)本發(fā)明者粗略推算，每毫升血液約含幾億個(gè)抗體分子)。因此本發(fā)明任何一種途徑(包括從純化的未經(jīng)免疫的血清總抗體和乳汁總抗體)獲得的純化Abl抗體中，每一個(gè)克隆本身的抗體數(shù)量都是足夠流式細(xì)胞術(shù)或結(jié)合免疫磁性微珠技術(shù)，篩選專一結(jié)合相對(duì)應(yīng)的特異性B細(xì)胞試驗(yàn)所用的。同理否則人體內(nèi)也不可能對(duì)第一次遭遇到的抗原，發(fā)生初始的是由始動(dòng)者DC (而非B細(xì)胞)啟動(dòng)的特異性體液免疫應(yīng)答，這也表明體液特異性抗體數(shù)量足夠結(jié)合初始抗原的(注DC通過受體攝取抗原抗體復(fù)合物介導(dǎo)的內(nèi)化，屬于各種生物大分子內(nèi)化的基本方式)。3. 3. 2. 2制備和構(gòu)建具有不同特殊功能和用途的“Ab2 β抗體庫(kù)”的方法和技術(shù)首先將能夠與Abl抗體本身的抗原結(jié)合部位特異性結(jié)合的B細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)并在不同刺激條件下，在特定的不同時(shí)間內(nèi)，通過兩條途徑(I)將體外培養(yǎng)的B細(xì)胞(增值為目的)，通過構(gòu)建噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的兩種不同方式其一為主要方式，即通過B細(xì)胞PCR(In-CellPCR)裝配技術(shù)一噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，以保證抗體的輕重鏈配對(duì)為體內(nèi)原始配對(duì)的前提下，制備噬菌體“Ab2i3抗體庫(kù)”(注本發(fā)明不排除伴隨細(xì)胞內(nèi)PCR(In-CellPCR)技術(shù)--噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的不斷進(jìn)步，解決經(jīng)多次免疫產(chǎn)生的千差萬別不同克隆的記憶性B細(xì)胞，最重要“通用引物”設(shè)計(jì)的困難問題，制備輕重鏈配對(duì)為體內(nèi)原始配對(duì)的噬菌體Ab2i3抗體)。其二，即通常的構(gòu)建噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，，盡管這種方式獲得的抗體基因是體外的隨機(jī)組合。但由于抗體和抗原結(jié)合的特異性常主要由VH決定，所以本發(fā)明全部特異性B細(xì)胞(Ab2i3抗體產(chǎn)生細(xì)胞)，可在不改變特異性的情況下，使其每一個(gè)特異性的VH與本發(fā)明特異性B細(xì)胞不同的VL進(jìn)行組合(鏈替換)，產(chǎn)生特異性相同而親和力不同的Ab2i3抗體(注不排除某些VH與VL因空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性差和穩(wěn)定性差等原因?qū)е屡鋵?duì)失敗)。因此本發(fā)明可在不改變每一個(gè)B細(xì)胞克隆特異性的情況下找到VH—VL最佳配對(duì)，反而更可能篩選到高親和力的Ab2i3抗體抗體?；蛟S由于類似免疫抗體庫(kù)的原因，但本發(fā)明比免疫抗體庫(kù)更具優(yōu)越性和保障性，即全部由特異性B細(xì)胞克隆組成，如果數(shù)量足夠大而且VH--VL互補(bǔ)性強(qiáng)空間結(jié)構(gòu)十分穩(wěn)定，這會(huì)使原始抗體輕鏈和重鏈配對(duì)極易被恢復(fù)，反而不會(huì)導(dǎo)致高親和力原始Ab2i3抗體丟失。，通過這兩種不同方式(注關(guān)注通用引物和簡(jiǎn)并引物使用的方法)制備和構(gòu)建噬菌體“Ab2i3抗體庫(kù)”(注需要和具體試驗(yàn)操作者協(xié)商，選擇最適合本發(fā)明的方法和技術(shù))。(2)將體外培養(yǎng)的B細(xì)胞(生產(chǎn)抗體為目的)，通過轉(zhuǎn)化為抗體分泌漿細(xì)胞，獲得分泌性Ab2i3抗體(該途徑雖獲得的每一單個(gè)克隆抗體的數(shù)量較少，但足夠試驗(yàn)所用)，制備和構(gòu)建原始特異性“Ab2 β抗體庫(kù)”。通過這兩條途徑盡可能獲得模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的全部Ab2i3抗體，并以此制備和構(gòu)建初級(jí)具有不同特殊功能和用途的“Ab2i3抗體庫(kù)”。3. 3. 2. 3結(jié)合試驗(yàn)和競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)應(yīng)用各種常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)(I)根據(jù)結(jié)合試驗(yàn)，觀察來自第二階段不同途徑的噬菌體Ab2i3抗體和分泌性Ab2i3抗體與第一階段獲得的原始Abl抗體特異性結(jié)合的效果。(2)根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)，觀察來自第二階段不同途徑的噬菌體Ab2i3抗體和分泌性Ab2i3抗體競(jìng)爭(zhēng)抑制人呼吸道上皮細(xì)胞與第一階段獲得的原始Abl抗體結(jié)合的能力，特別是能否全方位阻斷人呼吸道上皮細(xì)胞與原始Abl抗體的結(jié)合能力(同時(shí)設(shè)置人呼吸道上皮細(xì)胞與原始Abl抗體結(jié)合的對(duì)照組)，以此判斷本發(fā)明第二階段獲得的全方位模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的“Ab2i3抗體庫(kù)”是否還存在“克隆漏洞”，本發(fā)明完全可以通過特異性試驗(yàn)彌補(bǔ)這種“克隆漏洞”，從而完善“Ab2 β抗體庫(kù)”。3. 3. 2. 4驗(yàn)證初級(jí)“Ab2 β抗體庫(kù)”的功能和效果應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，利用引起普通感冒的各種病毒和流感減毒活疫苗及滅活疫苗等從初級(jí)“Ab2 β抗體庫(kù)”中篩選特異性抗體，并提取和純化專一抗特定呼吸道病毒一靶細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)的抗體，即模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面“病毒受體”的Ab2i3抗體，以此驗(yàn)證初級(jí)“Ab2P抗體庫(kù)”的功能和效果。確證試驗(yàn)成功的最重要標(biāo)志是“Ab2P抗體庫(kù)”與引起普通感冒的各種病毒和各種流感特定疫苗特異性結(jié)合的范圍越廣說明成功率越高，同時(shí)說明本發(fā)明“Ab2i3抗體庫(kù)”構(gòu)建越完善。如果與上述病毒和疫苗特異性結(jié)合的成 功率達(dá)到百分之百，則意味著本發(fā)明“Ab2 β抗體庫(kù)”與未知和變異的致命性呼吸道病毒特異性結(jié)合的成功率也會(huì)極高。當(dāng)然本發(fā)明“Ab2i3抗體庫(kù)”也會(huì)越來越完善。3. 3. 2. 5致命性病毒中和試驗(yàn)
應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，利用某些已知致命性呼吸道病毒或減毒活疫苗等，從初級(jí)“Ab2i3抗體庫(kù)”中篩選特異性抗體，并進(jìn)行致命性病毒中和試驗(yàn)(委托試驗(yàn))，確證特異性Ab2i3抗體的功能和效果，制備針對(duì)某些特定致命性呼吸道病毒的特異性中和抗體，為工程抗體產(chǎn)業(yè)化和商品化產(chǎn)品一特異性免疫球蛋白打基礎(chǔ)。3. 3. 3制備和構(gòu)建多個(gè)具有不同特殊功能和用途的“Abl抗體庫(kù)”和“Ab2 β ”抗體庫(kù)，，根據(jù)人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原(如呼吸道以有包膜病毒為主，其受體表達(dá)十分豐富)的分布特點(diǎn)以及與Abl抗體和Ab2i3抗體相互作用的特點(diǎn)，通過本發(fā)明十分簡(jiǎn)單的獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，可隨著第一階段和第二階段試驗(yàn)，構(gòu)建多個(gè)具有不同功能和 用途的“Abl抗體庫(kù)”和多個(gè)相對(duì)應(yīng)的“Ab2i3抗體庫(kù)”，用于篩選特異性抗病毒抗體和進(jìn)行病毒中和試驗(yàn)。這些抗體庫(kù)其中抗體克隆庫(kù)容量估計(jì)最大的為104—105。對(duì)比一般抗體庫(kù)IO7-IOltl以上庫(kù)容量，兩者在庫(kù)容總抗體數(shù)量相等情況下，本發(fā)明抗體庫(kù)每一個(gè)單克隆抗體
的數(shù)量都在對(duì)方每一個(gè)單克隆抗體數(shù)量的千倍------百萬倍以上，因此本發(fā)明抗體庫(kù)與
呼吸道病毒相互作用，根本就沒有淘篩失敗的可能性(注抗體庫(kù)庫(kù)容量太大或每個(gè)特異性克隆數(shù)量太少都會(huì)影響篩選效果，因此要有度)。3. 3. 4本實(shí)驗(yàn)方案(保護(hù)本發(fā)明專利)，在實(shí)際試驗(yàn)中會(huì)選擇其中最合理化的方法和技術(shù)，以求在最短時(shí)間內(nèi)完成本發(fā)明。第二階段試驗(yàn)需要時(shí)間12個(gè)月-18個(gè)月，所需經(jīng)費(fèi)160-180萬人民幣，同時(shí)立即向世界各大國(guó)申請(qǐng)重要發(fā)明專利，在全世界控制實(shí)驗(yàn)方法和主要技術(shù)及市場(chǎng)……3. 3. 5全部回收不參于上述任何結(jié)合試驗(yàn)過程中的所有抗體和B細(xì)胞與其重要用途所指本實(shí)驗(yàn)方案任何試驗(yàn)過程中，(I).全部回收第一階段不與人呼吸道上皮細(xì)胞和Abl抗體以及Ab2i3抗體發(fā)生結(jié)合的所有剩余的非特異性抗體。(2)全部回收第二階段不與第一階段Abl抗體和Ab2i3抗體發(fā)生結(jié)合的所有剩余的非特異性B細(xì)胞。(3)所有剩余的全部回收的非特異性抗體和非特異性B細(xì)胞，分別分批分類長(zhǎng)期凍存。重要目的是重復(fù)本實(shí)驗(yàn)方案用于任何外源或內(nèi)源生物性物質(zhì)(如細(xì)胞或分子抗原)試驗(yàn)，制備特異性Abl抗體和Ab2i3抗體以及兩者各自相對(duì)應(yīng)特異性B細(xì)胞。(4)該種用于不同用途針對(duì)不同生物性物質(zhì)試驗(yàn)(見權(quán)利要求書)，預(yù)示可產(chǎn)生難以計(jì)數(shù)的發(fā)明專利。(5)實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)的原因在于本實(shí)驗(yàn)方案主要試驗(yàn)材料，即本實(shí)驗(yàn)方案實(shí)施后，全部回收的非特異性抗體和非特異性B細(xì)胞，因其來源于成千上萬人和大量不同種系不同動(dòng)物，而且都是純化的，因此這是一筆非常省時(shí)省力省錢的財(cái)富。4.實(shí)驗(yàn)時(shí)間和預(yù)期產(chǎn)品以及預(yù)算經(jīng)費(fèi)4. I第一階段全部試驗(yàn)需要時(shí)間3-6個(gè)月，所需經(jīng)費(fèi)70-90萬人民幣。4. I. I第一階段預(yù)期產(chǎn)品(1).制備具有不同功能和用途的全部原始Abl抗體和相對(duì)應(yīng)的全部原始Ab2i3抗體。(2).本實(shí)驗(yàn)方案可毫不費(fèi)力的極可能同時(shí)獲得抗相應(yīng)人肺腫瘤細(xì)胞的特異性抗癌抗體。4. I. 2第一階段試驗(yàn)結(jié)束后，立即向世界各大國(guó)申請(qǐng)關(guān)鍵性發(fā)明專利，在全世界控制實(shí)驗(yàn)方法和主要技術(shù)及市場(chǎng)……4. 2第二階段全部試驗(yàn)需要時(shí)間12個(gè)月-18個(gè)月，所需經(jīng)費(fèi)160-180萬人民幣。
4. 2. I第二階段預(yù)期產(chǎn)品制備和構(gòu)建多個(gè)具有不同特殊功能和用途的“Abl抗體庫(kù)，，和“Ab2 β ”抗體庫(kù)”4.2.2第二階段試驗(yàn)結(jié)束后，立即向世界各大國(guó)申請(qǐng)重要發(fā)明專利，在全世界控制實(shí)驗(yàn)方法和主要技術(shù)及市場(chǎng)……4. 3.第一階段和第二階段全部實(shí)驗(yàn)時(shí)間兩年，預(yù)算經(jīng)費(fèi)約250萬元，預(yù)期向世界各大國(guó)申請(qǐng)多個(gè)重要發(fā)明專利……4. 4.特別說明在本實(shí)驗(yàn)方案之外伴隨 試驗(yàn)過程還可以產(chǎn)生另外一個(gè)附加產(chǎn)品，即如果利用人CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞之間的差異，通過本發(fā)明實(shí)驗(yàn)方案相同的獨(dú)創(chuàng)性試驗(yàn)技術(shù)，制備抗CD4+T細(xì)胞膜表面CD4分子不同表位(內(nèi)含HIV-艾滋病病毒受體)的Abl抗體和相對(duì)應(yīng)的Ab2 β抗體，然后應(yīng)用Ab2 β抗體與含有HIV——gpl60和gpl20的試劑盒相互作用，并提取和純化特異性結(jié)合的Ab2 β抗體，同時(shí)進(jìn)行進(jìn)一步確證和HIV中和試驗(yàn)，以此制備重要的專一阻斷HIV—⑶4+細(xì)胞結(jié)合部位的特異性中和抗體。5.應(yīng)用特異性B細(xì)胞及其相應(yīng)的原始抗體編碼基因直接對(duì)接工程抗體技術(shù)的特殊試驗(yàn)這是除外噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，通過本實(shí)驗(yàn)方案第一階段和第二階段全部試驗(yàn)，獲得的不同來源的B細(xì)胞(全部Ab2i3抗體產(chǎn)生細(xì)胞)及其相應(yīng)的原始抗體編碼基因，直接對(duì)接細(xì)胞工程抗體技術(shù)的第二條生產(chǎn)更為原始的人源或人源化特異性免疫球蛋白的特殊途徑。這也是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)方案的直接目標(biāo)。其方法5. I.體外致敏方法應(yīng)用特定普通感冒病毒或特定流感減毒活疫苗和滅活疫苗與本實(shí)驗(yàn)方案第二階段獲得的B細(xì)胞(全部Ab2i3抗體產(chǎn)生細(xì)胞)在體外混合培養(yǎng)1-3天，致敏其中特異性B細(xì)胞。待其中特異性B細(xì)胞接受特定抗原第一信號(hào)刺激表達(dá)最早期活化信號(hào)B7分子(動(dòng)物試驗(yàn)表明B7分子在48h達(dá)到峰值，72h后出現(xiàn)回落)和IL-2受體等多個(gè)活化分子時(shí)，即以抗B7分子和IL-2受體抗體將其中部分活化(完全活化需要第二信號(hào)刺激)的特異性B細(xì)胞篩選出來。5. 2. ELISA方法等常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)將特定普通感冒病毒或特定流感減毒活疫苗和滅活疫苗固相化過程(包被)，應(yīng)用ELISA方法從第二階段獲得的B細(xì)胞中專一篩選結(jié)合特定病毒抗原的特異性B細(xì)胞(該試驗(yàn)盡管存在其它專利文獻(xiàn)，本發(fā)明即使在這一小點(diǎn)上，也要想辦法增加兩者結(jié)合性而有利篩選)。5.3.流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用特定普通感冒病毒或特定流感減毒活疫苗和滅活疫苗與本實(shí)驗(yàn)方案第二階段獲得的B細(xì)胞(全部Ab2i3抗體產(chǎn)生細(xì)胞)相互作用，然后再通過特定病毒抗原特異性Ab2i3抗體作為一抗與復(fù)合物中的特定普通感冒病毒或特定流感減毒活疫苗和滅活疫苗相互作用，在此基礎(chǔ)上Ab2 β抗體結(jié)合熒光二抗，形成四聚體復(fù)合物，然后通過流式細(xì)胞術(shù)將其中的特異性B細(xì)胞篩選出來(注該試驗(yàn)只是一種創(chuàng)意)。通過這三條途徑(還有更多途徑)獲得的病毒特異性B細(xì)胞，經(jīng)體外增值培養(yǎng)后，再通過PCR裝配技術(shù)將目的VH-VL基因連接，然后插入到適當(dāng)載體中(除外噬菌體抗體庫(kù)技術(shù))。直接通過細(xì)胞工程抗體技術(shù)和基因工程抗體技術(shù)，特別是基因工程抗體技術(shù)一大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳動(dòng)物和植物細(xì)胞(如眾所周知的轉(zhuǎn)基因大豆)表達(dá)系統(tǒng)，生產(chǎn)特異性抗病毒抗體。當(dāng)然長(zhǎng)期目標(biāo)通過乳腺表達(dá)系統(tǒng)，在轉(zhuǎn)基因奶中生產(chǎn)抗體，也是不錯(cuò)的選項(xiàng)。這是本發(fā)明除外噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，第二條可獲得原始特異性Ab2i3抗體編碼基因的途徑。其目的就是直接對(duì)接工程抗體技術(shù)，制備專一阻斷呼吸道病毒---上皮細(xì)胞結(jié)合部位的特異性中和抗體(不同用途的免疫球蛋白)。6.市場(chǎng)商品化產(chǎn)品一即走向工程抗體產(chǎn)業(yè)化道路(可根據(jù)長(zhǎng)遠(yuǎn)和短期目標(biāo)精心制定規(guī)劃，選擇最合適工藝，)工程抗體主要包括細(xì)胞工程抗體和基因工程抗體。細(xì)胞工程抗體，指該技術(shù)是在細(xì)胞水平上進(jìn)行操作，如人B細(xì)胞的EBV轉(zhuǎn)化及融合技術(shù)、雜交瘤細(xì)胞通過克隆化篩選產(chǎn)生單克隆抗體和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作為生物反應(yīng)器通過乳汁獲得特異性抗體等各種相關(guān)技術(shù)和方法?；蚬こ炭贵w則指在基因水平上進(jìn)行操作，把特定編碼抗體分子的目的基因，轉(zhuǎn)移至大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)，生產(chǎn)目的抗體等各種相關(guān)技術(shù)和方法。工程抗體產(chǎn)業(yè)化就是利用細(xì)胞工程、基因工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程等現(xiàn)代生物工程技術(shù)，對(duì)工程抗體有目的、有計(jì)劃地通過小試、中試、生產(chǎn)逐級(jí)放大過程，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品(抗體)生產(chǎn)的規(guī)范化、產(chǎn)業(yè)化，以滿市場(chǎng)需求。本發(fā)明根據(jù)“Ab2i3 ”抗體庫(kù)”功能和用途的不同，應(yīng)精心選擇最適合本發(fā)明的工程抗體產(chǎn)業(yè)化之路，制備三種市場(chǎng)商品化產(chǎn)品(I)抗未知和變異的呼吸道病毒人體特異性免疫球蛋白或人源化特異性免疫球蛋白。(2)抗各種已知的呼吸道病毒人體特異性免疫球蛋白或人源化特異性免疫球蛋白.。(3)僅抗I-幾個(gè)已知的特定致命性呼吸道病毒的人體特異性免疫球蛋白或人源化特異性免疫球蛋白。本發(fā)明預(yù)期商品化免疫球蛋白與目前市場(chǎng)商品化免疫球蛋白相比主要有5個(gè)重要區(qū)別其一，本發(fā)明免疫球蛋白抗體克隆數(shù)量最多IO4.而目前市場(chǎng)商品化免疫球蛋白抗體克隆數(shù)量至少IO7--IO8以上.兩者相差數(shù)千-數(shù)萬倍.這意味著如果是規(guī)格和重量相同的免疫球蛋白，本發(fā)明每一單克隆抗體數(shù)量是目前市場(chǎng)商品化免疫球蛋白每一單克隆抗體數(shù)量的數(shù)千或數(shù)萬倍以上。這樣的對(duì)比結(jié)果，對(duì)防治呼吸道病毒感染，本發(fā)明免疫球蛋白的用量要相對(duì)少得多，效果卻要好得多。其二，本發(fā)明最終走向商品化的3種免疫球蛋白都是針對(duì)各種呼吸道病毒的；而目前市場(chǎng)商品化免疫球蛋白卻是針對(duì)各種各樣抗原的，其中抗呼吸道病毒抗體含量太少.而眾所周知市場(chǎng)主要需求防治呼吸道病毒感染的免疫球蛋白。其三，本發(fā)明3種免疫球蛋白都是專一阻斷病毒-靶細(xì)胞間結(jié)合部位的，因此是用量很少的最好抗體，·而目前市場(chǎng)商品化免疫球蛋白所含抗體，卻是好抗體和無效抗體以及壞抗體的混合物，對(duì)個(gè)體而言其臨床用量很大。其四，本發(fā)明特定的免疫球蛋白就像阻斷病毒侵入人呼吸道上皮細(xì)胞途徑一樣，可以阻斷細(xì)菌等病原體通過其表面的黏附素(adhesin)與宿主粘膜上皮細(xì)胞黏附和有毒的分泌物對(duì)上皮細(xì)胞造成的損傷。其五，特別是防治未知或變異的致命性呼吸道病毒如引起“非典”和各種流感的病毒感染以及病毒性生物武器攻擊引發(fā)的突發(fā)事件。因此預(yù)期產(chǎn)品本發(fā)明免疫球蛋白與目前市場(chǎng)商品化免疫球蛋白相比，孰優(yōu)孰略一比便知。企業(yè)平時(shí)向市場(chǎng)提供3種抗不同呼吸道病毒的特效免疫球蛋白就是本發(fā)明最重要目的之一。7.逆向工程設(shè)計(jì)的兩種附加實(shí)驗(yàn)方案事物的兩面性理論Abl抗體和Ab2抗體分別屬于事物的兩個(gè)面，這一原理對(duì)本附加實(shí)驗(yàn)方案啟迪，即人呼吸道上皮細(xì)胞和呼吸道病毒同樣分別屬于事物的兩個(gè)面，因此可以通過逆向工程設(shè)計(jì)兩者程序位置互換的實(shí)驗(yàn)方案。7. I把本實(shí)驗(yàn)方案中的人呼吸道上皮細(xì)胞置換成特定呼吸道病毒或流感減毒活疫苗及滅活疫苗等，通過相同的本發(fā)明實(shí)驗(yàn)方案全部試驗(yàn)過程，制備抗和模擬病毒配體結(jié)合位點(diǎn)的Abl抗體和Ab2 β抗體，如果模擬病毒配體的Ab2 β抗體能夠特異性結(jié)合人呼吸道上皮細(xì)胞，說明抗病毒配體結(jié)合位點(diǎn)的Abl抗體，就是本發(fā)明所指專一阻斷特定呼吸道病毒------人呼吸道上皮細(xì)胞結(jié)合部位的特異性中和抗體。7. 2把本實(shí)驗(yàn)方案中的人呼吸道上皮細(xì)胞置換成特定呼吸道病毒或流感減毒活疫苗及滅活疫苗等，通過相同的本實(shí)驗(yàn)方案全部試驗(yàn)過程制備抗特定病毒Abl抗體。同時(shí)制備抗人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的Abl抗體。將兩種不同來源的Abl抗體固定一方，篩選另一方(如利用所謂抗原柱純化抗體技術(shù))。其中發(fā)生特異性結(jié)合的抗體分別為模擬病毒受體的抗體和模擬病毒配體的抗體，而模擬病毒受體的抗體就是本發(fā)明所指專一阻斷特定呼吸道病毒------人呼吸道上皮細(xì)胞結(jié)合部位的特異性中和抗體。7. 3該逆向工程設(shè)計(jì)的附加實(shí)驗(yàn)方案，不在本次發(fā)明的試驗(yàn)范圍之內(nèi)。 8.本發(fā)明說明書和實(shí)驗(yàn)方案需要重點(diǎn)說明的幾個(gè)問題首先特別指出由于本發(fā)明和實(shí)驗(yàn)方案屬于生命科學(xué)領(lǐng)域中的大工程，其中所涉及的眾多知識(shí)點(diǎn)和各種難題以及相應(yīng)的技術(shù)點(diǎn)與發(fā)現(xiàn)和創(chuàng)造性解決方式，就如同相互連接的似乎有些復(fù)雜的“網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)”，這導(dǎo)致如果不排除某種觀念禁錮(屢見不鮮)，不建立辯證唯物所帶來的正反雙向思維大框架，即使專業(yè)知識(shí)再厚重，也難以真正透徹理解和完全弄通本發(fā)明以及本發(fā)明實(shí)驗(yàn)方案，更別提交叉其中相互連接點(diǎn)上的每一步試驗(yàn)的目標(biāo)和要求，包括肯定會(huì)遇到和需要解決的各種問題，特別是本發(fā)明需要與每一步試驗(yàn)具體操作者協(xié)商選擇最適合本發(fā)明的試驗(yàn)方法和技術(shù)。更需要合理的銜接好所有試驗(yàn)的整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程。因此盡管本發(fā)明專利向全世界公開，世界上也只有發(fā)明者本人充分了解整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程每一步試驗(yàn)如何有目的進(jìn)行有序銜接和更有意義完成本發(fā)明。8. I內(nèi)源性配體和病毒與細(xì)胞表面同一受體相互作用的復(fù)雜關(guān)系8. I. I病毒受體一詞指位于細(xì)胞表面參與病毒識(shí)別和結(jié)合等過程，并促進(jìn)病毒感染的一組分子復(fù)合物。病毒受體可以是細(xì)胞的特定受體，亦可能是特殊受體之外的膜蛋白分子。而決定一個(gè)病毒能否進(jìn)入細(xì)胞，病毒的特異性受體起到關(guān)鍵性作用。隨著對(duì)細(xì)胞膜分子生物學(xué)的深入研究，作為各種配體的細(xì)胞受體蛋白，大多是一類細(xì)胞的信號(hào)受體，而其中許多均是同時(shí)作為病毒受體存在的。至少對(duì)有包膜的病毒而言，細(xì)胞膜表面的病毒受體的分布十豐富而且穩(wěn)定表達(dá)，且有易接近性。否則不能解釋這類病毒如流感病毒能夠引起大范圍的感染和相應(yīng)疾病。因此這一類病毒受體有一定規(guī)律可循，這提示本發(fā)明模擬此類病毒受體的Ab2 β抗體的獲得相對(duì)更容易。8. I. 2本發(fā)明研究的是病毒和體內(nèi)特定正常生理配體與細(xì)胞同一受體蛋白之間相互作用的空間結(jié)構(gòu)，即兩者與細(xì)胞同一受體蛋白結(jié)合部位是完全重疊；還是部分重疊；抑或兩者分別作用同一受體蛋白的不同表位。重點(diǎn)問題在于如果兩者與細(xì)胞同一受體蛋白結(jié)合部位完全重疊，而病毒仍然侵入機(jī)體，只能說明體內(nèi)常態(tài)下特定內(nèi)源性生理配體(激動(dòng)劑)太少或者相應(yīng)閑置受體太多，導(dǎo)致競(jìng)爭(zhēng)性抑制病毒結(jié)合細(xì)胞同一受體同一部位的效應(yīng)失敗，本發(fā)明甚至認(rèn)為如果閑置受體太多，其結(jié)合相應(yīng)病毒的過程都不會(huì)受到干擾和影響。如果兩者與細(xì)胞受體蛋白結(jié)合部位是部分重疊，抑或兩者分別作用同一受體蛋白的不同表位，則特定生理配體對(duì)病毒侵入細(xì)胞的影響則更小或者根本沒有影響。另外還有其他機(jī)制保護(hù)人呼吸道上皮細(xì)胞免遭病毒入侵，如分泌型IgA(SIgA)呼吸道粘膜上皮抗感染作用包括所謂少量的天然自身抗體(NAA)以低親和力同自身抗原結(jié)合，屏蔽抗原決定基的作用等，都不能阻擋特定病毒侵入人呼吸道粘膜上皮細(xì)胞，如“非典”和特定流感的大范圍流行，這種現(xiàn)象只能說明缺乏(哪怕是少量的)特異性中和抗體的保護(hù)作用。有論據(jù)表明抗狂犬病毒突變株1000個(gè)以上的IgG分子仍然不能中和該病毒，進(jìn)一步論證抗體覆蓋的空間位置是十分重要的而不是僅取決于抗體數(shù)量，關(guān)鍵在于抗體與病毒的結(jié)合所形成的空間位阻和所帶來的外力，對(duì)病毒與靶細(xì)胞特定結(jié)合位點(diǎn)的作用和影響。8. I. 3本發(fā)明制備的專一阻斷病毒-靶細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)Ab2 β抗體，可以完全克服8. I. 2所闡述的各種重點(diǎn)問題。甚至在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，通過Ab2i3抗體的特定功能和作用，可能觀察到各種呼吸道病毒與呼吸道上皮細(xì)胞表面病毒受體相互作用的某些特點(diǎn)。 8. 2如何最大限度提高Ab2 β抗體免疫識(shí)別廣度和深度以及親和力的問題人體內(nèi)T和B細(xì)胞克隆總數(shù)在IO12以上，可以表達(dá)IO12種獨(dú)具識(shí)別特性的抗體分子和T細(xì)胞分子，因此每個(gè)BCR和TCR均具有獨(dú)特的抗原特異性。具體到每一個(gè)體都可能有IO7以上表達(dá)不同抗原受體的B細(xì)胞和T細(xì)胞。一些研究認(rèn)為構(gòu)建天然抗體庫(kù)，庫(kù)容量IO7可覆蓋百分之99%自身抗原決定基，庫(kù)容量超過IO8可得到相對(duì)親和力較高自身抗體。為此本發(fā)明有三條途徑即可提高Ab2i3抗體免疫識(shí)別廣度和深度又可提高其親和力。8. 2. I第一途徑本發(fā)明利用不同人群不同個(gè)體和不同種系不同動(dòng)物免疫系統(tǒng)之間的差異，越多越好的大量提取純化不同人群不同個(gè)體和不同種系不同動(dòng)物的B細(xì)胞和血清抗體。其中如何最大限度的獲取更多克隆的人源B細(xì)胞和更多克隆的人源抗體，是本發(fā)明制備和構(gòu)建人源性“Ab2i3抗體庫(kù)”的關(guān)鍵。如通過實(shí)驗(yàn)方案的3. I實(shí)驗(yàn)主要材料3. I. I和3. I. 2所發(fā)現(xiàn)的兩條十分特殊的途徑，即針對(duì)人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位為目標(biāo)，那么僅僅專一針對(duì)和模擬該目標(biāo)的特異性B細(xì)胞就可達(dá)幾十萬至百萬不同克隆，而特異性抗體至少可達(dá)百萬以上不同克隆(注本發(fā)明已注意到B細(xì)胞和抗原都會(huì)出現(xiàn)重復(fù)計(jì)算)。其中必然會(huì)得到本發(fā)明所需的全部模擬各種已知和未知或變異的呼吸道上皮細(xì)胞表面病毒受體的，具有較高親和力的眾多不同克隆的Ab2i3抗體，這是本發(fā)明制備和構(gòu)建人源性“Ab2i3抗體庫(kù)”的最佳途徑。另外本發(fā)明就是要盡最大可能最大限度集中人和動(dòng)物眾群體免疫系統(tǒng)的綜合力量，以此獲得最大程度免疫識(shí)別廣度和深度的優(yōu)勢(shì)效應(yīng)，同時(shí)以此制備具有較高親和力的模擬包含全部“病毒受體”的人源和動(dòng)物源Ab2 β抗體。8. 2. 2第二條特殊途徑本發(fā)明構(gòu)建的具有不同特殊功能和用途的噬菌體“Ab2i3抗體庫(kù)”，完全不同于按抗體基因分類的天然抗體庫(kù)和免疫抗體庫(kù)。本發(fā)明噬菌體抗體庫(kù)重要特點(diǎn)(1)全部是以專一模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的特異性B細(xì)胞構(gòu)建的，根本不存在任何非特異性B細(xì)胞。(2)由于抗體和抗原結(jié)合的特異性常主要由VH所決定，所以本發(fā)明抗體庫(kù)針對(duì)某一特定病毒配體結(jié)合位點(diǎn)的的每一個(gè)特異性原始(原本的輕重鏈搭配)克隆，在不改變特異性的情況下，使其特異性的VH可與多種特定的不同的VL進(jìn)行組合(鏈替換)，即在不改變其特異性的情況下找到VH--VL最佳配對(duì)，產(chǎn)生高親和力的Ab2P抗體。(3)由于本發(fā)明噬菌體抗體庫(kù)容量小，而每一個(gè)克隆數(shù)量大如果互補(bǔ)性和穩(wěn)定性強(qiáng)，那么原始抗體輕鏈和重鏈配對(duì)極易被恢復(fù)，不會(huì)導(dǎo)致高親和力原始Ab2 β抗體丟失。(注需要和具體試驗(yàn)操作者協(xié)商，選擇最適合本發(fā)明的方法和技術(shù))8. 2. 3制備多價(jià)單特異性微型抗體如本發(fā)明的特異性噬菌體Ab2i3抗體，可借鑒把2個(gè)或2個(gè)以上的ScFv重組在一起的技術(shù)，以此提高親和力。
8.3.本發(fā)明Ab2P抗體會(huì)不會(huì)產(chǎn)生自身抗體的問題8. 3. I這個(gè)問題不僅對(duì)本發(fā)明是個(gè)問題，對(duì)人體內(nèi)特異性免疫應(yīng)答也是同樣問題。如病毒結(jié)構(gòu)上與病毒受體的結(jié)合結(jié)構(gòu)部位通常也是免疫學(xué)中的中和抗體所涉及的主要抗原表位(注單指這種結(jié)合結(jié)構(gòu)部位的中和性抗體，其本身就或多或少模擬了病毒受體)，因而此類模擬了病毒受體的Abl抗體作為免疫原產(chǎn)生的抗抗體(Ab2)的作用點(diǎn)就是自身成分。如流感病毒HA抗原，既是結(jié)合細(xì)胞受體的結(jié)構(gòu)成分，亦是產(chǎn)生中和性抗體的結(jié)構(gòu)，這導(dǎo)致病毒經(jīng)常變異逃逸相應(yīng)免疫壓力。在特定流感大范圍流行期結(jié)束后，臨床上有多少人因此產(chǎn)生自身免疫性疾病而到醫(yī)院就診。實(shí)際上此類中和性Abl抗體等同于本發(fā)明的Ab23抗體，對(duì)比兩者相差了一個(gè)免疫過程，因此本發(fā)明通過Ab2i3抗體誘導(dǎo)產(chǎn)生的Ab3抗體精準(zhǔn)性更差，所以產(chǎn)生特異性和高親和力的自身抗體的可能性更小。8. 3. 2免疫系統(tǒng)和免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)與抑制高親和力自身抗體產(chǎn)生的原因(I)由于個(gè)體免疫系統(tǒng)在發(fā)育早期和胚胎期形成的天然免疫耐受，其機(jī)制如克隆排除、克隆流產(chǎn)、克隆無能、克隆禁忌和免疫抑制等，導(dǎo)致體內(nèi)自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞或被清除或被抑制，特別指出胚胎發(fā)育期，AId就能引起免疫耐受。另外妊娠期間，母體IgG通過胎盤傳遞到胎兒，對(duì)選擇B細(xì)胞群具有重要作用，并發(fā)現(xiàn)經(jīng)母乳喂養(yǎng)的嬰兒，很少發(fā)生自身免疫性疾病。(2)生物體內(nèi)有少量天然自身抗體(NAA)的存在(進(jìn)化過程中為識(shí)別自身抗原而保留的)，有其生物學(xué)意義。如抗跨膜蛋白MUCl天然自身抗體與非小細(xì)胞肺癌關(guān)系以及天然自身抗體(NAA)以低親和力同自身抗原結(jié)合，屏蔽抗原決定基，抑制或阻止自身抗體同自身抗原的過度反應(yīng)等。(3).體內(nèi)“自我”與“非我”的免疫識(shí)別機(jī)制不同個(gè)體具有不同的免疫識(shí)別體系，導(dǎo)致免疫識(shí)別的方向也各不相同(注本發(fā)明單指差異識(shí)別不指重疊識(shí)別)。如正常人體每天都有一定數(shù)量(IO7-IO8)的細(xì)胞突變，而免疫監(jiān)督系統(tǒng)隨之將其中轉(zhuǎn)化細(xì)胞殲滅。要知道轉(zhuǎn)化細(xì)胞比癌細(xì)胞與正常細(xì)胞間的微細(xì)差異更小，可見人體在正常情況下這種“自我”與“非我”的免疫識(shí)別機(jī)制，在清除“非我”時(shí)，會(huì)避免損傷自身。(4).免疫調(diào)節(jié)涉及整體如神經(jīng)-內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)、各種免疫細(xì)胞和免疫分子、獨(dú)特型/抗獨(dú)特型網(wǎng)絡(luò)以及基因等構(gòu)成調(diào)解網(wǎng)絡(luò)，調(diào)控全身與局部的免疫應(yīng)答。(5).本發(fā)明包括人源性和動(dòng)物源性噬菌體抗體，僅從動(dòng)物源性噬菌體抗體的免疫原性講，如ScFv小分子抗體(包括雙鏈或三鏈ScFv抗體)，其免疫原性與經(jīng)過多次體細(xì)胞高頻突變和具有種間獨(dú)特型的人源抗體又有多大區(qū)別，本發(fā)明認(rèn)為兩者應(yīng)用臨床沒有多大區(qū)別。而且個(gè)體胚胎期高親和力的自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞被清除或抑制(禁忌克隆)所形成的淋巴細(xì)胞庫(kù)漏洞，其中包括針對(duì)自身同一抗原同一表位卻具有不同結(jié)構(gòu)(功能模擬)的高親和力自身抗體也會(huì)同時(shí)被清除或被抑制，或因個(gè)體發(fā)生早期表現(xiàn)出的獨(dú)特型締合性影響，這可能有助于其對(duì)應(yīng)面一某些模擬自身抗原的B細(xì)胞會(huì)成為潛在優(yōu)勢(shì)克隆，如果復(fù)雜一點(diǎn)闡述不同個(gè)體可能會(huì)有不同的模擬不同自身抗原的B細(xì)胞會(huì)成為潛在優(yōu)勢(shì)克隆。8. 3. 3基于上述五種原因，正常情況下產(chǎn)生自身抗體的可能性很小。本發(fā)明Ab2i3抗體的臨床應(yīng)用量肯定少，因此引起的免疫反應(yīng)容量有限，而且免疫原性弱和暴露不充分，比之抗HA抗原抗體或其它外源性抗原內(nèi)影像-Ab2 0抗體，誘導(dǎo)產(chǎn)生高親和力自身抗體如Ab3抗體的可能性更小。當(dāng)然不排除長(zhǎng)期反復(fù)大量應(yīng)用，在某些情況下 產(chǎn)生主要為抑制性Ab3抗體或者類似天然自身抗體(NAA)的低親和力Ab3抗體的諸多可能性。而由于“禁忌克隆”復(fù)活誘導(dǎo)產(chǎn)生高親和力Ab3自身抗體的可能性相對(duì)更小。
9.預(yù)期成果——本發(fā)明項(xiàng)目的重要用途和意義
眾所周知“非典”時(shí)期，北京某著名軍醫(yī)利用廣東感染SARS病毒痊愈患者的抗病毒血清自救獲得新生的故事，本發(fā)明項(xiàng)目預(yù)期產(chǎn)品-特異性免疫球蛋白，比之上述抗病毒血清強(qiáng)得多。與人感染病毒或接種了疫苗后提取的抗病毒血清相比，克服了抗病毒血清存在的四大問題①安全性問題，抗病毒血清中可能存在病毒，由此可能增加受者感染病毒的機(jī)會(huì)，并由于同種異體血清中存在眾多物質(zhì)也可能會(huì)給受者帶來過敏反應(yīng)。②有效性問題，抗病毒血清中的抗病毒抗體是不純的，而且由于不同個(gè)體存在不同的免疫應(yīng)答格局的原因，病毒或疫苗在宿主體內(nèi)產(chǎn)生的抗體有“好”抗體和“壞”抗體之分，而真正抗病毒作用取決于“好”抗體與“壞”抗體兩者作用的“凈”效應(yīng)。③抗原“原罪”問題，這一問題很重要，即感染某一特定病毒或接種了某一特定病毒的疫苗后，再次接觸感染了該特定病毒的“變異體”(病毒變異了)后，很可能某些個(gè)體對(duì)變異病毒不產(chǎn)生免疫應(yīng)答，如果出現(xiàn)這種免疫延遲現(xiàn)象真不如當(dāng)初不接種疫苗，因此疫苗接種是有原則和條件的。④從具有特殊功能和用途的“抗體庫(kù)”篩選和大量制備特異性抗病毒抗體，體現(xiàn)了多、快、好和省的原則，可以快捷有效特別是防治任何呼吸道病毒引起的突發(fā)事件，這是任何病毒疫苗和抗病毒血清無法做到的、也是任何抗病毒物質(zhì)包括化學(xué)藥品所不能做到的。9. I本發(fā)明項(xiàng)目預(yù)期產(chǎn)品-“Ab2i3抗體庫(kù)”可在最短時(shí)間提供大量最有效抗體，防治人類呼吸系統(tǒng)的任何急性病毒性傳染病。特別是如HlNl流感、禽流感、SARS或生物武器等致命性疾病引起的突發(fā)事件。9. 2應(yīng)用從“Ab20抗體庫(kù)”中篩選的特異性抗病毒抗體，制備抗體芯片和病毒診斷試劑盒。9. 3本發(fā)明獨(dú)創(chuàng)性免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)還有兩個(gè)重要用途特別與制備雙重阻斷艾滋病毒感染的超級(jí)抗體有關(guān)，如制備模擬HIV主要靶分子一⑶4和SIGN“病毒受體”的Ab20抗體。甚至應(yīng)用抗癌領(lǐng)域制備專一殺傷癌細(xì)胞的高精準(zhǔn)性CTL抗癌細(xì)胞和高特異性抗癌抗體(注前所未有的從多態(tài)性MHC群體提取的大量不同克隆的CTL細(xì)胞和B細(xì)胞中進(jìn)行篩選)有關(guān)。9. 4制備抗體疫苗等如以痘苗天壇株為載體的基因工程疫苗。9. 5 "Ab20抗體庫(kù)”可以防治生物武器或基因靶向性武器對(duì)特定人種群的攻擊。9. 6本發(fā)明獨(dú)創(chuàng)的免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)，可以有的放矢地促進(jìn)病毒一祀細(xì)胞間“配體和受體”的研究如兩者相互作用關(guān)系和作用規(guī)律以及空間結(jié)構(gòu)。另外也會(huì)促進(jìn)正常生理配體與受體結(jié)合的細(xì)胞生物學(xué)研究。9. 7本發(fā)明獨(dú)創(chuàng)的免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)，在生命科學(xué)領(lǐng)域?yàn)楦叻直嫒魏挝镔|(zhì)間微細(xì)差異提供了一個(gè)重要方法。9. 8其它如本發(fā)明獨(dú)創(chuàng)的免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)，還可用于某些自身免疫性疾病和細(xì)胞組織器官免疫耐受的研究。9. 9最后指出一種特殊用途(軟用途)，即本發(fā)明把專業(yè)知識(shí)和大自然規(guī)律相結(jié)合的創(chuàng)造性模式，在理論和應(yīng)用研究上可以提供更廣闊的思路，可以在遵循和符合自然規(guī)律的大框架內(nèi)，預(yù)判和解決實(shí)驗(yàn)方案中可能遇到的任何問題，相信也會(huì)給生命科學(xué)領(lǐng)域從事發(fā)明和創(chuàng)造的人士帶來難忘的啟迪和思維的活力。結(jié)論本發(fā)明甚至包括任何發(fā)明和創(chuàng)造必須在遵循和符合大自然規(guī)律的大框架下，進(jìn)行有的放矢的研究， 這是成功的基礎(chǔ)，否則難逃失敗命運(yùn)。碰運(yùn)氣的機(jī)會(huì)主義，在科學(xué)研究上并不可取。
權(quán)利要求
1.一種制備和構(gòu)建抗各種已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2 0抗體庫(kù)的方法，其特征在于整個(gè)實(shí)驗(yàn)方案包括第一階段和第二階段兩個(gè)主要實(shí)驗(yàn)步驟。
第一階段主要實(shí)驗(yàn)步驟 (I).通過四種不同試驗(yàn)途徑制備全方位抗人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位抗體(Abl抗體) 一方面①.應(yīng)用不同來源保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤細(xì)胞(包括相應(yīng)永生化細(xì)胞)，分別免疫大量不同品系(注包括雜交和野生)的兔子和鼠，從中分別提取兔子和鼠的抗人血清和其純化的總抗體。然后應(yīng)用保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞分別與這些抗人血清和其純化的總抗體相互作用，接著以人呼吸道上皮細(xì)胞吸附其中抗體，即抗人呼吸道上皮細(xì)胞抗體，并采用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)或新方法提取和純化這些抗體，本發(fā)明把這些專一抗人呼吸道上皮細(xì)胞的抗體稱Abl抗體。②.制備大量不同品系(注包括雜交和野生)未經(jīng)免疫的兔子和鼠以及羊等動(dòng)物血清和從這些動(dòng)物血清中提取純化的總抗體。然后應(yīng)用保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞分別與這些未經(jīng)免疫的兔子和鼠以及羊等動(dòng)物血清和其純化的總抗體相互作用，接著以人呼吸道上皮細(xì)胞吸附其中抗體，即抗人呼吸道上皮細(xì)胞抗體，并采用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)或新方法提取和純化這些抗體，本發(fā)明把這些專一抗人呼吸道上皮細(xì)胞的抗體稱Abl抗體。③.應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)，從不同品系牛和羊乳汁中提取純化總抗體。然后應(yīng)用保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞分別與這些從不同品系牛和羊乳汁中提取純化的總抗體相互作用，接著以人呼吸道上皮細(xì)胞吸附其中抗體，即抗人呼吸道上皮細(xì)胞抗體，并采用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)或新方法提取和純化這些抗體，本發(fā)明把這些專一抗人呼吸道上皮細(xì)胞的抗體稱Abl抗體。④由于這是一條十分特殊的試驗(yàn)途徑因此單獨(dú)闡述即通過說明書3. I. 2途徑可得到萬人體內(nèi)全部不同克隆的抗體。首先應(yīng)用保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞與上述商品化的全部人免疫球蛋白相互作用，并通過常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，提取并純化吸附在人呼吸道上皮細(xì)胞的低親和性和多反應(yīng)性的天然自身抗體(NAA)，即少量的具有天然免疫耐受性質(zhì)的Abl抗體。同時(shí)全部回收(收集并保留)那些不與上皮細(xì)胞相結(jié)合的全部人免疫球蛋白。然后再用相應(yīng)腫瘤細(xì)胞與那些不與上皮細(xì)胞結(jié)合的全部人免疫球蛋白相互作用，從中篩選特異性抗癌抗體。并在吸附特異性抗癌抗體后，最后千萬注意再次全部回收和儲(chǔ)存那些不與腫瘤細(xì)胞相結(jié)合的全部人免疫球蛋白以備制備本發(fā)明所需的Ab2 β抗體。 本發(fā)明通過上述四種途徑一制備全方位抗人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的Abl抗體(本發(fā)明稱原始Abl抗體，借以區(qū)別第二階段構(gòu)建具有不同特殊功能和用途的“Abl抗體庫(kù)”)。 另一方面上述試驗(yàn)衍生的附加產(chǎn)品-----特異性抗相應(yīng)人肺腫瘤細(xì)胞Abl抗癌抗體的獲得。特別重點(diǎn)指出本發(fā)明在該階段試驗(yàn)中存在著毫不費(fèi)力的附加產(chǎn)品(抗癌領(lǐng)域方面)——即應(yīng)用不同來源保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞完全徹底吸附上述四種途徑制備Abl抗體的試驗(yàn)后，再應(yīng)用相應(yīng)人肺腫瘤細(xì)胞分別與全部回收(收集并保留)沒有結(jié)合上皮細(xì)胞后所剩下的其它全部抗體相互作用。，接著以相應(yīng)人肺腫瘤細(xì)胞吸附其中抗體，即抗人肺腫瘤細(xì)胞抗體，并采用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)或新方法提取和純化這些抗體，本發(fā)明把這些專一抗人肺腫瘤細(xì)胞抗體，稱特異性Abl抗癌抗體。有充分理論依據(jù)說明本發(fā)明已經(jīng)是盡可能最大限度集中人和動(dòng)物眾群體免疫系統(tǒng)的綜合力量，并以求獲得最大程度免疫識(shí)別廣度和深度的優(yōu)勢(shì)效應(yīng)，即眾多不同的“自我”與“非我”免疫識(shí)別體系，以此克服個(gè)體免疫識(shí)別盲區(qū)(如有充分理論依據(jù)說明鼠源單克隆抗體免疫識(shí)別能力十分有限，而且由于遺傳因素影響每一個(gè)體淋巴細(xì)胞庫(kù)的庫(kù)容量都是既有限度又有差異，另外個(gè)體免疫系統(tǒng)胚胎發(fā)育期因先天免疫耐受造成T細(xì)胞庫(kù)和B細(xì)胞庫(kù)漏洞……等眾多原因)，用以識(shí)別人呼吸道上皮細(xì)胞與相應(yīng)腫瘤細(xì)胞之間的微細(xì)差異(注這本身就是辯證思維相對(duì)論指導(dǎo)下事物兩面性和整體與局部相互作用的大局觀念)。因此通過本階段該方法獲得的抗癌抗體比之目前任何方法獲得的抗癌抗體在精準(zhǔn)性識(shí)別腫瘤細(xì)胞方面都會(huì)更加可靠和更具有可行性。(注一般規(guī)律是應(yīng)用同一個(gè)體具有共同起源的人呼吸道上皮細(xì)胞和相應(yīng)人腫瘤細(xì)胞從事上述試驗(yàn)的，這種試驗(yàn)準(zhǔn)確度高。如同一個(gè)體肺癌手術(shù)切除術(shù)后，分離被切除腫瘤組織中的新鮮正常細(xì)胞和新鮮腫瘤細(xì)胞) (2).全方位模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位抗體(Ab2i3抗體)的制備 一方面①.首先通過以下三種不同途徑，分別獲得大量不同來源的不同人群的不同個(gè)體和不同種系的不同動(dòng)物(注包括雜交和野生)以及其它不同來源的總抗體。第一途徑應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，分別提取純化大量不同人血清和不同品系(注包括雜交和野生)兔子、鼠、羊等動(dòng)物血清中的總抗體。第二途徑應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，分別從牛和羊或人乳汁中提取純化總抗體。第三途徑購(gòu)買正規(guī)市場(chǎng)各種不同來源的商品化人體免疫球蛋白，即通過(I)……④……途徑全部回收(收集并儲(chǔ)存)那些不與人呼吸道上皮細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤細(xì)胞相結(jié)合的所有剩下的全部人免疫球蛋白，這才是本發(fā)明制備人源性Ab2 0抗體所需總抗體的最佳途徑。本發(fā)明通過上述三種途徑可分別獲得大量不同來源未經(jīng)免疫的人和動(dòng)物的總抗體(注內(nèi)含潛在的本發(fā)明所需的“Ab2i3抗體”)。②專一篩選結(jié)合Abl抗體抗原結(jié)合位點(diǎn)的Ab2i3抗體首先通過本發(fā)明十分簡(jiǎn)單的獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，分別巧妙處理第一階段(2)……①……通過上述三種途徑獲得大量不同來源未經(jīng)免疫的人和動(dòng)物的總抗體(注內(nèi)含潛在的本發(fā)明所需的Ab2i3抗體)與第一階段(I)……制備的全方位抗人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的Abl抗體，關(guān)鍵在于解決兩者之間相互作用關(guān)系問題。即通過本發(fā)明獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，分別從第一階段(2)……①……經(jīng)三種途徑獲得的大量不同來源未經(jīng)免疫的人和動(dòng)物總抗體中，完全徹底清除掉與全部Abl抗體本身的抗原結(jié)合部位不能結(jié)合的任何無關(guān)的抗體，辯證思維就是指完全徹底清除掉那些專門與Abl抗體(非抗原結(jié)合部位)本身其它表位相結(jié)合的抗體。經(jīng)過本發(fā)明這種獨(dú)創(chuàng)性特殊篩選技術(shù)和過程，唯一目的是全部回收(收集和儲(chǔ)存)其它與本發(fā)明相關(guān)的抗體(注內(nèi)含潛在的本發(fā)明所需的Ab2i3抗體)。然后應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)如免疫親和純化技術(shù)第一步，將純化的不同來源的Abl抗體分別與固相基質(zhì)共價(jià)連接,制備Abl抗體親和層析柱。第二步，在(2)……①和②……試驗(yàn)過程，即已經(jīng)完全徹底清除掉與Abl抗體(非抗原結(jié)合部位)的本身其它表位相結(jié)合的無關(guān)抗體后，把全部回收(收集和儲(chǔ)存)的其它與本發(fā)明相關(guān)的總抗體，分別與Abl抗體親和層析柱相互作用，唯一目標(biāo)是特異性篩選結(jié)合到Abl抗體本身的抗原結(jié)合部位的抗體，即本發(fā)明所需的Ab2 0抗體。第三步，從層析柱上洗脫Ab2 3抗體。如此經(jīng)過免疫親和純化技術(shù)，分別提取純化來自人源和動(dòng)物源的不同的Ab2i3抗體 另一方面上述試驗(yàn)衍生的附加產(chǎn)品-------模擬人相應(yīng)肺腫瘤細(xì)胞膜表面特有抗原表位抗體(Ab2i3抗體)的獲得，整個(gè)試驗(yàn)過程和應(yīng)用技術(shù)完全同第一階段(2).全方位模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位抗體(Ab2i3抗體)的制備試驗(yàn)過程和應(yīng)用技術(shù)，因此不再重復(fù)闡述。制備的模擬人相應(yīng)肺腫瘤細(xì)胞膜表面特有抗原表位的Ab2i3抗體，同樣可通過下面第二階段主要實(shí)驗(yàn)步驟的整個(gè)試驗(yàn)過程和應(yīng)用技術(shù)，獲得“Abl抗癌抗體”產(chǎn)生細(xì)胞。并可通過轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或通過細(xì)胞工程抗體技術(shù)和基因工程抗體技術(shù)制備工程抗癌抗體，最終走向工程抗癌抗體產(chǎn)業(yè)化之路。由于本發(fā)明目標(biāo)和實(shí)驗(yàn)方案時(shí)間有限，故對(duì)抗癌抗體的制備在此簡(jiǎn)單陳述，并在第二階段主要實(shí)驗(yàn)步驟不再闡述這種附加產(chǎn)品。
(3)競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn) 應(yīng)用各種常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)，觀察Ab2i3抗體競(jìng)爭(zhēng)抑制人呼吸道上皮細(xì)胞與Abl抗體結(jié)合的能力，特別是能否全方位阻斷人呼吸道上皮細(xì)胞與Abl抗體的結(jié)合能力(同時(shí)設(shè)置人呼吸道上皮細(xì)胞與Abl抗體結(jié)合的對(duì)照組)，以此判斷本發(fā)明全方位模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的Ab2i3抗體是否還存在“克隆漏洞”，本發(fā)明可完全通過簡(jiǎn)單的特異性試驗(yàn)彌補(bǔ)這種“克隆漏洞”。
(4).檢測(cè)Ab2i3抗體與引起普通感冒的各種病毒和流感疫苗相互作用 經(jīng)過(2).全方位模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位抗體(Ab2i3抗體)的制備過程，獲得的全部Ab2i3抗體，其實(shí)質(zhì)就是一個(gè)簡(jiǎn)單的、不同的、初級(jí)的Ab2i3抗體庫(kù)?？梢钥隙ù穗A段盡管抗體庫(kù)中每一單個(gè)克隆的抗體數(shù)量不會(huì)很多，但足以應(yīng)對(duì)試驗(yàn)所需。
本發(fā)明從安全角度出發(fā)，通過常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，檢測(cè)Ab2i3抗體與引起普通感冒的各種病毒和流感減毒活疫苗以及滅活疫苗相互作用。即通過不同技術(shù)手段檢測(cè)Ab2i3抗體與病毒和疫苗特異性結(jié)合的功能和效果。確證試驗(yàn)成功的最重要標(biāo)志是“Ab2i3抗體庫(kù)”與各種引發(fā)普通感冒的病毒和各種流感特定疫苗特異性結(jié)合的范圍越廣說明成功率越高(設(shè)置巧妙的試驗(yàn)對(duì)照組)，同時(shí)說明本發(fā)明“Ab2i3抗體庫(kù)”構(gòu)建越完善。如果與上述病毒和疫苗特異性結(jié)合的成功率達(dá)到百分之百，則意味著本發(fā)明“Ab2 β抗體庫(kù)”與未知和變異的致命性呼吸道病毒特異性結(jié)合的成功率也會(huì)極高。當(dāng)然本發(fā)明“Ab2i3抗體庫(kù)”會(huì)進(jìn).一步完善。
(5).Ab2 β抗體與引起普通感冒的特定病毒中和試驗(yàn) 如果針對(duì)某一特定病毒的特異性Ab2i3抗體數(shù)量足夠多的話，或者通過“追蹤溯源”再次提取純化該抗體，以便進(jìn)行相應(yīng)病毒中和試驗(yàn)。
(6).確證試驗(yàn)證實(shí)本發(fā)明篩選到特異性抗病毒抗體，表明第一階段(時(shí)間3-6個(gè)月)試驗(yàn)成功結(jié)束。
(7)預(yù)期產(chǎn)品 ①制備具有不同功能和用途的全部原始Abl抗體和相對(duì)應(yīng)的全部原始Ab2β抗體。
②本實(shí)驗(yàn)方案可毫不費(fèi)力的極可能同時(shí)獲得抗相應(yīng)人肺腫瘤細(xì)胞的特異性抗癌抗體。
(8).立即向世界各大國(guó)申請(qǐng)發(fā)明專利，在全世界控制實(shí)驗(yàn)方法和主要技術(shù)及場(chǎng)......第二階段主要實(shí)驗(yàn)步驟 (I).制備和構(gòu)建具有不同特殊功能和用途的“Abl抗體庫(kù)” ①.專一篩選能夠結(jié)合Ab2 β抗體本身抗原結(jié)合位點(diǎn)的B細(xì)胞 第一步試驗(yàn)首先應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，分別提取純化大量不同品系(注包括雜交和野生)兔子、鼠、羊等動(dòng)物的B細(xì)胞-------主要是未經(jīng)過免疫的B細(xì)胞和第一階段經(jīng)過多次免疫后純化并儲(chǔ)存的兔子及鼠的B細(xì)胞，其中包括不同器官組織來源及不同途徑來源的B細(xì)胞。第二步試驗(yàn)通過本發(fā)明十分簡(jiǎn)單的獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，分別巧妙處理上述第一步試驗(yàn)獲得的兔子、鼠、羊等動(dòng)物的B細(xì)胞和第一階段獲得的全部Ab2 β抗體，關(guān)鍵在于解決B細(xì)胞和Ab2i3抗體兩者之間相互作用關(guān)系問題。即通過本發(fā)明獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，從這些B細(xì)胞中完全徹底清除掉與全部Ab2i3抗體本身的抗原結(jié)合部位不能結(jié)合的任何無關(guān)的B細(xì)胞，辯證思維就是指完全徹底清除掉那些專門與Ab2i3抗體(非抗原結(jié)合部位)本身其它表位相結(jié)合的B細(xì)胞。經(jīng)過本發(fā)明這種獨(dú)創(chuàng)性特殊篩選技術(shù)和過程，唯一目的是全部回收(收集和保留)所有剩下的其它與本發(fā)明相關(guān)的B細(xì)胞(注內(nèi)含潛在的本發(fā)明所需的Abl抗體產(chǎn)生細(xì)胞)。第三步試驗(yàn)即將第二步試驗(yàn)……全部回收(收集和保留)所有剩下的其它與本發(fā)明相關(guān)的B細(xì)胞并和全部Ab2i3抗體分別分類進(jìn)行相互作用，再通過流式細(xì)胞術(shù)(FCM)或結(jié)合免疫磁性微珠技術(shù)，可更多更快的篩選出專一結(jié)合Ab2i3抗體本身的抗原結(jié)合部位的特異性B細(xì)胞，即本發(fā)明所需的Abl抗體產(chǎn)生細(xì)胞。
②.制備和構(gòu)建具有不同特殊功能和用途的“Abl抗體庫(kù)”的方法和技術(shù) 首先將能夠與Ab2 β抗體本身的抗原結(jié)合部位特異性結(jié)合的B細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)并在不同刺激條件下，在特定的不同時(shí)間內(nèi)，通過兩條途徑第一途徑，將體外培養(yǎng)的B細(xì)胞(增值為目的)，通過構(gòu)建噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的兩種不同方式其一為主要方式，即B細(xì)胞內(nèi)PCR(In-CellPCR)裝配技術(shù)噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，以保證抗體的輕重鏈配對(duì)為體內(nèi)原始配對(duì)的前提下，制備噬菌體Abl抗體(注本發(fā)明不排除伴隨細(xì)胞內(nèi)PCR(In-CellPCR)技術(shù)--噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的不斷進(jìn)步，解決經(jīng)多次免疫產(chǎn)生的千差萬別不同克隆的記憶性B細(xì)胞，最重要“通用引物”設(shè)計(jì)的困難問題，制備輕重鏈配對(duì)為體內(nèi)原始配對(duì)的噬菌體Abl抗體)。其二，即通常的構(gòu)建噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，，盡管這種方式獲得的抗體基因是體外的隨機(jī)組合。但由于抗體和抗原結(jié)合的特異性常主要由VH決定，所以本發(fā)明全部特異性B細(xì)胞(Abl抗體產(chǎn)生細(xì)胞)，可在不改變特異性的情況下，使其每一個(gè)特異性的VH與本發(fā)明特異性B細(xì)胞不同的VL進(jìn)行組合(鏈替換)，產(chǎn)生特異性相同而親和力不同的Abl抗體(注不排除某些VH與VL因空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性差和穩(wěn)定性差等原因?qū)е屡鋵?duì)失敗)。因此本發(fā)明可在不改變每一個(gè)B細(xì)胞克隆特異性的情況下找到VH—VL最佳配對(duì)，反而更可能篩選到高親和力的Abl抗體?；蛟S由于類似免疫抗體庫(kù)的原因，但本發(fā)明比免疫抗體庫(kù)更具優(yōu)越性和保障性，即全部由特異性B細(xì)胞克隆組成，如果數(shù)量足夠大而且VH--VL互補(bǔ)性強(qiáng)空間結(jié)構(gòu)十分穩(wěn)定，這會(huì)使原始抗體輕鏈和重鏈配對(duì)極易被恢復(fù)，反而不會(huì)導(dǎo)致高親和力原始Abl抗體丟失。本發(fā)明通過這兩種不同方式(注關(guān)注通用引物和簡(jiǎn)并引物使用的方法)制備噬菌體“Abl抗體庫(kù)”(注需要和具體試驗(yàn)操作者協(xié)商，選擇最適合本發(fā)明的方法和技術(shù))。第二途徑根據(jù)用途不同其一，將體外培養(yǎng)的B細(xì)胞(生產(chǎn)抗體為目的)，通過轉(zhuǎn)化為抗體分泌漿細(xì)胞，獲得分泌性Abl抗體(該途徑雖獲得的每一單個(gè)克隆抗體的數(shù)量較少，但足夠試驗(yàn)所用)，制備原始特異性“Abl抗體庫(kù)”。其二，將體外培養(yǎng)的B細(xì)胞(增值為目的)，作為抗原儲(chǔ)存(注每個(gè)B細(xì)胞膜表面有I萬-10萬個(gè)BCR抗原分子，而且BCR排列方向一致都易接近，區(qū)別抗體作為免疫原)以備免疫不同品系兔子和鼠制備Ab2P抗體和獲取Ab2 3 抗體產(chǎn)生細(xì)胞。 通過這兩條途徑盡可能獲得抗人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的全部“Abl抗體”，并以此制備和構(gòu)建初級(jí)具有不同特殊功能和用途的“Abl抗體庫(kù)” (2).構(gòu)建具有不同特殊功能和用途的“Ab2i3抗體庫(kù)” ①.專一篩選能夠結(jié)合Abl抗體抗原結(jié)合位點(diǎn)的B細(xì)胞 第一步試驗(yàn)首先應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，分別提取純化大量不同人和不同品系(注包括雜交和野生)兔子以及鼠的B細(xì)胞(包括未經(jīng)過免疫和經(jīng)過免疫的不同器官組織來源及不同途徑來源的B細(xì)胞)。其中含有第二階段(I)……②……其二，將體外培養(yǎng)的B細(xì)胞(增值為目的)，作為抗原(注每個(gè)B細(xì)胞膜表面有I萬-10萬個(gè)BCR抗原分子，而且BCR排列方向一致都易接近，區(qū)別抗體作為免疫原)免疫不同品系兔子和鼠，并提取純化經(jīng)過免疫的B細(xì)胞(注其免疫血清內(nèi)含相應(yīng)Ab2P抗體，可通過第一階段制備的特異性Abl抗體篩選出來，制備原始Ab2i3抗體)。另外本試驗(yàn)重復(fù)指出通過說明書3. I實(shí)驗(yàn)主要材料3. I. I途徑……可獲得內(nèi)含專一針對(duì)和模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的特異性B細(xì)胞可達(dá)幾十萬至百萬不同克隆，而且已注意到B細(xì)胞和抗原都會(huì)出現(xiàn)重復(fù)計(jì)算。其中必然會(huì)得到本發(fā)明所需的全部模擬各種已知和未知或變異的呼吸道上皮細(xì)胞表面病毒受體(如呼吸道以有包膜病毒為主，其受體表達(dá)十分豐富)的，具有較高親和力的眾多不同克隆的Ab2i3抗體，這是本發(fā)明構(gòu)建人源性“Ab2i3抗體庫(kù)”的最佳途徑。第二步試驗(yàn)通過本發(fā)明十分簡(jiǎn)單的獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，分別巧妙處理第一步試驗(yàn)獲得的人和兔子以及鼠的B細(xì)胞與第一階段獲得的全部Abl抗體，關(guān)鍵在于解決B細(xì)胞與Abl抗體兩者之間相互作用關(guān)系問題。即通過本發(fā)明獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，從這些B細(xì)胞中完全徹底清除掉與Abl抗體本身的抗原結(jié)合部位不能結(jié)合的任何無關(guān)的B細(xì)胞，辯證思維就是指完全徹底清除掉那些專門與Abl抗體(非抗原結(jié)合部位)本身其它表位相結(jié)合的B細(xì)胞。經(jīng)過本發(fā)明這種獨(dú)創(chuàng)性特殊篩選技術(shù)和過程，唯一目的是全部回收(收集和保留)所有剩余的其它與本發(fā)明相關(guān)的B細(xì)胞(注內(nèi)含潛在的本發(fā)明所需的Ab2i3抗體產(chǎn)生細(xì)胞)。第三步試驗(yàn).即將第二步試驗(yàn)……全部回收(收集和儲(chǔ)存)所有剩余的與本發(fā)明相關(guān)的B細(xì)胞并和全部Abl抗體分別分類進(jìn)行相互作用，再通過流式細(xì)胞術(shù)(FCM)或結(jié)合免疫磁性微珠技術(shù)，可更多更快的篩選出專一結(jié)合Abl抗體本身的抗原結(jié)合部位的特異性B細(xì)胞，即本發(fā)明所需的Ab2P抗體產(chǎn)生細(xì)胞。
②制備和構(gòu)建具有不同特殊功能和用途的“Ab2i3抗體庫(kù)”的方法和技術(shù) 首先將能夠與Abl抗體本身的抗原結(jié)合部位特異性結(jié)合的B細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)并在不同刺激條件下，在特定的不同時(shí)間內(nèi)，通過兩條途徑第一條途徑，將體外培養(yǎng)的B細(xì)胞(增值為目的)，通過構(gòu)建噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的兩種不同方式其一為主要方式，即通過B細(xì)胞內(nèi)PCR(In-CellPCR)裝配技術(shù)一噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，以保證抗體的輕重鏈配對(duì)為體內(nèi)原始配對(duì)的前提下，制備噬菌體“Ab2i3抗體庫(kù)”(注本發(fā)明不排除伴隨細(xì)胞內(nèi)PCR(In-CellPCR)技術(shù)一噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的不斷進(jìn)步，解決經(jīng)多次免疫產(chǎn)生的千差萬別不同克隆的記憶性B細(xì)胞，最重要“通用引物”設(shè)計(jì)的困難問題，制備輕重鏈配對(duì)為體內(nèi)原始配對(duì)的噬菌體Ab2 β抗體)。其二，即通常 的構(gòu)建噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，，盡管這種方式獲得的抗體基因是體外的隨機(jī)組合。但由于抗體和抗原結(jié)合的特異性常主要由VH決定，所以本發(fā)明全部特異性B細(xì)胞(Ab2i3抗體產(chǎn)生細(xì)胞)，可在不改變特異性的情況下，使其每一個(gè)特異性的VH與本發(fā)明特異性B細(xì)胞不同的VL進(jìn)行組合(鏈替換)，產(chǎn)生特異性相同而親和力不同的Ab2i3抗體(注不排除某些VH與VL因空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性差和穩(wěn)定性差等原因?qū)е屡鋵?duì)失敗)。因此本發(fā)明可在不改變每一個(gè)B細(xì)胞克隆特異性的情況下找到VH--VL最佳配對(duì)，反而更可能篩選到高親和力的Ab2 0抗體抗體?；蛟S由于類似免疫抗體庫(kù)的原因，但本發(fā)明比免疫抗體庫(kù)更具優(yōu)越性和保障性，即全部由特異性B細(xì)胞克隆組成，如果數(shù)量足夠大而且VH--VL互補(bǔ)性強(qiáng)空間結(jié)構(gòu)十分穩(wěn)定，這會(huì)使原始抗體輕鏈和重鏈配對(duì)極易被恢復(fù)，反而不會(huì)導(dǎo)致高親和力原始Ab2i3抗體丟失。本發(fā)明通過這兩種不同方式(注 關(guān)注通用引物和簡(jiǎn)并引物使用的方法)制備噬菌體“Ab2i3抗體庫(kù)”(注需要和具體試驗(yàn)操作者協(xié)商，選擇最適合本發(fā)明的方法和技術(shù))。第二條途徑，將體外培養(yǎng)的B細(xì)胞(生產(chǎn)抗體為目的)，通過轉(zhuǎn)化為抗體分泌漿細(xì)胞，獲得分泌性Ab2 β抗體(該途徑雖獲得的每一單個(gè)克隆抗體的數(shù)量較少，但足夠試驗(yàn)所用)，制備原始特異性“Ab2i3抗體庫(kù)”。
通過這兩條途徑盡可能獲得模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的全“Ab2i3抗體”，并以此制備和構(gòu)建初級(jí)具有不同特殊功能和用途的“Ab2i3抗體庫(kù)”。
(3)結(jié)合試驗(yàn)和競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn) 應(yīng)用各種常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)(I)根據(jù)結(jié)合試驗(yàn)，觀察來自第二階段不同途徑的噬菌體Ab2i3抗體和分泌性Ab2i3抗體與第一階段獲得的原始Abl抗體特異性結(jié)合的效果。(2)根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)，觀察來自第二階段不同途徑的噬菌體Ab2i3抗體和分泌性Ab2i3抗體競(jìng)爭(zhēng)抑制人呼吸道上皮細(xì)胞與第一階段獲得的原始Abl抗體結(jié)合的能力，特別是能否全方位阻斷人呼吸道上皮細(xì)胞與原始Abl抗體的結(jié)合能力(同時(shí)設(shè)置人呼吸道上皮細(xì)胞與原始Abl抗體結(jié)合的對(duì)照組)，以此判斷本發(fā)明第二階段獲得的全方位模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的“Ab2i3抗體庫(kù)”是否還存在“克隆漏洞”，本發(fā)明可通過特異性試驗(yàn)彌補(bǔ)這種“克隆漏洞”，從而完善“Ab2 β抗體庫(kù)”。
(4).驗(yàn)證初級(jí)“Ab2i3抗體庫(kù)”的功能和效果 應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，利用引起普通感冒的各種病毒和不同流感減毒活疫苗及滅活疫苗等從初級(jí)“Ab2 β抗體庫(kù)”中篩選特異性抗體，并提取和純化這種專一抗特定呼吸道病毒一靶細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)的抗體，即模擬人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面“病毒受體”的Ab2 β抗體，以此驗(yàn)證初級(jí)“Ab2i3抗體庫(kù)”的功能和效果。確證試驗(yàn)成功的最重要標(biāo)志是“Ab2i3抗體庫(kù)”與引起普通感冒的各種病毒和不同流感特定疫苗特異性結(jié)合的范圍越廣說明成功率越高(設(shè)置巧妙的試驗(yàn)對(duì)照組)，同時(shí)說明本發(fā)明“Ab2i3抗體庫(kù)”構(gòu)建越完善。如果與上述病毒和疫苗特異性結(jié)合的成功率達(dá)到百分之百，則意味著本發(fā)明“Ab2 β抗體庫(kù)”與未知和變異的致命性呼吸道病毒特異性結(jié)合的成功率也會(huì)極高。當(dāng)然本發(fā)明“Ab2i3抗體庫(kù)”也會(huì)越來越完善。
(5).致命性呼吸道病毒中和試驗(yàn) 應(yīng)用常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，利用某些已知致命性呼吸道病毒或減毒活疫苗等，從初級(jí)“Ab2i3抗體庫(kù)”中篩選特異性抗體，并進(jìn)行致命性病毒中和試驗(yàn)(委托試驗(yàn))，確證特異性Ab2 β抗體的功能和效果，制備針對(duì)某些特定致命性呼吸道病毒的特異性中和抗體，為工程抗體產(chǎn)業(yè)化和商品化產(chǎn)品——特異性免疫球蛋白打基礎(chǔ)。
(6).制備和構(gòu)建多個(gè)具有不同特殊功能和用途的“Abl抗體庫(kù)”和“Ab2i3”抗體庫(kù)” 根據(jù)人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原(如呼吸道以有包膜病毒為主，其受體表達(dá)十分豐富)的分布特點(diǎn)以及與Abl抗體和Ab2i3抗體相互作用的特點(diǎn)，通過本發(fā)明十分簡(jiǎn)單的獨(dú)創(chuàng)性免疫試驗(yàn)技術(shù)，可隨著第一階段和第二階段試驗(yàn)，構(gòu)建多個(gè)具有不同功能和用途的“Abl抗體庫(kù)”和多個(gè)相對(duì)應(yīng)的“Ab2 β抗體庫(kù)”，用于篩選特異性抗病毒抗體和進(jìn)行相應(yīng)病毒中和試驗(yàn)。這些抗體庫(kù)其中抗體克隆庫(kù)容量估計(jì)最大的為104—105。.對(duì)比一般抗體庫(kù)IO7-IOki以上庫(kù)容量，兩者在庫(kù)容總抗體數(shù)量相等情況下，本發(fā)明抗體庫(kù)每一個(gè)單克隆抗體的數(shù)量都在對(duì)方每一個(gè)單克隆抗體數(shù)量的千倍一百萬倍以上，因此本發(fā)明“Ab2 β ”抗體庫(kù)”與呼吸道病毒相互作用，根本就沒有淘篩失敗的可能性(注抗體庫(kù)庫(kù)容量太大或每個(gè)特異性克隆數(shù)量太少都會(huì)影響篩選效果，因此要有度) 另外僅從抗原的免疫原性講，動(dòng)物源基因工程抗體如ScFv小分子抗體(包括雙鏈和三鏈ScFv抗體)，其免疫原性與經(jīng)過多次體細(xì)胞高頻突變和具有種間獨(dú)特型的人源抗體又有多大區(qū)別，本發(fā)明認(rèn)為兩者應(yīng)用臨床沒有多大區(qū)別。
(7)第二階段試驗(yàn)需要時(shí)間12個(gè)月-18個(gè)月 (8)第二階段預(yù)期產(chǎn)品制備和構(gòu)建多個(gè)具有不同特殊功能和用途的“Abl抗體庫(kù)”和“Ab2i3 ”抗體庫(kù)” (9)第二階段試驗(yàn)結(jié)束后，立即向世界各大國(guó)申請(qǐng)發(fā)明專利，在全世界控制實(shí)驗(yàn)方法和主要技術(shù)及市場(chǎng)…… (10)應(yīng)用特異性B細(xì)胞及其相應(yīng)的原始抗體編碼基因直接對(duì)接工程抗體技術(shù)的特殊試驗(yàn) 這是除外噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，通過本實(shí)驗(yàn)方案第一階段和第二階段全部試驗(yàn)，獲得的各種不同來源的B細(xì)胞(全部Ab2i3抗體產(chǎn)生細(xì)胞)及其相應(yīng)的原始抗體編碼基因，直接對(duì)接細(xì)胞工程抗體技術(shù)的第二條生產(chǎn)更為原始人源或人源化特異性免疫球蛋白的特殊途徑。這也是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)方案的直接目標(biāo)。其方法 ①.體外致敏方法應(yīng)用特定普通感冒病毒或特定流感減毒活疫苗和滅活疫苗與本實(shí)驗(yàn)方案第二階段獲得的B細(xì)胞(全部Ab2i3抗體產(chǎn)生細(xì)胞)在體外混合培養(yǎng)1-3天，致敏其中特異性B細(xì)胞。待其中特異性B細(xì)胞接受特定抗原第一信號(hào)刺激表達(dá)最早期活化信號(hào)B7分子(動(dòng)物試驗(yàn)表明B7分子在48h達(dá)到峰值，72h后出現(xiàn)回落)和IL-2受體等多個(gè)活化分子時(shí)，即以抗B7分子和IL-2受體抗體將初步活化的特異性B細(xì)胞篩選出來。
②.ELISA方法等常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)將特定普通感冒病毒或特定流感減毒活疫苗和滅活疫苗固相化過程(包被)，應(yīng)用ELISA方法從第二階段獲得的B細(xì)胞中專一篩選結(jié)合特定病毒抗原的特異性B細(xì)胞(該試驗(yàn)盡管存在其它專利文獻(xiàn)，本發(fā)明即使在這一小點(diǎn)上，也要想辦法增加兩者結(jié)合性而有利篩選)。
③.流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用特定普通感冒病毒或特定流感減毒活疫苗和滅活疫苗與本實(shí)驗(yàn)方案第二階段獲得的B細(xì)胞(全部Ab2i3抗體產(chǎn)生細(xì)胞)相互作用，然后再通過特定病毒抗原特異性Ab2i3抗體作為一抗與復(fù)合物中的特定普通感冒病毒或特定流感減毒活疫苗和滅活疫苗相互作用，在此基礎(chǔ)上Ab2 β抗體結(jié)合熒光二抗，形成四聚體復(fù)合物，然后通過流式細(xì)胞術(shù)將特異性B細(xì)胞篩選出來(注該試驗(yàn)只是一種創(chuàng)意)。
通過這三條途徑(還有更多途徑)獲得的病毒特異性B細(xì)胞，經(jīng)體外增值培養(yǎng)后，再通過PCR裝配技術(shù)將目的VH-VL基因連接，然后插入到適當(dāng)載體中(除外噬菌體抗體庫(kù)技術(shù))。直接通過細(xì)胞工程抗體技術(shù)和基因工程抗體技術(shù)，特別是基因工程抗體技術(shù)一大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳動(dòng)物和植物細(xì)胞(如眾所周知的轉(zhuǎn)基因大豆)表達(dá)系統(tǒng)，生產(chǎn)特異性抗病毒抗體。當(dāng)然長(zhǎng)期目標(biāo)通過乳腺表達(dá)系統(tǒng)，在轉(zhuǎn)基因奶中生產(chǎn)抗體，也是不錯(cuò)的選項(xiàng)。這是本發(fā)明除外噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，第二條可獲得原始特異性Ab20抗體編碼基因的途徑。其目的就是直接對(duì)接工程抗體技術(shù)，制備專一阻斷呼吸道病毒一上皮細(xì)胞結(jié)合部位的特異性中和抗體(不同用途的免疫球蛋白)。
逆向工程設(shè)計(jì)的兩種附加實(shí)驗(yàn)方案 事物的兩面性理論Abl抗體和Ab2抗體分別屬于事物的兩個(gè)面，這一原理對(duì)本附加實(shí)驗(yàn)方案啟迪即人呼吸道上皮細(xì)胞和呼吸道病毒同樣分別屬于事物的兩個(gè)面，因此可以通過逆向工程設(shè)計(jì)兩者程序位置互換的實(shí)驗(yàn)方案。
(1)把本實(shí)驗(yàn)方案中的人呼吸道上皮細(xì)胞置換成特定呼吸道病毒或流感減毒活疫苗及滅活疫苗等，通過相同的本實(shí)驗(yàn)方案全部試驗(yàn)過程，制備抗和模擬病毒配體結(jié)合位點(diǎn)的Abl抗體和Ab2P抗體，如果模擬病毒配體的Ab2P抗體能夠特異性結(jié)合人呼吸道上皮細(xì)胞，說明抗病毒配體結(jié)合位點(diǎn)的Abl抗體，就是本發(fā)明所指專一阻斷特定呼吸道病毒------人呼吸道上皮細(xì)胞結(jié)合部位的特異性中和抗體。
(2)把本實(shí)驗(yàn)方案中的人呼吸道上皮細(xì)胞置換成特定呼吸道病毒或流感減毒活疫苗及滅活疫苗等，通過相同的本實(shí)驗(yàn)方案全部試驗(yàn)過程制備抗特定病毒Abl抗體。同時(shí)制備抗人呼吸道上皮細(xì)胞膜表面不同抗原不同表位的Abl抗體。將兩種不同來源的Abl抗體固定一方，篩選另一方(如利用所謂抗原柱純化抗體技術(shù))。其中發(fā)生特異性結(jié)合的抗體分別為模擬病毒受體的抗體和模擬病毒配體的抗體，而模擬病毒受體的抗體就是本發(fā)明所指專一阻斷特定呼吸道病毒------人呼吸道上皮細(xì)胞結(jié)合部位的特異性中和抗體。
(3)該逆向工程設(shè)計(jì)的附加實(shí)驗(yàn)方案，不在本次發(fā)明的試驗(yàn)范圍之內(nèi)。
最后本發(fā)明目標(biāo)—— 市場(chǎng)商品化產(chǎn)品，即走向工程抗體產(chǎn)業(yè)化道路(可根據(jù)長(zhǎng)遠(yuǎn)和短期目標(biāo)精心制定規(guī)劃，選擇最合適工藝，)。工程抗體主要包括細(xì)胞工程抗體和基因工程抗體。細(xì)胞工程抗體，指該技術(shù)是在細(xì)胞水平上進(jìn)行操作，如人B細(xì)胞的EBV轉(zhuǎn)化及融合技術(shù)、雜交瘤細(xì)胞通過克隆化篩選產(chǎn)生單克隆抗體和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作為生物反應(yīng)器通過乳汁獲得特異性抗體等各種相關(guān)技術(shù)和方法?；蚬こ炭贵w則指在基因水平上進(jìn)行操作，把特定編碼抗體分子的目的基因，轉(zhuǎn)移至大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)，生產(chǎn)目的抗體等各種相關(guān)技術(shù)和方法。制備三種市場(chǎng)商品化產(chǎn)品一一(I)抗未知和變異的呼吸道病毒人體特異性免疫球蛋白或人源化特異性免疫球蛋白。(2)抗各種已知的呼吸道病毒人體特異性免疫球蛋白或人源化特異性免疫球蛋白.。(3)僅抗I-幾個(gè)已知的特定致命性呼吸道病毒的人體特異性免疫球蛋白或人源化特異性免疫球蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所訴的一種制備和構(gòu)建抗各種已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2P抗體庫(kù)的方法，其特征在于整個(gè)實(shí)驗(yàn)方案所訴的第一階段和第二階段試驗(yàn)過程……(10)應(yīng)用特異性B細(xì)胞及其相應(yīng)的原始抗體編碼基因直接對(duì)接工程抗體技術(shù)的特殊試驗(yàn)……體外致敏方法和ELISA方法以及流式細(xì)胞術(shù)篩選特異性B細(xì)胞，用采用本實(shí)驗(yàn)方案的任何其它免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)或改進(jìn)技術(shù)篩選特異性B細(xì)胞所代替。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所訴的一種制備和構(gòu)建抗各種已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2 ^抗體庫(kù)的方法，其特征在于整個(gè)實(shí)驗(yàn)方案所訴的第一階段和第二階段試驗(yàn)過程…… (10)應(yīng)用特異性B細(xì)胞及其相應(yīng)的原始抗體編碼基因直接對(duì)接工程抗體技術(shù)的特殊試驗(yàn)……所應(yīng)用的保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞和第二階段獲得的全部相應(yīng)特異性B細(xì)胞以及其中原始的特異性模擬病毒受體的Ab2 ^抗體編碼基因，用采用本實(shí)驗(yàn)方案的人類任何器官組織任何細(xì)胞和第二階段獲得的全部相應(yīng)特異性B細(xì)胞以及其中原始的特異性模擬病毒受體Ab2 3抗體編碼基因所代替。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所訴的一種制備和構(gòu)建抗各種已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2 ^抗體庫(kù)的方法，其特征在于整個(gè)實(shí)驗(yàn)方案所訴的第一階段和第二階段試驗(yàn)過程……(10)應(yīng)用特異性B細(xì)胞及其相應(yīng)的原始抗體編碼基因直接對(duì)接工程抗體技術(shù)的特殊試驗(yàn)……所應(yīng)用的保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞和第二階段獲得的全部相應(yīng)特異性B細(xì)胞以及其中原始的特異性模擬病毒受體的Ab2 ^抗體編碼基因，用采用本實(shí)驗(yàn)方案的不同種系不同動(dòng)物任何器官組織任何細(xì)胞和第二階段獲得的全部相應(yīng)特異性B細(xì)胞以及其中原始的特異性模擬病毒受體的Ab2 ^抗體編碼基因所代替。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所訴的一種制備和構(gòu)建抗各種已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2P抗體庫(kù)的方法，其特征在于整個(gè)實(shí)驗(yàn)方案所訴的第一階段和第二階段試驗(yàn)過程……(10)應(yīng)用特異性B細(xì)胞及其相應(yīng)的原始抗體編碼基因直接對(duì)接工程抗體技術(shù)的特殊試驗(yàn)……特定普通感冒病毒或特定流感減毒活疫苗和滅活疫苗，用采用本實(shí)驗(yàn)方案的任何呼吸道病毒或其減毒活疫苗和滅活疫苗所代替。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所訴的一種制備和構(gòu)建抗各種已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2P抗體庫(kù)的方法，其特征在于整個(gè)實(shí)驗(yàn)方案所訴的第一階段和第二階段試驗(yàn)過程……(10)應(yīng)用特異性B細(xì)胞及其相應(yīng)的原始抗體編碼基因直接對(duì)接工程抗體技術(shù)的特殊試驗(yàn)……所應(yīng)用的保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞和特定普通感冒病毒或特定流感減毒活疫苗以及滅活疫苗，用采用本實(shí)驗(yàn)方案的人類任何器官組織任何細(xì)胞和相應(yīng)特定病毒或特定減毒活疫苗以及滅活疫苗所代替。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所訴的一種制備和構(gòu)建抗各種已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2P抗體庫(kù)的方法，其特征在于整個(gè)實(shí)驗(yàn)方案所訴的第一階段和第二階段試驗(yàn)過程……(10)應(yīng)用特異性B細(xì)胞及其相應(yīng)的原始抗體編碼基因直接對(duì)接工程抗體技術(shù)的特殊試驗(yàn)……所應(yīng)用的保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞和特定普通感冒病毒或特定流感減毒活疫苗以及滅活疫苗，用采用本實(shí)驗(yàn)方案的不同種系不同動(dòng)物任何器官組織任何細(xì)胞和相應(yīng)特定病毒或特定減毒活疫苗以及滅活疫苗所代替。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所訴的一種制備和構(gòu)建抗各種已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2P抗體庫(kù)的方法，其特征在于整個(gè)實(shí)驗(yàn)方案所訴的第一階段和第二階段試驗(yàn)過程……(10)應(yīng)用特異性B細(xì)胞及其相應(yīng)的原始抗體編碼基因直接對(duì)接工程抗體技術(shù)的特殊試驗(yàn)……所應(yīng)用的保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤細(xì)胞與第二階段獲得的全部相應(yīng)特異性B細(xì)胞以及其中原始的特異性模擬病毒受體的Ab2 ^抗體編碼基因，用采用本實(shí)驗(yàn)方案的人類任何器官組織任何保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的正常細(xì)胞與相應(yīng)腫瘤細(xì)胞和不同器官組織來源與外周血來源的各種免疫細(xì)胞所代替。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所訴的一種制備和構(gòu)建抗各種已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2P抗體庫(kù)的方法，其特征在于整個(gè)實(shí)驗(yàn)方案所訴的第一階段和第二階段試驗(yàn)過程……(10)應(yīng)用特異性B細(xì)胞及其相應(yīng)的原始抗體編碼基因直接對(duì)接工程抗體技術(shù)的特殊試驗(yàn)……所應(yīng)用的保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤細(xì)胞與第二階段獲得的全部相應(yīng)特異性B細(xì)胞以及其中原始的特異性模擬病毒受體的Ab2 ^抗體編碼基因，用采用本實(shí)驗(yàn)方案的不同種系不同動(dòng)物任何器官組織任何保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的正常細(xì)胞與相應(yīng)腫瘤細(xì)胞和不同器官組織來源與外周血來源的各種免疫細(xì)胞所代替。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所訴的一種制備和構(gòu)建抗各種已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2 0抗體庫(kù)的方法，其特征在于整個(gè)實(shí)驗(yàn)方案所訴的(I)第一階段和第二階段試驗(yàn)過程，所應(yīng)用的保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤細(xì)胞，用采用本實(shí)驗(yàn)方案的人類任何器官組織保有天然正確空間結(jié)構(gòu)正常細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤細(xì)胞包括白血病細(xì)胞所代替。(2)第一階段和第二階段試驗(yàn)過程，所應(yīng)用的保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤細(xì)胞，用采用本實(shí)驗(yàn)方案的其它不同種系的不同動(dòng)物的任何器官組織保有天然正確空間結(jié)構(gòu)正常細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤細(xì)胞包括白血病細(xì)胞所代替。(3)第一階段和第二階段試驗(yàn)過程，所應(yīng)用的保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤細(xì)胞，用采用本實(shí)驗(yàn)方案的人類任何器官組織中任何保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的相似細(xì)胞(如利用保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的⑶4+T細(xì)胞和⑶8+T細(xì)胞之間的差異，制備專一抗HIV配體結(jié)合位點(diǎn)的Ab2P抗體)或相似分子所代替。(4)第一階段和第二階段試驗(yàn)過程，所應(yīng)用保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤細(xì)胞，用采用本實(shí)驗(yàn)方案的其它不同種系不同動(dòng)物的任何器官組織中任何保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的相似細(xì)胞或相似分子所代替。(5)第一階段和第二階段試驗(yàn)過程，所應(yīng)用的保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的人呼吸道上皮細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤細(xì)胞，用采用本實(shí)驗(yàn)方案的任何保有天然正確空間結(jié)構(gòu)的相似外源生物性物質(zhì)(如用于微生物分型)所代替。
本發(fā)明其它權(quán)利要求已在前一個(gè)同族發(fā)明專利(申請(qǐng)?zhí)?01210064594. 3) “制備和構(gòu)建抗各種已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2P抗體庫(kù)的方法”中闡述，故本權(quán)利要求書不再重復(fù)。
全文摘要
本發(fā)明是對(duì)已公開發(fā)明專利(申請(qǐng)?zhí)?01110103966.4)和發(fā)明專利(申請(qǐng)?zhí)?01210064594.3)“制備和構(gòu)建抗各種呼吸道病毒感染的重大創(chuàng)新性Ab2β抗體庫(kù)的方法”，更具創(chuàng)造性的全方位補(bǔ)充。本發(fā)明說明書對(duì)外表明，作為世界首創(chuàng)項(xiàng)目具有完全的可行性和重大用途，同時(shí)本發(fā)明師法自然規(guī)律，客觀剖析世界上僅有的兩個(gè)所謂廣譜抗病毒藥物L(fēng)J001化合物和DRACO化合物研究上的缺陷，并從中找出與本發(fā)明的本質(zhì)區(qū)別。本發(fā)明五個(gè)主要目標(biāo)1.實(shí)驗(yàn)方案開始，半年內(nèi)就會(huì)有關(guān)鍵產(chǎn)品，立即向全世界各大國(guó)申請(qǐng)發(fā)明專利。2.同時(shí)伴隨試驗(yàn)附加產(chǎn)品篩選特異性抗人肺腫瘤細(xì)胞的抗體。3.一年半時(shí)間內(nèi)構(gòu)建多個(gè)不同用途的Ab2β抗體庫(kù)，用于篩選抗各種人類呼吸道病毒特異性中和抗體。4.為工程抗體(三種特異性免疫球蛋白)產(chǎn)業(yè)化之路打基礎(chǔ)。5.其它重要用途。本發(fā)明罕見的將如此眾多的知識(shí)點(diǎn)、難點(diǎn)、技術(shù)點(diǎn)、發(fā)現(xiàn)和創(chuàng)造點(diǎn)渾然成一體，需辯證全面透徹思維方可理解。
文檔編號(hào)C40B50/06GK102628191SQ201210087488
公開日2012年8月8日 申請(qǐng)日期2012年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月29日
發(fā)明者王勝軍 申請(qǐng)人:王勝軍