FoxO1選擇性抑制劑AS1842856的新用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種FoxO1選擇性抑制劑AS1842856的新用途。本發(fā)明所提供的式I所述的上述化合物的新用途是其在制備預防和/或治療傷口愈合障礙的藥物中的應用，尤其是在制備糖尿病傷口愈合障礙的藥物中的應用。本發(fā)明的藥效學實驗證實，AS1842856能顯著促進糖尿病小鼠傷口愈合。其在治療糖尿病傷口愈合障礙方面將產(chǎn)生良好的應用前景。
【專利說明】
Fox01選擇性抑制劑AS1842856的新用途
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及一種FoxOl選擇性抑制劑AS1842856的新用途。
【背景技術】
[0002] 糖尿病是嚴重威脅人類健康的代謝性疾病，糖尿病患者傷口愈合障礙是糖尿病一 個常見的并發(fā)癥，嚴重者甚至可以導致截肢，據(jù)報道全世界每30秒就有一例因糖尿病而 導致的截肢（Boulton, AJ, Vileikyte, L, Ragnarson-Tennvall，G, Apelqvist, J, 2005. The global burden of diabetic foot disease. Lancet. 366:1719-1724)。有效地控制和治療 糖尿病傷口愈合不良可以顯著降低截肢的風險。目前常用的治療方法包括清創(chuàng)、使用敷料 和局部給藥，近年又出現(xiàn)了很多輔助治療方法，如負壓治療、電刺激、機械輔助治療等。其中 藥物治療主要是使用生長因子治療，如重組血小板衍生生長因子（recombinant platelet derived growth factor, rhPDGF)是第一個被FDA批準用于臨床治療傷口愈合的生長因子， 但是其作用較弱，起效慢，需使用20周才能見效（0' Loughlin, A, McIntosh, C, Dinneen, SF, 0' Brien, T, 2010. Basic concepts to novel therapies:A review of the diabetic foot. Int J Low Extrem Wounds. 9:90-102)。敷料治療，如蛋白酶抑制劑Promogran通過結合并 抑制多種蛋白酶活性，改善創(chuàng)面的微環(huán)境促進傷口愈合，但是價格昂貴，且治療效果有限。 負壓治療，通過對創(chuàng)面提供局部負壓，將一個開放創(chuàng)面變成一個受控制的閉合的創(chuàng)面，將創(chuàng) 面基底過多的滲出液體移出，促進循環(huán)，減輕水腫，從而促進傷口愈合，但是其治療效果也 備受爭議（Game, FL，Hinchliffe，RJ，Apelqvist, J，Armstrong, DG，Bakker，K，Hartemann，A ,Londahl, M, Price, PE, Jeffcoate, WJ, 2012. A systematic review of interventions to enhance the healing of chronic ulcers of the foot in diabetes. Diabetes Me tab Res Rev. 28Suppl 1:119-141)。近年隨著分子生物學的發(fā)展，基因治療和細胞治療又被提 上了日程，目前研究結果顯示采用間充質(zhì)干細胞或者內(nèi)皮祖細胞移植的方法可以顯著促進 傷口愈合，但是尚處于實驗階段，其可靠性還需要進一步證實。因此，尋找一種安全、有效且 價格低廉的藥物或治療方法顯得尤為必要。
[0003] FoxOl(forkhead transcription factors of the 0 class 1)是 Forkhead 蛋 白家族中的成員，它是調(diào)節(jié)細胞活力的重要的轉(zhuǎn)錄因子，在糖尿病誘導的氧化應激以及細 胞凋亡中起重要的作用。FoxOl是胰島素信號通路的下游分子，其活性受磷酸化及泛素化 調(diào)節(jié)，當FoxOl被激活時它會發(fā)生核轉(zhuǎn)位，調(diào)控下游革E基因轉(zhuǎn)錄（Tsuchiya, K, Tanaka, J, S huiqing, Y, Welch, CL, DePinho, RA, Tabas, I, Tall, AR, Goldberg, IJ, Accili, D, 2012. Foxos integrate pleiotropic actions of insulin in vascular endothelium to protect mice from atherosclerosis. Cell Metab. 15:372-381)。糖尿病發(fā)生時，F(xiàn)oxOl 在糖尿病小 鼠的多種組織中明顯的高表達，提示它在糖尿病的發(fā)生和發(fā)展中起重要的作用（Battiprol u, PK, Hojayev, B, Jiang, N, Wang, ZV, Luo, X, Iglewski, M, Shelton, JM, Gerard, RD, Rotherme 1, BA, Gillette, TG, Lavandero, S, Hill, JA, 2012. Metabolic stress-induced activation of foxol triggers diabetic cardiomyopathy in mice. J Clin Invest. 122:1109-1118) 〇
[0004] 目前僅有日本的Nagashima課題組研究發(fā)現(xiàn)了兩類FoxOl的選擇性抑制劑，其中 僅有小分子化合物 AS1842856 和 AS1708727 活性較好（Nagashima, T, Shigematsu, N, Maruk i, R, Urano, Y, Tanaka, H, Shimaya, A, Shimokawa, T, Shibasaki, M, 2010. Discovery of novel forkhead box olinhibitors for treating type 2diabetes:Improvement of fasting glycemia in diabetic db/db mice. Mol Pharmacol ;78:961-970 ;Tanaka，H，Nagashima ，T，Shimaya，A，Urano, Y，Shimokawa，T，Shibasaki，M，2010. Effects of the novel foxol inhibitor asl708727on plasma glucose and triglyceride levels in diabetic db/db mice.Eur J Pharmacol ;645:185-191)。目前已經(jīng)商品化的是 AS1842856。AS1842856 是 一種可進入細胞內(nèi)的氧代二氫喹啉，它可以通過直接結合FoxOl來抑制其轉(zhuǎn)錄活性（IC5。為 33nM)，而并不結合于ser 256-磷酸化的FoxOl以及無活性的FoxOl。基于HepG2細胞報告基 因的檢測結果顯示，AS1842856對于FoxO家族成員FoxOl、Fox03a和Foxo4功能的抑制率 分別為70%、20%和3%。但是并沒有關于AS1842856在促進糖尿病患者傷口愈合方面的 報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供FoxOl選擇性抑制劑AS1842856的藥物新用途。
[0006] 本發(fā)明所提供的FoxOl選擇性抑制劑AS1842856的藥物新用途是其在制備預防和 /或治療傷口愈合障礙的產(chǎn)品中的應用。
[0007] 所述傷口愈合障礙具體可為糖尿病傷口愈合障礙。
[0008] 所述產(chǎn)品具體可為藥物或保健品。
[0009] 所述FoxOl選擇性抑制劑AS1842856的結構式如式I所示：
[0010]
[0011] 以FoxOl選擇性抑制劑AS1842856為活性成分制備的預防和/或治療傷口愈合障 礙的藥物（尤其是糖尿病傷口愈合障礙的藥物）也均屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0012] 所述藥物可通過注射、口服、噴射、滲透、吸收、物理或化學介導的方法導入機體如 肌肉、皮內(nèi)、皮下、靜脈、粘膜組織；或是被其他物質(zhì)混合或包裹后導入機體。
[0013] 需要的時候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學上可接受的載體。所述載 體包括藥學領域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面 活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
[0014] 所述藥物可以制成注射液、懸浮劑、粉劑、片劑、顆粒劑等多種形式。上述各種劑型 的藥物均可以按照藥學領域的常規(guī)方法制備。
[0015] 本發(fā)明的藥效學實驗證實，F(xiàn)oxOl選擇性抑制劑AS1842856能顯著促進糖尿病小 鼠傷口愈合。其在治療糖尿病傷口愈合障礙方面將產(chǎn)生良好的應用前景。
【附圖說明】
[0016] 圖1為FoxOl選擇性抑制劑AS1842856對糖尿病小鼠傷口愈合的促進作用。
[0017] 圖2為傷口建立后第0、6和12天的各組小鼠傷口的代表照片。
[0018] 圖3為FoxOl選擇性抑制劑AS1842856對糖尿病小鼠傷口及傷口周圍血流的影 響。
[0019] 圖4為傷口建立后第6天的各組小鼠傷口及傷口周圍血流的代表圖。標尺顯示從 藍色到紅色，代表血流依次增強，箭頭指示傷口位置。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實施例。
[0021] 下述實施例中所述方法如無特別說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和生物材料，如無 特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。
[0022] 下述實施例中所用的FoxOl選擇性抑制劑AS 1842856購自Merck Mi 11 ipore公司。
[0023] 實施例1、FoxOl選擇性抑制劑AS1842856顯著促進糖尿病小鼠傷口愈合
[0024] 雄性C57BL/6小鼠，10-12周，購自北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部。飼養(yǎng)條件：10 只/籠，室溫22 ± 1 °C，濕度50 ± 10 % °C，自然光照，自由攝食飲水。所有動物于飼養(yǎng)環(huán)境中 適應5天后開始實驗，食水自由。
[0025] 將40只上述雄性小鼠均分為4組，每組10只：具體分組方法為：對照組一組， 糖尿病模型組一組，F(xiàn)oxOl選擇性抑制劑AS1842856組按照給藥量分別設置高、低劑量 各一組，共兩組；對照組小鼠腹腔注射枸櫞酸鈉緩沖液，糖尿病模型組和FoxOl選擇性抑 制劑AS1842856組小鼠均連續(xù)五天腹腔注射60mg/kg鏈脲佐菌素（Sigma-Aldrich, St Louis，M0, USA)。注射72h后剪尾取血測定血糖濃度，篩選出血糖在250mg/dL以上者作為 糖尿病動物模型，之后監(jiān)測一周血糖濃度以備實驗用。
[0026] 當小鼠血糖濃度升至250mg/dL -周后，腹腔注射60mg/kg戊巴比妥鈉麻醉小鼠， 固定四肢，使用電動剃毛器和脫毛膏脫去小鼠背部毛，用活檢打孔器（Acuderm inc.，F(xiàn)〇rt Lauderdale, FL, USA)在小鼠背內(nèi)側制成一個直徑6mm的圓形創(chuàng)面，暴露出皮下的肌肉 組織，然后用透氣敷料（Johnson&Johnson, Milpitas, CA, USA)覆蓋傷口。每兩天更換膠 布，標記傷 口面積并照相，采用 Image-Pro Plus 軟件（Media Cybernetics, Inc. , Silver Spring, MD，USA)計算傷口面積。傷口模型建立時開始給藥，將FoxOl選擇性抑制劑 AS1842856 溶于 5 % DMS0/95 % PEG-400(v/v)中，并分別以 lmg/kg(低劑量組）和 5mg/ kg(高劑量組）皮下隔天給藥。
[0027] 實驗結果顯示，與正常對照組小鼠相比，糖尿病組小鼠傷口愈合的速度明顯地減 慢，而給予5mg/kg AS1842865的糖尿病小鼠傷口愈合速度從第4天開始加快，一直持續(xù)到 第14天。正常對照組小鼠第6天的傷口愈合面積的百分率為52. 29% ±4. 30%，而糖尿病 組小鼠第6天的傷口愈合面積的百分率為17. 88 % ±4. 85 %，給予lmg/kg AS1842865組小 鼠第6天的傷口愈合面積的百分率為33. 99% ±9. 36%，給予5mg/kg AS1842865組小鼠第 6天的傷口愈合面積的百分率為52. 46% ±7. 30% (實驗結果如圖1和圖2所示）。
[0028] 同時采用激光多普勒血流成像系統(tǒng)（MoorLDI, Moor Instruments Ltd.，Devon，UK)在傷口建立后的第6天測定傷口及傷口周圍血流變化。所記錄的圖像使用 專用軟件分析（MoorLDI v2.1;Moor Instruments Ltd.，Devon, UK)，取其平均值代表該部 位平均血流值。
[0029] 實驗結果顯示，與正常對照組小鼠相比，糖尿病組小鼠傷口及傷口周圍平均血流 值明顯地降低，而給予5mg/kg AS1842865的糖尿病小鼠傷口及傷口周圍平均血流值顯著增 高。正常對照組小鼠第6天的傷口及傷口周圍平均血流值為324. 0± 36. 54,而糖尿病組小 鼠第6天的傷口及傷口周圍平均血流值為200. 7 ± 19. 96,給予lmg/kg AS1842865組小鼠第 6天的傷口及傷口周圍平均血流值為230. 5± 15. 85,給予5mg/kg AS1842865組小鼠第6天 的傷口及傷口周圍平均血流值為328. 4±19.41 (實驗結果如圖3和圖4所示）。上述結果 表明，F(xiàn)oxOl選擇性抑制劑AS1842856能顯著促進糖尿病小鼠傷口愈合。其在治療糖尿病 傷口愈合障礙方面將產(chǎn)生良好的應用前景。
【主權項】
1. 式I所示的化合物在制備預防和/或治療傷口愈合障礙的產(chǎn)品中的應用：2. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于：所述傷口愈合障礙為糖尿病傷口愈合障 礙。3. 根據(jù)權利要求1或2所述的應用，其特征在于：所述產(chǎn)品為藥物或保健品。4. 一種預防和/或治療傷口愈合障礙的產(chǎn)品，其活性成分為權利要求1中式I所示的 化合物。5. 根據(jù)權利要求4所述的產(chǎn)品，其特征在于：所述傷口愈合障礙為糖尿病傷口愈合障 礙。6. 根據(jù)權利要求4或5所述的產(chǎn)品，其特征在于：所述產(chǎn)品為藥物或保健品。
【文檔編號】A61P17/02GK105853421SQ201510032912
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2015年1月22日
【發(fā)明人】鐵璐, 李學軍, 史運迪, 王卓飛, 陳錦文
【申請人】北京大學