次2小時，分次濾過，合并濾 液，回收乙醇;減壓濃縮至730mL的濃縮液，放至室溫；
[0086] ③澄清；
[0087] 方法a:向所得濃縮液中加入4%的卵蛋白混懸液60ml，充分?jǐn)埌?，加熱煮?分鐘， 放至室溫；
[008引或方法b:向所得濃縮液中加入2 %殼聚糖-1 %醋酸溶液60ml，充分?jǐn)埌?，加熱?0 °C保溫10分鐘，放至室溫，過濾，得澄清液；
[0089] 或方法C:向所得濃縮液中加入2% "ZTCl + r澄清劑B組分的1 %醋酸溶液60mL，充 分?jǐn)埌瑁訜嶂?0°C保溫1 Omin，再加入2% "ZTCl + r澄清劑A組分的水溶液30mL，60°C保溫 1 Omin，放至室溫，過濾，得澄清液；
[0090] ④向步驟③所得澄清液中加入濃度60%食用白酒167ml，攬拌均勻;加入藥液重量 1 %的娃藻±，攬拌均勻，利用板框過濾器進行過濾，收集濾液；
[0091] ⑤向步驟④所得濾液中加入3g吐溫-80，Ig甜菊糖巧;攬拌均勻;和/或
[0092] ⑥向步驟⑤所得藥液中加入Ig焦亞硫酸鋼(抗氧劑），2g依地酸巧鋼(絡(luò)合劑）；攬 拌均勻；
[0093] ⑦加入純化水至1000 ml，用氨氧化鋼溶液調(diào)節(jié)至pH值至5.0;攬拌均勻，濾過，
[0094] ⑧灌裝，每支IOml，100°C滅菌30分鐘，即得。
[00M]按上述方法制備實驗組樣品，區(qū)別在于步驟③、⑥W及步驟⑦是否調(diào)節(jié)pH值不同， 具體見下表。（下表中步驟⑦具體是指調(diào)節(jié)pH值）
[0097] 將上述實驗組各五虎口服液樣品1-12及對比例1五虎口服液樣品置于高溫(60°C) 條件下進行加速實驗，按文獻譚曉梅等（五虎口服液中阿魏酸含量測定方法的研究，中藥 材，2003,（第6期）背景文獻2)公開的方法，分別于第0、5、10天檢測各樣品五虎口服液中阿 魏酸的含量。檢測結(jié)果見下表。
[0098] 各五虎口服液樣品高溫(60°C)影響因素試驗阿魏酸含量測定結(jié)果(單位mg/mU
[0099]
[0100] 各五虎口服液樣品高溫(60°C)影響因素試驗阿魏酸含量測定結(jié)果(單位mg/mU
[0102]各五虎口服液樣品高溫(60°C)影響因素試驗阿魏酸含量測定結(jié)果(單位mg/mU
[0103]
[0104] 從上表可W看出單用抗氧劑及絡(luò)合劑對阿魏酸的穩(wěn)定性有所改善，但并不明顯， 調(diào)抑值對阿魏酸的穩(wěn)定性改善作用好于單用抗氧劑及絡(luò)合劑。單獨改變絮凝方法對阿魏酸 的穩(wěn)定性改善較大，分別聯(lián)合加抗氧劑及絡(luò)合劑或調(diào)pH值后阿魏酸穩(wěn)定性又有所改善，但 阿魏酸降解仍較大。=者聯(lián)合應(yīng)用后，阿魏酸穩(wěn)定性問題得到根本的解決，高溫影響因素10 天，含量下降在5%W內(nèi)。
[0105] 將上述實驗組五虎口服液樣品8(其制備方法包括步驟①②③b④⑤⑥⑦⑧），實驗 組五虎口服液樣品12(其制備方法包括步驟①②③C④⑤⑥⑦⑧），及對比例1五虎口服液樣 品分別進行長期穩(wěn)定性實驗，按文獻譚曉梅等(五虎口服液中阿魏酸含量測定方法的研究， 中藥材，2003,（第6期)背景文獻2)公開的方法，檢測各樣品五虎口服液中阿魏酸的含量。檢 測結(jié)果見下表。
[0107]從上表可W看出實驗組樣品8、樣品12各3個批樣品經(jīng)長期穩(wěn)定性考察24個月，阿 魏酸含量幾無變化，而采用常規(guī)口服液制備方法制備的樣品長期穩(wěn)定性考察中含量下降明 顯，長期24個月，含量下降了33.8%。說明本發(fā)明技術(shù)方案在改善有效成分阿魏酸穩(wěn)定性方 面效果明顯。
[0108] 實驗例2藥效學(xué)實驗
[0109] 實驗材料藥物:實施例7制備的五虎口服液，批號:20131104;對比例1制備的五虎 口服液，批號：20131101;五虎散(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號20130812)， 用前W10%乙醇配制所需濃度。對照組給予等容積的10%乙醇溶液。阿司匹林，山東新華制 藥股份有限公司生產(chǎn)，批號：20130402。鹽酸贓替晚，宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批 號：20130303。動物：昆明種小白鼠、18-22g，雌雄各半。大白鼠，SD種，180-220g，雌雄各半， 由北京華阜康生物科技有限公司提供。
[0110] 1止痛作用
[0111] 1.1小鼠醋酸扭體法(實施例7及對比例1樣品生產(chǎn)后即進行試驗)將小鼠隨機分5 組，灌胃給10%乙醇或藥物1小時后，腹腔注射0.6%醋酸溶液O.lml/lOg，觀察小鼠在20分 鐘內(nèi)的扭體次數(shù)，結(jié)果見表1。
[0112] 表1醋酸扭體法測定五虎口服液的鎮(zhèn)痛作用（X±SD)
[0114] 注:胖<0.0 l (與正常對照組比較）
[0115] 結(jié)果表明，五虎散與各五虎口服液均可減少小鼠扭體次數(shù)，與正常對照組比較，具 有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0116] 1.2小鼠醋酸扭體法(實施例7及對比例1樣品生產(chǎn)一年后進行試驗)將小鼠隨機分 5組，灌胃給10%乙醇或藥物1小時后，腹腔注射0.6%醋酸溶液0.1 ml/lOg，觀察小鼠在20分 鐘內(nèi)的扭體次數(shù)，結(jié)果見表2。
[0117] 表2醋酸扭體法測定五虎口服液放置一年后的鎮(zhèn)痛作用（X±SD)
[0119] 注:胖<0.01 (與正常對照組比較）
[0120] 結(jié)果表明，樣品經(jīng)放置一年后，五虎口服液(實施例7)組藥效未明顯降低，但五虎 口服液(對比例1)藥效降低明顯，但兩者與正常對照組比較，具有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0121] 2、抗炎作用
[0122] 2.1小鼠耳二甲苯致炎法
[0123] 2.1.1五虎口服液對二甲苯致小鼠耳部炎癥影響（實施例7及對比例I樣品生產(chǎn)后 即進行試驗）
[0124] 小鼠隨機分5組，致炎前45分鐘灌胃10 %乙醇或藥物，將0.05ml二甲苯涂于小鼠右 耳前后兩側(cè)，另一耳作對照。20分鐘處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑8mm的打孔器于 同一部位分別打下耳片、稱重，W左耳重量為lOOg，計算右耳炎癥增重百分率，結(jié)果見表3。
[0125] 表3五虎口服液抗炎作用（完±:獨）
[0127] 注:沖<0.0 l (與正常對照組比較）
[012引結(jié)果表明，五虎散和各口服液均能抑制二甲苯致小鼠耳部炎癥。
[0129] 2.1.2五虎口服液對二甲苯致小鼠耳部炎癥影響（實施例7及對比例1樣品生產(chǎn)一 年后進行試驗）
[0130] 小鼠隨機分5組，致炎前45分鐘灌胃10%乙醇或藥物，將0.05ml二甲苯涂于小鼠右 耳前后兩側(cè)，另一耳作對照。20分鐘處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑8mm的打孔器于 同一部位分別打下耳片、稱重，W左耳重量為lOOg，計算右耳炎癥增重百分率，結(jié)果見表4。
[0131] 表4五虎口服液放置一年后抗炎作用C X±SD)
[0133] 注:沖<0.01 (與正常對照組比較）
[0134] 結(jié)果表明，樣品經(jīng)放置一年后，五虎口服液(實施例7)組藥效未明顯降低，與正常 對照組比較，具有統(tǒng)計學(xué)意義。但五虎口服液(對比例1)藥效明顯降低。
[0135] 3.1大鼠足巧蛋清致炎法(實施例7及對比例1樣品生產(chǎn)后即進行試驗）
[0136] 五虎口服液對大鼠蛋清足腫影響大鼠隨機分5組，每組9只，每只大鼠受試前灌服 普通水5ml，灌胃給10%乙醇或藥物15分鐘后，將蛋清0.05ml注入大鼠后足巧皮下，致炎前 及致炎后的0.5、1.0、2.0、4.0、6.0小時測量大鼠足巧體積、計算體積變化百分率，結(jié)果見表 5。
[0137] 表5五虎口服液對蛋清致大鼠足巧腫脹的影響:(X±SD)
[013 引
[0139] 沖<0.05 *沖<0.01 (與正常對照組比較）A P<〇.05:(與五虎散組比較）
[0140] 結(jié)果表明，各給藥組大鼠足巧腫脹程度均明顯低于正常對照組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，在 注射蛋清后各個時刻，除五虎散在0.5小時外，各給藥組與對照組比較均有顯著性差異，五 虎散與各五虎口服液組比較，在0.5小時腫脹程度差異顯著，其他各個時刻無差異，說明五 虎口服液與五虎散對大鼠蛋清關(guān)節(jié)炎都有明顯抑