分離胎盤中機能成分的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于分離胎盤中活性成分的技術領域，更詳而言之是指一種可分離出胎盤 中雌激素、勝肽與維生素和微量元素等機能成分的方法。
【背景技術】
[0002] 胎盤為胎兒的營養(yǎng)來源，含有必需的氨基酸及具有藥理活性的勝肽、維生素、礦物 質和各種生長因子，經(jīng)科學研究發(fā)現(xiàn)，其機能重要成份是免疫球蛋白和延緩衰老基因的勝 肽，還含有豐富的卵磷脂、腦磷脂、脂多醣、多種維生素和微量元素，更有轉移因子、蛋白質 活性因子、膠原蛋白素和核酸化合物等成分。因此，胎盤成分具有抗衰老、靚麗肌膚、提高免 疫力與調節(jié)內(nèi)分泌等機能，不過，胎盤中的雌激素（estrogen)及黃體酮（progesterone)等 成分，過量使用會造成心血管疾病與引發(fā)癌癥等問題。
[0003] 已知萃取分離胎盤勝肽的方法，有反復凍融法、酸或堿水解法、酶解法等，如美 國發(fā)明公開US20130072466A1使用混合溶劑乙酸乙酯、氯仿、乙醚、己烷等有機溶劑萃取 胎盤中雌激素等成分，萃取后再加入堿性物質沉淀，最后用酸性物中和萃取物，此法制程 時間長，會產(chǎn)生大量酸、堿與有機溶劑等廢液，造成機能成分分解與毒性殘留；中國專利 CN101837005B利用堿溶液水解豬胎盤預處理，經(jīng)蛋白酶水解，再以有機溶劑沉淀胎盤中胎 盤脂多醣等機能性成分；美國專利US3041245使用酸性水-丙酮有機溶劑萃取哺乳動物的 胎盤中白蛋白護膚成分；美國發(fā)明公開US20130072466A1為使用混合有機溶劑，萃取胎盤 中雌激素等成分。
[0004] 前述已知萃取胎盤成分的技術，不是制程復雜耗時，制程中常添加大量的酸、堿、 有機溶劑，有機溶劑可能會與機能成分產(chǎn)生化學反應，完成后溶劑去除與濃縮過程中，加 熱蒸發(fā)溶劑，易造成機能成分被部分破壞，溶劑會殘留于分離物或純化物中，皆無法一次簡 單、安全而有效率地分離與完整保留胎盤中雌激素、勝肽與維生素和微量元素等機能成分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的主要目的在于提供一種分離胎盤中雌激素的方法，可分離出胎盤油脂與 雌激素，不需再經(jīng)繁復的溶劑去除與濃縮、分離程序，且無溶劑殘留等安全疑慮，且成本低， 能有效改善胎盤粉末產(chǎn)品風味與營養(yǎng)，提高胎盤勝肽的吸收效果及良好風味口感，甚為環(huán) 保、安全，具實用價值。
[0006] 為達成前述的目的，本發(fā)明提供一種分離胎盤中機能成分的方法，其步驟包含有： 去味與萃?。涸陬A定溫度與壓力的操作條件下，將胎盤粉末放置于一萃取槽內(nèi)，再將超臨界 狀態(tài)溶劑通入該萃取槽內(nèi)，用以去除胎盤粉末的魚腥味與萃取胎盤粉末中的油脂；吸附雌 激素：與前述相同的操作條件下，將去除魚腥味與萃取胎盤油脂后的胎盤粉末與超臨界狀 態(tài)溶劑以預定體積流速比例流入一吸附槽，用以使胎盤粉末中的雌激素被該吸附槽吸附， 獲致去除雌激素的胎盤萃取物；分離：在預定溫度與壓力的操作條件下，快速降壓分離超 臨界狀態(tài)溶劑，以獲得胎盤粉末中的機能成分。
[0007] 更進一步地，所述去味與萃取的步驟中，胎盤粉末可為干燥的人體或羊、豬、鹿等 動物的胎盤粉末。
[0008] 更進一步地，去味與萃取的步驟中，在壓力2000-4000Psi、溫度40-60°C的操作條 件下，將l-2Kg胎盤素粉末放置于萃取槽，超臨界狀態(tài)溶劑為超臨界二氧化碳/乙醇，以15: 1的體積流速比例流入萃取槽，萃取時間為2-3小時。
[0009] 更進一步地，分離的步驟中，在壓力1000_1200Psi與溫度40°C的操作條件下，快 速降壓分離超臨界狀態(tài)溶劑。
[0010] 更進一步地，最適的操作條件為：壓力為4000Psi、溫度為60°C對油脂產(chǎn)率最大。
[0011] 更進一步地，最適的操作條件為：壓力4000Psi、溫度為40°C可分離胎盤粉末中 90-95%的雌激素成分，且從胎盤粉中萃取分離的機能成分，最適合促進脂肪組織來源的干 細胞的活化與再生能力。
[0012] 更進一步地，最適的操作條件為：壓力3000Psi、溫度50°C下，可從胎盤粉中萃取 最高蛋白質含量、壓力4000Psi、溫度40°C或60°C下，從胎盤粉中萃取分離的蛋白質機能成 分最高。
[0013] 更進一步地，所述萃取槽為內(nèi)徑60mm、高度745mm的不銹鋼槽體。
[0014] 更進一步地，所述吸附槽為內(nèi)徑60mm與高度450mm的不銹鋼槽體，其內(nèi)充填有可 吸附雌激素的吸附劑。
[0015] 更進一步地，所述吸附劑為硅膠Silicagel、Sephadex(聚酰胺）或Resin(樹脂） 等可吸附雌激素的吸附劑。
[0016] 本發(fā)明的有益效果為：通過本發(fā)明所述分離胎盤中雌激素的方法，可分離出胎盤 油脂與雌激素，不需再經(jīng)繁復的溶劑去除與濃縮、分離程序，且無溶劑殘留等安全疑慮，且 成本低，能有效改善胎盤粉末產(chǎn)品風味與營養(yǎng)，提高胎盤勝肽的吸收效果及良好風味口感， 甚為環(huán)保、安全，具實用價值。
【附圖說明】
[0017] 圖1為本發(fā)明一較佳實施例的流程圖。
[0018]圖2為本發(fā)明一較佳實施例中胎盤粉末在萃取槽中的油脂產(chǎn)率圖。
[0019]圖3為本發(fā)明一較佳實施例中雌激素成分在萃取槽與吸附槽中被萃取分離的效 率分析圖。
[0020] 圖4為本發(fā)明一較佳實施例中ADSC存活率分析圖。
[0021] 圖5為本發(fā)明一較佳實施例中萃取蛋白質的含量分析圖。
[0022] 圖6A為本發(fā)明一較佳實施例中蛋白質分子量58000時的含量分析圖。
[0023] 圖6B為本發(fā)明一較佳實施例中蛋白質分子量14600時的含量分析圖。
[0024]圖7為本發(fā)明一較佳實施例中蛋白質的勝肽機能成分的含量分析圖。
【具體實施方式】
[0025] 以下，舉本發(fā)明一較佳實施例，并配合附圖做進一步的詳細說明如后：
[0026] 首先，請參閱圖1所示，本發(fā)明一較佳實施例分離胎盤中機能成分的方法100,可 去除胎盤粉末的魚腥味、萃取胎盤油脂、雌激素、勝肽與維生素和微量元素，其第一步驟為 去味與萃取110 :在壓力2000-4000Psi、溫度40-60°C的操作條件下，將l-2Kg胎盤素粉末 放置于一萃取槽，再將超臨界狀態(tài)溶劑通入萃取槽內(nèi)，進行萃取油脂流程，萃取時間為2-3 小時，用以萃取胎盤粉末中的油脂，將其收集于萃取槽底部。胎盤粉末可為干燥的人體或 羊、豬、鹿等動物的胎盤粉末，超臨界狀態(tài)溶劑為超臨界狀態(tài)二氧化碳SC-C02/乙醇溶劑，該 萃取槽為內(nèi)徑60mm、高度745mm的不銹鋼槽體，其內(nèi)充填有不銹鋼單體片。
[0027] 本發(fā)明的第二步驟為吸附雌激素120:在與前述相同的操作條件（壓力 2000-4000Psi、溫度40-60°C)下，將去除魚腥味與萃取胎盤油脂后的胎盤粉末，與體積流 速比例為15 :1的超臨界狀態(tài)溶劑流入萃取槽，并同時再經(jīng)過一吸附槽內(nèi)，使胎盤粉末中的 雌激素被該吸附槽吸附，吸附時間為2-3小時。該吸附槽為內(nèi)徑60mm與高度450mm的不銹 鋼槽體，內(nèi)部充填有如硅膠Silicagel、Sephadex(聚酰胺）或Resin(樹脂）等可吸附雌 激素的吸附劑。
[0028] 本發(fā)明的第三步驟為分離130 :在壓力1000-1200Psi與溫度40°C的操作條件下， 快速降壓分離超臨界狀態(tài)溶劑，用以可從吸附槽底部收集胎盤粉末萃取的機能成分。
[0029] 以下，利用不同的操作條件（改變壓力與超臨界狀態(tài)溶劑的體積流速比例）實施 前述方法，取胎盤粉末樣品、萃取槽底部的收集樣品與吸附槽底部的收集樣品，分析定量以 下物化性質：（1)油脂產(chǎn)率、（2)雌激素濃度、（3)脂肪組織來源的干細胞（adiposederived stemcells;ADSC)的活化能力、（4)蛋白質濃度、（5)蛋白質電泳、（6)勝肽濃度。
[0030]油脂產(chǎn)率的測量，計算收集萃取槽底部的油脂質量，比較放置于萃取槽中的胎 盤粉末質量，以％單位表示。雌激素濃度的測量，計算吸附槽底部的收集樣品，比較放 置于萃取槽中的胎盤粉末樣品，以ELISA定量雌激素濃度，計算去除雌激素的去除率 (Rejection，％)。ADSC活化能力的測量，收集吸附槽底部的收集樣品，以細胞流式儀分析， 單位以％表示。蛋白質濃度的測量，分析吸附槽底部的收集樣品，以Bradford蛋白濃度測 定試劑定量分析，單位以mg/gdw表示。蛋白質電泳分析，分析吸附槽底部的收集樣品，以 SDS-PAGE蛋白質電泳膠體分析，單位以mg/gdw表示。勝肽濃度的測量，分析吸附