五味子甲素在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種預(yù)防和治療糖尿病的藥物，特別涉及一種五 味子甲素在制備預(yù)防和治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 根據(jù)國(guó)際糖尿病聯(lián)盟（International Diabetes Federatio，IDF)統(tǒng)計(jì)，2014 年 全球的糖尿病患者有3. 87億，全球發(fā)病率為8. 3%，估計(jì)到2035年，全球糖尿病人數(shù)會(huì)達(dá)到 5. 92億。中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)于2007至2008年在我國(guó)部分地區(qū)開展的糖尿病流行病 學(xué)調(diào)查顯示：我國(guó)20歲以上人群糖尿病患病率為9. 7%，糖尿病前期的比例為15. 5%。糖 尿病是一種慢性疾病，伴隨著病程的延長(zhǎng)，各種代謝紊亂能導(dǎo)致各種組織，特別是眼、腎、心 臟、血管、神經(jīng)的慢性損害和功能障礙，由此引發(fā)的心腦血管病變、腎功能衰竭、失明、下肢 壞疽等成為糖尿病致殘致死的主要原因。2014年全球有490萬(wàn)人死于糖尿病。糖尿病不僅 給患病個(gè)體帶來(lái)了肉體和精神上的損害并導(dǎo)致壽命的縮短，還給個(gè)人、國(guó)家?guī)?lái)了沉重的 經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。預(yù)防糖尿病前期向糖尿病轉(zhuǎn)化以及對(duì)已診斷患者進(jìn)行良好的治療是糖尿病防治 指南中最重要的策略。
[0003] 2型糖尿病占所有糖尿病90 %以上，其發(fā)病機(jī)制有兩個(gè)基本環(huán)節(jié)：胰島素抵抗和 胰島β細(xì)胞胰島素分泌相對(duì)不足。胰島素抵抗是指肝、肌肉、脂肪等胰島素作用的靶器官 對(duì)正常濃度的胰島素產(chǎn)生反應(yīng)不足的病理生理狀態(tài)。在這種狀態(tài)下，胰島β細(xì)胞需要分泌 更多的胰島素（高胰島素血征）來(lái)抵抗高血糖。胰島β細(xì)胞不能夠產(chǎn)生足夠的胰島素來(lái) 抵抗越發(fā)嚴(yán)重的胰島素抵抗，最終導(dǎo)致胰島β細(xì)胞衰竭。
[0004] 2型糖尿病是一種慢性進(jìn)行性的疾病，絕大部分患者需要終身用藥。
[0005] 五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis (Turcz. )Baill.或華中五味 子Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils.的干燥成熟果實(shí)。五味子的功效是斂肺，滋 腎，生津，收汗，澀精。中醫(yī)稱糖尿病為消渴癥，基本病機(jī)為陰津虧耗，燥熱偏盛。申請(qǐng)?zhí)枮?201110330663. 6的專利文獻(xiàn)公開了一種治療糖尿病的藥物，按重量份數(shù)計(jì)算，包括天花粉、 茯苓、熟地、生地、地骨皮、枸杞、麥冬、石膏、山藥、白芍、知母、黃連、僵蠶、五味子、太子參、 三七、丹參50~70份、北沙參50~70份、粉葛50~70份、肉桂25~35份、紅參50~70 份、荔枝核50~70份、血竭45~55份以及萌蘆巴50~70份；并至少包含黃芪50~70 份、玉竹50~70份、黃精50~70份或石斛50~70份中的一種以上。該發(fā)明采用對(duì)中藥 配方進(jìn)行優(yōu)化的篩選組合，獲得一種能適用于大多數(shù)糖尿病患者的藥物，該藥物療效好，見 效快，而且副作用小。很多治療糖尿病中藥方劑中都含有五味子，一些研究表明五味子的提 取物有降低血糖的作用，不過五味子中的單體成分抗糖尿病作用未見任何報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了五味子甲素在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用，并提供一種以五味子 甲素為有效成分的藥物組合物。該藥物組合物具備顯著降血糖的效果。
[0007] 五味子甲素在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。
[0008] 申請(qǐng)人研究發(fā)現(xiàn)五味子甲素可顯著改善胰島素抵抗，增加胰島素抵抗肝細(xì)胞的葡 萄糖吸收，其效果顯著。五味子甲素能很好地應(yīng)用于治療糖尿病，尤其是2型糖尿病和與糖 尿病相關(guān)的疾病，達(dá)到改善糖尿病病情的目的。
[0009] -種治療糖尿病的藥物組合物，包含作為有效成分的五味子甲素。
[0010] 研究發(fā)現(xiàn)，五味子甲素的有效作用濃度為5~20 μM。
[0011] 作為優(yōu)選，所述藥物組合物中，五味子甲素的重量百分比為22~25%。
[0012] 作為優(yōu)選，藥物組合物包括可藥用輔料。藥物輔料可以賦予藥物一定劑型，有效保 證藥物有效成分的釋放和吸收。
[0013] 作為優(yōu)選，所述藥物為口服給藥的劑型?？诜o藥方式簡(jiǎn)便，不直接損傷皮膚或黏 膜，減少感染風(fēng)險(xiǎn)。由于糖尿病患者需要長(zhǎng)期用藥，故口服給藥是一種經(jīng)濟(jì)安全的方式。
[0014] 更為優(yōu)選，所述口服給藥的劑型為溶液劑、片劑、膠囊劑或顆粒劑。
[0015] 本發(fā)明具備的有益效果：本發(fā)明以五味子甲素為有效成分的藥物可有效降低糖尿 病患者的血糖水平，且作用靈敏度遠(yuǎn)高于市場(chǎng)一線用藥二甲雙胍。
【附圖說明】
[0016] 圖1是5 μΜ五味子甲素對(duì)胰島素抵抗的BNL CL. 2細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響；
[0017] 圖2是10 μ Μ五味子甲素對(duì)胰島素抵抗的BNL CL. 2細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響；
[0018] 圖3是20 μ Μ五味子甲素對(duì)胰島素抵抗的BNL CL. 2細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響；
[0019] 其中，顯著性檢驗(yàn)方法為t檢驗(yàn)，*表示P〈0. 05vs模型組，**表示P〈0.0 lvs模型 組，表示P〈0.0 Olvs模型組，##表示P〈0.0 lvs陽(yáng)性藥物二甲雙胍。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合具體實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0021] 實(shí)施例1
[0022] 5 μ Μ的五味子甲素液對(duì)胰島素抵抗肝細(xì)胞降糖活性的研究
[0023] 小鼠胚胎肝細(xì)胞BNL CL. 2用含10%胎牛血清的低糖型DMEM培養(yǎng)基于37°C、5% C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育，隔天更換新鮮培養(yǎng)液。待細(xì)胞生長(zhǎng)至80-90%時(shí)，棄去培養(yǎng)液，加 入3mL PBS潤(rùn)洗一次，加入lmL0.0 5 %胰蛋白酶-EDTA溶液消化約2min，加入三倍量培養(yǎng)液 終止消化，將細(xì)胞液900r/min離心5min，棄去上清液，加入一定量培養(yǎng)液，將細(xì)胞吹散，取 10 μ L計(jì)數(shù)，將BNL CL. 2細(xì)胞接種于96孔板，每孔2萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，并設(shè)無(wú)細(xì)胞空白對(duì)照孔。培 養(yǎng)24小時(shí)后，棄去原培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液（PBS)洗一遍，換上無(wú)血清無(wú)酚紅的低糖DMEM 培養(yǎng)液，分組加受試藥。
[0024] 設(shè)空白對(duì)照組（加入正常細(xì)胞培養(yǎng)液100yL)，模型組（加入含ΙμΜ的胰島素 的細(xì)胞培養(yǎng)液1〇〇 μU，五味子甲素組（加入含1 μΜ的胰島素及5 μΜ的五味子甲素的細(xì) 胞培養(yǎng)液100 μ L)，二甲雙胍組（加入含ΙμΜ的胰島素及ImM的二甲雙胍的細(xì)胞培養(yǎng)液 100 μ L)。作用24小時(shí)后，用葡萄糖氧化酶法測(cè)定每孔培養(yǎng)液的葡萄糖含量，即每孔取5 μ L 培養(yǎng)液于另一 96孔板中，加入200 μ L葡萄糖氧化酶測(cè)試液，37°C孵育30min，于492nm波 長(zhǎng)下測(cè)定每孔吸光度。在葡萄糖0-10mm〇l/L濃度范圍內(nèi)按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算每孔葡萄糖含 量。每孔葡萄糖消耗量=無(wú)細(xì)胞空白孔培養(yǎng)液葡萄糖含量-每孔培養(yǎng)液葡萄糖含量，每組 設(shè)3個(gè)或3個(gè)以上復(fù)孔，相同實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0025] 葡萄糖含量測(cè)定后，原培養(yǎng)孔棄去原培養(yǎng)液，每孔加入含有0. 5mg/mL MTT溶液的 培養(yǎng)液，于37°C、5% C02的條件下孵育4h。棄去上清液，每孔加入100 μ L DMSO, 37°C，振蕩 lOmin，于550nm波長(zhǎng)下測(cè)定每孔的吸光度值，用于反映細(xì)胞的增殖狀況，以矯正細(xì)胞數(shù)目 差異引起的葡萄糖吸收差異。最后計(jì)算各組葡萄糖消耗量相對(duì)于模型組消耗量的百分比。
[0026] 結(jié)果見圖1，五味子甲素5μΜ，