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一種治療老年性癡呆的中藥組合物及其制備方法_2

文檔序號:9442430閱讀:來源:國知局
。 圖3為給藥組海馬神經(jīng)元(TEMX1200)。
【具體實施方式】
[0015] 下面通過具體實施例對本發(fā)明進行進一步的說明,下述說明僅是示例性的,并不 對其內(nèi)容進行限制。如無特別說明,下述原料藥均為重量份。 實施例1
[0016] 中藥組合物配方為:石菖蒲35份,益智仁30份,菟絲子20份,川芎12份,白芍12 份,當歸8份,銀杏葉6份,白術(shù)8份,遠志3份。 制備方法為: ⑴將石菖蒲、益智仁、菟絲子、川考、白芍、當歸、銀杏葉、白術(shù)、遠志混合,用它們8質(zhì) 量倍的80wt%的乙醇提取3次,每次1. 5小時,合并提取液; (2)將提取液濃縮成80°C下相對密度為1. 20~1. 40的清膏或稠膏,干燥,得干膏; (3)將干膏粉碎成細粉,加入藥用量的輔料,將中藥組合物制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、 丸劑等劑型。 實施例2
[0017] 中藥組合物配方為:石菖蒲25份,益智仁40份,菟絲子15份,川芎15份,白芍10 份,當歸10份,銀杏葉5份,白術(shù)10份,遠志1份。 制備方法同實施例1。 實施例3
[0018] 中藥組合物配方為:石菖蒲40份,益智仁25份,菟絲子25份,川芎10份,白芍15 份,當歸5份,銀杏葉10份,白術(shù)5份,遠志5份。 制備方法同實施例1。 實施例4
[0019] 中藥組合物配方為:石菖蒲35份,益智仁30份,菟絲子20份,川芎12份,白芍12 份,當歸8份,銀杏葉6份,白術(shù)8份,遠志3份,紅花20份,淫陽藿10份,茯神6份,丹參3 份。 制備方法為: (1) 將石菖蒲、益智仁、菟絲子、川芎、白芍、當歸、銀杏葉、白術(shù)、遠志、紅花、淫陽藿、茯 神、丹參混合,用它們8質(zhì)量倍的80wt%的乙醇提取3次,每次1. 5小時,合并提取液; (2) 將提取液濃縮成80°C下相對密度為1. 20~1. 40的清膏或稠膏,干燥,得干膏; (3) 將干膏粉碎成細粉,加入藥用量的輔料,將中藥組合物制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、 丸劑等劑型。 實施例5
[0020] 中藥組合物配方為:石菖蒲25份,益智仁40份,菟絲子15份,川芎15份,白芍10 份,當歸10份,銀杏葉5份,白術(shù)10份,遠志1份,紅花25份,淫陽藿5份,茯神10份,丹參 1份。 制備方法同實施例4。 實施例6
[0021] 中藥組合物配方為:石菖蒲40份,益智仁25份,菟絲子25份,川芎10份,白芍15 份,當歸5份,銀杏葉10份,白術(shù)5份,遠志5份,紅花15份,淫陽藿15份,茯神5份,丹參 5份。 制備方法同實施例4。 本發(fā)明中藥組合物對于老年性癡呆具有很好的改善和治療作用,為了驗證其療效,例 舉以下實驗。 1、實驗動物
[0022] 健康快速老化癡呆模型小鼠SAMP8 (簡稱SAMP8) 20只,雄性,體重24. 5~34. 2g, 平均(29. 36±2. 16)g,鼠齡 6 個月;抗快速老化小鼠(senescenceacceleratedmouse/ resistanceI,SAMR1) 10 只,雄性,體重 30. 2 ~37. 6g,平均(34. 45±2. 54)g,鼠齡 6 個月。 實驗動物由天津中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院提供(動物許可證號:SCXK(津)2008-0001)。將 20只SAMP8小鼠隨機分為2組,10只/組;分別為模型組、給藥組。10只SAMRl小鼠為正 常組。 2、 實驗藥物
[0023] 各組動物均置于SPF環(huán)境中飼養(yǎng)和護理,每天灌胃給藥1次,連續(xù)給藥8周。給藥 組給予含生藥39g/kg的實施例4的藥物,劑量根據(jù)臨床成人日服用量,按體表面積比值折 算,相當于臨床成人日用量的4倍,按0. 2ml/10g體重的體積灌胃給藥。模型組和正常組給 予等量的生理鹽水。 3、 行為實驗測試 3.IMorris水迷宮實驗
[0024] 釆用Morris水迷宮(MorrisWaterMaze,MffM)測試法對SAMP8進行空間學習記憶 與行為能力測試。實驗室溫度保持在24-25°C,Morris水迷宮中水溫控制在25. 0±1. (TC。 水中加入漂白劑,充分混勻,使水呈乳白色,平臺低于水面lcm,水中不能明顯見到安全平 臺。迷宮上方安置帶有顯示系統(tǒng)的攝像機,計算機自動跟蹤并記錄游泳軌跡。實驗時,房間 密閉,保持安靜,房間門窗遮以不透光窗簾,室內(nèi)以恒定燈光照明。測試過程中保持實驗室 內(nèi)燈光、物品等空間參照物擺放位置不變,排除干擾因素。 3.I. 1 定位航行實驗(placenavigation)
[0025] MffM測試第ld,撤除平臺,讓SAMP8在水池中自由游泳2min,錄下受試SAMP8的游 泳軌跡,計算各SAMP8的游泳速度。MWM實驗的第2-6d進行定位航行試驗,實驗為期5d。每 天相同時間點進行實驗,影像跟蹤系統(tǒng)記錄小鼠尋找平臺所需時間(潛伏期)、經(jīng)過平臺次 數(shù)、平臺停留時間及原平臺象限游泳時間百分比,作為學習記憶能力的指標,找到平臺后允 許動物在平臺上停留30s;如果小鼠在120s內(nèi)未找到平臺,記為120s。 3.L2 空間探索試驗(spacialprobetest)
[0026] 由于SAMP8在搜索隱蔽平臺過程中,可能偶爾、無意識或隨機碰到平臺后而進駐 上臺,為消除這種隨機性,MffM實驗第7d進行空間探索試驗:撤除隱藏平臺,從原平臺象限 對側(cè)象限池壁中點將SAMP8放入水中,記錄2min內(nèi)SAMP8的游泳軌跡,計算SAMP8跨躍平 臺次數(shù)、停留時間、原平臺象限游泳時間占總時間百分比及原平臺象限游泳距離占總距離 百分比作為評價SAMP8空間認知和記憶能力指標。 3. 2跳臺實驗
[0027] 連接跳臺裝置,穩(wěn)定銅柵間的電壓為36V。將小鼠放入箱內(nèi)適應(yīng)環(huán)境30min后通以 36V交流電,受到電擊后,小鼠跳到橡膠平臺上以躲避傷害性刺激,如果小鼠跳下平臺,受到 刺激后會重新返回平臺。如此訓練5min,小鼠可形成記憶,停留在平臺上。24小時后進行 記憶的保留測試:先將小鼠放置在平臺上,記錄小鼠第一次跳下平臺的潛伏期和5min內(nèi)跳 下平臺受到電擊的次數(shù)(錯誤次數(shù))。 3. 3電鏡檢測
[0028] 行為學測試結(jié)束后,樣品采集前夜灌胃干預(yù)結(jié)束禁食12h,采血法后處死小鼠, 無菌條件下取出小鼠一側(cè)海馬組織,分裝。采用組織取材與處理方法后,取海馬區(qū)組織約 ImmXImmX1mm,迅速置于2 %戊二醛外固定24h,用PBS反復(fù)沖洗后,逐級脫水,Epon812包 埋,超薄切片,醋酸鈾及檸檬酸鉛雙重染色。在日立H-7000透射電鏡下觀察。每個組織塊 觀察2個銅網(wǎng),每個銅網(wǎng)隨機對含線粒體的神經(jīng)元攝片6張,放大倍數(shù)為10000-20000倍。 4、 統(tǒng)計方法
[0029] 水迷宮實驗采用方差分析探討不同處理對各指標是否有影響,多重比較采用SNK 法,所有測量指標均以均數(shù)土標準差表示表示;跳臺實驗采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差 分析,探索不同組測量指標的時間變化趨勢。以上統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS18.O統(tǒng)計軟件包, P〈0. 05即為有統(tǒng)計學意義。 5、實驗結(jié)果與分析 5.IMorris水迷宮實驗測試結(jié)果 5.I. 1快速老化癡呆模型小鼠SAMP8游泳速度的測定 結(jié)果顯示與模型組比較,正常組、給藥組小鼠的游泳速度快于模型對照組,趨勢明顯, 這表明灌胃2個月后,給藥組SAMP8小鼠游泳能力在一定程度上有所提高。 表.1-1迷宮適應(yīng)性訓練中各組小鼠的游泳速度比較(杜s)
5. 1. 2定位航行實驗 表.1-2各組MffM定位航行相關(guān)參數(shù)5d均值總體比較(n= 10)
5. 1. 2. 1逃避潛伏期 從表.1-2可看出,與模型組比較,給藥組SAMP8的逃避潛伏期明顯縮短(P< 0. 01)。 5. 1. 2. 2尋求次數(shù) 從表.1-2得知,與正常組比較,模型組小鼠尋求次數(shù)明顯增多(P< 0. 05)。給藥組小 鼠尋求次數(shù)明顯降低。 5. 1. 2. 3停留時間 從表1-2結(jié)果顯示,與正常組比較,模型組小鼠5d的平均停留時間明顯縮短,(P< 0. 05);給藥組5d的平均停留時間明顯延長。 5.L2. 4平臺象限百分比(% )。 從表1-2結(jié)果得知,與正常組比較,模型組小鼠的平臺象限百分比最高(P< 0. 01);組 藥組小鼠的平臺象限百分比明顯降低。
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