一種含綠茶的植物組合物提取方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種含綠茶的植物組合物提取方法及應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 含綠茶的植物組合物由綠茶lOOg，龍牙草根60g、杜莖山70g、通梗花90g作為原料 藥制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小時，合并煎液，濾過，濃縮成稠膏，制 粒，干燥，壓制成1000片，包糖衣，即得，能清熱解毒。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有含綠茶的植物組合物在提取制備方面采用微波技術(shù)的報道， 而采用水煎煮的方法，工藝粗糖、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴(yán)重影響 了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種含綠茶的植物組合物 提取方法。
[0005]本發(fā)明的另一個目的在于提供一種含綠茶的植物組合物在制備抑制大鼠膠質(zhì)瘤 C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006] 技術(shù)方案：本發(fā)明的目的是通過如下的方案實現(xiàn)的：
[0007] -種含綠茶的植物組合物提取方法，植物組合物由綠茶lOOg，龍牙草根60g、杜莖 山70g、通?；?0g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入 化的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次 4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到D101大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體 積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒 劑。
[0008] 上述一種含綠茶的植物組合物提取方法，制備方法中微波萃取功率為500W，每次 萃取6分鐘。
[0009] -種含綠茶的植物組合物在制備抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，含 綠茶的植物組合物由綠茶lOOg，龍牙草根60g、杜莖山70g、通?；?0g作為原料藥制成，審U 備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入化的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn) 行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到D101 大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥， 得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
[0010] 上述一種含綠茶的植物組合物在制備抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng) 用，制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0011] 現(xiàn)有技術(shù)中，含綠茶的植物組合物每片〇.4g，每次4片，一日3次，采用本發(fā)明制備 成的含綠茶的植物組合物每片0. 4g，但含有的藥材量是原來的2倍，因此每次僅需2片，一 日服用3次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實施方式】
[0012] W下通過實施例形式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于W下的實例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均 屬于本發(fā)明的范圍。
[001引實施例1
[0014]取綠茶lOOg，龍牙草根60g、杜莖山70g、通?；?0g，粉碎，加入化的70 %乙醇，投 入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取 液，濃縮，加到D101大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收 乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑，每片0. 4g。
[001引 實施例2
[0016] 取綠茶lOOg，龍牙草根60g、杜莖山70g、通?；?0g，粉碎，加入化的70%乙醇，投 入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取 液，濃縮，加到D101大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收 乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成膠囊。
[0017] 實施例3
[0018] 取綠茶lOOg，龍牙草根60g、杜莖山70g、通?；?0g，粉碎，加入化的70%乙醇，投 入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取 液，濃縮，加到D101大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收 乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成顆粒劑。
[0019] 龍牙草根為菩薇科植物龍芽草的根。秋后采收，洗凈，除去蘆頭。味辛澀，溫，無毒。 治赤白頻疾，婦女經(jīng)閉，腫毒，驅(qū)緣蟲。
[0020] 杜莖山為紫金?？贫徘o山屬植物杜莖山MaesajaponicaCrhunb. )Mo;ritzi，W根、 葉入藥。全年可采，洗凈曬干。桂風(fēng)利尿，止血，消腫。根：頭痛，腰痛，水腫，腹水；葉：外用 治創(chuàng)傷出血。本發(fā)明W根入藥。
[0021] 通梗花，拉下名為Abeliaengle;riana(Graebn. )Rehd.，六道木屬，科中文名：忍冬 科，根：理氣止痛，清熱燥濕。用于牙痛，高熱，火眼。果實或花：桂風(fēng)濕，解熱毒。用于風(fēng)濕 筋骨疼痛，外用于痛瘡紅腫。本發(fā)明W根入藥。
[0022] 實施例4 :含綠茶的植物組合物抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖的實驗研究資料
[002引 1實驗材料
[0024] 1. 1實驗用細(xì)胞株
[00巧]大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實驗動物中屯、實驗室細(xì)胞庫，DMEM+10%FBS常 規(guī)培養(yǎng)。
[0026] 1. 2實驗藥物
[0027] 研究藥物：本發(fā)明含綠茶的植物組合物：按實施例1方法制備。
[0028]藥液儲液：稱取lOOmg含綠茶的植物組合物，溶于5ml無水乙醇中，0. 2ym濾器過 濾，500y1doff管分裝，-20°C存儲，同時0. 2ym濾器過濾無水乙醇W備對照組之用。
[002引 1. 3實驗試劑
[0030] DMEM(GIBC0公司Cat.No. 12100-061Lot.No. 758137);胎牛血清（浙江天 杭生物科技有限公司Lot.No. 100419) ;NaHC03(上海久億化學(xué)試劑有限公司化t. No.11810-033Lot.No. 1088387) ;T巧psin(AMRESC0公司批號：2010/04);邸TA(AMRESC0 公司批號：2009/10);PenicillinGSodiumSalt(AMRESC0公司批號：2010242); Str巧tomycinSul化te(AMRESC0公司批號：2010382);無水乙醇（南京化學(xué)試劑有限公司 批號：080310182);MTT度iosha巧批號：0793);PBS(實驗室自配）；
[0031] 1.4實驗器材
[00礎(chǔ)萊卡倒置顯微鏡（德國Leica型號：DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀（美國MD公司型號：S陽CTRAMAX190) ;C02培養(yǎng)箱（FORMA型號：3111);超凈臺（蘇凈集團(tuán)安泰公 司制造型號：SW-CJ-Z抑）；純水儀（美國Spring公司型號：S/N020579);精密移液器（法 國吉爾森公司型號：P2);電子天平（德國賽多利斯有限公司型號：BT323巧；全自動高壓滅 菌鍋（日本SANYO公司型號：MLS-3020);臺式電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密實驗設(shè)備公司型 號：畑G9123A);冰箱（西口子公司型號：KG18V2m);液氮罐仰S型號：2001);低速離屯、 機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠型號：KA-1000) ;0.濾器（MILLIP0RE型號：SLGP033RB);10cm 培養(yǎng)皿（肥ST公司）、96孔培養(yǎng)板（肥ST公司）；細(xì)胞計數(shù)板；離屯、管、移液管、Tips若干。 [003引 2實驗方法
[0034] 1)大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)（10cm培 養(yǎng)皿），當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0. 25%膜 蛋白酶-0. 04%邸TA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后 將其轉(zhuǎn)入離屯、管中，100化pm離屯、5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X104個/ml。
[003引。將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180y1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱 中（37°C，5%C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0036] 3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至50% -70%，加入含綠茶的植物組合物溶液，繼續(xù) 培養(yǎng)2地。
[0037]4) 2地后加入20y1MTT溶液巧mg/ml，即0. 5 %MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)地。
[003引 W4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200y1二甲基亞諷，置搖 床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。 [003引 6)同時設(shè)置本底（不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液），對照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解 介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞諷），每組設(shè)定6個復(fù)孔。
[0040] 7)結(jié)果W藥物對細(xì)胞的抑制率表示：
[0041] 細(xì)胞增值抑制率（％ )=(對照孔0D值-給藥孔0D值）/對照孔0D值X100 %。 實驗重復(fù)3次。
[004引 3統(tǒng)計處理
[0043] 采用MicrosoftExcel2003軟件中的相關(guān)分析和Studentt檢驗，數(shù)據(jù)W mean+S.D.表不。
[0044] 4實驗結(jié)果
[004引 MTT法實驗后統(tǒng)計結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時，對大鼠膠質(zhì)瘤 C6細(xì)胞增殖抑制有差異（P<0. 05)，劑量在lOmg/ml時該差異具有顯著性（P<0. 01)，當(dāng)劑量 達(dá)到15-20mg/ml時有極顯著性差異（P<0. 001)。
[0046] 表1含綠茶的植物組合物對大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖抑制影響研究
[0047] 犀±如）
[0048]
[0049] 注：與對照組比較，沖<0. 01 ;*沖<0. 001
[0050] 5實驗結(jié)論
[0051] 含綠茶的植物組合物可W抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖，減少大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞 的細(xì)胞生長數(shù)目，該作用呈劑量依賴性。
【主權(quán)項】
1. 一種含綠茶的植物組合物提取方法，其特征在于植物組合物由綠茶l〇〇g，龍牙草根 60g、杜莖山70g、通?；?0g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉 碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2 次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5 倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠 囊或顆粒劑。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種含綠茶的植物組合物提取方法，其特征在于制備方法中微 波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。3. -種含綠茶的植物組合物在抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在 于含綠茶的植物組合物由綠茶l〇〇g，龍牙草根60g、杜莖山70g、通?；?0g作為原料藥制 成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝 置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加 到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮 并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述一種含綠茶的植物組合物在抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物 中的應(yīng)用，其特征在于制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種含綠茶的植物組合物提取方法，由綠茶100g，龍牙草根60g、杜莖山70g、通?；?0g作為原料藥制成，采用微波提取方法制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了含綠茶的植物組合物在制備抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【IPC分類】A61K36/82, A61P35/00
【公開號】CN105147869
【申請?zhí)枴緾N201510641893
【發(fā)明人】陳愛華
【申請人】陳愛華
【公開日】2015年12月16日
【申請日】2015年10月3日