一種靈芝發(fā)酵原漿化妝品及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種靈芝發(fā)酵原漿化妝品及其制備方法與應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 靈芝Ganodermalucidum(Qi;rtis:F';r. )P.Karst.是我國名貴的藥用真菌。由于它 能預(yù)防或治療眾多疾病，在古代曾被稱為"仙草"?，F(xiàn)代化學(xué)研究證明，靈芝含有多種生物活 性成分，如多糖、=祗、醬醇、核酸、蛋白質(zhì)、多膚、脂肪酸等，其中靈芝多糖和靈芝=祗是靈 芝的關(guān)鍵藥效成分?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，靈芝多糖的生物活性十分廣泛，包括調(diào)節(jié)免疫作 用、抗腫瘤作用、促進體內(nèi)核酸與蛋白質(zhì)的代謝、抗氧化作用、抗衰老作用等。
[0003] 現(xiàn)有的靈芝活性物提取最常采用的是水提法：靈芝干品粉碎后加去離子水，調(diào)抑 后攬拌浸提一段時間，離屯、后取上清液濃縮，最后使用乙醇沉淀，干燥后粉碎得到產(chǎn)物。但 是該方法在提取過程中引入有機物，不僅破壞環(huán)境，且在應(yīng)用的過程中存在潛在的安全隱 患。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的之一是提供一種靈芝發(fā)酵原漿的制備方法。 陽〇化]本發(fā)明所提供的靈芝發(fā)酵原漿的制備方法，包括如下步驟：將靈芝干粉、水和發(fā)酵 菌菌液混合得到初始體系，對所述初始體系進行發(fā)酵培養(yǎng)，得到靈芝發(fā)酵原漿。
[0006] 上述制備方法中，所述靈芝干粉為靈芝子實體干粉，所述靈芝干粉的大小為20-50 目，具體可為30目。
[0007] 所述發(fā)酵菌菌液的濃度為106-10化即/血。
[0008] 所述發(fā)酵菌菌液的抑值為6. 5-7. 5。
[0009] 所述發(fā)酵菌菌液、靈芝干粉和水的配比為：18-28血：5-10g:250g，具體可為22血： 8g：250g〇
[0010] 所述發(fā)酵菌為酵母菌，具體可為葡萄酒酵母Saccharomycesellipsoideus。
[0011] 所述發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為25-35°C，具體可為30°C，時間為20h-28h，具體可為2地。
[0012] 上述制備方法還包括對所述發(fā)酵培養(yǎng)后得到的發(fā)酵液依次進行滅菌、離屯、、取上 清液得到靈芝發(fā)酵原漿化妝品的步驟。 陽01引所述滅菌的條件為：滅菌溫度為110-12rc，具體為115°C，滅菌時間為15-30min， 具體可為20min。
[0014] 所述離屯、的條件為：離屯、轉(zhuǎn)速為4500-6000r/min，具體為5000r/min、離屯、時間為 20-30min，具體為25min，離屯、半徑為8-12畑1，具體為9畑1。
[0015] 本發(fā)明所制備得到的靈芝發(fā)酵原漿也屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0016] 本發(fā)明所制備得到的靈芝發(fā)酵原漿在制備具有下述至少一種功能的化妝品中的 應(yīng)用或在直接作為具有下述至少一種功能的化妝品中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護范圍：
[0017] 1)美白； 陽01引?？顾ダ希?br>[0019] 如清除自由基；
[0020] 4)抑制酪氨酸酶。
[0021] 上述應(yīng)用中，所述化妝品為面膜、精華液或爽膚水。
[0022] 本發(fā)明提供了一種靈芝發(fā)酵原漿化妝品的制備方法，該方法選擇更加合適的菌 種，使產(chǎn)品更加天然，且不需要添加酶等外來物質(zhì)，不僅節(jié)約生產(chǎn)成本，而且最大化的簡化 了生產(chǎn)步驟，從而使該發(fā)酵技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)大量生產(chǎn)、工業(yè)化生產(chǎn)，并能夠充分保證產(chǎn)品質(zhì)量 的穩(wěn)定性。通過實驗證明：本發(fā)明制備的靈芝發(fā)酵原漿不含任何化學(xué)成分，可W直接作為面 膜或精華液或爽膚水的成品使用，比現(xiàn)有市面上的其他產(chǎn)品更加天然，不會給肌膚造成任 何負(fù)作用；而且能夠獲得分子量小的活性成分，更易被皮膚充分吸收。
[0023] 本發(fā)明所具有的優(yōu)點是（1)本發(fā)明采用葡萄酒酵母對靈芝進行全植物發(fā)酵，保留 了植物的全部功效成分及其活性，避免了提取方法造成的活性成分流失。（2)本發(fā)明所采用 的發(fā)酵法，在對靈芝有效成分提取過程中，不添加任何有機試劑，發(fā)酵溫度和發(fā)酵抑溫和， 植物活性成分結(jié)構(gòu)不被破壞，保持植物的天然活性。（3)本發(fā)明提供的化妝品發(fā)酵完成后， 發(fā)酵原漿中不添加香精等對化學(xué)成分，確保產(chǎn)品對人體的安全性。（4)本發(fā)明提供的靈芝發(fā) 酵原漿中富含的多糖、蛋白等物質(zhì)，與發(fā)酵濾液中的益生菌發(fā)酵產(chǎn)物成分具有協(xié)同作用，從 而具有顯著地抗氧化及抗衰老作用。
【附圖說明】
[0024] 圖1為靈芝發(fā)酵原漿化妝品的活性多膚分子量分布HPLC圖譜。
[0025]圖2為靈芝發(fā)酵原漿化妝品的清除DPPH自由基結(jié)果示意圖。
[0026] 圖3為靈芝發(fā)酵原漿化妝品的抑制酪氨酸酶活性示意圖。
【具體實施方式】
[0027] 下面通過具體實施例對本發(fā)明進行說明，但本發(fā)明并不局限于此。
[0028] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法；下述實施例中所 用的試劑、材料等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0029] 下述實施例中所采用的液體培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)及其在液 體培養(yǎng)基中的濃度為：葡萄糖20g/L，蛋白腺20g/L，酵母膏l(xiāng)Og/L，抑值為7. 0。
[0030] 下述實施例中所采用的的YTO培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)及其在 液體培養(yǎng)基中的濃度為：酵母提取物1% (質(zhì)量分?jǐn)?shù)），膜蛋白腺2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù)），葡萄糖 2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù)），抑值為7.0。
[0031] 下述實施例中所采用的靈芝購自青海康普生物科技有限公司。
[0032] 下述實施例中所采用的葡萄酒酵母Saccharomycesellipsoideus的ATCC編號為 4108,可從ATCC獲得。
[0033] 實施例1、靈芝發(fā)酵原漿的制備
[0034]1、菌種的活化
[0035] 挑取葡萄酒酵母（Saccharomycesellipsoideus)菌落一環(huán)于液體培養(yǎng)基中，放入 搖床中將菌種活化，得到活化后葡萄酒酵母菌液。
[0036] 2、菌種的純化
[0037] 將步驟1得到的活化后的菌液梯度稀釋鋪板，W便獲取單菌落，得到純化后葡萄 酒酵母。
[0038] 3、菌種的擴大培養(yǎng)
[0039] 將步驟2得到的純化后的菌種接種到Y(jié)TO培養(yǎng)基（抑值為7.0)中，在25°C的搖床 中培養(yǎng)，當(dāng)0D值=0. 6-1. 0時，得到發(fā)酵菌菌液（菌種處在對數(shù)期，濃度為106-108CFU/ml)。
[0040] 4、靈芝發(fā)酵原漿的獲得
[0041] 將22mL步驟3得到的發(fā)酵菌菌液接種到8g的靈芝干粉和250g的水中，得到發(fā)酵 體系（發(fā)酵體系中菌液和靈芝與水的配比為22mL:8g:250g);將發(fā)酵體系在30°C搖床中發(fā) 酵24小時，得到發(fā)酵產(chǎn)物；將發(fā)酵產(chǎn)物115°C高壓滅菌20min，使菌失活，得到滅菌后的發(fā)酵 產(chǎn)物；將滅菌后的發(fā)酵產(chǎn)物在5000r/min、離屯、半徑為9cm的條件下離屯、25min，棄沉淀，收 集上清液，即為靈芝發(fā)酵原漿。
[0042] 實施例2、靈芝發(fā)酵原漿在作為化妝品的應(yīng)用：
[0043] 一、靈芝發(fā)酵原漿的性質(zhì)：
[0044] 該實施例制備所得的靈芝發(fā)酵原漿（上清液）的外觀為粘稠液體、顏色為淡黃 色至棟黃色。抑值5. 2-6. 3,粘度200-500CP，可溶性固含物含量1. 5-5. 0 %，菌落總數(shù)小 于50CFU/ml，無致病菌檢出。根據(jù)化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB7916-87，化妝品細(xì)菌總數(shù)不高于 lOOOCFU/ml，所W此發(fā)酵原漿符合化妝品質(zhì)量要求。
[0045] 對該靈芝發(fā)酵原漿進行成分分析，蛋白質(zhì)檢測方法參照GB5009. 5-2010;粗多糖 檢測方法參照GB/T5009. 8-2008;黃酬檢測方法參照GB/T5009. 124-2003;總酪檢測方法 參照GB/T8313-2008,所得結(jié)果如下：
[0046] 本發(fā)明制得的靈芝發(fā)酵原漿含蛋白質(zhì)2. 93g/kg、粗多糖9. 91g/kg、總黃酬 0. 045g/kg(W蘆下計）、總酪0. 〇54g/kg。
[0047] 二、靈芝發(fā)酵原漿的安全性檢測
[0048] 人體斑貼試驗主要是用于檢測化妝品終產(chǎn)品或原料的刺激性。本發(fā)明對實施例1 獲得的靈芝發(fā)酵原漿進行人體封閉式斑貼試驗，旨在對其潛在皮膚刺激性進行評估。
[0049] 1、試驗對象
[0050] 選擇合適的志愿者30人，年齡范圍在18-60歲隨機選擇。
[0051] 2、試驗方法
[0052] 若為固體樣品或半固體的樣品，則稱取0.020g-0.025g置于斑試器中備用；若是 液體樣品，則量取0. 〇25mL-〇. 2血滴加于濾紙片上，再將濾紙片置于斑試器內(nèi)。本發(fā)明采用 后者，每個樣品均設(shè)置空白對照，在對照斑試器孔內(nèi)加入與樣品等量的樣品溶劑，如蒸饋水 或橄攬油。
[0053] 試驗部位選為人體背部，利用無刺激性的膠帶將斑試器固定貼敷于受試者背部。 測試周期持續(xù)2地。為了試驗結(jié)果的準(zhǔn)確、可信和科學(xué)，在測試期間志愿者按照要求，不能摘 掉斑試器，亦不可使受試部位接觸水。24h后去除斑試器，靜置30min后，等待壓痕消失，觀 察皮膚的反應(yīng)。如果試驗結(jié)果為陰性，則需要在斑貼試驗后24h和4化分別再觀察一次。
[0054] 3、試驗結(jié)果 陽化日]斑貼試驗結(jié)果如表