，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果同樣與圖7和圖8類似。該結(jié)果表明，酚類物質(zhì)和三萜類物 質(zhì)的質(zhì)質(zhì)量比在1 :1~2 :1之間的芡實(shí)醇提物具有顯著的降低效果。
[0139] 表I:
[0140]
[0144] *P〈0. 05, **P〈0. 01，vs正常組；#P〈0. 05, ##P〈0. 01，vs.DN組。
[0145] 3. 6. 3芡實(shí)醇提物對(duì)糖尿病腎病大鼠血生化指標(biāo)的影響
[0146] 12周灌胃結(jié)束后，監(jiān)測(cè)三次空腹血糖并取平均值，具體結(jié)果見(jiàn)圖9A。圖9A中的結(jié) 果顯示DN組與正常組比較，血糖（BG)水平明顯升高，平均水平均大于所能測(cè)量的最大值 33. 3mmol/L。芡實(shí)各給藥組相對(duì)于DN組BG并無(wú)明顯改善，說(shuō)明芡實(shí)醇提物對(duì)降低血糖的 作用不明顯。
[0147] 測(cè)量血清Scr和BUN的結(jié)果分別如圖9B和9C。結(jié)果表明，芡實(shí)醇提物對(duì)肌酐值的 改善不顯著，芡實(shí)醇提物四個(gè)給藥組均有降低BUN的效果。
[0148] 測(cè)量TC和TG的結(jié)果表明，分別如圖9D和圖9E所示，芡實(shí)醇提物各組對(duì)TC和TG 的影響程度不十分明顯。
[0149] 3. 6. 4芡實(shí)醇提物對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟的病理改變
[0150] 對(duì)上述各組大鼠的腎臟病理切片進(jìn)行HE染色，檢測(cè)在細(xì)胞水平上的病理結(jié)構(gòu)的 變化，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖10。從圖10中可以看出，正常對(duì)照組，顯示出正常腎組織結(jié)構(gòu)；模型 組腎臟可見(jiàn)部分腎小球體積增大，腎小球囊腔減小，基底膜增厚，近曲小管上皮細(xì)胞空泡變 性，腎間質(zhì)充血，并可見(jiàn)適量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；陽(yáng)性藥組可見(jiàn)近曲小管變性和間質(zhì)充血有所減 輕，腎小球體積增大未見(jiàn)明顯減輕；小劑量組較模型組腎臟病變未見(jiàn)減輕；低劑量組較模 型組腎臟病變未見(jiàn)減輕沖和高劑量組腎小球腫脹有所減輕，近曲小管變性和間質(zhì)充血也 有所減輕。
[0151] 從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，建立DN模型后，模型大鼠均出現(xiàn)預(yù)期病理癥狀，給予厄貝 沙坦陽(yáng)性對(duì)照藥和不同劑量的芡實(shí)醇提物后，可發(fā)現(xiàn)：中、高劑量芡實(shí)醇提物對(duì)尿蛋白和 UALB的改善作用較為明顯，而對(duì)血糖雖有相應(yīng)的緩解趨勢(shì)，只是這種療效與醇提物的劑量 并沒(méi)有相關(guān)性。對(duì)于血脂紊亂的調(diào)節(jié)，根據(jù)所得TC和TG的數(shù)據(jù)認(rèn)為，芡實(shí)醇提物對(duì)血脂調(diào) 節(jié)作用效果并不明顯，還需進(jìn)一步確證。實(shí)驗(yàn)證明，芡實(shí)醇提物可以調(diào)節(jié)DN引起的BUN水 平上升，且在中劑量給藥時(shí)此效果較好。
[0152] 由病理切片可觀察到大鼠腎臟出現(xiàn)不同程度的損傷，陽(yáng)性給藥組，中、高劑量組均 可見(jiàn)近曲小管變性和間質(zhì)充血有所減輕，腎小球體積膨脹也有所減輕等緩解癥狀，而小、低 劑量組則與模型組比較無(wú)明顯差異。
[0153] 因而，本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明芡實(shí)醇提物具有降低糖尿病腎病大鼠尿蛋白和尿微 量白蛋白的作用，一定濃度（300、600mg/kg)的芡實(shí)醇提物具有保護(hù)腎臟，延緩DN病理進(jìn)程 的作用。
[0154] 進(jìn)一步地，發(fā)明人利用UPLC-MS對(duì)上述芡實(shí)醇提物中的化學(xué)成分進(jìn)行了鑒定。具 體步驟如下：
[0155] 實(shí)驗(yàn)四、UPLC-MS分析芡實(shí)醇提物化學(xué)成分
[0156] 4. 1實(shí)驗(yàn)材料和儀器
[0157] 4. I. 1主要試劑
[0158] 甲醇、乙腈（色譜純，F(xiàn)isherScientific公司）；超純水（Millipore制備）；甲酸 (國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；上述自制芡實(shí)醇提物凍干粉末。
[0159] 4. 1.2主要設(shè)備
[0160] 電子天平（美國(guó)奧豪斯電子天平）；WatersAcquityUPLC-Q-T0F-MS液相色 譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Waters公司）；MassLynxV4. 1質(zhì)譜工作站（美國(guó)Waters公司）； UPLCTMHSST3 超高效液相色譜柱（美國(guó)Waters公司，2.ImmX100mm，1.8ym);Millipore Simplicity純水儀。
[0161] 4. 2實(shí)驗(yàn)方法
[0162] 4. 2.1樣品制備
[0163] 稱取IOmg芡實(shí)醇提物粉末，溶于Iml10%的乙腈-水中，離心取上清，經(jīng)0.22ym 的微孔濾膜過(guò)濾后，得濃度為lOmg/ml的樣品溶液。
[0164] 4. 3.IUPLC色譜條件優(yōu)化
[0165] 對(duì)比甲醇-水和乙腈_水體系，最終選定峰形較好的乙腈-水系統(tǒng)進(jìn)一步優(yōu)化，具 體分離條件如下：流動(dòng)相為A相（0. 1%甲酸-水），B相（乙腈），柱溫35°C，進(jìn)樣體積2yl， 詳細(xì)洗脫程序見(jiàn)下表3。
[0166] 4. 3. 2UPLC-Q-TOF-MS對(duì)芡實(shí)醇提物的分析
[0167] 4. 3. 2.IUPLC-MS總離子流圖
[0168] 分別采用UPLC正、負(fù)離子模式對(duì)芡實(shí)醇提物進(jìn)行分析，得到兩種模式下的總離子 流圖，如圖11，由圖11中結(jié)果顯示，負(fù)離子模式較正離子模式信號(hào)峰更為豐富，峰形分離的 更好，因此，本實(shí)驗(yàn)主要以負(fù)離子模式為分析對(duì)象，結(jié)合正離子模式作為參考。
[0169] 表 3 :
[0170]
[0171] 4. 3. 2. 2對(duì)芡實(shí)醇提物中化學(xué)成分的鑒別
[0172] 負(fù)離子模式下的一級(jí)質(zhì)譜中低能量轟擊時(shí)主要產(chǎn)生[M-H]' [2M-H]' [M-HCOOr等 碎片離子峰，而正離子模式下低能量轟擊時(shí)主要產(chǎn)生[M+H]+、[2M+H]+、[M+Na]+等碎片離子 峰。利用MassLynxsoftware數(shù)據(jù)分析軟件，結(jié)合給出的化合物的高分辨分子量，參照提供 的可能分子式，聯(lián)合SciFinder數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行參照，并與現(xiàn)有文獻(xiàn)對(duì)比，比較化合物二級(jí)質(zhì)譜 的差異，得到9個(gè)化學(xué)結(jié)構(gòu)。具體分析結(jié)果見(jiàn)表4,其中第6個(gè)化合物為萜類，其他化合物為 酚類化合物。
[0173] 表4:
[0174]
[0175] 此外，為了比較現(xiàn)有的包含芡實(shí)原料藥的復(fù)方藥與本發(fā)明的芡實(shí)醇提物單味藥在 治療腎病，尤其是具有尿蛋白升高癥狀的腎病方面的作用，發(fā)明人基于前述的氧化應(yīng)激及 自由基學(xué)說(shuō)，也對(duì)含有芡實(shí)原料的中藥復(fù)方組合物在抗氧化方面的作用進(jìn)行了檢測(cè)。
[0176] 其中，含有芡實(shí)原料的中藥復(fù)方組合物為芡實(shí)合劑，包括：芡實(shí)30g，白術(shù)12g，茯 苓12g，懷山藥15g，菟絲子24g，金櫻子24g，黃精24g，百合18g，枇杷葉9g，黨參9g。采用 現(xiàn)有復(fù)方中藥的常規(guī)制備方法進(jìn)行制備，即：以10倍量的水加熱煮沸提取1次，約I. 5h，過(guò) 濾濃縮后即得（稱為水提物）。另外，也采用本發(fā)明的方法進(jìn)行醇提，得到芡實(shí)合劑的醇提 物。
[0177] 對(duì)芡實(shí)合劑的水提物及本發(fā)明的各芡實(shí)提取物進(jìn)行抗氧化能力的測(cè)定，具體方法 同實(shí)驗(yàn)一。檢測(cè)結(jié)果如圖12A至12D所示。從圖12A至12D可以看出，與本發(fā)明的芡實(shí)醇 提物相比，芡實(shí)合劑不具有抗氧化的能力，且對(duì)各種有害自由基不具有明顯的清除能力。
[0178] 從以上的描述中，可以看出，本發(fā)明上述的實(shí)施例實(shí)現(xiàn)了如下技術(shù)效果：本發(fā)明的 含有芡實(shí)醇提物的降蛋白藥物具有降低糖尿病腎病大鼠尿蛋白和尿微量白蛋白的作用，對(duì) 腎臟具有一定的具有保護(hù)作用，能夠延緩DN病理的進(jìn)程。
[0179] 以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技 術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修 改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種降低尿蛋白的藥物，其特征在于，所述藥物由有效量的芡實(shí)醇提物和輔料組成。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于，所述芡實(shí)醇提物中含有酚類物質(zhì)和三萜 類物質(zhì)，且所述酚類物質(zhì)和三萜類物質(zhì)的質(zhì)量之和占所述芡實(shí)醇提物總質(zhì)量的比例大于 50 %，優(yōu)選大于60 %。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物，其特征在于，所述酚類物質(zhì)包含沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸乙 酯、表兒茶素沒(méi)食子酸酯、5, 7, 3'，4'，5' -五羥基二氫黃酮以及5, 7, 4' -三羥基二氫黃酮； 所述三萜類物質(zhì)包括異落葉松樹(shù)酯醇-9-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷；優(yōu)選地，所述芡實(shí)醇提物 中的所述酚類物質(zhì)與所述三萜類物質(zhì)的質(zhì)量比為1 :1~2 :1。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于，所述輔料為載體、賦形劑或佐劑。5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的藥物，其特征在于，所述藥物的給藥途徑為口服 給藥；優(yōu)選地，所述藥物的劑型為片劑、膠囊劑、丸劑、粉末劑、栓劑、溶液劑或懸浮劑。6. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的藥物，其特征在于，所述芡實(shí)醇提物的制備方法 包括： 用乙醇對(duì)芡實(shí)果仁粉進(jìn)行醇提，得到醇粗提物； 用大孔樹(shù)脂對(duì)所述醇粗提物進(jìn)行純化，并用體積含量為20 %~80 %的乙醇進(jìn)行洗脫， 得到所述芡實(shí)醇提物； 其中，所述大孔樹(shù)脂選自AB-8、D101、DM-301或HPD-100中的任意一種。7. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的藥物，其特征在于，以SD大鼠體重計(jì)，所述芡實(shí) 醇提物的有效劑量為75~600mg/kg。8. -種保健品，其特征在于，所述保健品包含有效量的芡實(shí)醇提物。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的保健品，其特征在于，所述保健品的劑型為片劑、膠囊劑、丸 劑、粉末劑、栓劑、溶液劑或懸浮劑。10. 根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的保健品，其特征在于，所述芡實(shí)醇提物中含有酚類物質(zhì) 和三萜類物質(zhì)，且所述酚類物質(zhì)和三萜類物質(zhì)的質(zhì)量之和占所述芡實(shí)醇提物的總質(zhì)量的比 例大于50 %，優(yōu)選大于60 %。11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的保健品，其特征在于，所述酚類物質(zhì)包含沒(méi)食子酸、沒(méi)食子 酸乙酯、表兒茶素沒(méi)食子酸酯、5, 7, 3'，4'，5' -五羥基二氫黃酮以及5, 7, 4' -三羥基二氫 黃酮；所述三萜類物質(zhì)包括異落葉松樹(shù)酯醇-9-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷；優(yōu)選地，所述芡實(shí) 醇提物中，所述酚類物質(zhì)與所述三萜類物質(zhì)的質(zhì)量比為1 :1~2 :1。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種降低尿蛋白的藥物及保健品。該藥物由有效量的芡實(shí)醇提物及輔料組成，能夠顯著降低尿蛋白和尿微量白蛋白，可用于治療各種具有尿蛋白和尿微量白蛋白升高癥狀的包含糖尿病腎病在內(nèi)的腎病。
【IPC分類】A61P13/12, A61P3/10, A23L1/30, A61K36/62
【公開(kāi)號(hào)】CN104906195
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510359629
【發(fā)明人】張慶林, 楊曉曦, 程曉晨, 盧育新
【申請(qǐng)人】中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所
【公開(kāi)日】2015年9月16日
【申請(qǐng)日】2015年6月25日