一種甘草活性提取物的制備方法及在抑制幽門(mén)螺桿菌中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥制備技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 現(xiàn)代社會(huì)生活節(jié)奏加快、工作壓力大以及飲食習(xí)慣不健康，加劇了相關(guān)胃腸道疾 病的發(fā)生率，其中胃癌的發(fā)病率和死亡率長(zhǎng)期居高不下，極大地威脅著人們的健康。幽門(mén)螺 桿菌（Helicobacterpylori)簡(jiǎn)稱Hp，是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細(xì)菌， 在胃粘膜上皮細(xì)胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形。幽門(mén)螺桿菌感染是慢性胃炎、潰瘍以及 胃黏膜相關(guān)淋巴組織瘤的主要致病因素，特別是越來(lái)越多的研宄數(shù)據(jù)表明幽門(mén)螺桿菌感染 和胃癌發(fā)病有很強(qiáng)的相關(guān)性。因此，尋找或者研發(fā)有效的幽門(mén)螺桿菌抑制劑具有很好的應(yīng) 用前景，特別是從天然產(chǎn)物來(lái)源資源中篩選功效成分。
[0003] 根據(jù)《中國(guó)藥典》說(shuō)明，甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis FischJK 果甘草Glycyrrhiza inflate Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根莖， 春、秋二季采挖，除去須根，曬干。大量研宄表明，甘草可以治療咳嗽、胃潰瘍、口腔潰瘍以及 回腸炎、腸易激綜合癥等，常見(jiàn)藥物為甘草片。中國(guó)專利CN102552239B公開(kāi)了一種從甘草 中制備抗炎、抗腫瘤有效成分的方法，中國(guó)專利CN102151296B公開(kāi)了一種從甘草廢渣中提 取降血糖活性的成分，中國(guó)專利CN102858359B公開(kāi)了一種藥物組分包含醇溶性且非水溶 性的甘草提取物，和至少一種抗腫瘤藥或降糖降脂的藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的在于提供一種抑制幽門(mén)螺桿菌生長(zhǎng)甘草活性提取物的制備方法。
[0005] 本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。
[0006] 本發(fā)明所述的一種甘草活性提取物的制備方法，其特征是按如下步驟。
[0007] (1)取一定量烘干或自然曬干的甘草(果實(shí))，經(jīng)中藥粉碎機(jī)粉碎后待用。
[0008] (2)稱取步驟（1)所制備得到的甘草粉末，加入50-95%質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乙醇回流提取， 甘草和乙醇的料液比為1:5~1:25 (kg/L，質(zhì)量體積比)，于50-70°C溫度下水浴提取1~3h， 提取次數(shù)為1~2次，得甘草提取液。
[0009] (3)將步驟（2)中的提取液合并，趁熱過(guò)濾，然后于4800r/m轉(zhuǎn)速下離心15min， 收集上層清液并再次進(jìn)行抽濾。
[0010](4)將步驟（3)中的濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，濃縮溫度為45°C，最后用質(zhì)量分 數(shù)為25%的乙醇溶液稀釋，經(jīng)巴氏滅菌后冷卻，于4°C條件下密封保存，即可獲得甘草活性 提取物。
[0011] 本發(fā)明所述的甘草活性提取物在抑制幽門(mén)螺桿菌中的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：提供了含有甘草活性提取物的制備方法，甘草是一種傳統(tǒng)的藥 食兩用資源，本發(fā)明制備得到的提取物可以作為原料或者產(chǎn)品應(yīng)用于相關(guān)保健食品、藥品 等方面，有利于甘草開(kāi)發(fā)和價(jià)值提升；制備得到的甘草提取物具有較好地抑制幽門(mén)螺桿菌 生長(zhǎng)的作用，是一種天然的、植物源的活性提取物；制備工藝簡(jiǎn)單，成本低，具有廣闊的開(kāi)發(fā) 前景。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 下面對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本 發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。在不脫離本發(fā)明上述思想、方法的情況下，根據(jù) 本領(lǐng)域普通技術(shù)知識(shí)和常規(guī)手段做出的各種替換方法或變更，均包含在本發(fā)明之內(nèi)。
[0014] 實(shí)施例1。
[0015] 取一定量烘干或自然曬干的甘草，經(jīng)中藥粉碎機(jī)粉碎后待用。稱上述制備的甘草 粉末70g，加入95%質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乙醇回流提取，料液比為1:10(kg/L，質(zhì)量體積比)，于70°C 溫度下水浴回流提取2h，提取次數(shù)為2次，合并提取液，趁熱過(guò)濾，然后于4800r/m轉(zhuǎn)速下 離心15min，收集上層清液并再次進(jìn)行抽濾。將上述濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，濃縮溫度 為45°C，最后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%的乙醇溶液稀釋至所得樣品提取液對(duì)應(yīng)的生藥質(zhì)量濃度為 Ikg/L，經(jīng)巴氏滅菌后冷卻，于4°C條件下密封保存，即可獲得甘草活性提取物A。
[0016] 實(shí)施例2。
[0017] 取一定量烘干或自然曬干的甘草，經(jīng)中藥粉碎機(jī)粉碎后待用。稱取上述制備的甘 草粉末20g，加入70%質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乙醇回流提取，料液比為1:15 (kg/L，質(zhì)量體積比)，于 50°C溫度下水浴回流提取Ih，提取次數(shù)為2次，合并提取液，趁熱過(guò)濾，然后于4800r/m轉(zhuǎn) 速下離心15min，收集上層清液并再次進(jìn)行抽濾。將上述濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，濃縮 溫度為45°C，最后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%的乙醇溶液稀釋至所得樣品提取液對(duì)應(yīng)的生藥質(zhì)量濃 度為Ikg/L，經(jīng)巴氏滅菌后冷卻，于4°C條件下密封保存，即可獲得甘草活性提取物B。 [0018] 實(shí)施例3。
[0019] 取一定量烘干或自然曬干的甘草，經(jīng)中藥粉碎機(jī)粉碎后待用。稱取上述制備的甘 草粉末20g，加入50%質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乙醇回流提取，料液比為1:5(kg/L，質(zhì)量體積比)，于60°C溫度下水浴回流提取3h，提取次數(shù)為1次，合并提取液，趁熱過(guò)濾，然后于4800r/m轉(zhuǎn)速下 離心15min，收集上層清液并再次進(jìn)行抽濾。將上述濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，濃縮溫度 為45°C，最后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%的乙醇溶液稀釋至所得樣品提取液對(duì)應(yīng)的生藥質(zhì)量濃度為 Ikg/L，經(jīng)巴氏滅菌后冷卻，于4°C條件下密封保存，即可獲得甘草活性提取物C。
[0020] 下面結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)說(shuō)明本方法制備得到的甘草活性提取物體外抑制幽門(mén)螺桿菌 作用。
[0021] 1、幽門(mén)螺桿菌來(lái)源。
[0022] 選擇來(lái)自門(mén)診胃病患者胃粘膜標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)室保存的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC11637。
[0023] 經(jīng)電子胃鏡檢查，取胃竇小彎側(cè)距幽門(mén)口約5cm處胃黏膜組織1塊，進(jìn)行胃黏膜 組織幽門(mén)螺桿菌（Hp)培養(yǎng)，在Hp培養(yǎng)陽(yáng)性的患者中，加做藥物敏感試驗(yàn)。
[0024] 2、Hp培養(yǎng)及鑒定。
[0025] 將胃組織置于滅菌的組織研磨器中研磨成混勻液，用滅菌滴管，吸取組織混勻液， 接種于含10%綿羊全血哥倫比亞瓊脂平板上，37°c，在5% 02、10% 0)2和85% 1的環(huán)境中 培養(yǎng)4天，觀察結(jié)果。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：革蘭染色陰性，氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，尿素 酶試驗(yàn)陽(yáng)性，氯化三苯四氮唑試驗(yàn)在斜面培養(yǎng)基上菌落呈現(xiàn)金屬光澤，符合以上全部者為Hp陽(yáng)性。
[0026] 3、藥物作用實(shí)驗(yàn)。
[0027] 選取分離的臨床菌株，將菌株進(jìn)行傳代3~4次，擴(kuò)大培養(yǎng)至實(shí)驗(yàn)所需，接種于含 10%綿羊全血哥倫比亞瓊脂平板上，打孔，加入甘草乙醇提取物繼續(xù)培養(yǎng)3天后觀察藥敏實(shí) 驗(yàn)結(jié)果，測(cè)量抑菌圈直徑。
[0028] 4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0029] 表1甘草活性提取物對(duì)幽門(mén)螺桿菌體外抑制作用（n=3)
實(shí)驗(yàn)結(jié)論： 采用不同乙醇濃度提取得到的甘草提取物A、B和C，與25%乙醇對(duì)照組相比，體外實(shí)驗(yàn) 中均具有較好的抑制幽門(mén)螺桿菌生長(zhǎng)的作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種甘草活性提取物的制備方法，其特征是按如下步驟： (1) 取一定量烘干或自然曬干的甘草，經(jīng)中藥粉碎機(jī)粉碎后待用； (2) 稱取步驟（1)所制備得到的甘草粉末，加入50-95%質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乙醇回流提取，甘 草和乙醇的料液比（1^/1)為1:5~1 :25，于50-701：溫度下水浴提取1~3 11，提取次數(shù)為1~2 次，得甘草提取液； (3) 將步驟（2)中的提取液合并，趁熱過(guò)濾，然后于4800r/m轉(zhuǎn)速下離心15min，收 集上層清液并再次進(jìn)行抽濾； (4) 將步驟（3)中的濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，濃縮溫度為45°C，最后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 25%的乙醇溶液稀釋，經(jīng)巴氏滅菌后冷卻，于4°C條件下密封保存，即可獲得甘草活性提取 物。2. 權(quán)利要求1所述的甘草活性提取物在抑制幽門(mén)螺桿菌中的應(yīng)用。
【專利摘要】一種甘草活性提取物的制備方法及在抑制幽門(mén)螺桿菌中的應(yīng)用，按如下步驟：（1）取烘干或自然曬干的甘草，粉碎機(jī)粉碎；（2）稱取甘草粉末，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50-95%的乙醇回流提取，甘草和乙醇的料液質(zhì)量體積（kg/L）比為1:5~1:25， 50-70℃，水浴提取1~3 h，提取1~2次，得甘草提取液；（3）將甘草提取液合并，趁熱過(guò)濾，離心，收集上層清液，抽濾；（4）將45℃濾液濃縮，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%的乙醇溶液稀釋，巴氏滅菌后冷卻，4℃密封保存。本發(fā)明甘草活性提取物，具有抑制幽門(mén)螺桿菌的作用，是一種天然的、植物源性的活性提取物，可以作為原料或者產(chǎn)品應(yīng)用于保健食品、藥品等方面；制備工藝簡(jiǎn)單，成本低。
【IPC分類】A61P31/04, A61K36/484, A23L1/29
【公開(kāi)號(hào)】CN104887745
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510276906
【發(fā)明人】謝明勇, 殷軍藝, 王小銀, 聶少平
【申請(qǐng)人】南昌大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年9月9日
【申請(qǐng)日】2015年5月27日