專利名稱：用于改善同種異型的造血細(xì)胞移植的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明的領(lǐng)域?yàn)閷?lái)自供體的同種異型的造血體系重構(gòu)細(xì)胞移植入遺傳上不同的受體的改進(jìn)方法，本領(lǐng)域還涉及到特定的造血細(xì)胞類型的去除，這些被除去的細(xì)胞類型的存在相關(guān)于移植受體存活的降低。
GvHD是一種發(fā)病率較高的疾病。產(chǎn)生急性GvHD的患者可能在其皮膚表面發(fā)生水泡，發(fā)生大規(guī)模的胃腸道出血或急性肝衰竭和黃疸。產(chǎn)生慢性GvHD的患者可能發(fā)生導(dǎo)致關(guān)節(jié)攣縮的硬皮病，皮膚潰瘍，毛發(fā)脫落和全身性消瘦綜合征(generalized wasting syndrome)?；加屑毙曰蚵訥vHD的患者的免疫受抑制并有罹患致命的條件性感染的危險(xiǎn)，這類似于AIDS患者所發(fā)生的感染。
目前，現(xiàn)有的移植技術(shù)涉及到T細(xì)胞的耗竭(depletion)，其根據(jù)是研究表明這些細(xì)胞的去除導(dǎo)致移植物vs.宿主的反應(yīng)的幾率降低。供體骨髓的T細(xì)胞通過(guò)使用幾種工藝之一來(lái)去除，例如CD3+細(xì)胞的除去，E紅細(xì)胞形成玫瑰花結(jié)和大豆凝集素的使用?；蛘呤褂霉w骨髓的富集在同源異型移植物上誘導(dǎo)臨床試驗(yàn)，基于表面標(biāo)記CD34的存在而對(duì)造血干細(xì)胞正選擇來(lái)進(jìn)行富集，通過(guò)該方法去除了大量的T細(xì)胞。在這一審驗(yàn)中，在CD34+選擇后進(jìn)行CD2+細(xì)胞的去除，該去除耗竭了T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞(NK)的一個(gè)額外的群體(Clarke，E.，Potter，M.N.，Steward，C.G.，Cornish，J.M.，Marks，D.，Oakhill，A.，andPamphilon，D.H.1997 Blood 90(10)Suppl.1；page 37A；Abst.No.1662；“Double T-cell depletion using sequential +/-Immunoaffinity or CD34+cell selection followed by campath-MEffect on CD34+and progenitor cell recovery”；Bunjes，D.，M.Wiesneth，S.Von Harsdorf，J.Duyster，T.Shreiner，C.Duncker，B.Macari，B.Kubanek 1997 Blood 90(10)Suppl.1；page 1034；Abst.No.454；“T cell depleted allogeneic PBSC transplant In30 patients with hematological malignanciesBenefis andrisks”)。使用目前的CD34+選擇設(shè)備T細(xì)胞平均耗竭2～3個(gè)數(shù)量級(jí)；例如，一個(gè)典型的CD34+選擇移植物的移植相對(duì)于每kg受體體重可含有2-4×106CD34+細(xì)胞和0.1-0.5×106CD3+細(xì)胞(即T細(xì)胞)。然而，即使經(jīng)該處理，這樣的患者還需要GvHD預(yù)防。
此外，盡管來(lái)自匹配的無(wú)關(guān)或不匹配的相關(guān)同胞供體所移植的骨髓中的T細(xì)胞的去除減少了GvHD，它還是與患者對(duì)同源異型骨髓的排斥的升高的發(fā)生率有聯(lián)系。因此，存在于同源異型骨髓移植物中的白細(xì)胞，尤其是T細(xì)胞，對(duì)于確保在抗原性上和遺傳上不匹配的受體中的移植十分重要。存在于同源異型骨髓移植物中的T細(xì)胞還在消除受體中的殘余癌細(xì)胞中起重要作用，該作用稱為“移植物vs.白血病效應(yīng)”。
為最小化以T細(xì)胞進(jìn)行給藥的不良影響，Waller等人以非增殖的T細(xì)胞進(jìn)行給藥，該非增殖的T細(xì)胞在缺少GvHD的情況下改善移植(美國(guó)專利號(hào)No.5,800,539)。在另一個(gè)臨床研究中，Aversa等人(NewEngl.J.Med.3391186-1193)對(duì)受體以額外劑量的供體外周血單核細(xì)胞進(jìn)行給藥，該受體接受了一個(gè)含有骨髓或外周血單核細(xì)胞的完全單體的不匹配供體移植物，該供體外周血單核細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)行了T細(xì)胞耗竭并且隨后進(jìn)行了CD34+選擇。
這樣，自從30年以前的第一例人類骨髓移植成功以來(lái)，盡管移植工藝穩(wěn)步提高，接受同源移植物的患者仍死于移植物排斥和移植物vs.宿主疾病以及其它并發(fā)癥。開(kāi)發(fā)一種同源異型骨髓移植的最佳程序仍是迫切需要的。
本發(fā)明基于在供體移植物中一個(gè)相關(guān)細(xì)胞類型家族的發(fā)現(xiàn)，該家族的存在與移植物的存活的降低有關(guān)。除去這些細(xì)胞類型的一種或幾種提高了同源異型移植物在受體中的存活，這些類型細(xì)胞被稱為樹(shù)狀細(xì)胞或樹(shù)狀細(xì)胞前體(DCP)。
本文所用的“樹(shù)狀細(xì)胞”或“DC”指一種成熟的抗原呈遞細(xì)胞或如下定義的樹(shù)狀細(xì)胞母細(xì)胞，或以上兩者，該成熟的抗原呈遞細(xì)胞通過(guò)其表面的以下標(biāo)記中的一種或多種來(lái)確認(rèn)CD1a，CD1b和CD1c，CD4，Cd11c，CD33，CD40，CD80，CD86，CD83，HLA-DR。
本文中可互換使用的“樹(shù)狀細(xì)胞祖細(xì)胞”、“樹(shù)狀祖細(xì)胞”、“樹(shù)狀細(xì)胞前體”或樹(shù)狀前體細(xì)胞“DCP”指的是一種造血細(xì)胞，該細(xì)胞通過(guò)其表面的以下標(biāo)記中的一種或多種的表達(dá)來(lái)確認(rèn)CD123，CD45RA，CD36和CD4。
“有效地降低”指的是，在一個(gè)造血系統(tǒng)的同源移植物的重構(gòu)細(xì)胞中，DC和/或DCP的數(shù)量被降低至滿足以下方程[CD34+細(xì)胞數(shù)]－2×[DC/DCP數(shù)]≥1.5×106細(xì)胞/千克受體體重。
“造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞”指的是一個(gè)細(xì)胞群體，在優(yōu)選情況下是人類細(xì)胞群體，該群體有分裂并產(chǎn)生后代的能力，該后代包括血液中所有成形的的細(xì)胞成分。造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞的來(lái)源可以包括骨髓(胎兒和成人)和外周血單核細(xì)胞(PBMC)。
“供體”和“供體來(lái)源”指的是動(dòng)物，在優(yōu)選情況下是人類，該動(dòng)物為天然來(lái)源，造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞可從中原始地移除。
“受體”指的是動(dòng)物，在典型情況下是人類，該動(dòng)物被移植入了造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞。
“同源異型”指的是受體并非造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞可從中原始地移除的天然來(lái)源。
“移植體”、“同源移植物”和“移植物”在本文中可互換使用，它們指的是被移植入一個(gè)受體的造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞。詳細(xì)描述本發(fā)明提供了一種方法，該方法用以增加同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞移植受體存活的機(jī)率，該方法包括以同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞對(duì)受體進(jìn)行給藥，在該系統(tǒng)中樹(shù)狀細(xì)胞的數(shù)量被有效地降低。即，移植物中CD34+細(xì)胞的數(shù)量同DC細(xì)胞的數(shù)量的比值符合以下方程[CD34+細(xì)胞數(shù)]－2×[DC數(shù)]≥1.5×106細(xì)胞/千克受體體重。
在一個(gè)實(shí)施方案中，用以增加同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞移植受體存活的機(jī)率的方法包括以同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞對(duì)受體進(jìn)行給藥，在該系統(tǒng)中樹(shù)狀細(xì)胞前體或DCP的數(shù)量被有效地降低。即，移植物中CD34+細(xì)胞的數(shù)量同DCP細(xì)胞的數(shù)量的比值符合以下方程[CD34+細(xì)胞數(shù)]－2×[DCP數(shù)]≥1.5×106細(xì)胞/千克受體體重。
表1所示為反映出有效降低的移植物的CD34+細(xì)胞和DCP細(xì)胞的代表性組合。
表1.本發(fā)明的一種移植物中的細(xì)胞數(shù)CD34+細(xì)胞數(shù) DCP細(xì)胞數(shù)*df值*4.730.024.694.4 1.4 1.62.7 0.5 1.61.9 0.15 1.62.380.3 1.773.340.043.27*×106/每千克受體體重(df＝函數(shù)差)盡管不想通過(guò)理論加以限制，據(jù)認(rèn)為從同源移植物中除去樹(shù)狀細(xì)胞可以降低移植物vs.宿主疾病(GvHD)。因此，在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種方法，該方法用以在同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞移植受體中降低并或許防止移植物VS.宿主疾病，該方法包括以同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞對(duì)受體進(jìn)行給藥，在該系統(tǒng)中樹(shù)狀細(xì)胞的數(shù)量被有效地降低。在另一個(gè)實(shí)施方案中，用以在同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞移植受體中降低并或許防止移植物VS.宿主疾病的方法包括以同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞對(duì)受體進(jìn)行給藥，在該系統(tǒng)中樹(shù)狀細(xì)胞前體(DCP)的數(shù)量被有效地降低。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，發(fā)明還提供了一種方法，該方法用以在同源骨髓移植物移植受體中降低或防止移植物VS.宿主疾病，該方法包括以同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞對(duì)受體進(jìn)行給藥，在該系統(tǒng)中被用于給藥的樹(shù)狀細(xì)胞前體的數(shù)量低于0.25×106/千克受體體重。
在一個(gè)實(shí)施方案中，將被移植的同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞經(jīng)過(guò)針對(duì)CD34+表型的正選擇，即針對(duì)CD34細(xì)胞表面標(biāo)記表達(dá)的選擇?！罢x擇”指的是表達(dá)CD34蛋白的細(xì)胞通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法被收集，方法例如熒光激活的細(xì)胞分選或免疫磁性層析，描述見(jiàn)本文實(shí)施例和引用的參考。對(duì)重構(gòu)細(xì)胞的CD34+造血系統(tǒng)的正選擇可以在造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞中的樹(shù)狀細(xì)胞的耗竭或去除之前或之后進(jìn)行。
本發(fā)明的方法可以同其它用于移植造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞的方法或過(guò)程進(jìn)行組合使用。例如，本文所披露的方法可以同Waller等人的方法(美國(guó)專利No.5,800,539)綜合使用，Waller等人的方法包括以非增殖的T細(xì)胞進(jìn)行給藥，非增殖的T細(xì)胞可增強(qiáng)移植以改善同源異型細(xì)胞移植。在替代情況下，或者同Waller等人包括以非增殖的T細(xì)胞進(jìn)行給藥的方法進(jìn)一步綜合使用的情況下，本文所述的方法可以同Aversa等人的方法(New Engl.J.Med.3391186-1193)綜合使用，Aversa等人的方法包括以額外劑量的經(jīng)過(guò)T細(xì)胞耗竭的CD34+供體外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞進(jìn)行給藥以提高同源異型細(xì)胞移植。
本發(fā)明的效能可以通過(guò)存活者數(shù)量的增加來(lái)顯示，這一提高是在移植后2或3年在本發(fā)明方法的移植造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞的受體群體中，同非本發(fā)明方法的移植造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞的受體群體相比較來(lái)測(cè)量。本發(fā)明在降低或防止移植物vs.宿主疾病上的的效能可以通過(guò)臨床醫(yī)生所熟知的一批臨床指數(shù)在臨床上測(cè)定，例如完全移植時(shí)間(time to full engraftment)或減低的移植失敗率。樹(shù)狀細(xì)胞或樹(shù)狀前體細(xì)胞的標(biāo)記樹(shù)狀細(xì)胞是抗原呈遞細(xì)胞，它們?cè)诿庖邞?yīng)答的起始中十分重要。根據(jù)體外培養(yǎng)和特征研究，DC被認(rèn)為代表了相關(guān)細(xì)胞類型的一個(gè)家族，它們可能來(lái)自于同一個(gè)譜系?；谔囟ǖ募?xì)胞表面標(biāo)記的表達(dá)，目前在許多組織中鑒別出DC的母細(xì)胞(DCP)，如骨髓和血液。在表皮中發(fā)現(xiàn)了前體細(xì)胞的一個(gè)類型，郎格罕氏細(xì)胞。在郎格罕氏細(xì)胞上的工作顯示，這些未成熟的前體細(xì)胞能夠攝取抗原，但在分化成成熟的DC之前不表現(xiàn)出刺激T細(xì)胞的顯著能力。
多種可用于定義樹(shù)狀細(xì)胞家族的特定細(xì)胞類型的標(biāo)記已被鑒別出來(lái)。例如，表達(dá)于成熟樹(shù)狀細(xì)胞表面的標(biāo)記包括CD1a，CD11c，DEC-205，CD4，CD33，CD40，CD80，CD83和CD86。在典型情況下，在成熟樹(shù)狀細(xì)胞表面找不到以下標(biāo)記CD20，CD3，CD14，CD16，CD2，CD45RA，CD56和CD19。存在于樹(shù)狀細(xì)胞前體的細(xì)胞表面標(biāo)記包括CD4，CD45RA，CD34，CD10，CD123和CD36，而樹(shù)狀細(xì)胞前體表面找不到以下標(biāo)記CD11c，CD1a，CD8，CD40，CD80，CD83和CD86(例見(jiàn)Caux et al.Intl.Immunology1994 6(8)1177-1185；Steptoe et al.J.Immunology 19971595483-5491；Grouard et al.(J.Exp.Med.1997185(6)1101-1111；0’Dokherty et al.Immunology 1994 82487-493；Galy et al.J.Immunotherapy 1998 21(2)132-141；Strunk et al.J.Exp.Med.1997 185(6)1131-1136；Olweus et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1997 9412551-12556；Prignano et al.，Intl.J.Dermatol.1998 37116-119)。通過(guò)這些標(biāo)記的適當(dāng)使用可以將樹(shù)狀細(xì)胞同樹(shù)狀細(xì)胞母細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。用于在造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞中除去和/或降低DC和/或DCP的方法樹(shù)狀細(xì)胞和/或樹(shù)狀細(xì)胞前體從造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞中的去除可以通過(guò)一批方案，使用細(xì)胞分揀和收集技術(shù)來(lái)完成，這些技術(shù)在本領(lǐng)域中為人熟知(例如，0lweus et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 19979412551-12556)，它們包括熒光激活的細(xì)胞分選(FACS)和免疫磁性層析。
例如，為從造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞中除去DC，該造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞首先同熒光標(biāo)記的抗體接觸，如，F(xiàn)ITC標(biāo)記的抗體，該抗體特異地同成熟樹(shù)狀細(xì)胞標(biāo)記相結(jié)合，例如CD1a，CD11c，DEC-205，CD4，CD33，CD40，CD80，CD83和CD86，隨后該造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞被用于熒光激活的流式細(xì)胞儀。在尺度為四十(four decade)的對(duì)數(shù)圖上表現(xiàn)出FITC信號(hào)高于二十(second decade)的細(xì)胞被除去，而包括CD34+細(xì)胞在內(nèi)的不發(fā)光的細(xì)胞被收集用于移植。
用于去除DCP的方案的總體目標(biāo)是除去具有CD3-，CD4+，CD8-表型的細(xì)胞群體，該群體的進(jìn)一步特征在于其在FASC(熒光激活的細(xì)胞分選)圖中具有比典型的單核細(xì)胞更低的側(cè)向散射。然而，如下文詳述，這一群體可以根據(jù)一批不同的表型標(biāo)記來(lái)鑒別和去除。
一種用于有效地降低DCP的數(shù)量的方案是除去CD123+細(xì)胞，該CD123表面蛋白為白細(xì)胞介素3(IL-3)受體的α鏈(IL-3R-α)。作為一個(gè)例子，可以將附著于順磁珠的與CD123特異結(jié)合的抗體(可獲自PharMingen/Becton-Dickinson，San Diego，CA)同造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞相接觸，接觸時(shí)磁珠和靶細(xì)胞比例為50∶1，隨后使用一永磁體或磁化物質(zhì)將磁珠從造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞中除去。在另一個(gè)實(shí)施方案中，特異結(jié)合CD123的抗體被結(jié)合于一固定支持物，隨后將造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞通過(guò)該支持物，被洗脫的細(xì)胞被耗竭了DCP。在另一個(gè)實(shí)施方案中，DCP可以通過(guò)先以熒光標(biāo)記的單克隆抗體結(jié)合IL-3R-α/CD1231蛋白，隨后經(jīng)熒光激活的細(xì)胞分選除去。在這些實(shí)施方案中，所產(chǎn)生的用于移植的造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞不會(huì)表達(dá)CD123，但該系統(tǒng)包括有CD34+細(xì)胞。
DCP還可以基于CD4蛋白的在細(xì)胞表面的存在而從造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞中除去。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，一個(gè)熒光標(biāo)記的抗CD4的抗體被加入造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞。該造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞被用于熒光激活的流式細(xì)胞儀，在尺度為四十的對(duì)數(shù)圖上表現(xiàn)出FITC信號(hào)高于二十的細(xì)胞被除去，而包括CD34+細(xì)胞在內(nèi)的不表達(dá)的細(xì)胞被收集。
同樣地，其他用于除去樹(shù)狀細(xì)胞和/或樹(shù)狀細(xì)胞母細(xì)胞的配基可被附著于順磁珠，該順磁珠同造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞相接觸，隨后通過(guò)一順磁體除去磁珠。這些配基可以是任何與細(xì)胞表面蛋白結(jié)合的分子。例如，配基可以是抗體，細(xì)胞因子或激素。配基抗體可以是多克隆或單克隆并且可以通過(guò)該領(lǐng)域所熟知的方法產(chǎn)生。
在替代情況下，配基可以同一支持物相結(jié)合，造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞被通過(guò)該支持物并收集未結(jié)合的細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，給配基可以偶聯(lián)一熒光標(biāo)記，以使被標(biāo)記的細(xì)胞通過(guò)經(jīng)熒光激活的流式細(xì)胞儀的分選而被除去。這些方案的結(jié)果為DC/DCP耗竭的造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞。除抗CD123或抗CD4之外，其它可用于在本發(fā)明中除去DCP的配基還有CD45RA抗體和CD36抗體。被發(fā)明的任何配劑均可單獨(dú)使用或綜合使用以獲得樹(shù)狀細(xì)胞群體經(jīng)有效降低的造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞。
在替代情況下，IL-3作為CD123表面蛋白的配基其本身可用于從造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞中除去DCP。如上文對(duì)抗體配基的描述，IL-3可結(jié)合于一根柱子上或附著于順磁珠上以從移植物中除去DCP。在另一個(gè)實(shí)施方案中，IL-3被偶聯(lián)于一毒性部分并同造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞孵育該IL-3-毒性部分結(jié)合于DCP表面并被攝入細(xì)胞，該細(xì)胞為該毒性部分殺死。這樣，DCP通過(guò)選擇性細(xì)胞殺傷而從造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞中消除。任何對(duì)于人類細(xì)胞有毒性并可以同IL-3共價(jià)偶聯(lián)的微粒均可被使用；毒性部分的例子包括diptheria toxin，篦麻毒素和百日咳毒素以及該領(lǐng)域已知的其他毒素，但不限于此。
這些用于除去DC/DCP的工藝的任何一種或任何一種組合均可被使用以有效地降低在一個(gè)造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞的同源移植物中的DC/DCP數(shù)量。例如，一個(gè)同源移植物可以通過(guò)上述的一種或幾種工藝處理來(lái)去除CD4+和CD123+細(xì)胞?；蛘撸煌匆浦参锟梢越?jīng)處理除去以下任何一種組合CD123+和CD45RA+細(xì)胞；CD123+和CD36+細(xì)胞；CD45RA+和CD36+細(xì)胞；CD123+，CD4+和CD45RA+細(xì)胞；CD123+，CD4+和CD36+細(xì)胞；或CD4+，CD123+，CD45RA+和CD36+細(xì)胞。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，該同源移植物一開(kāi)始進(jìn)行正選擇，該選擇針對(duì)在表面表達(dá)CD34標(biāo)記的細(xì)胞，這些CD34正選擇的細(xì)胞隨后經(jīng)處理以除去表達(dá)某些細(xì)胞表面蛋白的細(xì)胞，這些蛋白為以下組合任何一種CD123+和CD45RA+細(xì)胞；CD4+和CD123+細(xì)胞；CD123+和CD36+細(xì)胞；CD45RA+和CD36+細(xì)胞；CD123+，CD4+和CD45RA+細(xì)胞；CD123+，CD4+和CD36+細(xì)胞；或CD4+，CD123+，CD45RA+和CD36+細(xì)胞。
通過(guò)使用任何先前用于除去DCP的工藝，本發(fā)明提供了一種組合物，該組合物適用于向有需要的受體移植造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞的一種移植物，該組合物包括造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞，在該系統(tǒng)中樹(shù)狀細(xì)胞母細(xì)胞的數(shù)量被有效地降低。
本發(fā)明還提供了柱子和柱系統(tǒng)以用于在移植前制備造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞，這樣可使移植物中DCP的數(shù)量被有效地降低。作為例子提供了一種雙柱系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括的第一根柱子含有一種支持物，該支持物結(jié)合有可特異結(jié)合CD34的抗體，第二根柱子含有一種支持物，該支持物結(jié)合有抗體，該抗體與表達(dá)于樹(shù)狀細(xì)胞母細(xì)胞的表面標(biāo)記特異地結(jié)合，其中第一根柱子吸附了至少百分之三十(30％)的CD34+細(xì)胞。被吸附的CD34+細(xì)胞從第一根柱子釋放(例如，通過(guò)攪動(dòng))后隨即通過(guò)第二根柱子，該柱子含有足量的被結(jié)合抗體以吸附表達(dá)DCP表面標(biāo)記的細(xì)胞，這樣便有效地降低了第二根柱子的洗脫流分(pass-through)中的DCP數(shù)量。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，經(jīng)該雙柱系統(tǒng)處理后的移植物的細(xì)胞組分含有至少2×106CD34細(xì)胞/千克和少于0.25×106DCP/千克受體體重。
在其它的實(shí)施方案中，一個(gè)用于在移植前制備造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞以使移植物中DCP的數(shù)量被有效地降低的柱子包括一種支持物，該支持物結(jié)合有一種抗體，該抗體可與選自以下組合群體的一種細(xì)胞表面標(biāo)記的組合結(jié)合CD4和CD123；CD123和CD45RA；CD123和CD36；CD45RA和CD36；CD123，CD4和CD45RA；CD123，CD4和CD36；或CD4，CD123，CD45RA和CD36。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，該柱系統(tǒng)含有足量的被結(jié)合抗體以吸附表達(dá)DCP表面標(biāo)記的細(xì)胞，這樣便使造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞中的DCP數(shù)量少于0.25×106DCP/千克受體體重。
本申請(qǐng)自始至終引用了多種出版物。這些出版物的披露內(nèi)容在此全文引入作為參考。
以下的實(shí)施例意圖在于闡釋而非限定本發(fā)明。盡管它們?cè)谑堑湫偷目赡鼙挥玫降姆椒?，其它為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所知的步驟可能在替代的情況下被使用。
這樣，可以基于移植物中的CD34+細(xì)胞和DCP數(shù)量描述出一個(gè)簡(jiǎn)單的數(shù)學(xué)關(guān)系(一個(gè)微分方程，df)如下df＝(CD34+細(xì)胞數(shù))-2×(DCP數(shù))。對(duì)于df的一個(gè)閾值，1.5×106每千克體重，將這些患者分為兩組移植物df大于或等于1.5×106每千克體重的患者在3年內(nèi)DFS為67％，與之相比移植物df小于1.5×106每千克體重的患者在3年內(nèi)DFS為34％實(shí)施例2.選中的干細(xì)胞的移植供體來(lái)源收集自HLA匹配或不匹配的供體的骨髓或外周血液干細(xì)胞。
供體PBSC收集為固定化PBSC，每天以G-CSF進(jìn)行給藥直至完成對(duì)白細(xì)胞的去除。供體根據(jù)其實(shí)際體重接受10μg/kg/天皮下注射G-CSF。在動(dòng)員和白細(xì)胞去除期間必須遵從供體支持護(hù)理的制度標(biāo)準(zhǔn)。PBSC通過(guò)白細(xì)胞消除法收集。白細(xì)胞去除應(yīng)根據(jù)制度標(biāo)準(zhǔn)方法在一臺(tái)連續(xù)的流式分離儀器上進(jìn)行。每次白細(xì)胞去除收集的終點(diǎn)應(yīng)為對(duì)多于12升全血量的加工或4小時(shí)的白細(xì)胞去除。白細(xì)胞去除應(yīng)在供體G-CSF治療的+5天開(kāi)始并且每天進(jìn)行(白細(xì)胞去除最大為四天)直至達(dá)到2×106CD34+細(xì)胞/千克受體體重的目標(biāo)(加工后)。每天根據(jù)流式細(xì)胞儀分析CD34+細(xì)胞數(shù)量來(lái)決定去除術(shù)是否應(yīng)繼續(xù)。
供體細(xì)胞制備按照已公開(kāi)的方案(例如，Kvalheim G，Pharo A，Holte H et al.The Use of immuneomagnetic beads and Isolex 300gives high purity and yield of CD34+cells from peripheral bloodprogenitor cell products.Bone Marrow Transplant 1996；17(suppl1)S57；and Cancelas JA，Canais C，Querol S et al.CD34+celltransplantion from mobilized peripheral blood byimmuneomagentic absorption in breast cancer patients.BoneMarrow Transplant 1996；17 suppl 1)S32)使用免疫磁性吸附細(xì)胞系統(tǒng)來(lái)選擇骨髓或PBSC，例如Isolex300系統(tǒng)(BaxterImmunotherapy，Irvine，CA)或下一代Isolex300i系統(tǒng)，該系統(tǒng)可按照出版的方案(Report Series 8，Initial Performance ofAutomates Isolex 300i System in Mulicenter Internationalclinical Trials.I.Purity)完全自動(dòng)操作。這些設(shè)備產(chǎn)生的最終移植物平均純度為77-93％，選擇后細(xì)胞數(shù)為1.1-6.4×106CD34+細(xì)胞每千克。如果適當(dāng)，額外量的移植物被冷凍保存與液氮的氣相中以備進(jìn)一步灌輸。
CD34+選擇的移植物隨后經(jīng)處理以除去DCP(見(jiàn)下文實(shí)施例3)。所產(chǎn)生的CD34+，DCP耗竭的移植物含有至少2×106CD34+細(xì)胞/千克受體體重并且少于0.25×106DCP每千克，該移植物被灌輸入受體。如果適當(dāng)，額外量的移植物被冷凍保存與液氮的氣相中以備進(jìn)一步灌輸。
供體細(xì)胞移植以如上制備的供體細(xì)胞對(duì)需要這樣的移植物的患者通過(guò)中央靜脈導(dǎo)管(典型的在胸部)進(jìn)行給藥。在接受供體細(xì)胞灌輸前的一至兩天，接受這些供體細(xì)胞的患者可能需要狀態(tài)預(yù)調(diào)整處理。該狀態(tài)預(yù)調(diào)整處理為全身照射或二甲磺酸丁酯處理同免疫抑制劑治療聯(lián)合使用，免疫抑制治療如fludarabine，三胺硫磷，環(huán)磷酰胺和抗體處理以耗竭T細(xì)胞。
權(quán)利要求
1.一種方法，該方法用以在同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞移植受體中降低或防止移植物VS.宿主疾病，該方法包括以同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞對(duì)受體進(jìn)行給藥，在該系統(tǒng)中樹(shù)狀細(xì)胞的數(shù)量被有效地降低，如此便降低或防止了移植物VS.宿主疾病。
2.權(quán)利要求1的方法，其中樹(shù)狀細(xì)胞為樹(shù)狀細(xì)胞祖細(xì)胞。
3.一種方法，該方法用以增加同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞移植受體存活的機(jī)率，該方法包括以同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞對(duì)受體進(jìn)行給藥，在該系統(tǒng)中樹(shù)狀細(xì)胞的數(shù)量被有效地降低，如此便增加了該受體存活的機(jī)率。
4.權(quán)利要求3的方法，其中樹(shù)狀細(xì)胞為樹(shù)狀細(xì)胞祖細(xì)胞。
5.一種方法，該方法用以在同源異型骨髓移植受體中降低或防止移植物VS.宿主疾病，該方法包括以同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞對(duì)受體進(jìn)行給藥，在該系統(tǒng)中被用于給藥的樹(shù)狀細(xì)胞前體的數(shù)量低于0.25×106/千克受體體重。
6.一種方法，該方法用以增加同源異型骨髓受體存活的機(jī)率，該方法包括以同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞對(duì)受體進(jìn)行給藥，在該系統(tǒng)中被用于給藥的樹(shù)狀細(xì)胞前體的數(shù)量低于0.25×106/千克受體體重。
7.權(quán)利要求1或3的方法，其中該樹(shù)狀細(xì)胞使用熒光激活的細(xì)胞分選而除去。
8.權(quán)利要求1的方法，其中樹(shù)狀細(xì)胞通過(guò)以下方法除去a)令同源異型造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞同一種結(jié)合于順磁支持物的配基相接觸，該配基特異地結(jié)合樹(shù)狀細(xì)胞表面的一種受體，以及b)以一種磁體從同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞中除去樹(shù)狀細(xì)胞。
9.權(quán)利要求3的方法，其中樹(shù)狀細(xì)胞通過(guò)以下方法除去a)令同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞同一種結(jié)合于順磁支持物的配基相接觸，該配基特異地結(jié)合樹(shù)狀細(xì)胞表面的一種受體，以及b)以一種磁體從同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞中除去樹(shù)狀細(xì)胞。
10.權(quán)利要求1的方法，其中樹(shù)狀細(xì)胞通過(guò)令同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞通過(guò)一根或幾根柱子而除去，所述的柱子含有支持材料，該支持材料結(jié)合有一種或多種配基，這些配基與表達(dá)與樹(shù)狀細(xì)胞表面的一種或多種蛋白相結(jié)合。
11.權(quán)利要求3的方法，其中樹(shù)狀細(xì)胞通過(guò)令同源異型造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞過(guò)一根或幾根柱子而除去，所述的柱子含有支持材料，該支持材料結(jié)合有一種或多種配基，這些配基與表達(dá)與樹(shù)狀細(xì)胞表面的一種或多種蛋白相結(jié)合。
12.權(quán)利要求8的方法，其配基選自以下分子組成的群體IL3，抗CD123，抗CD45RA，抗CD4和抗CD36。
13.權(quán)利要求9的方法，其配基選自以下分子組成的群體IL3，抗CD123，抗CD45RA，抗CD4和抗CD36。
14.權(quán)利要求10的方法，其配基選自以下分子組成的群體IL3，抗CD123，抗CD45RA，抗CD4和抗CD36。
15.權(quán)利要求11的方法，其配基選自以下分子組成的群體IL3，抗CD123，抗CD45RA，抗CD4和抗CD36。
16.權(quán)利要求2或4的方法，其中樹(shù)狀前體細(xì)胞通過(guò)令同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞與IL-3-毒性部分偶聯(lián)體相接觸，其中樹(shù)狀前體細(xì)胞被毒性部分破壞。
17.權(quán)利要求16的方法，其毒性部分選自diptheria toxin，篦麻毒素和百日咳毒素組成的群體。
18.權(quán)利要求1或3的方法，其中同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞經(jīng)過(guò)針對(duì)CD34+表型的正性選擇。
19.一種柱系統(tǒng)，該系統(tǒng)用于在移植前制備造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞，該系統(tǒng)包括的第一根柱子含有一種結(jié)合有可以特異結(jié)合CD34的抗體的支持物，第二根柱子含有一種結(jié)合有可以特異結(jié)合表達(dá)于樹(shù)狀細(xì)胞祖細(xì)胞表面的標(biāo)記的抗體的支持物，其中第一根柱子在造血系統(tǒng)的重構(gòu)細(xì)胞通過(guò)時(shí)吸附了至少30％的CD34+細(xì)胞，并以從第一根柱子釋放出的被吸附的細(xì)胞流分通過(guò)第二根柱子并且吸附表達(dá)樹(shù)狀細(xì)胞前體表面的標(biāo)記的細(xì)胞，這樣便有效地減少了樹(shù)狀前體細(xì)胞的數(shù)量。
全文摘要
提供了用以在同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞移植受體中降低或防止移植物VS.宿主疾病的方法,該方法包括以同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞對(duì)受體進(jìn)行給藥,在該系統(tǒng)中樹(shù)狀細(xì)胞的數(shù)量被有效地降低,如此便降低或防止了移植物VS.宿主疾病。提供了用以增加同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞移植受體存活的機(jī)率的方法,該方法包括以同源異型造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞對(duì)受體進(jìn)行給藥,在該系統(tǒng)中樹(shù)狀細(xì)胞的數(shù)量被有效地降低,如此便增加了該受體存活的機(jī)率。公開(kāi)了一種柱系統(tǒng),該系統(tǒng)用于在移植前制備造血系統(tǒng)重構(gòu)細(xì)胞,用以選擇CD34細(xì)胞除去樹(shù)狀細(xì)胞。
文檔編號(hào)A61K35/14GK1333688SQ99815503
公開(kāi)日2002年1月30日 申請(qǐng)日期1999年11月10日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月11日
發(fā)明者E·K·瓦勒 申請(qǐng)人:埃莫里大學(xué)