專利名稱：Vla－4拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用作VLA-4拮抗劑的有機化合物，所述化合物的制備方法及其作為藥物的用途。
細胞粘著(即，細胞彼此結(jié)合、向特異性靶點遷移或在細胞外基質(zhì)內(nèi)集中的過程)是許多生物學現(xiàn)象的基礎(chǔ)。細胞粘著可以引起造血細胞向內(nèi)皮細胞的粘著以及隨后的這些造血細胞離開血管向損傷位點遷移，因此在哺乳動物疾病例如炎癥和免疫反應中起重要作用。
有多種細胞表面大分子(稱為細胞粘著受體)調(diào)節(jié)細胞-細胞和細胞-基質(zhì)相互作用。例如，整聯(lián)蛋白是造血細胞和其它細胞之間粘著作用的關(guān)鍵介質(zhì)。整聯(lián)蛋白是由α和β兩個亞單位組成的非共價的雜二聚體配合物。根據(jù)其α和β亞單位成分的類型，將各整聯(lián)蛋白分子分成不同的亞族。至少有12種不同的α亞單位(α1-α6，α-L、α-M、α-X、α-IIB、α-V和α-E)和至少9種不同的β亞單位(β1-β9)。
極遲抗原-4(VLA-4)，也稱為α4β1整聯(lián)蛋白或CD49d／CD29，是一種參與多種細胞-細胞和細胞-基質(zhì)粘著的白細胞細胞表面受體。它是細胞因子可誘導的內(nèi)皮細胞表面蛋白，血管細胞粘著分子-1(VCAM-1)和細胞外基質(zhì)蛋白纖連蛋白(FN)的受體?？筕LA-4單克隆抗體(mAb’s)可以在體外和體內(nèi)抑制VLA-4依賴性的粘著作用。該VLA-4依賴性細胞粘著的抑制可以預防或抑制炎癥或自身免疫疾病。
WO 96／22966記載了下式的化合物 該化合物可用于抑制、預防和減輕VLA-4介導的細胞粘著。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，某些新的化合物具有非常好的VLA-4拮抗劑活性和有用的藥理學特性。
因此，一方面，本發(fā)明提供式Ⅰ的化合物或其可藥用鹽 其中R1是烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基稠合的環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、芳基取代的烷基(芳烷基)、芳基取代的鏈烯基或炔基、環(huán)烷基取代的烷基、環(huán)烯基取代的環(huán)烷基、聯(lián)芳基、烷氧基、鏈烯氧基、炔氧基、芳基取代的烷氧基(芳烷氧基)、芳基取代的鏈烯氧基或炔氧基、烷基氨基、鏈烯基氨基或炔基氨基、芳基取代的烷基氨基、芳基取代的鏈烯基氨基或炔基氨基、芳氧基、芳基氨基、N-烷基脲基取代的烷基、N-芳基脲基取代的烷基、烷基羰基氨基取代的烷基、氨基羰基取代的烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基取代的烷基、雜環(huán)基取代的氨基、羧基烷基取代的芳烷基、氧代碳環(huán)基稠合的芳基或雜環(huán)基烷基；R2是(CH2)q-V-(CH2)q’-Vr-R8；R3是H、烷基、鏈烯基、芳基或雜芳基；R4是H、芳基、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、環(huán)烯基、炔基和芳基取代的烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基羰基、氨基羰基、酰氨基、單或二烷基氨基羰基、單或二芳基氨基羰基、烷基芳基氨基羰基、二芳基氨基羰基、單或二?；被驶⒎甲寤蛑艴；?、或被選自氨基、鹵素、羥基、巰基、單或二烷基氨基、單或二芳基氨基、烷基芳基氨基、單或二酰基氨基、烷氧基、鏈烯氧基、芳氧基、硫代烷氧基、硫代鏈烯氧基、硫代炔氧基、硫代芳氧基和雜環(huán)基的取代基任選地取代的烷基；R5是烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、芳基取代的烷基、芳基取代的鏈烯基，或炔基；被選自氨基、鹵素、羥基、巰基、單或二烷基氨基、單或二芳基氨基、烷基芳基氨基、單或二酰基氨基、烷氧基、鏈烯氧基、芳氧基、硫代烷氧基、硫代鏈烯氧基、硫代炔氧基、硫代芳氧基和雜環(huán)基的取代基任選地取代的烷基；R6是烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳烷基、芳基取代的鏈烯基或炔基、羥基取代的烷基、烷氧基取代的烷基、芳烷氧基取代的烷基、氨基取代的烷基、(芳基取代的烷氧羰基氨基)取代的烷基、巰基取代的烷基、烷基磺酰基取代的烷基、(羥基取代的烷硫基)取代的烷基、硫代烷氧基取代的烷基、?；被〈耐榛?、烷基磺酰基氨基取代的烷基、芳基磺酰基氨基取代的烷基、嗎啉代-烷基、硫代嗎啉代-烷基、嗎啉代羰基取代的烷基、硫代嗎啉代羰基取代的烷基、[N-(烷基、鏈烯基或炔基)-或(N，N-二烷基、二鏈烯基或二炔基)-氨基]羰基取代的烷基、羧基取代的烷基、二烷基氨基取代的?；被榛?；或選自精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、S-甲基半胱氨酸、蛋氨酸及其相應的亞砜和砜衍生物、甘氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、別-異亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、丙氨酸、鳥氨酸、組氨酸、谷氨酰胺、纈氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、天冬氨酸、β-氰基丙氨酸和別蘇氨酸的氨基酸側(cè)鏈；R7和R8彼此獨立地是H、烷基、鏈烯基、碳環(huán)芳基、雜芳基或被1-3個選自氨基、羥基、巰基、單或二烷基氨基、單或二芳基氨基、烷基芳基氨基、二芳基氨基、單或二?；被⑼檠趸?、鏈烯氧基、芳氧基、硫代烷氧基、硫代鏈烯氧基、硫代炔氧基、硫代芳氧基和雜環(huán)基的取代基取代的烷基、鏈烯基、碳環(huán)芳基或雜芳基；或者R2和R6與它們所連接的原子合在一起可以形成雜環(huán)；V是O、NH、S，SO或SO2；X是CO2R5、PO3H、SO2R5、SO3H、OPO3H、CO2H或CON(R4)2；W是CH或N；Y是CO、SO2或PO2；Z是(CH2)n’、CHR6或NR7；n和n’彼此獨立地是0-4；m是1-4；p是1-4；q和q’彼此獨立地是1-5；r是0或1。
本發(fā)明的化合物，即式Ⅰ化合物及其可藥用鹽，是VLA-4拮抗劑，可用于預防、減輕或抑制細胞粘著。因此，它們可用于VLA-4介導的細胞粘著疾病狀態(tài)，特別是炎癥和自身免疫疾病。它們特別適用于手術(shù)、特別是移植手術(shù)引起的炎癥。本發(fā)明的化合物可單獨使用或與具有預防、減輕或抑制細胞粘著活性的其它物質(zhì)聯(lián)用。
本發(fā)明的另一個實施方案是藥物組合物，特別是用于VLA-4拮抗的組合物，所述組合物含有有效量的本發(fā)明化合物以及任選地可藥用載體。
另一方面，本發(fā)明還提供用作藥物、特別是VLA-4拮抗劑的本發(fā)明化合物，即式Ⅰ化合物及其可藥用鹽。
另一方面，本發(fā)明還提供在哺乳動物中拮抗VLA-4的方法，該方法包括，向需要所述治療的哺乳動物、優(yōu)選人施用有效量的本發(fā)明化合物。
另一方面，本發(fā)明提供本發(fā)明的化合物在制備用于治療由VLA-4介導的疾病的藥物中的用途。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物是式Ⅰa化合物或其可藥用鹽， 其中R2是C1-4烷氧基-C1-8烷基；R4是H、烷基、鏈烯基、碳環(huán)芳基或雜芳基；X是CO2H或CO2烷基；其它符合如式Ⅰ所定義。
更優(yōu)選的本發(fā)明化合物是其中R1是芳基；R2是甲氧基-正丙基；R3是H；R4是鏈烯基或芳基；X是CO2H；n是0并且W是CH的式Ⅰa化合物或其可藥用鹽。
本發(fā)明特別優(yōu)選的實施方案涉及式Ⅰb的化合物或其可藥用鹽 其中R1是N-芳基脲基苯基；R2是C1-C4烷氧基-C2-C4烷基；R3是H；R4是H、C1-C4-烷基、C2-C4-鏈烯基或碳環(huán)芳基；n是1或2；m是1、2或3；X是COOH或CO2R5；R5是任選地取代的低級烷基。
優(yōu)選如下式Ⅰb的化合物或其可藥用鹽，其中R1是N-(任選地取代的苯基)-脲基苯基；R2是甲氧基丙基；R3是H；R4是C2-C4-鏈烯基或任選地取代的苯基；n是1；m是1；X是COOH。
最優(yōu)選的本發(fā)明化合物是式Ⅰc化合物或其可藥用鹽 其中Ra是H、CH3、Cl或NH2；R2是(CH2)3OCH3或(CH2)4OCH3；R4是-(CH)=(CH)-CH3、苯基、4-甲氧基苯基或3，4-二甲氧基苯基；T是NH或CH2。
“烷基”是指含有1-10個、優(yōu)選1-6個、更優(yōu)選1-4個碳原子的直鏈或支鏈的烷基基團。所述基團的例子包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、己基和癸基。
“鏈烯基”是指含有2-10個、優(yōu)選2-6個、更優(yōu)選2-4個碳原子的直鏈或支鏈鏈烯基基團。所述基團的例子包括乙烯基、E-和Z-丙烯基、異丙烯基、E-和Z-丁烯基、E-和Z-異丁烯基、E-和Z-戊烯基和癸烯基。
與上述術(shù)語連接的“低級”是指所述基團含有最多6個碳原子。
與上述術(shù)語連接的“取代的”是指所述基團被例如氨基、鹵素、羥基、巰基、單或二烷基氨基、單或二芳烷基氨基、單或二芳基氨基、烷氧基、芳氧基、芳基、硫代芳氧基、硫代烷氧基或雜環(huán)基取代。
“烷基”是指含有2-10個、優(yōu)選2-6個、更優(yōu)選2-4個碳原子的直鏈或支鏈炔基基團。所述基團的例子包括乙炔基、丙炔基、炔丙基、丁炔基、己炔基和癸炔基。
“環(huán)烷基”是指含有3-8個、優(yōu)選3-6個碳原子的環(huán)狀烷基基團。所述環(huán)烷基的例子包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)丙基甲基。
“環(huán)烯基”是指含有4-8個、優(yōu)選5-6個碳原子和一個或多個雙鍵的環(huán)狀碳環(huán)。所述環(huán)烯基的例子包括環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)戊二烯基和2-甲基-2-丁烯基。
芳基是指碳環(huán)或雜環(huán)芳基(雜芳基)。
“芳基(碳環(huán)芳基和雜芳基)”是指含有0-3個選自O(shè)、N和S的雜原子的5或6元碳環(huán)芳族或雜芳族環(huán)；含有0-3個選自O(shè)、N和S的雜原子的二環(huán)9或10元芳族或雜芳族環(huán)系；或含有0-3個選自O(shè)、N和S的雜原子的三環(huán)13或14元芳族或雜芳族環(huán)系；以上各環(huán)均可以被1-3個選自例如低級烷基、鏈烯基、炔基、取代的低級烷基、取代的鏈烯基、取代的炔基、=O、NO2、鹵素、羥基、烷氧基、氰基、-NR’R’、?；被⒈交?、芐基、苯氧基、芐氧基、雜芳基和雜芳氧基的取代基任選地取代，其中所述的苯基、芐基、苯氧基、芐氧基、雜芳基和雜芳氧基可以被1-3個選自例如低級烷基、鏈烯基、炔基、鹵素、羥基、烷氧基、氰基、苯基、苯氧基、芐基、芐氧基、羧基、烷氧羰基、甲酰氨基、雜芳基、雜芳氧基、NO2和-NR’R’的取代基任選地取代，其中R’是H或低級烷基。碳環(huán)芳族環(huán)系包括苯基、萘基、茚基、二氫化茚基、薁基、芴基、蒽基。雜環(huán)芳族環(huán)系包括呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、異噁唑基、異噻唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，3-三唑基、1，3，4-噻二唑基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、1，3，5-三噻烷基、吲嗪基、吲哚基、異吲哚基、3H-吲哚基、二氫吲哚基、苯并[b]呋喃基、2，3-二氫苯并呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、異喹啉基、噌啉基、二氮雜萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基和吩噁嗪基。
當“芳基”具體涉及上式中的基團R1時，是指碳環(huán)或雜環(huán)芳基，特別是被1-3個取代基任選地取代的苯基，所述取代基彼此獨立地選自例如鹵素、羥基、氨基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、烷基、鏈烯基、炔基、氰基、羧基、烷氧羰基、Ar’-取代的烷基、Ar’-取代的取代的鏈烯基或炔基、1，2-二氧亞甲基、1，2-二氧亞乙基、烷氧基、鏈烯氧基或炔氧基、Ar’-取代的的烷氧基、Ar’-取代的鏈烯氧基或炔氧基、烷基氨基、鏈烯基氨基或炔基氨基、Ar’-取代的烷基氨基、Ar’-取代的鏈烯基氨基或炔基氨基、Ar’-取代的羰基氧基、烷基羰基氧基、脂族或芳族酰基如鏈烷?；?、Ar’-取代的鏈烷?；駻r’-取代的羰基、Ar’-取代的烷基羰基氧基、Ar’-取代的羰基氨基、Ar’-取代的氨基、Ar’-取代的氧基、烷基羰基氨基、Ar’-取代的烷基羰基氨基、Ar’-取代的氨基羰基烷基、烷氧羰基氨基、Ar’-取代的烷氧羰基氨基、Ar’-氧羰基氨基、烷基磺酰基氨基、單或二(Ar’-磺?；?氨基、Ar’-取代的烷基磺?；被?、嗎啉代羰基氨基、硫代嗎啉代羰基氨基、N-烷基胍基、N-Ar’胍基、N-Ar’氰基胍基、N，N-(Ar’-，烷基)胍基、N，N-(Ar’，Ar’)胍基、N，N-二烷基胍基、N，N，N-三烷基胍基、N-烷基-脲基、N，N-二烷基脲基、N-Ar’-脲基、N，N-(Ar’，烷基)脲基和N，N-(Ar’)2脲基；?；驶被籄r’-取代的芳基；芳族酰基取代的芳族或脂族?；?；Ar’-取代的雜環(huán)基；Ar’-取代的環(huán)烷基或環(huán)烯基；雜環(huán)基烷氧基；N，N-(Ar’，羥基)脲基；Ar’-取代的環(huán)烷基和環(huán)烯基、Ar’-取代的聯(lián)芳基；Ar’-取代的氨基羰基氨基；Ar’-巰基取代的烷基；Ar’-氨基取代的芳基；Ar’-氧基取代的烷基；Ar’-取代的氨基環(huán)烷基和環(huán)烯基；芳烷基氨基磺酰基；芳烷氧基烷基；N-Ar’-取代的硫脲基；N-芳烷氧基脲基；N-羥基脲基；N-鏈烯基脲基；N，N-(烷基，羥基)脲基；雜環(huán)基；硫代芳氧基取代的芳基；N，N-(芳基，烷基)肼基；Ar’-取代的磺?；s環(huán)基；芳烷基取代的雜環(huán)基；環(huán)烷基和環(huán)烯基取代的雜環(huán)基；環(huán)烷基稠合的芳基；芳氧基取代的烷基；雜環(huán)基氨基；Ar’-取代的芳基氨基磺?；?；Ar’-取代的鏈烯酰基；脂族或芳族酰基氨基羰基；脂族或芳族酰基取代的鏈烯基；Ar’-取代的氨基羰基氧基；Ar’，Ar’-二取代的芳基；脂族或芳族?；〈孽；?；苯環(huán)稠合的雜環(huán)基羰基氨基；Ar’-取代的肼基；Ar’-取代的氨基磺酰基；Ar’-取代的烷基氨基；Ar’-取代的雜環(huán)基；Ar’，Ar’-二取代的鏈烷?；被?；Ar’-取代的環(huán)烷?；被浑s環(huán)基烷氧基；N，N-Ar’，羥基脲基；N，N’-Ar’，羥基脲基；雜環(huán)基羰基氨基；Ar’-取代的氨基羰基雜環(huán)基；Ar’-取代的氨基羰基；Ar’-取代的羰基氨基；Ar’-取代的氨基磺?；被?；Ar’-取代的巰基烷基；Ar’-氨基取代的聯(lián)芳基；芳烷基氨基烷氧基；烷基和芳氧基取代的烷氧基；雜環(huán)基羰基；Ar’-取代的磺?；榛?；Ar’-氨基碳環(huán)基；芳烷基磺?；?；芳基取代的鏈烯基；雜環(huán)基烷基氨基；雜環(huán)基烷基氨基羰基；Ar’-取代的磺酰基氨基烷基；Ar’-取代的環(huán)烷基；硫代芳氧基烷基；硫代芳氧基巰基；環(huán)烷基羰基烷基；環(huán)烷基取代的氨基；Ar’-取代的芳基氨基；芳氧基羰基烷基；二氨基磷酸(phosphorodiamidylacid)或酯；芳氧基二甲基甲硅烷氧基；2，3-二氫-1，3-茚二酮基羰基烷基；2，3-二氫-1，3-茚二酮基羰基；肟基；雜環(huán)基亞烷基；甲脒基；benzalizinyl；亞芐肼基(benzalhydrazino)；芳基磺?；寤?；benzilyl氨基；4-(N-2-羧基烷基-1-(1，3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)氨基-N-亮氨酰基烷基酰氨基芳基脲)；Ar’-氨基甲酰氧基和烷基-及芳氧基取代的脲基；其中“Ar’”是以上所定義的碳環(huán)或雜環(huán)芳基，其帶有1-3個選自氫、鹵素、羥基、氨基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、烷基、鏈烯基、炔基、1，2-二氧亞甲基、1，2-二氧亞乙基、烷氧基、鏈烯氧基、炔氧基、烷基氨基、鏈烯基氨基或炔基氨基、烷基羰基氧基、脂族或芳族?；?、烷基羰基氨基、烷氧羰基氨基、烷基磺酰基氨基、N-烷基或N，N-二烷基脲基的取代基。
“烷氧基”是指烷基醚基團。烷基醚基團的例子包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基?！版溝┭趸笔侵甘芥溝┗?O-的基團，條件是該基團不是烯醇醚。鏈烯氧基的例子包括烯丙氧基和E-和Z-3-甲基-2-丙烯氧基?！叭惭趸笔侵甘饺不?O-的基團，條件是該基團不是炔醇醚。炔氧基的例子包括炔丙氧基和2-丁炔氧基。“硫代烷氧基”是指式烷基-S-的硫醚基團。“烷基氨基”是指單或二烷基取代的氨基基團(即式烷基-NH-或(烷基)2-N-的基團)。烷基氨基的例子包括甲氨基、乙氨基、丙氨基、異丙氨基、叔丁基氨基和N，N-二乙基氨基?！版溝┗被笔侵甘芥溝┗?NH-或(鏈烯基)2N-的基團，條件是該基團不是烯胺。鏈烯基氨基的例子是烯丙基氨基?！叭不被笔侵甘饺不?NH-或(炔基)2N-的基團，條件是該基團不是炔胺。炔基氨基的例子是炔丙基氨基。“芳氧基”是指式芳基-O-的基團。芳氧基的例子包括苯氧基、萘氧基和吡啶基氧基。“芳基氨基”是指時芳基-NH-的基團。芳基氨基的例子包括苯基氨基(苯氨基)、萘基氨基、2-、3-或4-吡啶基氨基?！奥?lián)芳基”是指時芳基-芳基-的基團。“硫代芳基”是指式芳基-S-的基團。硫代芳基的例子是硫代苯基。“芳基稠合的環(huán)烷基”是指與芳基共享兩個相鄰原子的環(huán)烷基。芳基稠合的環(huán)烷基的例子是苯環(huán)稠合的環(huán)丁基?！爸艴；笔侵笍聂人嵫苌氖酵榛?CO-、鏈烯基-CO-或炔基-CO-的基團。脂族?；睦影ㄒ阴；⒈；⒍□；?、戊?；?、4-甲基戊酰基、丙烯酰基、巴豆基、丙炔?；图谆蝉；??！胺甲艴；笔侵甘椒蓟?CO-的基團。芳族?；睦影ū郊柞；?、4-鹵代苯甲酰基、4-羧基苯甲酰基、萘?；瓦拎せ驶??！皢徇驶焙汀胞u代嗎啉代羰基”分別是指N-羰基化的嗎啉代和N-羰基化的硫代嗎啉代基團?！巴榛驶被笔侵甘酵榛?CONH-的基團?！巴檠豸驶被笔侵甘酵榛?OCONH-的基團?！巴榛酋；被笔侵甘酵榛?SO2NH-的基團?！胺蓟酋；被笔侵甘椒蓟?SO2NH-的基團?！癗-烷基脲”或“N-烷基脲基”是指式烷基-NH-CO-NH-的基團?！癗-芳基脲”或“N-芳基脲基”是指式芳基-NH-CO-NH-的基團?！胞u素”是指氟、氯、溴和碘。若無另外說明，“雜環(huán)”是指穩(wěn)定的3-7元單環(huán)雜環(huán)或8-11元二環(huán)雜環(huán)，所述雜環(huán)可以是飽和或不飽和的，并且可以任選地與苯環(huán)稠合。各雜環(huán)由一個或多個碳原子和1-4選自氮、氧和硫、氮和硫的各種氧化形式以及任何堿性氮的季銨鹽形式的雜原子組成。任何環(huán)氮原子均可任選地被式Ⅰ化合物中所定義的取代基R4所取代。雜環(huán)可以在任何可以產(chǎn)生穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的環(huán)內(nèi)的碳或雜原子上進行連接。優(yōu)選的雜環(huán)包括5-7元單環(huán)雜環(huán)和8-10元二環(huán)雜環(huán)。雜環(huán)可以任選地在1-3個環(huán)位置上被氧代取代并且可以任選地被1-4個芳基取代基彼此獨立地取代。其包括本文所定義的雜芳基以及飽和的雜環(huán)如哌啶、嗎啉、吡咯烷、噻唑烷、哌嗪等。
需要指出的是，在特定分子中的任何取代基或符號的定義與其在該分子中別處的定義是相互獨立的。因此，例如，-N(R4)2表示-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2等。
本文所述的某些化合物含有一個或多個不對稱中心，因此可以產(chǎn)生可以用絕對立體化學的術(shù)語如(R)或(S)或用于氨基酸的(D)或(L)進行定義的對映體、非對映體和其它立體異構(gòu)體形式。本發(fā)明包括所有可能的非對映體及其外消旋和旋光體的形式。旋光的(R)和(S)或(D)和(L)異構(gòu)體可以用手性合成子或手性試劑制備，或用常規(guī)的技術(shù)進行拆分。當本文所述的化合物含有烯烴雙鍵或其它幾何不對稱中心時，若無另外說明，該化合物同時包括E和Z幾何異構(gòu)體。同樣，還包括所有的互變異構(gòu)體。
在其中式Ⅰ中的W是CH的一組優(yōu)選的本發(fā)明化合物中，該碳原子的立體化學是(S)，即下式的化合物及其可藥用鹽 其中R1、R2、R3、R4、X、Y、Z、m、n和p如式Ⅰ中所定義。
本發(fā)明的藥物組合物含有式Ⅰ化合物或其可藥用鹽作為活性成分，并且還可含有可藥用載體以及任選的其它治療成分。術(shù)語“可藥用鹽”是指從可藥用的無毒酸或堿包括有機或無機的酸或堿制得的鹽。
當本發(fā)明的化合物呈酸性時，可以從可藥用的無毒堿制備鹽。鹽可以從所有穩(wěn)定形式的無機堿包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、鋰、鎂、錳、鉀、鈉、鋅等衍生得到。特別優(yōu)選銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。從可藥用有機無毒堿衍生的鹽包括伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺(包括天然取代的胺)、環(huán)胺和堿性離子交換樹脂如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、N，N’-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、組氨酸、異丙基胺、賴氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺等的鹽。
當本發(fā)明的化合物呈堿性時，可以從可藥用的無毒酸制備鹽。所述酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、谷氨酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、撲酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸等。特別優(yōu)選檸檬酸、氫溴酸、馬來酸、磷酸、硫酸和酒石酸。堿鹽還包括銨鹽、堿金屬鹽、堿土金屬鹽以及與有機堿形成的鹽如二環(huán)己基胺鹽和與氨基如精氨酸和賴氨酸形成的鹽。此外，堿性含氮基團還可以用低級烷基鹵化物如甲基氯化物、硫酸二烷基酯如硫酸二甲酯、長鏈鹵化物如硬脂基鹵化物和芳烷基鹵化物如芐基氯化物等試劑季銨化。
本發(fā)明的化合物特別適于在哺乳動物中用作VLA-4拮抗劑和與VLA-4有關(guān)的細胞粘著的抑制劑。
式Ⅰ化合物抑制與VLA-4有關(guān)的細胞粘著的能力使得它們可以用于治療、緩解或預防各種炎癥、免疫和自身免疫疾病。用本發(fā)明的方法進行治療的疾病優(yōu)選選自呼吸疾病(例如哮喘)、關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、移植排斥、多發(fā)性硬化、Ⅰ型糖尿病和炎性腸疾病、干細胞活動和engraphment，以及鐮狀細胞性貧血。式Ⅰ化合物還可用于移植手術(shù)；具體地講，用于治療慢性和急性的異種移植和同種移植排斥反應。
對于呼吸疾病，本發(fā)明的化合物可用作對癥或預防性治療炎性氣道疾病的藥物。所述疾病包括各種類型或起因的哮喘，包括內(nèi)源性(非過敏性的)哮喘和外源性(過敏性)哮喘。它們可用于治療支氣道哮喘、運動引起的哮喘、職業(yè)性哮喘、由細菌感染引起的哮喘和其它非過敏性哮喘。應當理解，哮喘的治療包括對年齡小于4或5歲、具有喘鳴癥狀(特別是在夜間)并且被診斷為或可被診斷為“氣喘嬰兒”的患者的治療。
在治療哮喘中的預防性效力可以表現(xiàn)在癥狀發(fā)作頻率的減少或嚴重程度的降低、肺功能的改善或氣道過敏性的改善。此外，還可以通過對對癥治療需要的減少證實，所述對癥治療是指，當癥狀發(fā)作時用于控制或中止癥狀的治療，例如用皮質(zhì)類固醇進行抗炎治療。
可用本發(fā)明化合物治療的其它炎性氣道疾病包括塵肺(一種由于反復吸入粉塵引起的肺部炎性疾病，通常是職業(yè)性的)，包括，例如礬土肺、石棉肺、石末肺、鐵塵肺、矽肺、煙塵肺和棉屑肺。
可用本發(fā)明化合物治療的其它炎性氣道疾病包括成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、惡化期的慢性阻塞性肺疾病(COPD)和由于其它藥物治療如阿司匹林或b-激動劑支氣道擴張劑治療引起的氣道機能亢進的加劇。
鑒于其抗炎活性、特別是抑制嗜曙紅細胞的激活，本發(fā)明的化合物還可用于治療氣道的相關(guān)疾病，例如嗜曙紅細胞增多、超嗜曙紅細胞增多、嗜曙紅細胞性肺炎、寄生蟲感染(包括熱帶嗜曙紅細胞增多)、支氣道肺曲霉病、結(jié)節(jié)性多動脈炎、嗜曙紅細胞肉芽腫和由藥物反應引起的影響氣道的與嗜曙紅細胞有關(guān)的疾病。
本發(fā)明的化合物還可用于治療過敏性炎癥例如過敏性鼻炎。
根據(jù)以上描述，本發(fā)明包括(A)以上所述的本發(fā)明化合物(即式Ⅰ化合物或其可藥用鹽)在制備用于治療炎癥、免疫或自身免疫疾病，特別是關(guān)節(jié)炎、移植排斥或炎性氣道疾病，特別是哮喘的藥物中的用途。(B)治療炎癥、免疫或自身免疫疾病，特別是關(guān)節(jié)炎、移植排斥或炎性氣道疾病，特別是哮喘的方法，該方法包括，向需要所述治療的哺乳動物、特別是人施用以上所述的本發(fā)明化合物。
體外劑量可以在約10-6至10-10摩爾濃度之間，優(yōu)選約10-7至10-9摩爾濃度。
本發(fā)明化合物的預防或治療劑量的大小將隨著所治療病癥的性質(zhì)和嚴重程度、所涉及的哺乳動物以及具體的本發(fā)明化合物及其給藥途徑而改變。通常，每日劑量在200-0．001mg／kg哺乳動物體重的范圍內(nèi)，優(yōu)選50-0．05mg／kg，首選1．0-0．1mg／kg，可以單次或分多次給藥。在某些情況下，可能需要使用超出這些范圍的劑量。當使用用于靜脈內(nèi)給藥的組合物時，適宜的每日劑量為約50-0．0005mg(優(yōu)選20-0．01mg)本發(fā)明化合物／kg體重。當使用用于口服給藥的組合物時，適宜的每日劑量為約20-0．001mg(優(yōu)選10-0．01mg)本發(fā)明化合物／kg體重。當使用用于眼科給藥的組合物時，適宜的每日劑量為約10-0．01％(優(yōu)選5．0-0．5％本發(fā)明化合物，通常為2．0-0．1％(重量)本發(fā)明化合物在可接受的眼科制劑中的溶液或混懸液)。
本發(fā)明的化合物還可用于和其它藥物活性成分聯(lián)用。例如，一般的眼用制劑可以含有化合物本身或與β-腎上腺素能阻滯劑如噻嗎洛爾馬來酸鹽或擬副交感神經(jīng)藥如匹魯卡品的組合。當聯(lián)合使用時，兩種活性成分以大約等量存在。
可以采用任何適宜的途徑向哺乳動物、特別是人提供有效劑量的本發(fā)明化合物。例如，可以采用口服、直腸、局部、胃腸外、眼、肺、鼻等途徑。劑量形式包括片劑、錠劑、分散劑、混懸劑、溶液、膠囊、霜劑、軟膏氣霧劑等。
本發(fā)明的藥物組合物含有式Ⅰ化合物或其可藥用鹽作為活性成分，并可含有可藥用載體和任選的其它治療活性成分。本發(fā)明包括所述組合物用于治療炎癥、免疫或自身免疫疾病，特別是關(guān)節(jié)炎、移植排斥或炎性氣道疾病，特別是哮喘的用途。
組合物包括適用于口服、直腸、局部(包括經(jīng)皮裝置、氣霧劑、霜劑、軟膏、洗劑和撲粉)、胃腸外(包括皮下、肌肉內(nèi)和靜脈內(nèi))、眼睛(眼用)、肺(鼻或口腔吸入)或鼻給藥的組合物；在任何給定情況下的最佳途徑在很大程度上取決于所治療病癥的性質(zhì)和嚴重程度以及活性成分的性質(zhì)。它們可以方便地以單位劑量形式存在并且可以提供制藥領(lǐng)域熟知的各種方法制備。
例如，在治療氣道疾病時，可將本發(fā)明的化合物口服給藥，例如，以片劑的形式給藥，或通過吸入給藥，例如，以氣霧劑或其它可霧化制劑的形式或干粉制劑的形式用本領(lǐng)域熟知的適宜吸入裝置給藥。當用于治療過敏性鼻炎時，還可將本發(fā)明的化合物鼻內(nèi)給藥。
可以按照常規(guī)的制藥混合技術(shù)將作為活性成分的本發(fā)明化合物與可藥用載體混合成緊密混合物。根據(jù)用于給藥(即，口服、胃腸外等)的制劑的性質(zhì)，載體可以是各種形式的。在制備口服劑型時，對于口服液體制劑(例如混懸劑、酏劑和溶液)，可以采用任何常規(guī)的制藥介質(zhì)，例如水、甘油、油、醇、矯味劑、防腐劑、著色劑等；對于口服固體制劑如散劑、膠囊和片劑，可以采用載體如淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、造粒劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等。固體口服制劑比液體口服制劑更為優(yōu)選。片劑和膠囊由于易于給藥而是優(yōu)選的口服劑量單位形式。如需要，可將膠囊通過常規(guī)的含水或非水技術(shù)進行包衣。
除上述劑型外，還可將本發(fā)明的化合物通過控釋方式和裝置進行給藥。
適于口服給藥的本發(fā)明的藥物組合物可以制成含有預定量粉末或顆粒狀活性成分的不連續(xù)的單元如膠囊、扁囊劑或片劑，或是在含水或非水液體中的溶液或混懸液或水包油或油包水乳液。所述組合物可以通過制藥領(lǐng)域已知的各種方法制備。通常，可以通過將活性成分與液體載體、細粉碎的固體載體或兩種載體一起均勻、緊密地混合來制備組合物，如需要，可將產(chǎn)物成型成所需的形式。例如，可以通過壓片或模壓選擇性地用一種或多種輔助成分來制備片劑。壓制的片劑可以通過將自由流動形式的活性成分如粉末或顆粒在適宜的機器中壓片制得，所述活性成分可以選擇性地與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑或表面活性劑或分散劑混合。模壓的片劑可以通過將用惰性液體稀釋劑潤濕的粉末狀化合物的混合物在適宜的機器中模壓制得。眼科插入物可以由壓塑薄膜制成，所述壓塑薄膜通過在Carver Press上對活性成分和HPC的粉末狀混合物于149℃下施加12000 1b(表壓)的壓力1-4分鐘制得。通過在壓盤上用冷水循環(huán)使薄膜在壓力下冷卻。然后用棒形的沖從薄膜上切下插入物。將各插入物置于小瓶中，然后將小瓶置于潮濕的小室(30℃，88％相對濕度)中2-4天。從小室中取出后，將小瓶加蓋然后于121℃高壓滅菌0．5小時。
含有本發(fā)明化合物的組合物還可含有選自皮質(zhì)類固醇、支氣道擴張藥、平喘藥(肥大細胞穩(wěn)定劑)、抗炎劑、抗風濕藥、免疫抑制劑、抗代謝物、免疫調(diào)節(jié)劑、治牛皮癬藥和治糖尿病藥的其它試劑。具體的化合物包括，茶堿、柳氮磺胺吡啶和氨基水楊酸酯(抗炎劑)；環(huán)孢菌素、FK-506和雷怕霉素(免疫抑制劑)；環(huán)磷酰胺和甲氨蝶呤(抗代謝物)和干擾素(免疫調(diào)節(jié)劑)。
本發(fā)明包括可吸入形式的上述本發(fā)明化合物以及含有所述可吸入形式化合物的可吸入藥物，所述藥物可任選地含有可吸入形式的可藥用載體。
可吸入形式可以是，例如可霧化的組合物如含有本發(fā)明化合物在拋射劑中的溶液或分散液的氣霧劑，或含有本發(fā)明化合物在含水、有機或含水／有機溶媒中的分散液的可霧化組合物，或含有細粉碎形式的本發(fā)明化合物以及選擇性的細粉碎形式的可藥用載體的細粉碎的顆粒形式。
適于用作可吸入形式的氣霧劑組合物可以含有本發(fā)明化合物在拋射劑中的溶液或分散液，所述拋射劑可以選自本領(lǐng)域已知的各種拋射劑。適宜的拋射劑包括，烴，例如正丙烷、正丁烷或異丁烷或兩種或多種所述烴的混合物；鹵代烴，例如氟取代的甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、環(huán)丙烷或環(huán)丁烷，特別是1，1，1，2-四氟乙烷(HFA-134a)和七氟丙烷(HFA227)，或兩種或多種所述鹵代烴的混合物。當本發(fā)明的化合物以在拋射劑中的分散液的形式存在時，即，當所述化合物以顆粒的形式分散在拋射劑中時，氣霧劑組合物還可以含有潤滑劑和表面活性劑，所述潤滑劑和表面活性劑可以選自本領(lǐng)域已知的潤滑劑和表面活性劑。以拋射劑的重量計，氣霧劑組合物可含有最多約5％(重量)，例如0．002-5％、0．01-3％、0．015-2％、0．1-2％、0．5-2％或0．5-1％(重量)的本發(fā)明化合物。當含有潤滑劑和表面活性劑時，它們的含量分別最多為氣霧劑組合物重量的5％和0．5％。氣霧劑組合物還可含有含量最多為組合物重量30％的乙醇作為助溶劑，特別是用于加壓計量劑量吸入裝置的給藥形式。
適于用作可吸入形式的細粉碎的顆粒形式(即干粉)可以含有細粉碎的顆粒形式的本發(fā)明化合物，并可任選地含有細粉碎的顆粒形式的載體，所述載體可以選自已知在于粉吸入組合物中用作載體的物質(zhì)，例如糖，包括單糖、二糖和多糖如阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、核糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、淀粉或葡聚糖。特別優(yōu)選的載體是乳糖。干粉可存在于用于干粉吸入裝置的明膠或塑料膠囊或凸泡中，優(yōu)選為5μg-40mg活性成分的劑量單位?；蛘?，可將干粉以儲庫的形式包含在多劑量干粉吸入裝置中。
在細粉碎的顆粒形式和本發(fā)明化合物以顆粒形式存在的氣霧劑組合物中，本發(fā)明化合物的平均顆粒直徑最高可以是大約10μm，例如1-5μm?？梢酝ㄟ^常規(guī)方法，例如在空氣噴射磨、球磨或振動磨中研磨、微量沉淀、噴霧干燥、冷凍干燥或用超臨界溶媒重結(jié)晶將本發(fā)明化合物以及存在于干粉組合物中的固體載體的粒度降低至所需的水平。
可吸入藥物可以用適于可吸入形式的吸入裝置給藥，所述裝置是本領(lǐng)域已知的。因此，本發(fā)明還提供包含上述可吸入形式的本發(fā)明化合物以及吸入裝置的藥物產(chǎn)品。另一方面，本發(fā)明提供含有上述可吸入形式的本發(fā)明化合物的吸入裝置。
當可吸入形式是氣霧劑組合物時，吸入裝置可以是帶有能夠釋放計量劑量如10-100μl，例如25-50μl組合物的閥門的氣霧劑瓶，即稱為計量劑量吸入器的裝置。適宜的氣霧劑瓶以及在其中加入加壓氣霧劑組合物的方法是吸入治療領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。當可吸入形式是可霧化的含水、有機或含水／有機分散液時，吸入裝置可以是已知的霧化器，例如常規(guī)的氣動霧化器如空氣噴射霧化器，或超聲霧化器，其可以含有例如1-50ml，通常為1-10ml分散液；或是手動霧化器如AERx(exAradigm，US)或BINEB(Boehringer Ingelheim)霧化器，該霧化器可以比常規(guī)的霧化器霧化更小的體積，例如10-100μl。當可吸入形式是細粉碎的顆粒形式時，吸入裝置可以是例如適于從含有一個劑量單位干粉的膠囊或凸泡中釋放干粉的干粉吸入裝置，或者是每次動作可以釋放例如25mg干粉的多劑量干粉吸入裝置。適宜的干粉吸入裝置是公知的。
利用體外和體內(nèi)檢測可以確定本發(fā)明化合物的活性和VLA-4特異性。
通過確定阻斷VLA-4-表達細胞與纖連蛋白-、CS1-或VCAM-I-包被平板之結(jié)合所需的抑制劑濃度可以測定這些化合物的細胞粘附抑制活性。在該檢測中，用纖連蛋白(含CS-1序列)或CS-1或VCAM-I包被微滴定孔。如果使用CS-1，必須將其與載體蛋白例如牛血清白蛋白相連，以便與所述孔結(jié)合。將孔包被后，加入不同濃度的測試化合物與適宜標記的VLA-4-表達細胞。或者，先加入測試化合物并在加入細胞前與包被的孔保溫。使細胞在孔中保溫至少30分鐘。保溫后，將孔清空并洗滌。通過定量分析與不同濃度測試化合物的平板結(jié)合的熒光或放射性以及不含測試化合物之對照的熒光或放射性來測定結(jié)合抑制作用。在本檢測中所用的VLA-4-表達細胞包括Ramos細胞、Jurkat細胞、A375黑素瘤細胞、以及人外周血淋巴細胞(PBL)。本檢測中所用的細胞可以經(jīng)熒光標記的或放射性標記的。
還可以利用直接結(jié)合實驗定量分析本發(fā)明化合物的抑制活性。在該檢測中，將含連接有上述IgG1分子鉸鏈區(qū)之VCAM的前兩個免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域(D1D2)的VCAM-IgG融合蛋白(VCAM2D-IgG)與標記酶如堿性磷酸酶(AP)相連。在PCT公開WO90／13300中描述了該VCAM-IgG融合蛋白的合成。通過熟知的交聯(lián)方法可以將所述融合蛋白與所述標記酶相連。然后將VCAM-IgG酶結(jié)合物放在多孔過濾平板的孔中，例如在Millipore Multiscreen Assay System(Millipore Corp．，Bedford，MA)中所含的。然后將不同濃度的測試抑制化合物加到孔中，然后加入VLA-4-表達細胞。將細胞、化合物和VCAM-IgG酶結(jié)合物混合在一起，然后在室溫保溫。保溫后，將孔清空，留下細胞和結(jié)合的VCAM。通過加入與VCAM-IgG結(jié)合的酶的適宜比色底物并確定反應細胞粘附抑制活性的量來測定結(jié)合的VCAM量。
實施例的化合物具有測定的數(shù)量級低至1nm的VLA-4結(jié)合的IC50值。
為了評估本發(fā)明化合物的VLA-4抑制特異性，完成有關(guān)其他主要整合素即β2和β3以及其他β1整合素例如VLA-5、VLA-6和α4β7的檢測。這些檢測可以與上述粘附抑制和直接檢測類似，不同的是用適宜的整合素-表達細胞和相應的配體代替。例如多形核細胞(PMN)在其表面上表達β2整合素并與ICAM結(jié)合。β3整合素與血小板聚集有關(guān)，用標準血小板聚集實驗可測定抑制作用。VLA-5特異性結(jié)合Arg-Gly-Asp序列，而VLA-6結(jié)合層粘連蛋白。發(fā)現(xiàn)實施例的化合物對于VLA-4相對于相關(guān)整合素是選擇性的。
在P．L．Chisholm等，歐洲免疫學雜志(Eur．J．Immunol．)vol，23，pp．682-688(1993)中描述了檢測動物中接觸超敏性之抑制作用的體內(nèi)實驗。
在W．M．Abraham等，臨床研究雜志(J．Clin．Invest．)，vol．93，pp．776-87(1994)中描述了測定哮喘羊中蛔蟲抗原-誘導的晚期氣道反應和氣道超反應之抑制作用的試驗。
還可用下列試驗檢測本發(fā)明的化合物。小鼠中抗原誘導的肺嗜曙紅細胞增多小鼠的致敏通過腹膜內(nèi)注射0．5mL明礬沉淀的含8μg卵白蛋白(OVA)的抗原使雄性B6D2F1／J小鼠致敏，所述卵白蛋白吸附到2毫克在鹽水載體中的氫氧化鋁凝膠。5天后，用OVA／明礬給小鼠加強注射。對照動物僅用明礬致敏。每組用10只小鼠。
攻擊和給藥將小鼠放在12×14×10英寸有機玻璃室中并在試驗開始時與氣霧化OVA(在鹽水中0．5％)接觸1小時，在5小時后接觸1小時。將低分子量拮抗劑溶解于2％DMSO和150mM TRIS，pH8．8中，每個試驗均包括溶劑對照。在OVA接觸前30分鐘，將藥物經(jīng)口施用，然后在第一次OVA接觸后6小時給藥。
BAL液收集和分析第一次抗原攻擊后24小時通過CO2窒息殺死動物。暴露氣道并插套管。將肺用0．6mL緩沖液(含10mM Hepes，0．5％BSAh 10U／mL肝素的Hanks緩沖的鹽)灌洗。通過計數(shù)每個樣品的白細胞總數(shù)和嗜曙紅細胞的百分比來評估灌洗液中嗜曙紅細胞數(shù)。
通過下式計算抑制百分數(shù)1-(使用藥物的OA組的#Eos-非OA組的#Eos)X100％(OA組的#Eos-非OA組的#Eos)其中Eos=嗜曙紅細胞的平均數(shù)，OA=攻擊的小鼠，非OA=未攻擊的小鼠。
在該試驗中，將實施例的化合物以30mg／kg的劑量給藥，所產(chǎn)生的對嗜曙紅細胞增多的抑制百分比高達77％。
本發(fā)明的化合物可以用已知的方法合成。參見，例如WO96／22900(引入本文作為參考)，該文獻教導了類似化合物的合成。參照以下實施例對本發(fā)明進行進一步的描述，這些實施例是說明性的而不是限定性的。例如，其中W是CH的代表性式Ⅰ化合物可以通過將式Ⅱ化合物R1-(CH2)p-Y-OH(Ⅱ)其中R1、p和Y具有上述含義，或其活潑的官能基衍生物與式Ⅲ化合物反應進行制備 其中的羧基是保護的形式并且其中的R2-R4、Z、n和m具有上述含義，如需要，可將所得化合物轉(zhuǎn)變成本發(fā)明的另一種化合物?？s合反應按照本領(lǐng)域已知的用于形成酰胺的方法進行，例如，在縮合劑如1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和堿如二異丙基乙基胺的存在下、在惰性溶劑(例如二氯甲烷)中、優(yōu)選在室溫下進行。
式Ⅱ的原料，例如任選取代的苯基脲基苯乙酸是本領(lǐng)域已知的或者可以按照本領(lǐng)域已知的方法制備，例如，將對氨基苯乙酸酯與適宜的芳基異氰酸酯縮合得到相應的苯基脲基苯乙酸酯，然后將得到的酯水解。
式Ⅲ的原料可以通過將式Ⅳ化合物 其中的羧基是保護形式的(例如烷基酯的形式)，R3、R4和m具有上述含義，與式Ⅴ化合物L-Z-(CH2)n-COOH(Ⅴ)優(yōu)選其活潑的官能基衍生物的形式，其中Z是(CH2)n’或CHR6，且n、n’和R6具有上述含義并且L是離去基，例如鹵素或(烷基或芳基)-磺酰氧基，在堿如三乙胺的存在下反應生成式Ⅵ化合物 其中的羧酸是保護的形式(例如烷基酯的形式)，L、R1、R2和Z具有上述含義，然后將該化合物與式Ⅸ的胺在本領(lǐng)域已知的條件下反應R2-NH2(Ⅶ)其中R2具有上述含義，生成保護形式的(例如烷基酯的形式)式Ⅲ原料。用堿，例如氫氧化鋰水溶液水解得到式Ⅲ的原料。
在上述方法中，如需要，可將干擾活潑基團暫時進行保護，然后釋放所形成的本發(fā)明化合物。在可通過本文所述的方法轉(zhuǎn)變成本發(fā)明化合物的原料化合物和中間體中，所存在的官能基如羧基、氨基和羥基可以任選地通過制備有機化學中常用的常規(guī)保護基進行保護。公知的保護基及其引入方法記載于，例如，J．F．W．McOmie，“有機化學中的保護基”，Plemum Press，London，New York，T．W．Greene，“有機合成中的保護基”，Wiley，New York。例如，羥基優(yōu)選以芐基醚的形式保護，所述芐基醚可以通過催化氫化進行裂解，生成羥基取代的產(chǎn)物。
所生成的其中X是酯化的羧基(COOR5)的式Ⅰ化合物可以按照本領(lǐng)域公知的方法通過水解轉(zhuǎn)變成相應的酸。
以下實施例中使用的縮寫具有如下含義conc．=濃的DEIA=二異丙基乙基胺DMSO=二甲亞砜EDAC=1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽HOBT=羥基苯并三唑HOSu=羥基琥珀酰胺HPLC=高壓液相色譜MS=質(zhì)譜NMR=核磁共振OR=旋光度TEA=三乙胺TLC=薄層色譜TRIS=三(羥甲基)氨基甲烷實施例1(S)-β-[3-甲氧基丙基)[[4-[(2-甲基苯基氨基羰基氨基)苯基]乙酰基]氨基]乙酰基氨基-苯丙酸步驟1 向45ml二氯甲烷中加入1g(4．5mmol)(3S)-3-氨基-3-苯基丙酸1，1-二甲基乙基酯。然后加入0．720mL(5．17mmol)TEA。將混合物攪拌10分鐘，然后冷卻至0℃。于15分鐘內(nèi)向混合物中滴加0．450mL(5．17mmol)溴乙酰溴的5ml二氯甲烷溶液。將混合物攪拌3小時，然后升溫至室溫。用TLC(50％乙酸乙酯／50％己烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干并用30g硅膠(Merck，9385級，230-400目，60A)進行快速色譜，用25％乙酸乙酯／75％己烷洗脫得到1．75g粘稠的黃色油，其在TLC上顯示一個斑點。將該產(chǎn)物用于下一步驟。步驟2 向50ml DMF中加入1．5gA和1．0g(11mmol)3-甲氧基-丙胺。室溫下加入0．74mL(5．3mmol)三乙胺。將混合物室溫攪拌16小時。用TLC(10％甲醇／90％二氯甲烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干并用45g硅膠進行快速色譜，用2％甲醇／二氯甲烷開始然后逐漸增加至4％甲醇／二氯甲烷，得到1．6g黃色油，其在TLC上顯示一個斑點。將該產(chǎn)物用于下一步驟。步驟3 向50ml二氯甲烷中加入1．5gB。然后加入1．4g(4．8mmol)N-(2-甲基)-N’-(4’-乙酸)二苯基脲(僅部分溶解)和0．74mL(5．3mmol)DIEA。將混合物室溫攪拌15分鐘得到透明的黃色溶液。加入0．98g(4．8mmol)EDAC并將混合物攪拌3小時。用TLC(10％甲醇／90％二氯甲烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干并用90g硅膠進行快速色譜，用1％甲醇／二氯甲烷開始然后增加至5％甲醇／二氯甲烷，得到1．93g白色泡沫。步驟4
室溫下，向35ml二氯甲烷中加入1．7gC。然后與5ml二氯甲烷一起滴加8ml TFA。將混合物攪拌2小時。用TLC(10％甲醇／90％二氯甲烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干。多次加入新鮮的二氯甲烷以除去所有的TFA。將產(chǎn)物用50g硅膠進行快速色譜，用2％-5％甲醇／二氯甲烷洗脫得到1．5g白色粉末狀標題化合物。
mp125-127℃OR-27．4°，DMSO(10mg／mL)實施例2(S)-[3-甲氧基丙基)[[4-[(2-甲基苯基氨基羰基氨基)苯基]乙?；鵠氨基]乙?；被?4-己酸步驟1 按照實施例1，步驟1的方法，但用0．834g(4．5mmol)(3S)-3-氨基-4-己烯酸1，1-二甲基乙基酯作為原料制得01．46g粘稠的黃色油，其在TLC上顯示一個斑點。將該產(chǎn)物用于下一步驟。步驟2
向10ml DMF中加入0．31g(1mmol)A。然后加入0．18g(2mmol) 3-甲氧基丙胺。室溫下加入0．23mL(2mmol)TEA。將混合物室溫攪拌16小時。用TLC(10％甲醇／90％二氯甲烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干并用12g硅膠進行快速色譜，用2％甲醇／二氯甲烷開始然后逐漸增加至4％甲醇／二氯甲烷，得到0．1g黃色油，其在TLC上顯示一個斑點。將該產(chǎn)物用于下一步驟。步驟3 向50ml二氯甲烷中加入1．4g(4．4mmol)B。然后加入1．4g(4．8mmol)N-(2-甲基)-N’-(4’-乙酸)二苯基脲(僅部分溶解)和0．74mL(5．3mmol)DIEA并將混合物攪拌15分鐘得到透明的黃色溶液。加入0．98g(4．8mmol)EDAC并將混合物攪拌3小時。用TLC(10％甲醇的二氯甲烷溶液)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干，用90g硅膠進行快速色譜，用1％甲醇／二氯甲烷開始然后增加至5％甲醇／二氯甲烷，得到1．8g白色泡沫。步驟4 室溫下，向35ml二氯甲烷中加入1．7gC。然后與5ml二氯甲烷一起滴加8ml TFA。將混合物攪拌2小時。用TLC(10％甲醇／90％二氯甲烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干。多次加入新鮮的二氯甲烷以除去所有的TFA。將產(chǎn)物用50g硅膠進行快速色譜，用2％-5％甲醇／二氯甲烷洗脫得到1．5g白色粉末狀標題化合物。
mp88-90℃實施例3(S)-β-[3-甲氧基丙基)[[4-[(2-甲基苯基氨基羰基氨基)苯基]乙?；鵠氨基]乙酰基氨基-3，4-二甲氧基-苯丙酸步驟1 向300ml甲醇中加入30g(144．2mmol)3，4-二甲氧基肉桂酸。加入4滴硫酸并將混合物回流4小時。用TLC(70／30，乙酸乙酯／己烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干并用350g硅膠(60級，70-230目)進行快速色譜，用20％乙酸乙酯／80％己烷洗脫得到14．14g A。步驟2 向200ml THF中加入11．8g(55．8mmol)(R)-(+)-N-芐基-α-甲基芐基胺。將混合物冷卻至0℃然后在30分鐘內(nèi)滴加34．9mL(55．8mmol)正丁基鋰(1．6M的己烷溶液)。將混合物繼續(xù)攪拌30分鐘。將反應液冷卻至-78℃。然后在1小時內(nèi)滴加溶于150ml THF的6．2g(27．9mmol)3，4-二甲氧基肉桂酸甲酯。將混合物于-78℃攪拌30分鐘，然后保持在-78℃，緩慢加入25ml飽和氯化銨溶液，將混合物升溫至室溫，用鹽水洗滌，然后濃縮至干。用TLC(50／50乙酸乙酯／己烷)監(jiān)測反應。將混合物用180g硅膠(Merck，9385級，230-400目，60A)進行快速色譜得到10．5g粘稠的黃色油。步驟3 將5．0g(11．5mmol)B加入到250ml甲醇、25ml水和0．75ml乙酸中。加入1g Pearlman’s催化劑(Pd(OH)2)。使用氣囊，將混合物在氫氣氛下室溫回流16小時。用TLC(5％甲醇／二氯甲烷)監(jiān)測反應。將混合物用硅藻土過濾，用甲醇洗滌，然后濃縮至干。向干燥的產(chǎn)物中加入二氯甲烷并將其用由飽和碳酸氫鈉調(diào)至堿性的鹽水洗滌。將混合物濃縮至干并用150g硅膠(230-400目)進行快速色譜，用1-4％甲醇／二氯甲烷洗脫得到1．54g黃色油。步驟4 向9ml二氯甲烷中加入0．2g(0．8mmol)C和0．13ml(0．9mmol)TEA。將混合物攪拌10分鐘，然后將混合物冷卻至0℃。在15分鐘內(nèi)滴加0．08mL(0．9mmol)溴乙酰溴的1ml二氯甲烷溶液。將混合物攪拌3小時，然后將混合物升溫至室溫。用TLC(50％乙酸乙酯／50％己烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干并用30g硅膠進行快速色譜(Merck，9385級，230-400目，60A)，用25％乙酸乙酯／75％己烷洗脫得到0．237g粘稠的黃色油，其在TLC上顯示一個斑點。將該產(chǎn)物用于下一步驟。步驟5
向10ml DMF中加入0．36g(1mmol)D和0．18g(2mmol)3-甲氧基丙胺。于室溫下加入0．23mL TEA。將混合物室溫攪拌16小時。用TLC(10％甲醇／90％二氯甲烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干并用12g硅膠進行快速色譜，從2％甲醇／二氯甲烷開始，然后逐漸增加至4％甲醇／二氯甲烷，得到0．1g黃色油，其在TLC上顯示一個斑點。將該產(chǎn)物用于下一步驟。步驟6 向5ml二氯甲烷中加入0．1g(0．27mmol)E和0．0853g(0．30mmol)N-(2-甲基)-N’-(4’-乙酸)二苯基脲(僅部分溶解)。加入0．056mL(0．34mmol)DIEA并將混合物室溫攪拌15分鐘得到透明的黃色溶液。加入0．058g(0．30mmol)EDAC并將混合物攪拌3小時。用TLC(10％甲醇／90％二氯甲烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干，用90g硅膠進行快速色譜，用1％甲醇／二氯甲烷開始然后增加至5％甲醇／二氯甲烷，得到0．113g白色泡沫。步驟7
向21ml THF和8ml水中加入0．36g(0．57mmol)F。于5分鐘內(nèi)滴加溶于1ml水的0．36g(0．86mmol)氫氧化鋰并將混合物室溫攪拌2小時。用TLC(10％甲醇／二氯甲烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干并用20g硅膠進行快速色譜，用100％二氯甲烷至5％甲醇／二氯甲烷洗脫得到0．36g白色粉末狀標題化合物。
mp118-120℃OR-33．6°，DMSO(10mg／mL)實施例4(S)-β-[3-甲氧基丙基)[[4-[(2-甲基苯基氨基羰基氨基)苯基]乙?；鵠氨基]乙?；被?4-甲氧基-苯丙酸，鈉鹽步驟1 向250ml甲醇中加入50g(280．8mmol)4-二甲氧基肉桂酸和2ml濃硫酸。將混合物回流6小時。用TLC(70／30，乙酸乙酯／己烷)監(jiān)測反應。蒸除約30ml甲醇。將混合物冷卻至室溫，然后結(jié)晶，過濾，用水洗滌并干燥得到49．23g所需產(chǎn)物。步驟2 向300ml THF中加入10．99g(52mmol)(R)-(+)-N-芐基-α-甲基芐基胺。將混合物冷卻至0℃然后在30分鐘內(nèi)滴加32．5mL(52mmol)正丁基鋰(1．6M的己烷溶液)。將混合物繼續(xù)攪拌30分鐘。將反應液冷卻至-78℃。然后在1小時內(nèi)滴加溶于100ml THF的5g(26mmol)4-甲氧基肉桂酸甲酯。將混合物于-78℃攪拌30分鐘，然后保持在-78℃，緩慢加入25ml飽和氯化銨溶液，然后將混合物升溫至室溫，用鹽水洗滌，然后濃縮至干。用TLC(50／50乙酸乙酯／己烷)監(jiān)測反應。將混合物用180g硅膠(Merck，9385級，230-400目，60A)進行快速色譜得到9．738g粘稠的淺黃色油(用乙酸乙酯／己烷重結(jié)晶得到白色結(jié)晶)。步驟3 將7．74g(19．2mmol)B加入到250ml甲醇、25ml水和0．75ml乙酸中。加入1g Pearlman’s催化劑(Pd(OH)2)。使用氫氣囊，將混合物在氫氣氛下室溫回流16小時。用TLC(5％甲醇／二氯甲烷)監(jiān)測反應。將混合物用硅藻土過濾，用甲醇洗滌，然后濃縮至干。向干燥的產(chǎn)物中加入二氯甲烷并將其用由飽和碳酸氫鈉調(diào)至堿性的鹽水洗滌。將混合物濃縮至于并用150g硅膠(230-400目)進行快速色譜，用1-4％甲醇／二氯甲烷洗脫得到3．4g粘稠的淺黃色油(用乙酸乙酯／己烷重結(jié)晶得到白色結(jié)晶)。步驟4 向25ml二氯甲烷中加入0．8g(3．82mmol)C和0．62ml(4．4mmol)TEA。將混合物攪拌10分鐘，然后將混合物冷卻至0℃。在15分鐘內(nèi)滴加0．38mL(4．4mmol)溴乙酰溴的5ml二氯甲烷溶液。將混合物攪拌3小時，然后將混合物升溫至室溫。用TLC(50％乙酸乙酯／50％己烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干并用30g硅膠進行快速色譜(Merck，9385級，230-400目，60A)，用25％乙酸乙酯／75％己烷洗脫得到0．13g粘稠的黃色油，其在TLC上顯示一個斑點。將該產(chǎn)物用于下一步驟。步驟5 向70ml DMF中加入1．3g(3．94mmol)D和0．667g(7．49mmol)3-甲氧基丙胺。于室溫下加入0．105mL(7．49mmol)TEA。將混合物室溫攪拌16小時。用TLC(10％甲醇／90％二氯甲烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干并用75g硅膠進行快速色譜，從2％甲醇／二氯甲烷開始，然后逐漸增加至4％甲醇／二氯甲烷，得到1．29g黃色油，其在TLC上顯示一個斑點。將該產(chǎn)物用于下一步驟。步驟6 向30ml二氯甲烷中加入0．72g(2．1mmol)E和0．739g(2．6mmol)N-(2-甲基)-N’-(4’-乙酸)二苯基脲(僅部分溶解)。加入0．46mL(2．6mmol)DIEA并將混合物室溫攪拌15分鐘得到透明黃色溶液。加入0．499g(2．6mmol)EDAC并將混合物攪拌3小時。用TLC(10％甲醇／90％二氯甲烷)監(jiān)測反應。將混合物濃縮至干，用90g硅膠進行快速色譜，用1％甲醇／二氯甲烷開始然后增加至5％甲醇／二氯甲烷，得到0．920g白色泡沫。步驟7 向30ml乙醇和8ml水中加入0．90g(1．49mmol)F。向混合物中加入0．057g(1．42mmol)氫氧化鈉的1ml水溶液。將混合物室溫攪拌3．5小時。將混合物過濾然后干燥得到0．720g白色固體狀標題化合物。
mp216-118℃(分解)
OR-21．069°，在DMSO中(5．3mg／mL)實施例5按照與前述實施例類似的方法制得下式化合物
權(quán)利要求
1．式Ⅰ化合物或其可藥用鹽 其中R1是烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基稠合的環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、芳基取代的烷基(芳烷基)、芳基取代的鏈烯基或炔基、環(huán)烷基取代的烷基、環(huán)烯基取代的環(huán)烷基、聯(lián)芳基、烷氧基、鏈烯氧基、炔氧基、芳基取代的烷氧基(芳烷氧基)、芳基取代的鏈烯氧基或炔氧基、烷基氨基、鏈烯基氨基或炔基氨基、芳基取代的烷基氨基、芳基取代的鏈烯基氨基或炔基氨基、芳氧基、芳基氨基、N-烷基脲基取代的烷基、N-芳基脲基取代的烷基、烷基羰基氨基取代的烷基、氨基羰基取代的烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基取代的烷基、雜環(huán)基取代的氨基、羧基烷基取代的芳烷基、氧代碳環(huán)基稠合的芳基或雜環(huán)基烷基；R2是(CH2)q-V-(CH2)q’-Vr-R8；R3是H、烷基、鏈烯基、芳基或雜芳基；R4是H、芳基、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、環(huán)烯基、炔基和芳基取代的烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基羰基、氨基羰基、酰氨基、單或二烷基氨基羰基、單或二芳基氨基羰基、烷基芳基氨基羰基、二芳基氨基羰基、單或二酰基氨基羰基、芳族或脂族?；?、或被選自氨基、羥基、巰基、單或二烷基氨基、單或二芳基氨基、烷基芳基氨基、二芳基氨基、單或二?；被?、烷氧基、鏈烯氧基、芳氧基、硫代烷氧基、硫代鏈烯氧基、硫代炔氧基、硫代芳氧基和雜環(huán)基的取代基任選地取代的烷基；R5是烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、芳基取代的烷基、芳基取代的鏈烯基，或炔基；被選自氨基、鹵素、羥基、巰基、單或二烷基氨基、單或二芳基氨基、烷基芳基氨基、單或二?；被?、烷氧基、鏈烯氧基、芳氧基、硫代烷氧基、硫代鏈烯氧基、硫代炔氧基、硫代芳氧基和雜環(huán)基的取代基任選地取代的烷基；R6是烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳烷基、芳基取代的鏈烯基或炔基、羥基取代的烷基、烷氧基取代的烷基、芳烷氧基取代的烷基、氨基取代的烷基、(芳基取代的烷氧羰基氨基)取代的烷基、巰基取代的烷基、烷基磺?；〈耐榛?羥基取代的烷硫基)取代的烷基、硫代烷氧基取代的烷基、?；被〈耐榛?、烷基磺?；被〈耐榛?、芳基磺?；被〈耐榛?、嗎啉代-烷基、硫代嗎啉代-烷基、嗎啉代羰基取代的烷基、硫代嗎啉代羰基取代的烷基、[N-(烷基、鏈烯基或炔基)-或N，N-(二烷基、二鏈烯基或二炔基)-氨基]羰基取代的烷基、羧基取代的烷基、二烷基氨基取代的酰基氨基烷基；或選自精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、S-甲基半胱氨酸、蛋氨酸及其相應的亞砜和砜衍生物、甘氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、別-異亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、丙氨酸、鳥氨酸、組氨酸、谷氨酰胺、纈氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、天冬氨酸、β-氰基丙氨酸和別蘇氨酸的氨基酸側(cè)鏈；R7和R8彼此獨立地是H、烷基、鏈烯基、碳環(huán)芳基、雜芳基或被1-3個選自氨基、羥基、巰基、單或二烷基氨基、單或二芳基氨基、烷基芳基氨基、二芳基氨基、單或二?；被⑼檠趸㈡溝┭趸?、芳氧基、硫代烷氧基、硫代鏈烯氧基、硫代炔氧基、硫代芳氧基和雜環(huán)基的取代基取代的烷基、鏈烯基、碳環(huán)芳基或雜芳基；或者R2和R6與它們所連接的原子合在一起可以形成雜環(huán)；V是O、NH、S，SO或SO2；X是CO2R5、PO3H、SO2R5、SO3H、OPO3H、CO2H或CON(R4)2；W是CH或N；Y是CO、SO2或PO2；Z是(CH2)n’、CHR6或NR7；n和n’是0-4；m是1-4；p是1-4；q和q’是1-5；r是0或1。
2．權(quán)利要求1的化合物，其中R1是芳基。
3．權(quán)利要求2的化合物，其中R1是N-芳基脲基取代的苯基。
4．權(quán)利要求1-3中任意一項所述的化合物，其中R4是H、烷基、鏈烯基、碳環(huán)芳基或雜芳基。
5．權(quán)利要求1-4中任意一項所述的化合物，其中X是CO2H或CO2烷基。
6．根據(jù)權(quán)利要求1所述的式Ⅰa化合物或其可藥用鹽， 其中R2是C1-4烷基-氧基-C1-8烷基；R4是H、烷基、鏈烯基、碳環(huán)芳基或雜芳基；X是CO2H或CO2烷基；且其它符合如權(quán)利要求1中的式Ⅰ所定義。
7．權(quán)利要求6的化合物，其中R1是芳基；R2是甲氧基-正丙基；R3是H；R4是鏈烯基或芳基；X是CO2H；n是0并且W是CH。
8．根據(jù)權(quán)利要求1所述的式Ⅰb化合物或其可藥用鹽 其中R1是N-芳基脲基苯基；R2是C1-C4烷基-氧基-C2-C4烷基；R3是H；R4是H、C1-C4-烷基、C2-C4-鏈烯基或碳環(huán)芳基；n是1或2；m是1、2或3；X是COOH或CO2R5；且R5是任選地取代的低級烷基。
9．權(quán)利要求8的化合物，其中R1是N-(任選地取代的苯基)-脲基苯基；R2是甲氧基丙基；R3是H；R4是C2-C4-鏈烯基或任選地取代的苯基；n是1；m是1；且X是COOH。
10．權(quán)利要求1-9中任意一項所述的式Ⅰd的化合物或其可藥用鹽 其中R1、R2、R3、R4、X、Y、Z、m、n和p分別如權(quán)利要求1-9中任意一項所定義。
11．式Ⅰc化合物或其可藥用鹽 其中Ra是H、CH3、Cl或NH2；R2是(CH2)3OCH3或(CH2)4OCH3；R4是-(CH)=(CH)-CH3、苯基、4-甲氧基苯基或3，4-二甲氧基苯基；且T是NH或CH2。
12．用作藥物的前述權(quán)利要求中任意一項所述的化合物。
13．一種藥物組合物，含有權(quán)利要求1-11中任意一項所述的化合物作為活性成分并且任選地含有可藥用載體。
14．權(quán)利要求13的藥物組合物，用于VLA-4拮抗作用。
15．權(quán)利要求13的藥物組合物，用于治療炎癥、免疫或自身免疫疾病。
16．權(quán)利要求1-11中任意一項所述的化合物在制備用于治療由VLA-4介導的疾病的藥物中的用途。
17．權(quán)利要求1-11中任意一項所述的化合物在制備用于治療炎癥、免疫或自身免疫疾病的藥物中的用途。
全文摘要
式(Ⅰ)化合物及其可藥用鹽是VLA－4拮抗劑。它們可用于抑制細胞粘著,并可用于治療或預防炎癥和自身免疫疾病,特別是炎性氣道疾病。它們特別適用于減少術(shù)后炎癥,特別是由移植手術(shù)引起的炎癥。
文檔編號A61K31/167GK1294576SQ99803780
公開日2001年5月9日 申請日期1999年1月21日 優(yōu)先權(quán)日1998年1月23日
發(fā)明者S·瓦塔納辛, P·J·馮馬特 申請人:諾瓦提斯公司