專利名稱：N，n＇-二乙酰胱氨酸的有機鹽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有免疫調(diào)節(jié)活性的N，N′-二乙酰胱氨酸的有機鹽、以及以這些鹽為基礎(chǔ)的藥物組合物及其藥理應(yīng)用方法。本發(fā)明具體涉及制備含有無毒有機陽離子的鹽的方法，這些鹽是不吸濕且在化學(xué)上具有穩(wěn)定性的結(jié)晶鹽，可用于治療表現(xiàn)出免疫系統(tǒng)缺陷癥狀的疾病。
N-乙酰-L-半胱氨酸是一種公知的化合物，常用作慢性阻塞性疾病和慢性支氣管炎的治療劑。雖然早在1964年就有人申請了有關(guān)該化合物的第一個專利(GB954268)，但尚未闡明其作用機理。最近發(fā)現(xiàn)，N-乙酰-L-半胱氨酸的相應(yīng)二硫化物，即N，N′-二乙酰-L-胱氨酸，具有強效免疫刺激劑的作用(瑞典專利申請SE9002067-8)，其活性與現(xiàn)有的免疫刺激劑如二乙基二硫代氨基甲酸鈉或2，2′-聯(lián)硫基雙乙醇差不多。
已有許多專利報道了制備N，N′-二乙酰胱氨酸的合成路線(美國專利4，827，016、4，724，239和4，708，965;歐洲專利300100;德國專利2326444)。但N，N′-二乙酰胱氨酸無定形且吸濕，因而難于分離和制成藥物組合物，通常只能以水溶液形式施用。N，N′-二乙酰胱氨酸與無機或有機陽離子所成的鹽，多數(shù)都具有與游離二酸相同的不利物理性質(zhì)。專利文獻中也出現(xiàn)了其他含硫氨基酸的鹽的例子(美國專利3，647，834、日本專利56155298和法國專利8106592)。
現(xiàn)已出人意料地發(fā)現(xiàn)，有幾種N，N′-二乙酰胱氨酸與有機堿所成的鹽，具有不吸濕性與結(jié)晶性的有利組合，使這些鹽能以固體形式分離出來并制成制劑，并能以固體形式吸入施用，如果臨床上需要也可以以其他干制劑形式施用。
本發(fā)明提供具有式Ⅰa或Ⅰb的N，N′-二乙酰胱氨酸的有機鹽
其中R+有R2+分別為單質(zhì)子化和二質(zhì)子化的有機胺。該有機胺選自賴氨酸鎓、1，2-乙二銨、N，N′-二芐基-1，2-乙二銨、N-芐基-2-苯基乙銨、哌嗪鎓、1-金剛銨。
賴氨酸鎓可以是D型或L型。最優(yōu)選的是L型。
本發(fā)明包括水合鹽和溶劑化鹽，例如被低級烷類溶劑化的鹽。本發(fā)明包括N，N′-二乙酰胱氨酸鹽的單個異構(gòu)體，即D型、L型、內(nèi)消旋型及外消旋型。最優(yōu)選的是這些鹽的L型。
我們發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的新型鹽滿足易于結(jié)晶、不吸濕及化學(xué)上穩(wěn)定的要求，同時仍保留了N，N′-二乙酰胱氨酸的免疫調(diào)節(jié)活性，因而可在醫(yī)學(xué)上使用。
因此，本發(fā)明所提供的化合物所具有的性質(zhì)，有利于治療可能由于無免疫反應(yīng)、免疫反應(yīng)失常或宿主防御無效而引起的疾病。這些疾病包括慢性支氣管炎。據(jù)以前報道，免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，如Biostim(Radermecker，M.等，Int.J.Immunopharm ac.10913-917，1988;Scheffer，J.等，Arzneim.Forsch/Drug Res.41815-820，1991)、Ribomunyl和Broncho Vaxom(Paupe，J.Respiration 58150-154，1991)，以及N-乙酰半胱氨酸(參見Bergstrand，H.等，J.Free Radic.Biol.Med.2119-127，1986)，能降低慢性支氣管炎的惡化速度。
這類疾病還包括某些形式的惡性疾病。因此，世界上許多研究機構(gòu)都致力于尋找刺激各類惡性疾病患者免疫反應(yīng)的途徑，文獻中也有許多綜述闡述這一課題(Stevenson，F(xiàn).K.FASEB J.52250-2257，1991)。舉一個例子顱內(nèi)腫瘤(神經(jīng)膠質(zhì)瘤)患者的免疫性大大降低，這可能是由于這些患者的T細胞內(nèi)IL-2分泌和IL-2受體表達的缺陷(Roszman，T.等，Immunology Today12370-374，1991)。另外據(jù)記載，免疫刺激劑左咪唑在黑素瘤和結(jié)腸癌的免疫療法中有顯著的輔助作用(Van Wauwe，J.和Janssen，P.A.J.，Int.J.Immunopharmac.133-9，1991)。用IL-2在體內(nèi)進行免疫治療，或者用IL-2在體外處理患者的經(jīng)過淋巴細胞活素活化的殺傷細胞，在所選擇的患者體內(nèi)引起癌的消退(Rosenberg，S.A.，Immunology Today 958-，1988)?？赏没衔铫癞a(chǎn)生有益效果的惡性疾病包括間質(zhì)起源的腫瘤，例如象纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、成骨肉瘤或脊索瘤一類的肉瘤;象血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜肉瘤或間皮肉瘤一類的肉瘤;象粒細胞性白血病、單核細胞性白血病、淋巴細胞性白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤、網(wǎng)狀細胞肉瘤或何杰金病一類的白血病和淋巴瘤;象平滑肌肉瘤或橫紋肌肉瘤一類的肉瘤;上皮來源的腫瘤(癌)，如鱗狀上皮細胞癌、基底細胞癌、汗腺癌、皮脂腺癌、腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、囊腺癌、髓樣癌、未分化癌、支氣管癌、黑素瘤、腎細胞癌、肝細胞瘤-肝細胞癌、膽管癌、移行細胞癌、絨膜癌、精原細胞瘤或胚胎性癌;中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，如神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、神經(jīng)鞘瘤或室管膜瘤。
此外，這些化合物的性質(zhì)還有利于治療那些據(jù)以前報道可以用免疫刺激劑(如左咪唑)治療來改善臨床癥狀的慢性感染，如皰疹、口瘡性口炎和微小變化綜合癥(minimal change syndrome);以及可受益于用免疫刺激劑(如Biostim、Broncho-Vaxom和Ribomunyl)治療的尿道或耳、鼻、喉的其他慢性炎性疾病，或HIV感染或艾滋病。
另外據(jù)猜測，在諸如特應(yīng)性皮炎、鼻炎和哮喘等特應(yīng)性疾病中，存在著免疫反應(yīng)的損害、缺陷或失調(diào)(Katz，D.H.Transplantation Reviews4177-108，1977)。從理論上推測，刺激免疫反應(yīng)可能是使免疫失調(diào)和自身免疫病康復(fù)的最佳途徑(Varela，F(xiàn).J.和Coutinho，A.Immunology Today 12159-166，1991)，所以，可以預(yù)計這些化合物的性質(zhì)也有利于治療哮喘、鼻炎、特應(yīng)性皮炎和自身免疫疾病，如非肥胖性糖尿病、全身性紅斑狼瘡、硬皮病、斯耶格倫綜合癥、皮膚肌炎或多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，可能還有牛皮癬。
另外，這些化合物由于具有免疫刺激性質(zhì)，預(yù)計在各種形式的疫苗制劑中能夠具有優(yōu)異的佐劑性質(zhì)。
最后，可以預(yù)計這些化合物的性質(zhì)有利于治療動脈粥樣硬化，而不論它是否影響這種病癥中公認(rèn)的發(fā)炎過程(Hansson.G.K.等，Proc.Nat.Acad.Sci.USA8810530，1991)。
治療腫瘤生長的免疫刺激藥的重要性，以我們的相關(guān)腫瘤生長測試體系來說明。下述的大鼠腫瘤實驗?zāi)Ｐ停芮宄胤从沉伺c業(yè)已成熟的免疫刺激藥左咪唑相比，本發(fā)明化合物的腫瘤抑制效力。這些模型在臨床上很清楚地反映了一種快速生長的腫瘤(乳腺癌)和一種緩慢進行性生長的腫瘤(神經(jīng)膠質(zhì)瘤)。在這兩種體系中，上述藥物對腫瘤生長都具有優(yōu)異的抑制作用。
特別適于用本發(fā)明化合物治療的疾病有惡性腫瘤、例如黑素瘤、乳腺癌、胃腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、膀胱癌、以及頸部和頭部的鱗狀上皮細胞癌;感染，例如慢性支氣管炎、肝炎、感染后無反應(yīng)、以及獲得性免疫缺陷(如艾滋病);創(chuàng)傷后無免疫反應(yīng);有關(guān)的自身免疫疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化和牛皮癬。
治療上述疾病的有效劑量在每天0.1-100mg的范圍，優(yōu)選1.0-60mg。
制備方法式Ⅰa和Ⅰb有機鹽的一般制備方法是，將上述的N，N′-二乙酰胱氨酸和有機堿分別溶解或分散在溶劑或溶劑混合物中，再將二者混合起來?？梢允褂玫娜軇┯兴?、醇類、二元醇類、酮類、酰胺類、亞砜類、或其他極性溶劑或溶劑混合物。所生成的鹽或者直接從反應(yīng)混合物中沉淀出來，或者通過加入極性較弱的溶劑，或通過蒸發(fā)或冰凍干燥而得到。該反應(yīng)依反應(yīng)物在介質(zhì)中的溶解度而在高溫或室溫下進行。也可以先在水溶液或醇溶液中氧化適當(dāng)?shù)腘-乙酰半胱氨酸鹽，再如上所述通過沉淀制得鹽。既可以用化學(xué)方法利用(例如)過氧化氫或鹵素進行氧化，也可用電化學(xué)法進行氧化。
藥物制劑按照本發(fā)明，式Ⅰa和Ⅰb化合物可以用或不用可藥用載體配成制劑，以供吸入給藥及以其他途徑給藥，如口服或局部給藥。
這些物質(zhì)可以由加壓定量吸入器吸入，也可以由干粉吸入器如Turbuhaler吸入，也可以由使用明膠膠囊、塑料膠囊或其他膠囊的干粉吸入器吸入?？梢栽诜蹱钗镔|(zhì)中加入化學(xué)上惰性的無毒物質(zhì)，例如乳糖、海藻糖、甘露糖醇或葡萄糖。
該物質(zhì)也可以以膠囊劑或片劑的形式口服給藥，其中的膠囊、藥片或活性物質(zhì)本身，可以包衣也可以不包衣。這種包衣可以由(例如)異丙醇或其他合適溶劑中的羥丙基纖維素和高分散硅膠組成?？梢栽诜蹱钗镔|(zhì)中加入化學(xué)上惰性的無毒物質(zhì)，以達到理想的物理或藥學(xué)性質(zhì)。
這些新化合物也可以腸胃外給藥。
藥理實驗化合物N，N′-二乙酰-L-胱氨酸二-L-賴氨酸鎓鹽(Ⅰa;R＝賴氨酸)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的能力，以其在小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)的動物試驗中的效力來說明。
使用體重為18-20克的雄性和雌性Balb/c小鼠(得自丹麥的Bomholtsgaard)。4-乙氧基亞甲基-2-苯基噁唑啉-5-酮(OXA)購自BDH(英格蘭)，在本試驗中作為抗原。
在第0天給小鼠腹部備皮，用含有3%OXA的150μl無水乙醇-丙酮(3∶1)溶液涂在腹部上表皮上，使小鼠致敏。致敏后立即開始口服二硫化物鹽或媒液(0.9%NaCl)處理，并保持每天處理一次，直到第6天。致敏7天后(第6天)，所有小鼠的兩只耳朵都在兩側(cè)局部涂以20μl 1%OXA的花生油溶液進行激發(fā)。激發(fā)前、激發(fā)24小時或48小時后，用Oditest彈簧卡尺測量耳厚。激發(fā)和測量在輕微戊巴比妥麻醉下進行。
DTH反應(yīng)的強度以下式表示Tt24/48-Tt0(μm)，其中t0、t24和t48分別代表各次試驗(T)中激發(fā)前、激發(fā)24小時或48小時后的耳厚。結(jié)果以平均值±平均標(biāo)準(zhǔn)誤差來表示。用“學(xué)生”雙尾t檢驗法計算出各組平均值之間的顯著性水平。表1和表2分別顯示了由一個代表性實驗得到的24小時和48小時測量的結(jié)果。耳厚的增加比之對照組有顯著性差異，反映了化合物的免疫刺激效力。例如，處理組動物24小時后的反應(yīng)約為對照組動物的兩倍(15μm比8μm，表1)。
表1用所示劑量的N，N′-二乙酰-L-胱氨酸二-L-賴氨酸鎓鹽或媒液(NaCl)處理過的動物激發(fā)24小時后的耳厚劑量 N 差值 平均標(biāo)準(zhǔn)誤差 癥狀(微摩爾/千克) Tt24-Tt0NaCl 10 8.25 0.560.03 10 15.00 0.42 ***3.0 10 15.80 0.77 ******P<0.001.
表2用所示劑量的N，N′-二乙酰-L-胱氨酸二-L-賴氨酸鎓鹽或媒液(NaCl)處理過的動物激發(fā)48小時后的耳厚劑量 N 差值 平均標(biāo)準(zhǔn)誤差 癥狀(微摩爾/千克) Tt48-Tt0NaCl 10 8.83 0.310.03 10 12.55 0.41 ***3.0 10 13.20 0.28 ******P<0.001.
同一試驗化合物(Ⅰa，R＝賴氨酸)延長或增加患有腫瘤的大鼠存活時間的能力，用兩個不同的大鼠腫瘤接種實驗來說明。
將Wistar Furth品系大鼠分為兩組，每組10只，給每只大鼠皮下接種104個乳腺癌細胞，每周測量腫瘤大小兩次。一組大鼠飲用普通水，另一組大鼠飲用試驗化合物的水溶液達到每千克動物體重每天0.03微摩爾的劑量。38天后，飲水組中只有一只動物仍然存活，而飲化合物組有七只動物存活。
在另一個實驗中，將Lewis品系大鼠分為三組，每組10只，給每只大鼠皮下接種106個神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞，每周測量腫瘤大小兩次。一組大鼠飲用普通水，第二組大鼠飲用試驗化合物的水溶液達到每千克動物體重每天0.03微摩爾的劑量，而第三組大鼠飲用含左咪唑(一種公知的抗癌藥)的水，其劑量也是每千克動物體重每天0.03微摩爾。119天后，飲水組中已沒有大鼠存活。在飲用試驗化合物那一組中，有六只大鼠仍然存活，而飲用左咪唑那一組中，119天后有三只大鼠存活。
在兩個腫瘤實驗中，腫瘤陽性動物的出現(xiàn)頻率都比較低。在兩個實驗中，飲用化合物水溶液的實驗組中已形成的腫瘤的生長都受到抑制。
在另一個實驗中，將SCID小鼠(患有嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病的小鼠)分為兩組，每組8只，分別用2×103個乳腺癌細胞接種，每周測量其生長兩次。一組小鼠飲用普通水，第二組小鼠飲用試驗化合物的水溶液達到每千克動物體重每天0.03微摩爾的劑量。這兩組的生長速度和發(fā)病率都沒有顯著性差異。這表明，該化合物對腫瘤細胞并沒有直接的影響，而是通過免疫系統(tǒng)而起作用的。
在一個狼瘡(實驗性鼠全身性紅斑狼瘡(SLE))動物模型中，MRL lpr/lpr小鼠自發(fā)產(chǎn)生淋巴增生、皮炎、關(guān)節(jié)炎和腎小球性腎炎。在這個鼠狼瘡模型中，研究了N，N′-二乙酰-L-胱氨酸二-L-賴氨酸鎓鹽對由腎小球性腎炎引起的蛋白尿和血尿以及動物存活率的影響。N，N′-二乙酰-L-胱氨酸二-L-賴氨酸鎓鹽在飲用水中給予，并通過計算使平均劑量為0.03微摩爾/千克/天。對照小鼠則給予自來水。兩組小鼠均隨意攝取飲用水。在動物達到8周齡時開始進行處理，并持續(xù)到死亡或46周齡，屆時結(jié)束實驗。
蛋白尿和血尿的評定用Boehringer Mannheim公司的Eour-Test試劑條進行。
給予N，N′-二乙酰-L-胱氨酸二-L-賴氨酸鎓鹽后，存活率比對照小鼠顯著提高。未處理組(21只)的死亡率在25周齡左右時達到50%。而經(jīng)過N，N′-二乙酰-L-胱氨酸二-L-胱氨酸二-L-賴氨酸鎓鹽處理的MRL-lpr/lpr小鼠(12只)，直到44周齡時死亡率仍未達到50%。
這種形式的處理還使蛋白尿和血尿的評分都比未處理組顯著改善，這種評分是以試劑條的任意單位來量度的。
這些結(jié)果表明了本發(fā)明化合物的免疫調(diào)節(jié)效力，尤其是對全身性紅斑狼瘡的免疫調(diào)節(jié)效力。
實施例藥物制劑下列實施例代表準(zhǔn)備以不同方式局部施用和全身性施用的藥物制劑。
實施例1供吸入的加壓氣霧劑該氣霧劑體系設(shè)計成每個計量劑量含0.1-1.0mg。
粉碎的化合物Ⅰa或Ⅰb 1.0%(W/W)脫水山梨糖醇三油酸酯 0.7%(W/W)三氯一氟甲烷 24.4%(W/W)二氯四氟乙烷 24.4%(W/W)二氯二氟甲烷 49.5%(W/W)
實施例2供吸入純物質(zhì)的粉末氣霧劑制備供由Turbuhaler吸入的純物質(zhì)。
每個單次劑量含0.1-1.0mg。
經(jīng)過加工的化合物Ⅰa或Ⅰb 0.1-1.0mg實施例3供吸入的粉末氣霧劑每個單次劑量含0.1-1.0mg/膠囊。
粉碎的化合物Ⅰ 0.1-1.0mg乳糖 50mg實施例4供噴霧的溶液該溶液每毫升含1.0-10.0mg，每個單次劑量可施用1-3ml。
化合物Ⅰ 1.0-10.0mg注射和水 加至1.0ml實施例5片劑每片含化合物Ⅰ 0.1-100mg玉米淀粉 50mg乳糖 150mg
聚乙烯吡咯烷酮 7mg微晶纖維素 20mg硬脂酸鎂 2mg實施例6口服液一個10ml的單次劑量含10-100mg。
化合物Ⅰ 1-10mg70%山梨糖醇 150mg甘油 100mg苯甲酸鈉 1mg調(diào)味劑 適量純化水 加至1.0ml實施例7緩釋片劑1片中含有化合物Ⅰ 1-100mg特種石蠟 145mg乳糖粉末 50mg膠體二氧化硅 5mg10厘泊的乙基纖維素 13mg99.5%(體積)乙醇 85mg硬脂酸鎂 2.5mg
實施例8緩釋粒劑1克粒含有化合物Ⅰ 1-100mg乙基纖維素分散體 10mg乙酰檸檬酸三丁酯 0.5mgEudragit L 100-55 55mg檸檬酸三乙酯 5mg滑石 30mg新蒸水 350mg中性顆粒 加至1000mg實施例9注射液1ml的一個單次劑量含有1.0-10.0mg。
化合物Ⅰa或Ⅰb 1.0-10.0mg氯化鈉 8.9-7.7mg注射用水 加至1.0ml實施例10供局部涂用的霜劑1克霜劑含有化合物Ⅰ 0.1-1mg軟白石蠟 75mg液體石蠟 10mg
十六醇十八醇混合物 75mg聚乙二醇1000單鯨蠟基醚 20mg尼泊金甲酯 0.8mg尼泊金丙酯 0.2mg純化水 加至1.0g實施例11供局部涂用的軟膏1克軟膏含有化合物Ⅰ 0.1-1mg液體石蠟 150mg軟白石蠟 加至1.0g實施例12滴眼液一個2滴的劑量含有0.01-0.1mg化合物Ⅰ。
化合物Ⅰ 0.1-1mg潔爾滅 0.1mg氯化鈉 9.0mg無菌水 加至1.0ml化學(xué)實施例13N，N′-二乙酰-L′-胱氨酸二-L-賴氨酸鎓鹽(Ⅰa;R＝H2N(COOH)CH(CH2)4NH3)將N-乙酰-L-半胱氨酸(22摩爾，3.59千克)溶于2.6升去離子水中。在攪拌下加入45%氫氧化鈉水溶液(22摩爾，1.92千克)，溫度保持低于20℃。將溫度調(diào)節(jié)到5℃，然后在90分鐘時間內(nèi)小心滴加過氧化氫(11.0摩爾，0.95升)。在滴加過程中溫度保持不超過10℃。在所得溶液中加入9升經(jīng)過活化的強酸型陽離子交換劑。攪拌10分鐘后pH為2.0，濾掉離子交換劑。利用由純物質(zhì)制得的標(biāo)準(zhǔn)物，用HPLC法測得的濾液中含有9.65摩爾N，N′-二乙酰-L-胱氨酸。在這個粗制溶液中加入L-賴氨酸(19.3摩爾，3.17千克)。將形成的粘稠溶液緩慢地加到50升含有0.23千克結(jié)晶N，N′-二乙酰-L-胱氨酸二-L-賴氨酸鎓鹽的回流乙醇中。加完后，使該漿液冷卻，濾出晶體。用乙醇(8升)洗滌并干燥(真空，40℃)12小時，得到5.36千克(90%)標(biāo)題物質(zhì)，為白色結(jié)晶固體。
物理數(shù)據(jù)Mp210℃(分解);[α]25D＝-70°(c＝0.54，H2O);1H-NMR(D2O)δ1.36-1.60[4H，m，Lys γ CH2]，1.73[4H，p，LysδCH2]，1.84-1.96[4H，m，LysβCH2]，2.05[6H，s，CH3]，2.95[2H，dd，CH2S]，3.02[4H，t，Lys εCH2]，3.25[2H，dd，CH2S]，3.76[2H，t，LysαCH]，4.50[2H，dd，CHN]13C-NMR(D2Oδ24.27;24.80;29.24;32.72;41.89;42.78;52.96;57.30;176.53;177.41;179.74;元素分析計算值C22H44O10N6S2，C42.8 H7.2 N13.6實測值C42.6 H7.4 N13.7;MS m/z＝325(MH+)，m/z＝471(MLysH+)，m/z＝617(MLys2H+).
實施例14N，N′-二乙酰-L-胱氨酸-1，2-乙二銨鹽(Ⅰb;R＝H3NCH2CH2NH3)在N，N′-二乙酰-L-胱氨酸(30.9毫摩爾，10克)的20ml水溶液中，加入1，2-乙二胺(61.8毫摩爾，3.73克)和乙醇(30ml)。將該溶液濃縮成粘稠糊狀物，并重新溶解于80ml乙醇中。在10℃下攪拌2小時后出現(xiàn)結(jié)晶。過濾并干燥后得到6.2克(45%)標(biāo)題化合物。
物理數(shù)據(jù)Mp185.2-192.4℃.1H-NMR(D2O)δ;2.06[6H，s，CH3]，2.96[2H，dd，CH2S]，3.26[2H，dd，CH2S]，3.28[4H，s，H3N+CH2CH2N+H3]，4.50[2H，dd，CHN].
13C-NMR(D2O)δ24.78;39.99;42.74;56.98;176.55;179.82;元素分析計算值C37.5，H6.3，N14.6，S16.7.實測值 C37.3，H6.8，N15.3，S15.2;MS m/z＝385[M(H2NCH2CH2NH2)H+]實施例15N，N′-二乙酰-L-胱氨酸N，N′-二芐基-1，2-乙二銨鹽(Ⅰb;R＝PhCH2NH2CH2CH2NH2CH2Ph)在N，N′-二乙酰-L-胱氨酸(67毫摩爾，21.8克)的63%水溶液中，加入N，N′-二芐基-1，2-乙二胺(67毫摩爾，16.0克)。經(jīng)過放熱反應(yīng)，得到一種略呈油性的產(chǎn)物，可以用水使其重結(jié)晶而得到12.0克(32%)標(biāo)題物質(zhì)，為白色針狀結(jié)晶。
物理數(shù)據(jù)Mp 163.8-165.3℃.1H-NMR(D2O)δ2.04[6H，s，CH3]，2.93[2H，dd，CH2S]，3.22[2H，dd，CH2S]，3.44[4H，s，CH2NBn]，4.27[4H，s，PhCH2N]，4.47[2H，dd，CHN]，7.44-7.54[10H，m，Ph].13C-NMR(D2O)δ24.82，42.82，45.71，54.47，56.99，132.22，132.58，132.67，133.52，176.56，179.80.元素分析(單水合物)計算值C53.6，H6.6，N9.6，S11.0.實測值C54.5，H6.6，N9.6，S11.2.
實施例16N，N′-二乙酰-L-胱氨酸二(1-金剛銨)鹽(Ⅰa;R＝[C(1)CH(3，5，7)CH2(2，4，6，8，9，10)NH3]
在N，N-二乙酰-L-胱氨酸(5.35毫摩爾，1.73克)的5ml水溶液中，加入1-金剛胺(10.7毫摩爾，1.61克)。向該溶液中滴加60ml丙酮。濾出所得的結(jié)晶鹽并真空干燥，得到2.3克(67%)標(biāo)題化合物。
物理數(shù)據(jù)Mp162℃，1H-NMR(D2O)δ1.71[12H，寬 dd，CH2(4，6，10)]，1.87[12H，d，CH2(2，8，9)]，2.05[6H，s，CH3]，2.17[6H，寬s，CH(3，5，7)]，2.96[2H，dd，CH2S]，3.26[2H，dd，CH2S]，4.50[2H，dd，CHN]實施例17N，N′-二乙酰-L-胱氨酸二(N-芐基-2-苯基乙銨)鹽(Ⅰa;R＝PhCH2CH2NH2CH2Ph)在N，N′-二乙酰-L-胱氨酸(28.7毫摩爾，9.3克)的20ml水溶液中，加入N-芐基-2-苯基乙胺(57.4毫摩爾，12.1克)。將該溶液濃縮成粘稠糊狀物，從中緩慢結(jié)晶出鹽，分離并干燥結(jié)晶的標(biāo)題化合物。
物理數(shù)據(jù)Mp87℃.1H-NMR(D2O)δ2.05[6H，s，CH3]，2.95[2H，dd，CH2S]，3.04[4H，t，PhCH2C]，3.24[2H，dd，CH2S]，3.33[4H，t，CH2NBn]，4.25[4H，s，PhCH2N]，4.49[2H，dd，CHN]，7.30-7.52[20H，m，Ph]實施例18N，N′-二乙酰-L-胱氨酸哌嗪鎓鹽(Ⅰb;R＝NH2(1，4)CH2(2，3，5，6)]在N，N′-二乙酰-L-胱氨酸(4.60毫摩爾，1.49克)的5ml水溶液中，加入哌嗪(4.60毫摩爾，0.90克)。向該溶液中加入足夠的異丙醇形成油狀物，該油狀物緩慢固化。分離出鹽并干燥。
物理數(shù)據(jù)Mp＞170℃(分解)1H-NMR(D2O)δ2.05[6H，s，CH3]，2.96[2H，dd，CH2S]，3.26[2H，dd，CH2S]，3.42[8H，s，CH2(2，3，5，6)]，4.49[2H，dd，CHN]實施例19N，N′-二乙酰-L-胱氨酸二-L-賴氨酸鎓鹽(Ⅰa;R＝H2N(COOH)CH(CH2)4NH3)將N-乙酰-L-半胱氨酸(37毫摩爾，6.0克)和L-賴氨酸(37毫摩爾，5.4克)溶于10ml去離子水中。攪拌下滴加過氧化氫(18毫摩爾，1.5ml)，并保持溫度低于25℃。將該溶液再攪拌4小時。將該粘稠溶液緩慢加到150ml含有0.50克結(jié)晶N，N′-二乙酰-L-胱氨酸二-L-賴氨酸鎓鹽的回流乙醇中。加完后使溶液冷卻，濾出結(jié)晶。用乙醇(20ml)洗滌并干燥(真空，45℃)24小時，得到10.0克(84%)標(biāo)題物質(zhì)，為白色結(jié)晶固體。
物理數(shù)據(jù)Mp208℃;[α]25D＝-73°(c＝0.54，H2O)
權(quán)利要求
1.一種由有機堿與N，N′-二乙酰胱氨酸的單個異構(gòu)體(即D型、L型、內(nèi)消旋型和外消旋型)形成的鹽，其特征在于該鹽具有如下通式
其中R+和R2+為以下有機堿的陽離子賴氨酸、1，2-乙二胺、N，N′-二芐基-1，2-乙二胺、金剛胺、N-芐基-2-苯基乙胺或哌嗪。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的N，N′-二乙酰-L-胱氨酸的鹽。
3.一種制備如權(quán)利要求1或2所述化合物的鹽的方法，該方法包括用有機堿或含有有機堿陽離子的鹽處理N，N′-二乙酰胱氨酸，其中各反應(yīng)物溶解或分散在溶劑或溶劑混合物中;分離該鹽，其中該鹽可以是水合形式或溶劑化形式。
4.一種制備如權(quán)利要求1或2所述鹽的方法，該方法包括，氧化N-乙酰半胱氨酸和有機堿的鹽，并分離出N，N′-二乙酰胱氨酸的鹽，其中該鹽可以是水合形式或溶劑化形式。
5.一種藥物組合物，該組合物包含根據(jù)權(quán)利要求1或2的N，N′-二乙酰胱氨酸鹽作為活性成分。
6.一種如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，該組合物用于由加壓定量吸入器施用、由干粉吸入器施用、或者由使用明膠膠囊、塑料膠囊或其他膠囊的干粉吸入器施用。
7.如權(quán)利要求5或6所述的藥物組合物，該組合物中加有可藥用的載體。
8.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其形式為膠囊劑或片劑。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，該組合物含有可藥用的載體。
10.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，該組合物用于以溶液形式噴霧施用。
11.根據(jù)權(quán)利要求1或2的鹽，該鹽作為具有治療活性的物質(zhì)使用。
12.根據(jù)權(quán)利要求1或2的鹽，該鹽用于治療惡性疾病。
13.根據(jù)權(quán)利要求1或2的鹽在制備且有免疫調(diào)節(jié)活性的藥物中的應(yīng)用。
14.根據(jù)權(quán)利要求1或2的鹽在制備用于治療惡性疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
具有免疫調(diào)節(jié)作用的N，N＇-二乙酰胱氨酸的新結(jié)晶有機鹽、其制備方法、含有該鹽的藥物組合物及其藥理應(yīng)用方法。
文檔編號A61K31/195GK1094715SQ9310496
公開日1994年11月9日 申請日期1993年5月4日 優(yōu)先權(quán)日1993年5月4日
發(fā)明者C·-M·安德遜, E·雅庫波維克, M·林瓦爾, E·藤尼堡, H·貝格斯特蘭, B·-G·約瑟夫森, B·薩恩斯特蘭 申請人:阿斯特拉公司