本發(fā)明涉及納米藥物的，尤其涉及一種基于pb（即苯硼酸聚合物）和asd（即木通皂苷d）偶聯(lián)物納米粒子的制備方法，以及這種基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的制備方法在代謝性疾病中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、木通皂苷d（asd）是一類是從中藥續(xù)斷根中提取的三萜皂苷。asd可發(fā)揮抗代謝綜合征、預(yù)防動脈粥樣硬化、減輕非酒精性脂肪肝、預(yù)防糖尿病腎病、抗骨質(zhì)疏松等藥效。然而，研究發(fā)現(xiàn)，asd的生物利用度低（0.025%），半衰期短（2.54小時），快速的機體清除嚴重制約了其體內(nèi)治療效果。因此，通過提高木通皂苷d的生物利用度，延長半衰期，有望提高其體內(nèi)療效。

2、納米藥物遞送系統(tǒng)在提高藥物生物利用度和遞送效率等方面顯示出巨大優(yōu)勢。納米載體不僅可以保護藥物減輕體內(nèi)防御機制的影響，而且具有良好的穩(wěn)定性和載藥能力。目前，納米遞送系統(tǒng)常見的藥物裝載策略包括：第一，通過在水油體系中的親疏水相互作用，利用高分子聚合物、脂質(zhì)體等載體將藥物封裝在納米粒子核心；第二，通過藥物和聚合物共價結(jié)合形成聚合物-藥物偶聯(lián)物，進而自組裝形成納米粒子，以提升藥物擔載效率和納米粒子穩(wěn)定性；第三，通過藥物和藥物的共價和非共價結(jié)合，形成無載體納米藥物。目前，阻礙納米藥物臨床轉(zhuǎn)化的主要障礙是載藥率低、缺乏藥物控制性釋放以及生物安全性等。因此，設(shè)計具有高載藥率和可控藥物釋放能力的納米粒子載體系統(tǒng)將是規(guī)避困擾納米療法的諸多問題的重要平臺。

3、口服給藥具有給藥方便、患者依從性好、安全性高等優(yōu)勢，是臨床上最常用的給藥方式。然而，口服給藥必須要經(jīng)歷嚴苛的胃腸道（git）屏障。一方面，git環(huán)境呈現(xiàn)酸性，并富含大量的酶，這導(dǎo)致藥物口服進入git后易被降解失效。另一方面，腸上皮組織表面覆蓋粘液層，腸上皮細胞之間呈緊密連接狀態(tài)，這種粘液屏障和細胞屏障嚴重地阻礙了納米藥物在腸道部位的滲透和吸收。為了克服git屏障，研究者已開發(fā)了一系列口服納米藥物。聚乙二醇（peg）涂層和兩性離子納米載體通過減少納米藥物與粘液蛋白的相互作用等機制，在克服粘液屏障中具有顯著優(yōu)勢。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供了一種基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的制備方法，其通過制備高穩(wěn)定性和高載藥率的納米粒子，利用peg涂層修飾以高效穿越胃腸屏障，提高asd的口服生物利用度和遞送效率，降低毒副作用，提高asd對于代謝性疾病的治療效果。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案是：這種基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的制備方法，其包括以下步驟：

3、（1）合成苯硼酸衍生物單體b；

4、（2）通過可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移聚合raft合成苯硼酸聚合物pb，其主鏈含有苯硼酸基團；

5、（3）通過苯硼酸和asd上的糖環(huán)形成苯硼酯鍵連接pb和asd，形成pb和asd偶聯(lián)物pb-asd，由于其兩親性，pb-asd自組裝形成納米粒子pb@asd?nps，asd是木通皂苷d；

6、（4）在pb@asd?nps中滴加peg水溶液，通過靜電相互作用修飾peg涂層，得到最終的納米粒子cpb@asd?nps。

7、本發(fā)明的cpb@asd?nps具有窄而大小可調(diào)的粒度分布，高的asd擔載效率和穩(wěn)定性，可高效跨越胃腸屏障，增加腸道吸收，保護asd在循環(huán)、運輸至目標器官或組織過程中的活性，降低毒副作用，提高藥物遞送效率。在小鼠代謝相關(guān)脂肪性肝病模型中，與同劑量小分子asd相比，cpb@asd?nps對代謝相關(guān)脂肪性肝病、肥胖表現(xiàn)出顯著增強的治療效果，并能顯著改善血脂異常、糖耐量異常和胰島素抵抗。

8、還提供了基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的應(yīng)用，其應(yīng)用在制備治療代謝相關(guān)脂肪性肝病和肥胖的藥物中。

9、還提供了基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的應(yīng)用，其應(yīng)用在制備改善血脂異常、糖耐量異?；蛞葝u素抵抗的藥物中。

技術(shù)特征：

1.基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的制備方法，其特征在于：其包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中，稱取1.50?g?的3-氨基苯硼酸，加入到15?ml去離子水中，充分攪拌促進溶解；向其中緩慢滴加4?mol/l氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)ph值至10.5，攪拌直至充分溶解，將體系置于冰浴中；稱取1.19?g的丙烯酰氯，將其緩慢滴加到3-氨基苯硼酸中，邊滴加邊攪拌，同時滴加氫氧化鈉溶液將ph值維持為10.5；冰浴反應(yīng)30分鐘后繼續(xù)在室溫條件下反應(yīng)4小時；使用2mol/l鹽酸調(diào)節(jié)上述反應(yīng)溶液的ph值至3，利用乙酸乙酯萃取3次，收集有機相；加入無水硫酸鈉除去水分，經(jīng)抽濾、旋蒸、真空干燥后得到硼酸單體b。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）中，采用raft合成苯硼酸聚合物包括：稱取3.8?mg的ddmat、0.4?mg的aibn和100?mg的3-丙烯酰胺基苯基硼酸加入到燒瓶中，加入二甲基亞砜，攪拌溶解；向燒瓶中通入氮氣除去體系內(nèi)的氧氣，將燒瓶置于65?oc油浴中反應(yīng)24?小時；收集燒瓶中的溶液，置于分子量為3500的透析袋中透析48小時，收集透析袋內(nèi)的溶液，干燥得到苯硼酸聚合物pb。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的制備方法，其特征在于：所述步驟（3）中，稱取5?mg?pb和15?mg?asd于樣品瓶中，加入1?ml二甲基亞砜溶解，在室溫條件下攪拌反應(yīng)4小時后，得到pb和asd偶聯(lián)物pb-asd。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的制備方法，其特征在于：所述步驟（4）中，在pb-asd中緩慢滴加10?ml去離子水，邊滴加邊攪拌，滴加結(jié)束后，繼續(xù)在室溫攪拌30分鐘，得到pb-asd偶聯(lián)物納米粒子pb@asd?nps；取4?ml?pb@asd?nps，向其中緩慢滴加mw:2000、1?mg/ml的nh2-peg-nh2的水溶液4?ml，邊滴加邊攪拌，滴加結(jié)束后，繼續(xù)在室溫攪拌30分鐘；將得到乳液置于透析袋中，在去離子水中透析48小時，收集透析袋內(nèi)的乳液，得到最終的納米粒子cpb@asd?nps。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的制備方法，其特征在于：所述苯硼酸衍生物單體b為3-丙烯酰胺基苯基硼酸、2-氨基苯硼酸、對氨基苯硼酸、或4-硼-l-苯丙氨酸。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的制備方法，其特征在于：苯硼酸衍生物單體b和ddmat的投料摩爾比為30~200:1，pb和asd的質(zhì)量比為1:0.2~50，peg為nh2-peg-nh2或peg-nh2，分子量為1000~100000。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的制備方法，其特征在于：苯硼酸衍生物單體b和ddmat的投料摩爾比為50:1。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的應(yīng)用，其特征在于：其應(yīng)用在制備治療代謝相關(guān)脂肪性肝病和肥胖的藥物中。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于pb和asd偶聯(lián)物納米粒子的應(yīng)用，其特征在于：其應(yīng)用在制備改善血脂異常、糖耐量異常或胰島素抵抗的藥物中。

技術(shù)總結(jié)
基于pB和ASD偶聯(lián)物納米粒子的制備方法及應(yīng)用，通過制備高穩(wěn)定性和高載藥率的納米粒子，利用PEG涂層修飾以高效穿越胃腸屏障，提高ASD的口服生物利用度和遞送效率，降低毒副作用，提高ASD對于代謝性疾病的治療效果。方法包括：（1）合成苯硼酸衍生物單體B；（2）通過RAFT合成苯硼酸聚合物pB，其主鏈含有苯硼酸基團；（3）通過苯硼酸和ASD上的糖環(huán)形成苯硼酯鍵連接pB和ASD，形成pB和ASD偶聯(lián)物pB?ASD，由于其兩親性，pB?ASD自組裝形成納米粒子PB@ASD?NPs；（4）在PB@ASD?NPs中滴加PEG水溶液，通過靜電相互作用修飾PEG涂層，得到最終的納米粒子CPB@ASD?NPs。

技術(shù)研發(fā)人員：劉麗宏,康曉旭,宮麗麗
受保護的技術(shù)使用者：中日友好醫(yī)院（中日友好臨床醫(yī)學(xué)研究所）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9