本發(fā)明屬于分子生物技術(shù)與基因工程，具體涉及抑制dusp23表達的試劑在制備抗肝癌藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、截止2020年，全球有近1千萬人被診斷為肝癌，其發(fā)病率位居惡性腫瘤第六位，且肝癌患者的預(yù)后極差，是全球惡性腫瘤相關(guān)死亡的第三大原因。由于肝臟所處的位置比較隱蔽，且一般情況下肝癌早期癥狀僅表現(xiàn)為食欲不振、乏力、惡心等常見消化系統(tǒng)障礙，所以往往容易被人們忽視。目前，早期肝癌篩查主要依賴于血清甲胎蛋白和腹部超聲檢查，但目前學(xué)術(shù)界對afp檢測的敏感性、特異性和預(yù)測價值仍存在爭議，而且正常情況下無癥狀患者并不會主動就醫(yī)進行超聲檢查，加之肝癌的惡性程度高，具有易轉(zhuǎn)移、易復(fù)發(fā)等特點，導(dǎo)致大部分患者一經(jīng)發(fā)現(xiàn)就已經(jīng)處于肝癌中、晚期，基本都需要藥物治療。但是目前上市的抗肝癌藥物治療效果欠佳，而且大部分系統(tǒng)治療藥物使用后會產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致肝癌患者的預(yù)后極差，致使肝癌患者的藥物治療成為目前臨床的一大難題。因此，研究肝癌中異常高表達的基因和蛋白對肝癌患者診斷和預(yù)后評價的作用以及對開發(fā)新型抗肝癌藥物并改善肝癌患者的預(yù)后都有重要理論意義和應(yīng)用價值。

2、dusp23是目前為止發(fā)現(xiàn)的最小的ptps，屬于dusps家族中的非典型dusps亞家族，于2004年由3個不同的研究團隊克隆并表達鑒定，又名vhz或ldp-3。dusp23基因位于人1號染色體1q23，編碼150個氨基酸，在進化中高度保守。作為一種磷酸酶，dusp23在多種生理過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。例如，有研究發(fā)現(xiàn)dusp23在胎盤發(fā)育的過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。有研究表明，dusp23可能通過調(diào)節(jié)polo樣激酶4活性控制中心粒復(fù)制和紡錘體形成從而調(diào)控細胞有絲分裂。目前，有研究結(jié)果表明dusp23在包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤組織中表達水平均上調(diào)，過表達dusp23蛋白能夠促進乳腺癌細胞增殖和遷移，而敲低dusp23可通過影響乳腺癌細胞的細胞周期進程導(dǎo)致dna合成減少從而抑制細胞增殖。但是，目前dusp23在肝癌中的研究及其用于肝癌治療的靶點尚未見報道。

3、rna干擾是由小干擾rna引發(fā)其同源信使rna降解的一種轉(zhuǎn)錄后基因沉默形式。rnai技術(shù)由于具有特異性和強制性的基因沉默特點，近年來被認為可以通過操縱疾病相關(guān)基因表達從而成為一種有前途的針對于各種感染性疾病、腫瘤、心血管和神經(jīng)退行性疾病的新型治療策略。目前，已有多款sirna類藥物上市或在臨床研究中，成為繼化學(xué)藥物、生物蛋白藥物之后的第三大新藥類型。與傳統(tǒng)療法相比，如小分子和蛋白質(zhì)藥物，利用sirna療法具有許多優(yōu)勢。首先，與小分子、蛋白類藥物包括單克隆抗體等常規(guī)療法相比，sirna療法僅具有拮抗作用，而常規(guī)療法可同時產(chǎn)生激動劑和拮抗作用；其次，sirna治療的靶點可以存在于任何位置，甚至可以是不可成藥的靶點；第三，sirna的選擇性非常高，這是小分子類藥物無法達到的；最后，易于合成是sirna的另一個特點。因此，針對特定基因所設(shè)計的敲減效果顯著的sirna，在臨床基因治療藥物的開發(fā)中具有重大的利用價值。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，得到能有效治療肝癌的rnai藥物，發(fā)明人以dusp23基因為靶點，通過研究dusp23在肝癌組織中的表達水平、設(shè)計dusp23基因的sirna序列并構(gòu)建相應(yīng)的sirna，特異性抑制人肝癌細胞中dusp23基因和蛋白的表達，從而抑制人肝癌細胞增殖、遷移、細胞周期進程等過程，提示該sirna分子可以用于治療肝癌。這一發(fā)現(xiàn)開拓了肝癌新的治療基因靶點，為新的靶向治療提供方向，從而形成了本發(fā)明的基礎(chǔ)。

2、因此，本發(fā)明的第一個目的在于提供一種基于rnai技術(shù)的針對dusp23靶向的sirna。本發(fā)明的另一個目的提供上述dusp23靶向的sirna在制備用于治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。

3、為了達到以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

4、抑制dusp23表達的試劑在制備抗肝癌藥物中的應(yīng)用，所述抑制dusp23表達的試劑為核苷酸序列如seq?id?no.3-seq?id?no.4所示的sirna或核苷酸序列如seq?id?no.5-seqid?no.6所示的sirna。

5、優(yōu)選的，所述藥物為由核苷酸序列如seq?id?no.3-seq?id?no.4所示的sirna所配制的溶液；

6、所述藥物為由核苷酸序列如seq?id?no.5-seq?id?no.6所示的sirna所配制溶液。

7、優(yōu)選的，所述溶劑為depc水或無菌注射水。

8、優(yōu)選的，所述的抗肝癌藥物是抑制肝癌細胞增殖能力和降低肝癌細胞克隆形成能力的藥物。

9、優(yōu)選的，所述的抗肝癌藥物是抑制肝癌細胞遷移能力的藥物。

10、優(yōu)選的，所述的抗肝癌藥物是誘導(dǎo)肝癌細胞細胞周期進程阻滯和凋亡的藥物。

11、優(yōu)選的，所述的抗肝癌藥物是影響肝癌細胞細胞周期進程和凋亡相關(guān)蛋白表達的藥物。

12、優(yōu)選的，所述的抗肝癌藥物是對肝癌細胞的裸鼠移植瘤具有顯著的抑瘤活性的藥物。

13、一種dusp23靶向的sirna，所述sirna為所述核苷酸序列如seq?id?no.5-seq?idno.6所示的sirna。

14、一種抗肝癌藥物，含有所述的dusp23靶向的sirna。

15、優(yōu)選的，所述抗肝癌藥物還含有depc水。

16、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

17、本發(fā)明采用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)和定量蛋白組學(xué)技術(shù)檢測肝癌中dusp23基因和蛋白表達情況，發(fā)現(xiàn)dusp23基因和蛋白在肝癌組織中的表達均顯著高于癌旁組織，為肝癌的治療提供了dusp23基因這樣一個非常有效的作用靶點，可用于相應(yīng)rnai、單克隆抗體及小分子拮抗劑等靶向治療藥物的開發(fā)。

18、本發(fā)明設(shè)計了靶向抑制人dusp23基因的sirna，且該sirna能夠高效抑制人肝癌細胞中dusp23基因和蛋白的表達，并因此有效抑制肝癌細胞增殖和遷移能力，誘導(dǎo)肝癌細胞細胞周期g0/g1期阻滯和細胞凋亡，并對肝癌細胞的裸鼠移植瘤具有顯著的抑瘤活性。本發(fā)明為肝癌治療提供了一個新的基因靶點和藥物，為針對dusp23開發(fā)治療肝癌的靶向治療藥物提供了一種行之有效的方法，對于制備治療肝癌的藥物意義重大。

技術(shù)特征：

1.抑制dusp23表達的試劑在制備抗肝癌藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述抑制dusp23表達的試劑為核苷酸序列如seq?id?no.3-seq?id?no.4所示的sirna或核苷酸序列如seqid?no.5-seq?id?no.6所示的sirna。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物為由核苷酸序列如seq?id?no.3-seq?id?no.4所示的sirna所配制的溶液；

3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，配制溶液使用的溶劑為depc水或無菌注射水。

4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗肝癌藥物是抑制肝癌細胞增殖能力和降低肝癌細胞克隆形成能力的藥物。

5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗肝癌藥物是抑制肝癌細胞遷移能力的藥物。

6.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗肝癌藥物是誘導(dǎo)肝癌細胞細胞周期進程阻滯和凋亡的藥物。

7.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗肝癌藥物是對肝癌細胞的裸鼠移植瘤有抑瘤活性的藥物。

8.一種dusp23靶向的sirna，其特征在于，所述sirna為權(quán)利要求1中所述核苷酸序列如seq?id?no.5-seq?id?no.6所示的sirna。

9.一種抗肝癌藥物，其特征在于，所述抗肝癌藥物含有權(quán)利要求9所述的dusp23靶向的sirna。

10.如權(quán)利要求9所述的抗肝癌藥物，其特征在于，所述抗肝癌藥物還含有depc水。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了DUSP23靶向的siRNA及其應(yīng)用，屬于分子生物技術(shù)與基因工程技術(shù)領(lǐng)域。通過研究DUSP23在肝癌組織中的表達水平，為肝癌的治療提供了DUSP23基因這一作用靶點；提供了抑制人DUSP23基因和蛋白表達的siRNA及其應(yīng)用，該siRNA的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5?SEQ?ID?NO.6所示。通過在肝癌細胞系中轉(zhuǎn)染該siRNA，能調(diào)控和干擾DUSP23基因和蛋白表達，抑制細胞增殖和遷移能力，誘導(dǎo)細胞周期G0/G1期阻滯和細胞凋亡，并對肝癌細胞的裸鼠移植瘤具有顯著的抑瘤活性。

技術(shù)研發(fā)人員：蘇暢,招明高,楊樂
受保護的技術(shù)使用者：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9