本發(fā)明涉及一種用于黑色素瘤術(shù)后防復(fù)發(fā)和促進(jìn)組織修復(fù)的生物活性玻璃的制備方法，屬于生物材料制備。

背景技術(shù)：

1、黑色素瘤是皮膚癌中惡性程度最高的腫瘤，其侵襲性高、死亡率高。當(dāng)被診斷為厚腫瘤（晚期）時(shí)，死亡的可能性將高達(dá)60%。相比較于西方國家，我國患者初診時(shí)以中晚期（ⅱ、ⅲ、ⅳ期）居多，腫瘤厚度較厚。晚期/復(fù)發(fā)的患者常面臨被截肢的風(fēng)險(xiǎn)，且生存期較短，預(yù)后差。目前的臨床策略以手術(shù)切除和化學(xué)療法為主，但是手術(shù)切除無法保證腫瘤組織是否被清理干凈，復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)較大；化學(xué)療法會對健康的細(xì)胞產(chǎn)生不可逆的傷害，患者往往難以承受這巨大的副作用；手術(shù)切除后組織愈合緩慢，最終可能導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)。

2、理想的黑色素瘤治療方法，需要既能夠消除殘留腫瘤細(xì)胞，還可以促進(jìn)組織修復(fù)，具有抗癌和組織修復(fù)于一體的智能化管理的生物材料無疑是治療黑色素瘤的理想材料。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供用于黑色素瘤術(shù)后防復(fù)發(fā)和促進(jìn)組織修復(fù)的生物活性玻璃的制備方法，可有效實(shí)現(xiàn)黑色素瘤的術(shù)后防復(fù)發(fā)和促進(jìn)組織修復(fù)。

2、本發(fā)明實(shí)現(xiàn)過程如下：

3、一種用于黑色素瘤術(shù)后防復(fù)發(fā)和促進(jìn)組織修復(fù)的生物活性玻璃的制備方法，包括以下步驟：

4、（1）制備鈰、釹雙摻雜的介孔生物活性玻璃納米微球，具體包括：將四水合硝酸鈣、六水合硝酸鈰和六水合硝酸釹加入含十六烷基三甲基溴化銨、無水乙醇和氨水的去離子水中，然后加入磷酸三乙酯和正硅酸四乙酯，充分?jǐn)嚢璺磻?yīng)后收集沉淀、煅燒，即得鈰、釹雙摻雜的介孔生物活性玻璃納米微球；

5、（2）制備表面氨化的介孔生物活性玻璃納米微球，具體包括：將步驟（1）合成的鈰、釹雙摻雜的介孔生物活性玻璃納米微球與3-氨丙基三乙氧基硅烷分散在無水乙醇中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，收集沉淀得到表面氨化的介孔生物活性玻璃納米微球；

6、（3）制備甲氨蝶呤接枝改性的介孔生物活性玻璃納米微球，具體包括：將甲氨蝶呤、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和n-羥基琥珀酰亞胺溶解在去離子水中，加入步驟（2）合成的表面氨化的介孔生物活性玻璃納米微球，室溫充分?jǐn)嚢韬?，透析、凍干收集產(chǎn)物得到甲氨蝶呤接枝改性的介孔生物活性玻璃納米微球。

7、上述步驟（1）中，所述四水合硝酸鈣、六水合硝酸鈰和六水合硝酸釹的物質(zhì)的量之比為（2~3）：（10~50）:（10~50）；四水合硝酸鈣的質(zhì)量為十六烷基三甲基溴化銨質(zhì)量的2~6倍；磷酸三乙酯的體積為四水合硝酸鈣質(zhì)量的0.1~0.2倍；正硅酸四乙酯的體積為磷酸三乙酯體積的6~9倍；正硅酸四乙酯與去離子水、氨水、乙醇的體積比為1:（3~20）:（2~5）:（1~7），磷酸三乙酯的體積單位為ml，四水合硝酸鈣質(zhì)量單位為g，氨水的濃度為20~25%；所述煅燒溫度為500~800℃，煅燒時(shí)間為1~5?h。

8、上述步驟（2）中，所述鈰、釹雙摻雜的介孔生物活性玻璃納米微球與3-氨丙基三乙氧基硅烷的用量比為1：（1~5）g/?ml；所述無水乙醇的體積為雙摻雜的介孔生物活性玻璃納米微球粉末質(zhì)量的100~150倍，所述雙摻雜的介孔生物活性玻璃納米微球粉末的質(zhì)量單位為g，所述3-氨丙基三乙氧基硅烷的體積單位為ml。

9、上述步驟（3）中，所述去離子水的體積為氨化介孔生物活性玻璃納米微球粉末質(zhì)量的150~220倍；所述甲氨蝶呤與氨化介孔生物活性玻璃納米微球粉末的質(zhì)量比為1：（1.5~2.2）；甲氨蝶呤、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和n-羥基琥珀酰亞胺的物質(zhì)的量之比為1：（1~1.7）：（1~2）；所述氨化介孔生物活性玻璃納米微球粉末的質(zhì)量單位為g，所述去離子水的體積單位為ml。

10、上述方法制備得到的鈰、釹雙摻雜生物活性玻璃在制備治療黑色素瘤術(shù)后組織缺損修復(fù)和抑制癌癥復(fù)發(fā)中的應(yīng)用。

11、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：

12、（1）本發(fā)明制得的鈰、釹雙摻雜生物活性玻璃納米微球中，鈰具有高的生物相容性，促細(xì)胞增殖能力；釹具有光熱效應(yīng)，因而它們能實(shí)現(xiàn)殺滅癌細(xì)胞的同時(shí)促進(jìn)組織修復(fù)；

13、（2）本發(fā)明的生物活性玻璃在氨化后通過酰胺鍵接枝甲氨蝶呤，酰胺鍵作為酸性ph斷裂的化學(xué)鍵，在浸潤到腫瘤酸性微環(huán)境時(shí)發(fā)生斷裂，從而將化療藥甲氨蝶呤響應(yīng)性釋放；

14、（3）本發(fā)明制備的甲氨蝶呤接枝改性的介孔生物活性玻璃納米微球，其表面的甲氨蝶呤可作為葉酸受體的靶向配體，可有效實(shí)現(xiàn)納米微球的黑色素瘤靶向治療，降低治療副作用；

15、（4）采用本發(fā)明的制備方法得到的介孔生物活性玻璃納米微球性能穩(wěn)定，生物學(xué)性能顯著，滿足黑色素瘤術(shù)后治療需求；

16、（5）本發(fā)明制備方法簡單，原料廉價(jià)易得，工藝環(huán)境友好，容易放大，具有良好的市場應(yīng)用價(jià)值。

17、說明書附圖

18、圖1為實(shí)施例1的甲氨蝶呤接枝改性的介孔生物活性玻璃納米微球sem圖；

19、圖2為實(shí)施例1的甲氨蝶呤接枝改性的介孔生物活性玻璃納米微球tem圖；

20、圖3為實(shí)施例1的甲氨蝶呤接枝改性的介孔生物活性玻璃納米微球xrd圖；

21、圖4為實(shí)施例1的甲氨蝶呤接枝改性的介孔生物活性玻璃納米微球粒徑分析圖；

22、圖5為實(shí)施例1的甲氨蝶呤的藥物釋放曲線；

23、圖6為實(shí)施例1的甲氨蝶呤接枝改性的介孔生物活性玻璃納米微球?qū)16f10的細(xì)胞毒性示意圖。

技術(shù)特征：

1.一種用于黑色素瘤術(shù)后防復(fù)發(fā)和促進(jìn)組織修復(fù)的生物活性玻璃的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述生物活性玻璃的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，所述四水合硝酸鈣、六水合硝酸鈰和六水合硝酸釹的物質(zhì)的量之比為（2~3）：（10~50）:（10~50）。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述生物活性玻璃的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，所述四水合硝酸鈣的質(zhì)量為十六烷基三甲基溴化銨質(zhì)量的2~6倍，磷酸三乙酯的體積為四水合硝酸鈣質(zhì)量的0.1~0.2倍，正硅酸四乙酯的體積為磷酸三乙酯體積的6~9倍。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述生物活性玻璃的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，正硅酸四乙酯與去離子水、氨水、乙醇的體積比為1:（3~20）:（2~5）:（1~7），氨水的濃度為20~25%。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述生物活性玻璃的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，所述煅燒溫度為500~800℃，煅燒時(shí)間為1~5?h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述生物活性玻璃的制備方法，其特征在于：步驟（2）中，所述鈰、釹雙摻雜的介孔生物活性玻璃納米微球與3-氨丙基三乙氧基硅烷的用量比為1：（1~5）g/?ml；所述無水乙醇的體積為雙摻雜的介孔生物活性玻璃納米微球粉末質(zhì)量的100~150倍。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述生物活性玻璃的制備方法，其特征在于：步驟（3）中，所述去離子水的體積為氨化介孔生物活性玻璃納米微球粉末質(zhì)量的150~220倍。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述生物活性玻璃的制備方法，其特征在于：步驟（3）中，所述甲氨蝶呤與氨化介孔生物活性玻璃納米微球粉末的質(zhì)量比為1：（1.5~2.2）；甲氨蝶呤、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和n-羥基琥珀酰亞胺的物質(zhì)的量之比為1：（1~1.7）：（1~2）。

9.權(quán)利要求1~8任意之一所述方法制備得到的鈰、釹雙摻雜生物活性玻璃。

10.權(quán)利要求9所述鈰、釹雙摻雜生物活性玻璃在制備治療黑色素瘤術(shù)后組織缺損修復(fù)和抑制癌癥復(fù)發(fā)藥品中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種用于黑色素瘤術(shù)后防復(fù)發(fā)和促進(jìn)組織修復(fù)的生物活性玻璃的制備方法，首先通過有機(jī)模板法制備了富含鈰、釹的介孔生物活性玻璃，然后對其表面改性，使其表面富含氨基。最后，將化療藥甲氨蝶呤接枝在活性玻璃上，甲氨蝶呤的羧基與氨化的活性玻璃形成酸性pH響應(yīng)性斷裂的酰胺鍵，得到甲氨蝶呤接枝改性的介孔生物活性玻璃。本發(fā)明獲得的生物活性玻璃，具有良好的生物相容性和光熱性能，可通過光熱聯(lián)合化療實(shí)現(xiàn)消除術(shù)后殘留的腫瘤和促進(jìn)皮膚組織修復(fù)。

技術(shù)研發(fā)人員：惠俊峰,姚嘉玲,范代娣,姚嘉欣,鄭曉燕
受保護(hù)的技術(shù)使用者：西北大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6