本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及β-己糖胺酶(hexosaminidase?subunitbeta,hexb)抑制劑在制備治療神經(jīng)損傷藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、脊髓損傷往往導(dǎo)致患者運動和感覺功能的永久性障礙，嚴(yán)重影響了患者及其家庭的生活質(zhì)量。系統(tǒng)而全面地研究脊髓損傷的生理病理過程，探索其中細(xì)胞分子的機制，對于制定新的有效治療策略至關(guān)重要。正常情況下，健康的髓鞘組織在軸突周圍形成致密的多層絕緣質(zhì)膜，促進(jìn)軸突快速傳遞電信號和進(jìn)行新陳代謝。脊髓損傷后，髓鞘大量丟失，一周內(nèi)少突膠質(zhì)細(xì)胞減少90％以上，髓鞘的缺失進(jìn)一步加劇了功能障礙和軸突減少。研究脊髓損傷后少突膠質(zhì)細(xì)胞的調(diào)節(jié)及分子機制，將為脊髓損傷治療開辟新的途徑，具有重要的意義和價值。

2、hexb(hexosaminidase?subunit?beta)是一種蛋白質(zhì)編碼基因，其編碼溶酶體酶氨基己糖苷酶的β亞基，可以催化神經(jīng)節(jié)苷脂的降解。hexb基因的突變導(dǎo)致gm2神經(jīng)節(jié)苷脂在神經(jīng)元和神經(jīng)退行性疾病中的積累，稱為gm2神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥。目前尚無hexb在神經(jīng)損傷中的報道。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明首次公開了β-己糖胺酶編碼基因hexb在大鼠脊髓損傷后表達(dá)上調(diào)，且與少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的增殖和分化密切相關(guān)，有潛力成為脊髓神經(jīng)損傷修復(fù)的新靶點。

2、本發(fā)明具體技術(shù)方案如下：

3、β-己糖胺酶抑制劑在制備與少突膠質(zhì)細(xì)胞增殖和分化有關(guān)的疾病藥物中的應(yīng)用。

4、本發(fā)明所述β-己糖胺酶ncbl?reference?sequence:nm_001011946.2。

5、本發(fā)明所述的應(yīng)用，所述抑制劑為β-己糖胺酶或其編碼基因的負(fù)調(diào)控劑，包括靶向β-己糖胺酶的蛋白類抑制劑、核酸適配體和/或β-己糖胺酶編碼基因的干擾rna、grna、microrna、小分子化合物抑制劑和以上組合的抑制劑。

6、本發(fā)明一個具體的示例，所述負(fù)調(diào)控劑是靶向β-己糖胺酶基因的sirna。

7、所述β-己糖胺酶基因的sirna的序列如下所示：

8、si?hexb-1正義鏈：5’gataagggaaagactggtc3’，seq?id?no:1；

9、si?hexb-1反義鏈：5’gaccagtctttcccttatc3’，seq?id?no:2；

10、si?hexb-2正義鏈：5’tgttgtatttagacttggg3’，seq?id?no:3；

11、si?hexb-2反義鏈：5’cccaagtctaaatacaaca3’，seq?id?no:4；

12、si?hexb-3正義鏈：5’tgtacaagtagagaatagg3’，seq?id?no:5；

13、si?hexb-3反義鏈：5’cctattctctacttgtaca3’，seq?id?no:6。

14、本發(fā)明所述的應(yīng)用，所述與少突膠質(zhì)細(xì)胞增殖和分化有關(guān)的疾病為神經(jīng)損傷、神經(jīng)退行性疾病或癌癥。優(yōu)選為中樞神經(jīng)損傷。進(jìn)一步的，所述中樞神經(jīng)損傷為脊髓損傷。

15、本發(fā)明利用測序技術(shù)，發(fā)現(xiàn)hexb在大鼠脊髓損傷后表達(dá)上調(diào)。qrt-pcr結(jié)果顯示，與0d相比，hexb在損傷1d后表達(dá)顯著增加。針對hexb全長序列，設(shè)計sirna，進(jìn)行sirna干擾實驗。edu染色結(jié)果顯示干擾hexb的表達(dá)明顯抑制少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的增殖。體外分化實驗結(jié)果顯示，干擾hexb的表達(dá)明顯促進(jìn)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分化為成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞。體內(nèi)注射hexb?sirna，可以促進(jìn)大鼠脊髓半切損傷后的運動功能恢復(fù)。本發(fā)明研究結(jié)果顯示hexb在脊髓損傷修復(fù)過程中可以調(diào)節(jié)少突膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和分化，不僅有助于更好地理解hexb在中樞神經(jīng)損傷修復(fù)過程中起到的重要作用，更重要的是為脊髓神經(jīng)損傷后的治療提供新的靶點，β-己糖胺酶抑制劑可以成為脊髓神經(jīng)損傷治療藥物的新的選擇。

技術(shù)特征：

1.β-己糖胺酶抑制劑在制備與少突膠質(zhì)細(xì)胞增殖和分化有關(guān)的疾病藥物中的應(yīng)用。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述抑制劑為β-己糖胺酶或其編碼基因的負(fù)調(diào)控劑。

3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述負(fù)調(diào)控劑包括靶向β-己糖胺酶的蛋白類抑制劑、核酸適配體和/或β-己糖胺酶編碼基因的干擾rna、grna、microrna、小分子化合物抑制劑和以上組合的抑制劑。

4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述負(fù)調(diào)控劑是靶向β-己糖胺酶基因的sirna和/或基于載體的shrna。

5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述β-己糖胺酶基因的sirna序列如下：

6.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述與少突膠質(zhì)細(xì)胞增殖和分化有關(guān)的疾病為神經(jīng)損傷、神經(jīng)退行性疾病或癌癥。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述神經(jīng)損傷為中樞神經(jīng)損傷。

8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述中樞神經(jīng)損傷為脊髓損傷。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了β?己糖胺酶(Hexosaminidase?Subunit?Beta,Hexb)抑制劑在制備治療與少突膠質(zhì)細(xì)胞增殖和分化有關(guān)的疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)Hexb在大鼠脊髓損傷后表達(dá)上調(diào)，且與少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的增殖和分化密切相關(guān)，干擾Hexb的表達(dá)能夠明顯促進(jìn)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分化為成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞，進(jìn)一步研究結(jié)果顯示體內(nèi)注射Hexb?siRNA能夠促進(jìn)大鼠脊髓半切損傷后的運動功能恢復(fù)。本發(fā)明為脊髓神經(jīng)損傷后的治療提供了新的藥物選擇。

技術(shù)研發(fā)人員：姚淳,呂燁華,季凌云,戴慧,于彬,糜大國
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南通大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6