本發(fā)明涉及抗纖維化物質(zhì)，其可用于治療纖維化，特別是心臟纖維化。

背景技術(shù)：

1、纖維化是最大的疾病群之一，盡管已經(jīng)討論了幾種潛在的治療靶點(leask，circulation?research?2010，106，1675)，但仍然沒有有效的治療方法。

2、眾所周知，如果涉及重要器官，纖維化疾病會引發(fā)嚴(yán)重疾病。肌肉或具有身體基本功能的器官中膠原蛋白的浸潤增強可以完全阻礙其功能。已知的實例是肝臟、腎臟、肺和心臟中的結(jié)締組織浸潤，其中，肺和心臟占纖維化疾病的大多數(shù)，每年導(dǎo)致全球超過800,000人死亡。尤其是導(dǎo)致心肌僵硬的心肌纖維化是終末期心力衰竭的主要原因之一(mozaffarian等，heart?disease?and?stroke?statistics,rep.am.heart?assoc.2016,133,e38-e360)。這些纖維化疾病中出現(xiàn)的結(jié)締組織浸潤的特征是內(nèi)源性成纖維細(xì)胞膠原蛋白的異常和過量生產(chǎn)。

3、盡管醫(yī)療需求很高，但目前尚無已知的既定治愈方法。建議的治療方法大多是間接的，依賴于抑制成纖維細(xì)胞膠原蛋白產(chǎn)生的常見但不特定的激活因子或通過毒性干預(yù)點消除過度活躍的成纖維細(xì)胞(hinderer和schenke-leyland，advanced?drug?deliveryreviews?2019,146,77；fan和guan，biomaterials?res.2016,20,13/1-13；frangogiannis,molecular?aspects?of?medicine?2019,65,70)。

4、由于已知血壓升高會對平滑肌細(xì)胞造成機械應(yīng)力并可導(dǎo)致成纖維細(xì)胞活化，因此普遍使用抗高血壓藥物也可以降低發(fā)生纖維化的風(fēng)險。降低血壓的典型方法包括血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、醛固酮拮抗劑、血管緊張素受體阻滯劑和鈣拮抗劑(r.g.gourdie,s.dimmeler,p.kohl?nat.rev.drug?disc.2016,15,620；y.shibasaki等,hypertens.res.2005,28,787)。雖然這些藥物可以改善一般狀況，尤其是心血管狀況，但它們并不是控制過度成纖維細(xì)胞活動的特定方法。它們在復(fù)雜的高血壓治療方案中的精細(xì)調(diào)節(jié)、已知的藥物相互作用以及它們僅緩解多種成纖維細(xì)胞活化因子中的一種的事實阻礙了它們作為預(yù)防和治療纖維化疾病的普遍應(yīng)用。這些考慮也適用于非奈利酮(finerenone)，它是一種非甾體鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑，被認(rèn)為具有抗纖維化特性(b.pitt等，nengl?jmed?2021,385:2252)。

5、某些方法依賴于抑制在細(xì)胞活化和細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)中起一般作用的生長因子，主要是已討論或針對癌癥治療的目標(biāo)。這些藥物包括mmp抑制劑(f.g.spinale,phys.rev.2007,87,1285)、肥大細(xì)胞功能抑制劑(s.oyamada,s.bianchi,s.takai,l.m.chu,j.pharm.exp.ther.2011,339,143)、中和mcp1的單克隆抗體(s.hayashidani等.circulation?2003,108,2134)、cxc趨化因子配體10(m.bujak,circ.res.2009,105,973)、內(nèi)皮素通路抑制劑(f.rodriguez-pascual,o.busnadiego,j.gonzales-santamaria,lifesci.2014,118,156)和wnt信號調(diào)節(jié)劑(daskalopoulos等，trends?cardiovasc.med.2013,23,121)。這些干預(yù)點不適用于細(xì)胞類型特異性相互作用。它們已知的副作用使得長期治療纖維化不太可能成功。抗增生的化合物不能反映成纖維細(xì)胞的重要正常功能。

6、在健康心臟中，成纖維細(xì)胞是參與結(jié)締組織形成和維持的主要細(xì)胞類型(k.e.porter,n.a.turner?pharmacol.ther.2009,123,255)。這種組織包含細(xì)胞和非細(xì)胞成分，細(xì)胞外基質(zhì)(ecm)為單個肌細(xì)胞和整個心臟提供靈活的支架(j.b.caulfield,t.k.borg,lab.invest.1979,40,364)。這種高度組織化的富含膠原蛋白的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)由成纖維細(xì)胞形成，可穩(wěn)定心肌壁并支持力傳遞，但仍允許復(fù)雜的組織變形模式(p.w.hales等,prog.biophys.mol.biol.2012,110,319)。心肌損傷后，內(nèi)皮細(xì)胞可以發(fā)生內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(endmt)，從而導(dǎo)致纖維化(e.m.zeisberg等,nat?med.2007,13,952)。在此過程中，內(nèi)皮細(xì)胞失去內(nèi)皮特性，并獲得間質(zhì)或肌成纖維細(xì)胞標(biāo)志物，例如αsma的表達和i型膠原蛋白的分泌。阻斷心臟損傷后(例如缺血引起的多個細(xì)胞死亡后)平滑肌細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和膠原蛋白過度生產(chǎn)是無毒抗纖維化化合物的重要指征。

7、2019年，有研究表明，肼屈嗪(hydralazine)和二肼屈嗪(dihydralazine)這兩種自1952年以來在臨床上用于治療肌張力亢進的藥物具有抗纖維化作用。例如，低劑量的二肼屈嗪具有保護作用，因為它誘導(dǎo)內(nèi)源性tet3/tdg介導(dǎo)的dna去甲基化活性，從而逆轉(zhuǎn)異常的啟動子cpg島甲基化(b.tampe,d.tampe,e.m.zeisberg,g.a.müller,w.bechtel-walz,m.koziolek,r.kalluri,m.zeisberg,ebiomedicine?2015,2,19；g.hasenfuss等.de102019126517?a12021.04?01)。然而，除了強大的抗高血壓作用外，這兩種化合物還存在患者間差異高(j.r.batchelor等,lancet?1980,1(8178),1107；a.m.shepherd等,clin.res.1980,28,244a)和藥物誘發(fā)的狼瘡(m.bourdi等,mol.pharmacol.1992,42,280；c.chang,m.gershwin,j.autoimmunity?2010,34,j266)的問題。

8、總之，到目前為止，還沒有用于治療纖維化本身的化合物，建議的治療方法大多是間接的，并且依賴于抑制成纖維細(xì)胞膠原蛋白生產(chǎn)的常見但不特定的活化因子或通過毒性干預(yù)點消除過度活躍的成纖維細(xì)胞。wo?2016/085981?a1建議使用類異戊二烯化合物，特別是香葉基-香葉基丙酮，來抑制、減少或治療纖維化。wo?2016/046130?a1建議使用單酰甘油脂肪酶(mgl)抑制劑。wo?2021/089828a1公開了核酸連接酶抑制劑作為纖維化的可能治療方法。這種作用方式通常是抗增生的，并且作為典型的癌癥治療，具有已知的不良副作用。

9、激活成纖維細(xì)胞的主要因素是內(nèi)源性tgfβ升高，它會誘導(dǎo)膠原蛋白i的mrna水平增強，從而導(dǎo)致膠原蛋白生產(chǎn)的增加(m.lodyga和b.hinz,semin.cell.dev.biol.2020,101,123；j.m.carthy,j.cell.physiol.2018,233(1),98)。這已在細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)實驗中得到證實(lijnen,pedrov和fagard,molecular?genetics?and?metabol.2000,71,418)，因此，tgfβ刺激人類腎成纖維細(xì)胞系(tfkif和tnkf)可創(chuàng)建代表腎間質(zhì)纖維化的病理生理機制的體外模型，從而可以確定有希望的治療方法(g.a.müller等,exp.nephrol.1995,3,127)。

10、鑒于上述情況，需要用于治療纖維化的化合物，以有效減少纖維化纖維的形成，而不會對患者產(chǎn)生有害的副作用。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，通式i的化合物使tgfβ激活的成纖維細(xì)胞的膠原蛋白imrna水平正?；⒛z原蛋白生產(chǎn)逆轉(zhuǎn)至未受刺激的成纖維細(xì)胞中可見的正常水平。實施例60至62顯示了本發(fā)明的偶氮化合物的生物學(xué)特性。

2、

3、如前所述，纖維化疾病的特征是內(nèi)源性成纖維細(xì)胞膠原蛋白的異常和過量生成。對這種疾病的充分治療應(yīng)使成纖維細(xì)胞活性正?；?，而不會對細(xì)胞表型產(chǎn)生毒性作用并妨礙其正常的結(jié)締組織再生功能，例如在受傷或組織損傷后。出乎意料的是，我們發(fā)現(xiàn)通式i的化合物滿足了這一要求。具體而言，這些結(jié)構(gòu)將升高的膠原蛋白生產(chǎn)減弱回正常狀態(tài)，并將過度活躍的成纖維細(xì)胞的纖維型表型逆轉(zhuǎn)為非活化成纖維細(xì)胞的表型。這不是通過毒性作用方式實現(xiàn)的，因為它在有效水平下發(fā)生，而沒有細(xì)胞毒性的跡象。通過這種方式，通式(i)的化合物將活化的成纖維細(xì)胞的典型拉長和纖維型表型逆轉(zhuǎn)回正常。這種深刻而強大的效果通常發(fā)生在沒有觀察到經(jīng)典管家酶和蛋白質(zhì)(例如gapdh(western-blot)或還原酶(mtt測定))衰減的濃度下。

4、因此，通式i化合物對于預(yù)防和治療具有危及生命的結(jié)果或嚴(yán)重降低生活質(zhì)量的纖維化疾病具有很高的價值。此類疾病的實例并不唯一，包括腎纖維化、肝纖維化、肺纖維化，尤其是心臟纖維化。

5、因此，本發(fā)明涉及一種在治療或預(yù)防纖維化的方法中使用的偶氮化合物(i)

6、其中，

7、r選自由h、d、cn、nhr5、ndr5、cl、or3、sr3和c1-4烷基組成的組，特別是甲基；

8、x為n或cr1，其中，氮和碳原子是芳香原子；

9、w選自由共價鍵、cr4(其中碳原子是芳香環(huán)原子)、ch2、s、o、n(其中氮原子是芳香環(huán)原子)、nh和nr2組成的組；

10、x1選自由共價鍵、cr4(其中碳原子是芳香環(huán)原子)、ch2、s、o、n(其中氮原子是芳香環(huán)原子)、nh和nr2組成的組；

11、y選自由共價鍵、cr4(其中碳原子是芳香環(huán)原子)、ch2、s、o、n(其中氮原子是芳香環(huán)原子)、nh和nr2組成的組；

12、z選自由共價鍵、cr4(其中碳原子是芳香環(huán)原子)、ch2、s、o、n(其中氮原子是芳香環(huán)原子)、nh和nr2組成的組；

13、其中，表示單鍵或雙鍵；其中

14、w、x1、y和z是同一環(huán)的成員，并且被選擇為使得環(huán)由五個或六個成員組成；

15、選擇w、x1、y和z使得所述環(huán)在環(huán)中不包含超過兩個氮原子，并且選擇w、x1、y和z使得所述環(huán)不包含縮醛、硫縮醛、縮胺或肼基團；

16、其中，所述化合物不包含過氧化物或二硫化物基團；并且其中

17、r1選自由h、d、cd3、chd2、ch2d、cf3、chf2、ch2f、cdf2、cd2f、c1-4-烷基組成的組，任選地被oh、鹵素、or3取代；

18、r2選自由cho、coch3、coc2h5、coc3h7、coch(ch3)2、coc4h9、coc(ch3)3組成的組；

19、r3選自由c1-4烷基組成的組；

20、r4選自由h、d、f、cl、甲基、ch2f、chf2、cf3、och3、ocd3組成的組；以及

21、r5為c1-4烷基，任選地被oh取代。

22、本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，包含偶氮化合物或偶氮化合物的混合物和藥學(xué)上可接受的載體，所述偶氮化合物每個具有如權(quán)利要求1所定義的結(jié)構(gòu)(i)

23、

24、優(yōu)選地用于治療纖維化。