本發(fā)明屬于藥物制劑的應(yīng)用領(lǐng)域，特別涉及vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇在制備治療癌性腹腔粘連藥物中的應(yīng)用以及一種vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇組合物。

背景技術(shù)：

腹腔粘連的治療一直是臨床醫(yī)生尚未解決的重要難題，然而，直至目前尚無標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范治療方案。根據(jù)國外近年的試驗(yàn)研究和臨床觀察的mate分析顯示：目前尚無一種手術(shù)措施可以完全的預(yù)防腹腔粘連形成，并在臨床廣泛應(yīng)用。近年來很多學(xué)者從手術(shù)因素著手，研究控制和改善由于手術(shù)導(dǎo)致的腹腔粘連的藥物，有了很大的進(jìn)展，例如減輕炎癥反應(yīng)的藥物(非甾體類抗炎藥、殼聚糖或稱幾丁糖)、促纖維蛋白溶解(尿激酶、組織纖維酶原激活劑等)、防止纖維蛋白沉積(奧曲肽、抑肽酶)、抗粘連物(血管內(nèi)皮生長因子(vegf)單抗、右旋糖酐、膠原材料、纖維素等)、美藍(lán)、卡鉑復(fù)合液等。但是從腫瘤所致腹腔粘連的研究甚少，癌性腹腔粘連的治療仍處于探索階段。

epsteinjc等發(fā)現(xiàn)vegf可致腫瘤浸潤腹膜組織通透性增高,產(chǎn)生纖維蛋白原等粘連物漏出,在腹膜腔內(nèi)沉積、機(jī)化,形成粘連索帶,并有大量血管活性的新生血管包繞，導(dǎo)致癌性腹腔粘。karanlikh等發(fā)現(xiàn)腹腔灌注貝伐單抗對(duì)結(jié)腸癌吻合術(shù)后粘連形成有臨床意義，常規(guī)劑量貝伐珠(5mg/kg)可能增加吻合口破裂壓力，但有效地減少粘連的形成，比對(duì)照組顯著降低粘附分?jǐn)?shù)；如果貝伐減半至2.5mg/kg，沒有傷口裂開,既沒有影響吻合口及傷口愈合，還有效地減少了形成粘連，針對(duì)抗血管生成療法預(yù)防腹腔粘連，認(rèn)為粘連形成是血管發(fā)生依賴性的并且是部分地通過vegfr信號(hào)傳導(dǎo)通路。采用舒尼替尼(vegfr-2拮抗劑)可以顯著降低在鼠模型粘連形成，提示抗vegf抗體在治療腹膜粘連中發(fā)揮了舉足輕重的作用，但是目前只施用vegf單抗以治療癌性腹腔粘連療效還較差，且靜脈注射vegf單抗會(huì)引發(fā)更多并發(fā)癥并增加死亡率，包括出血(23.5％)和胃腸道穿孔(7.1％)。

紫杉醇作為抗癌藥物，在卵巢癌中具有明顯的抗腫瘤和抗癌作用，并且在寬范圍的腫瘤模型中也表現(xiàn)了優(yōu)異的抗腫瘤活性，但目前未見報(bào)道其具有抗腹腔粘連之功效。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇在制備治療癌性腹腔粘連藥物中的應(yīng)用，將vegf單抗與納米紫杉醇進(jìn)行聯(lián)合，形成的復(fù)合物，對(duì)于癌性腹腔粘連具有顯著的療效，明顯優(yōu)于單獨(dú)施用vegf單抗的療效。

本發(fā)明具體技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供了vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇在制備治療癌性腹腔粘連藥物中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，所述vegf單抗為蘭尼單抗或者雷珠單抗。

優(yōu)選地，所述癌性腹腔粘連為腹腔惡性腫瘤導(dǎo)致的腹腔粘連。

進(jìn)一步地，所述vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇為殼聚糖納米包裹強(qiáng)化的vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇。

進(jìn)一步地，所述vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇中，vegf單抗與納米紫杉醇的重量份數(shù)比為：1-3:8-13，優(yōu)選地，所述vegf單抗與納米紫杉醇的重量份數(shù)比為3:21。

更進(jìn)一步地，殼聚糖納米包裹強(qiáng)化的vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇中，所述vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇與殼聚糖的重量份數(shù)比為：1-2:5-7。

優(yōu)選地，殼聚糖納米包裹強(qiáng)化的vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇中，所述vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇與殼聚糖的重量份數(shù)比為：1:7:40。

優(yōu)選地，所述治療癌性腹腔粘連藥物為腹腔注射用藥。

本發(fā)明另一方面提供了一種殼聚糖納米包裹強(qiáng)化vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇復(fù)合物，所述復(fù)合物主要由如下重量份的原料制備而成：殼聚糖45-224、納米紫杉醇8-13、vegf單抗1-3。

另一方面，本發(fā)明還提供所述殼聚糖納米包裹強(qiáng)化vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇復(fù)合物在制備治療癌性腹腔粘連的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明將vegf單抗與納米紫杉醇進(jìn)行聯(lián)合，形成復(fù)合物，在治療癌性腹腔粘連方面具有意想不到的技術(shù)效果，與單獨(dú)施用vegf單抗進(jìn)行治療相比，腹腔粘連、腸梗阻等癥狀改善更為明顯，同時(shí)毒副作用較小。

殼聚糖納米包裹強(qiáng)化后的vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇，療效進(jìn)一步增強(qiáng)、藥效持續(xù)時(shí)間延長的同時(shí)，進(jìn)一步降低毒副作用，降低并發(fā)癥發(fā)生概率，同時(shí)可以通過調(diào)節(jié)殼聚糖納米包裹量，來靈活調(diào)節(jié)vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇的藥效作用時(shí)間與作用強(qiáng)度。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，下列實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明的發(fā)明內(nèi)容，不用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇在小鼠術(shù)后腹腔粘連的治療作用

1.1動(dòng)物：昆明小鼠，雌雄各半

1.2腹腔損傷模型的建立

術(shù)前動(dòng)物稱重，按照38mg/kg的用量給藥戊巴比妥鈉，完全麻醉后，無菌條件下，取下腹正中進(jìn)行腹部切口，找到盲腸及升結(jié)腸后，將其輕輕提起，在腸管外周各側(cè)面用紗布反復(fù)摩擦30次，中線右側(cè)的壁層腹膜用止血鉗多出反復(fù)鉗夾30次，然后用可吸收縫合線縫合腹膜，最后縫合線結(jié)扎前將治療藥物緩慢注入腹腔內(nèi)，然后結(jié)扎縫合，逐層關(guān)腹。術(shù)后禁食12h，分籠標(biāo)準(zhǔn)喂養(yǎng)，不用任何藥物。

1.3粘連評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

術(shù)后20天后，處死小鼠，在元切口上方左右肋緣下斜切口檢查上次腹部正中切口的完整性和腹腔內(nèi)粘連情況，通過對(duì)粘連程度，位置及類型的綜合評(píng)價(jià)，得出各組粘連分?jǐn)?shù)，粘連分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參考鄭振華的分級(jí)方法進(jìn)行三級(jí)分類：0級(jí)：無粘連；1級(jí)：輕度粘連，粘連容易分離；2級(jí)：中度粘連，粘連難以分離，但局限于一個(gè)區(qū)域；3級(jí)：重度粘連，呈纖維性粘連增生，可見多條粘連待，腸粘連或腸管固定于腹壁構(gòu)成團(tuán)塊狀。

1.4分組情況

取昆明小鼠50只，隨機(jī)5組，每組10只，雌雄各半，對(duì)照組治療藥物為生理鹽水；試驗(yàn)1組治療藥物為蘭尼單抗；試驗(yàn)2組為納米紫杉醇；試驗(yàn)3組為蘭尼單抗聯(lián)合納米紫杉醇(蘭尼單抗與納米紫杉醇重量比為3:8)；試驗(yàn)4組為殼聚糖納米包裹強(qiáng)化的vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇(蘭尼單抗、納米紫杉醇和殼聚糖重量比為3:8:45)；其中對(duì)照組生理鹽水濃度為150mmol/l，試驗(yàn)1-4組治療藥物在試驗(yàn)前均用濃度為150mmol/l生理鹽水按照1:100的體積稀釋。

vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇的制備方法，以及殼聚糖對(duì)vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇進(jìn)行納米包裹強(qiáng)化的工藝，按照常規(guī)白蛋白聯(lián)合納米紫杉醇的制備方法以及常規(guī)殼聚糖納米包裹方法制備即可，工藝成熟，本領(lǐng)域技術(shù)人員無需創(chuàng)造性勞動(dòng)即可制備，因此本發(fā)明不做詳述。

1.5試驗(yàn)結(jié)果

表1vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇在小鼠術(shù)后腹腔粘連的治療作用

由上述試驗(yàn)結(jié)果可知，對(duì)照組小鼠粘連發(fā)生率在100％，即在該處理?xiàng)l件下，小鼠會(huì)發(fā)生中度以上的腹腔粘連癥狀；單純蘭尼單抗對(duì)小鼠腹腔粘連具有一定的治療作用，將粘連率降至70％；單純納米紫杉醇與對(duì)照組相比，納米紫杉醇組的重度腹腔粘連比重增加，對(duì)小鼠腹腔粘連癥狀無治療作用的情況下，有一定的惡化反作用；而將蘭尼單抗與納米紫杉醇進(jìn)行聯(lián)合后形成的復(fù)合物，大幅提高了小鼠腹腔粘連的治療效果，具有意想不到的技術(shù)效果，而殼聚糖包裹后，治療效果更佳。

實(shí)施例2不同vegf單抗形成的vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇在小鼠術(shù)后腹腔粘連的治療作用

本實(shí)施例所用的試驗(yàn)動(dòng)物、粘連評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以及腹腔損傷模型的建立與實(shí)施例1相同。

2.1分組情況

取昆明小鼠72只，隨機(jī)6組，每組12只，雌雄各半，試驗(yàn)1組治療藥物為貝伐單抗聯(lián)合納米紫杉醇；試驗(yàn)2組治療藥物為蘭尼單抗聯(lián)合納米紫杉醇；試驗(yàn)3組治療藥物為舒尼替尼聯(lián)合納米紫杉醇；試驗(yàn)4組治療藥物為雷珠單抗聯(lián)合納米紫杉醇；試驗(yàn)5組治療藥物為哌加他尼聯(lián)合納米紫杉醇；試驗(yàn)6組治療藥物為vegf兔igg多抗聯(lián)合納米紫杉醇；vegf抗體與納米紫杉醇重量比為3:13，治療藥物在試驗(yàn)前均用濃度為150mmol/l生理鹽水按照1:100的體積稀釋。

2.2試驗(yàn)結(jié)果

表2不同vegf單抗對(duì)vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇在小鼠術(shù)后腹腔粘連的治療作用的影響

由上述試驗(yàn)結(jié)果可知，不同的vegf單抗聯(lián)合相同的納米紫杉醇，對(duì)小鼠的腹腔粘連均有一定的治療效果，但是療效并不相同，經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蘭尼單抗和雷珠單抗與納米紫杉醇相聯(lián)合而得到的復(fù)合物對(duì)小鼠腹腔粘連治療效果較佳。

實(shí)施例3不同重量份數(shù)比的vegf單抗與納米紫杉醇制備而成的vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇在小鼠術(shù)后腹腔粘連的治療作用

本實(shí)施例所用的試驗(yàn)動(dòng)物、粘連評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以及腹腔損傷模型的建立與實(shí)施例1相同。

3.1分組情況

取昆明小鼠80只，隨機(jī)8組，每組10只，雌雄各半，選用雷珠單抗與納米紫杉醇進(jìn)行聯(lián)合，考察兩個(gè)原料不同配比得到的復(fù)合物針對(duì)腹腔粘連的治療效果，治療藥物在試驗(yàn)前均用濃度為150mmol/l生理鹽水按照1:100的體積稀釋。

3.2試驗(yàn)結(jié)果

表3不同重量份數(shù)比的vegf單抗與納米紫杉醇對(duì)vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇在小鼠術(shù)后腹腔粘連的治療作用的影響

由上述試驗(yàn)結(jié)果可知，不同重量份數(shù)比的vegf單抗與納米紫杉醇經(jīng)聯(lián)合制備的vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇對(duì)小鼠腹腔粘連的治療效果差異較大，一般來說vegf單抗具有一定的抗腹腔粘連的作用，而納米紫杉醇沒有該功效，將vegf單抗與納米紫杉醇進(jìn)行聯(lián)合，將有效成分vegf單抗的含量大于納米紫杉醇，例如vegf單抗重量為納米紫杉醇重量的2倍，預(yù)期療效將優(yōu)于vegf單抗與納米紫杉醇重量相同的試驗(yàn)例，但試驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期相反，隨著納米紫杉醇重量份數(shù)的增加，療效反而增強(qiáng)，當(dāng)vegf單抗與納米紫杉醇重量份數(shù)比由3:7升至3:8后，粘連率由60％下降一半，到30％，當(dāng)vegf單抗與納米紫杉醇重量份數(shù)比為3:21時(shí)，療效最佳，腹腔粘連率下降至10％，當(dāng)vegf單抗與納米紫杉醇重量份數(shù)比為3:36之后，隨著納米紫杉醇重量份數(shù)繼續(xù)增加療效顯著降低，因此得到優(yōu)選的vegf單抗與納米紫杉醇的重量份數(shù)比例，具有意想不到的技術(shù)效果。

實(shí)施例4不同重量份數(shù)比的vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇與殼聚糖制備而成的殼聚糖納米包裹強(qiáng)化vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇在小鼠術(shù)后腹腔粘連的治療作用

本實(shí)施例所用的試驗(yàn)動(dòng)物、粘連評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以及腹腔損傷模型的建立與實(shí)施例1相同。

4.1分組情況

取昆明小鼠96只，隨機(jī)8組，每組12只，雌雄各半，雷珠單抗聯(lián)合納米紫杉醇與殼聚糖進(jìn)行包裹形成殼聚糖納米包裹強(qiáng)化vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇，考察兩個(gè)原料不同配比得到的復(fù)合物針對(duì)腹腔粘連的治療效果，治療藥物在試驗(yàn)前均用濃度為150mmol/l生理鹽水按照1:100的體積稀釋。

4.2試驗(yàn)結(jié)果

表4不同殼聚糖納米包裹強(qiáng)化vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇在小鼠術(shù)后腹腔粘連的治療作用

由上述試驗(yàn)結(jié)果可知，殼聚糖納米包裹vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇之后，療效的增強(qiáng)也與殼聚糖與vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇的重量份數(shù)比具有較密切的關(guān)系，當(dāng)殼聚糖與vegf單抗聯(lián)合納米紫杉醇的重量份數(shù)比為1:5時(shí)，可將粘連發(fā)生率降低至0％，療效最佳。