本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，更具體的說是涉及一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型。

背景技術(shù)：

胺碘酮又稱乙胺碘呋酮，是含碘苯丙呋喃衍生物，作為ⅲ類抗心律失常藥物廣泛應(yīng)用于臨床，主要用于治療室性心律失常和心房顫動。其副作用主要表現(xiàn)為肺毒性、甲狀腺毒性、心臟毒性、消化系統(tǒng)毒性等，其中肺毒性反應(yīng)最為嚴(yán)重，其發(fā)生率在1％-10％，肺毒性主要表現(xiàn)為肺纖維化，因臨床缺乏有效治療措施，其死亡率高達(dá)33％，嚴(yán)重影響人民生命健康。但胺碘酮在抗心律失常方面療效確切、穩(wěn)定，目前尚無其他類似藥物替代，在臨床上應(yīng)用仍十分廣泛。因此，闡明胺碘酮誘導(dǎo)肺纖維化機(jī)制對降低其藥物毒副作用，逆轉(zhuǎn)或延緩肺纖維化進(jìn)程、改善患者預(yù)后、提高生存率有重要的臨床意義。目前其發(fā)病機(jī)制尚不清楚，無有效的治療方法，肺纖維化動物模型是研究疾病發(fā)生發(fā)展和新型藥物必不可少的實(shí)驗(yàn)手段，在嚴(yán)格控制各種條件下，利用動物模型，我們可以觀察肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展和疾病轉(zhuǎn)歸以及這些不同改變在形態(tài)學(xué)、影像學(xué)和分子生物學(xué)上的表現(xiàn)等規(guī)律。因此，建立一種簡便、成熟而穩(wěn)定的符合胺碘酮誘導(dǎo)肺纖維化發(fā)病過程的動物模型，對深入研究肺纖維化發(fā)病機(jī)制、開發(fā)先進(jìn)的治療方法具有極其重要的意義。

現(xiàn)有的構(gòu)建肺纖維化動物模型的方法有很多，主要包括：氣管切開術(shù)、氣管插管、額鏡引導(dǎo)灌注、腹腔注射、鼻腔給藥、靜脈滴注化學(xué)藥物法和口咽部給藥法，造模方法有很多，但是各自存在缺點(diǎn)，比如氣管切開對標(biāo)本鼠的外源性創(chuàng)傷大操作繁雜，對相關(guān)實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的影響較大，且實(shí)施操作耗費(fèi)時(shí)間。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，操作方便，在給藥過程對大鼠損傷小。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，建立方法如下：將大鼠進(jìn)行稱重，隨機(jī)分為給藥組和對照組，腹腔注射麻藥進(jìn)行麻醉，將其放于籠中，讓其自然暈倒，對于給藥組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于藥品，所述藥品中含有胺碘酮和鹽酸萘甲唑啉，給藥的過程中觀察小鼠的呼吸情況，給藥結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長20-30天；對于對照組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于等體積0.9％氯化鈉注射液，給樣的過程中觀察小鼠的呼吸情況，給樣結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長20-30天；然后給藥組和對照組用戊巴比妥鈉麻醉處死大鼠,迅速開胸,取出肺臟,部分用于制作組織切片,部分速凍于液氮備作羥脯氨酸含量測定。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述藥品中胺碘酮和鹽酸萘甲唑啉濃度分別為3-5mg/ml和0.03-0.06mg/ml。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述藥品中含有濃度為5-10μm的1-磷酸鞘氨醇和1-5μm的激動劑sew2871。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述胺碘酮的給藥量為3-5mg/kg體重。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于藥品具體步驟如下：將大鼠脖頸處毛發(fā)剔除，準(zhǔn)備一個口部邊沿帶彈性緊固帶的透明塑料袋，將所述透明塑料袋套在大鼠頭部，使所述透明塑料袋口部邊沿的彈性緊固帶套設(shè)在大鼠脖頸處，在透明塑料袋上設(shè)置兩個洞，其中一個洞中插入導(dǎo)氣管，所述導(dǎo)氣管另一端連接有三通閥，所述三通閥一端和抽氣泵相連，還有一端和吹氣泵相連，另一個洞中插入軟質(zhì)導(dǎo)藥管，所述導(dǎo)藥管一端和加樣槍的針頭相連，另一端和大鼠一側(cè)鼻孔相連，所述導(dǎo)氣管和導(dǎo)藥管外側(cè)壁與透明塑料袋相接處無縫貼合；在大鼠暈倒后，使大鼠呈仰臥位狀以彈力固定夾將其四肢分別固定于鼠板上；給藥步驟如下，首先打開抽氣泵和吹氣泵，操作者一手控制三通閥，另一手控制注射器，注射器內(nèi)裝定量藥品，先讓抽氣泵和導(dǎo)氣管相通將透明塑料袋中空氣抽出，保持3-5s，迅速切換三通閥使吹氣泵和導(dǎo)氣管相連，與此同時(shí)，迅速推注藥品100-200μl進(jìn)入鼻腔內(nèi)，使藥物隨大鼠吸氣時(shí)的氣流充分進(jìn)入支氣管內(nèi)，推注完畢后，保持5-10s，重復(fù)上述給藥步驟若干次，解除鼠四肢彈力固定夾將鼠放回鼠籠內(nèi)待復(fù)蘇，然后置于恒溫大鼠房飼養(yǎng)。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述加樣槍的加樣速度為15-30μl/min。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，鼻腔給藥后將小鼠直立旋轉(zhuǎn)2-3min，利用體位及重力作用，盡量使藥液在兩側(cè)肺內(nèi)均勻分布。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，鼻腔給藥時(shí)把鼠板豎起與桌面成70-80°夾角，然后向右傾斜與桌面成60-70°夾角，將藥品吹入單側(cè)肺中。

本發(fā)明的大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，采用無創(chuàng)鼻腔給藥注入胺碘酮構(gòu)建肺纖維化大鼠模型，其操作方便，成功率高，在給藥過程對大鼠損傷小，減少氣管切開等對大鼠造成的外源性損傷，在給藥過程大鼠死亡率小，且能夠保證藥物完全進(jìn)入氣管內(nèi)。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳述。

實(shí)施例1

一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，建立方法如下：將大鼠進(jìn)行稱重，腹腔注射麻藥進(jìn)行麻醉，將其放于籠中，讓其自然暈倒，對于給藥組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于藥品，所述藥品中含有濃度分別為3mg/ml和0.03mg/ml的胺碘酮和鹽酸萘甲唑啉，所述胺碘酮的給藥量為3mg/kg體重，將大鼠脖頸處毛發(fā)剔除，準(zhǔn)備一個口部邊沿帶彈性緊固帶的透明塑料袋，將所述透明塑料袋套在大鼠頭部，使所述透明塑料袋口部邊沿的彈性緊固帶套設(shè)在大鼠脖頸處，在透明塑料袋上設(shè)置兩個洞，其中一個洞中插入導(dǎo)氣管，所述導(dǎo)氣管另一端連接有三通閥，所述三通閥一端和抽氣泵相連，還有一端和吹氣泵相連，另一個洞中插入軟質(zhì)導(dǎo)藥管，所述導(dǎo)藥管一端和加樣槍的針頭相連，另一端和大鼠一側(cè)鼻孔相連，所述導(dǎo)氣管和導(dǎo)藥管外側(cè)壁與透明塑料袋相接處無縫貼合；在大鼠暈倒后，使大鼠呈仰臥位狀以彈力固定夾將其四肢分別固定于鼠板上，把鼠板豎起與桌面成70°夾角，然后向右傾斜與桌面成60°夾角，首先打開抽氣泵和吹氣泵，操作者一手控制三通閥，另一手控制注射器，注射器內(nèi)裝定量藥品，先讓抽氣泵和導(dǎo)氣管相通將透明塑料袋中空氣抽出，保持3s，迅速切換三通閥使吹氣泵和導(dǎo)氣管相連，與此同時(shí)，迅速推注藥品100μl進(jìn)入鼻腔內(nèi)，所述加樣槍的加樣速度為15μl/min，使藥物隨大鼠吸氣時(shí)的氣流充分進(jìn)入支氣管內(nèi)，然后吹入單側(cè)肺中，推注完畢后，保持5s，重復(fù)上述給藥步驟3次，解除鼠四肢彈力固定夾將鼠放回鼠籠內(nèi)待復(fù)蘇，給藥的過程中不時(shí)觀察小鼠的呼吸情況，給藥結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長20天，然后置于恒溫大鼠房飼養(yǎng)；然后用戊巴比妥鈉麻醉處死大鼠,迅速開胸,取出肺臟,部分用于制作組織切片,部分速凍于液氮備作羥脯氨酸含量測定。

實(shí)施例2

一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，建立方法如下：將大鼠進(jìn)行稱重，腹腔注射麻藥進(jìn)行麻醉，將其放于籠中，讓其自然暈倒，對于給藥組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于藥品，所述藥品中含有濃度分別為4mg/ml和0.04mg/ml的胺碘酮和鹽酸萘甲唑啉，所述胺碘酮的給藥量為4mg/kg體重，將大鼠脖頸處毛發(fā)剔除，準(zhǔn)備一個口部邊沿帶彈性緊固帶的透明塑料袋，將所述透明塑料袋套在大鼠頭部，使所述透明塑料袋口部邊沿的彈性緊固帶套設(shè)在大鼠脖頸處，在透明塑料袋上設(shè)置兩個洞，其中一個洞中插入導(dǎo)氣管，所述導(dǎo)氣管另一端連接有三通閥，所述三通閥一端和抽氣泵相連，還有一端和吹氣泵相連，另一個洞中插入軟質(zhì)導(dǎo)藥管，所述導(dǎo)藥管一端和加樣槍的針頭相連，另一端和大鼠一側(cè)鼻孔相連，所述導(dǎo)氣管和導(dǎo)藥管外側(cè)壁與透明塑料袋相接處無縫貼合；在大鼠暈倒后，使大鼠呈仰臥位狀以彈力固定夾將其四肢分別固定于鼠板上，把鼠板豎起與桌面成75°夾角，然后向右傾斜與桌面成65°夾角，首先打開抽氣泵和吹氣泵，操作者一手控制三通閥，另一手控制注射器，注射器內(nèi)裝定量藥品，先讓抽氣泵和導(dǎo)氣管相通將透明塑料袋中空氣抽出，保持4s，迅速切換三通閥使吹氣泵和導(dǎo)氣管相連，與此同時(shí)，迅速推注藥品150μl進(jìn)入鼻腔內(nèi)，所述加樣槍的加樣速度為20μl/min，使藥物隨大鼠吸氣時(shí)的氣流充分進(jìn)入支氣管內(nèi)，然后吹入單側(cè)肺中，推注完畢后，保持6s，重復(fù)上述給藥步驟3次，解除鼠四肢彈力固定夾將鼠放回鼠籠內(nèi)待復(fù)蘇，給藥的過程中不時(shí)觀察小鼠的呼吸情況，給藥結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長28天，然后置于恒溫大鼠房飼養(yǎng)；然后用戊巴比妥鈉麻醉處死大鼠,迅速開胸,取出肺臟,部分用于制作組織切片,部分速凍于液氮備作羥脯氨酸含量測定。

實(shí)施例3

一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，建立方法如下：將大鼠進(jìn)行稱重，腹腔注射麻藥進(jìn)行麻醉，將其放于籠中，讓其自然暈倒，對于給藥組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于藥品，所述藥品中含有濃度分別為5mg/ml和0.06mg/ml的胺碘酮和鹽酸萘甲唑啉，所述胺碘酮的給藥量為5mg/kg體重，將大鼠脖頸處毛發(fā)剔除，準(zhǔn)備一個口部邊沿帶彈性緊固帶的透明塑料袋，將所述透明塑料袋套在大鼠頭部，使所述透明塑料袋口部邊沿的彈性緊固帶套設(shè)在大鼠脖頸處，在透明塑料袋上設(shè)置兩個洞，其中一個洞中插入導(dǎo)氣管，所述導(dǎo)氣管另一端連接有三通閥，所述三通閥一端和抽氣泵相連，還有一端和吹氣泵相連，另一個洞中插入軟質(zhì)導(dǎo)藥管，所述導(dǎo)藥管一端和加樣槍的針頭相連，另一端和大鼠一側(cè)鼻孔相連，所述導(dǎo)氣管和導(dǎo)藥管外側(cè)壁與透明塑料袋相接處無縫貼合；在大鼠暈倒后，使大鼠呈仰臥位狀以彈力固定夾將其四肢分別固定于鼠板上，把鼠板豎起與桌面成80°夾角，然后向右傾斜與桌面成70°夾角，首先打開抽氣泵和吹氣泵，操作者一手控制三通閥，另一手控制注射器，注射器內(nèi)裝定量藥品，先讓抽氣泵和導(dǎo)氣管相通將透明塑料袋中空氣抽出，保持5s，迅速切換三通閥使吹氣泵和導(dǎo)氣管相連，與此同時(shí)，迅速推注藥品200μl進(jìn)入鼻腔內(nèi)，所述加樣槍的加樣速度為30μl/min，使藥物隨大鼠吸氣時(shí)的氣流充分進(jìn)入支氣管內(nèi)，然后吹入單側(cè)肺中，推注完畢后，保持10s，重復(fù)上述給藥步驟4次，解除鼠四肢彈力固定夾將鼠放回鼠籠內(nèi)待復(fù)蘇，給藥的過程中不時(shí)觀察小鼠的呼吸情況，給藥結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長30天，然后置于恒溫大鼠房飼養(yǎng)；然后用戊巴比妥鈉麻醉處死大鼠,迅速開胸,取出肺臟,部分用于制作組織切片,部分速凍于液氮備作羥脯氨酸含量測定。

實(shí)施例4

一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，建立方法如下：將大鼠進(jìn)行稱重，腹腔注射麻藥進(jìn)行麻醉，將其放于籠中，讓其自然暈倒，對于給藥組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于藥品，所述藥品中含有濃度分別為3mg/ml和0.03mg/ml的胺碘酮和鹽酸萘甲唑啉，所述胺碘酮的給藥量為3mg/kg體重，將大鼠脖頸處毛發(fā)剔除，準(zhǔn)備一個口部邊沿帶彈性緊固帶的透明塑料袋，將所述透明塑料袋套在大鼠頭部，使所述透明塑料袋口部邊沿的彈性緊固帶套設(shè)在大鼠脖頸處，在透明塑料袋上設(shè)置兩個洞，其中一個洞中插入導(dǎo)氣管，所述導(dǎo)氣管另一端連接有三通閥，所述三通閥一端和抽氣泵相連，還有一端和吹氣泵相連，另一個洞中插入軟質(zhì)導(dǎo)藥管，所述導(dǎo)藥管一端和加樣槍的針頭相連，另一端和大鼠一側(cè)鼻孔相連，所述導(dǎo)氣管和導(dǎo)藥管外側(cè)壁與透明塑料袋相接處無縫貼合；在大鼠暈倒后，使大鼠呈仰臥位狀以彈力固定夾將其四肢分別固定于鼠板上，首先打開抽氣泵和吹氣泵，操作者一手控制三通閥，另一手控制注射器，注射器內(nèi)裝定量藥品，先讓抽氣泵和導(dǎo)氣管相通將透明塑料袋中空氣抽出，保持4s，迅速切換三通閥使吹氣泵和導(dǎo)氣管相連，與此同時(shí)，迅速推注藥品100μl進(jìn)入鼻腔內(nèi)，所述加樣槍的加樣速度為15μl/min，使藥物隨大鼠吸氣時(shí)的氣流充分進(jìn)入支氣管內(nèi)，推注完畢后，保持5s，重復(fù)上述給藥步驟5次，將小鼠直立旋轉(zhuǎn)2min，利用體位及重力作用，盡量使藥液在兩側(cè)肺內(nèi)均勻分布，解除鼠四肢彈力固定夾將鼠放回鼠籠內(nèi)待復(fù)蘇，給藥的過程中不時(shí)觀察小鼠的呼吸情況，給藥結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長20天，然后置于恒溫大鼠房飼養(yǎng)；然后用戊巴比妥鈉麻醉處死大鼠,迅速開胸,取出肺臟,部分用于制作組織切片,部分速凍于液氮備作羥脯氨酸含量測定。

實(shí)施例5

一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，建立方法如下：將大鼠進(jìn)行稱重，腹腔注射麻藥進(jìn)行麻醉，將其放于籠中，讓其自然暈倒，對于給藥組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于藥品，所述藥品中含有濃度分別為4mg/ml和0.04mg/ml的胺碘酮和鹽酸萘甲唑啉，所述胺碘酮的給藥量為4mg/kg體重，將大鼠脖頸處毛發(fā)剔除，準(zhǔn)備一個口部邊沿帶彈性緊固帶的透明塑料袋，將所述透明塑料袋套在大鼠頭部，使所述透明塑料袋口部邊沿的彈性緊固帶套設(shè)在大鼠脖頸處，在透明塑料袋上設(shè)置兩個洞，其中一個洞中插入導(dǎo)氣管，所述導(dǎo)氣管另一端連接有三通閥，所述三通閥一端和抽氣泵相連，還有一端和吹氣泵相連，另一個洞中插入軟質(zhì)導(dǎo)藥管，所述導(dǎo)藥管一端和加樣槍的針頭相連，另一端和大鼠一側(cè)鼻孔相連，所述導(dǎo)氣管和導(dǎo)藥管外側(cè)壁與透明塑料袋相接處無縫貼合；在大鼠暈倒后，使大鼠呈仰臥位狀以彈力固定夾將其四肢分別固定于鼠板上，首先打開抽氣泵和吹氣泵，操作者一手控制三通閥，另一手控制注射器，注射器內(nèi)裝定量藥品，先讓抽氣泵和導(dǎo)氣管相通將透明塑料袋中空氣抽出，保持4s，迅速切換三通閥使吹氣泵和導(dǎo)氣管相連，與此同時(shí)，迅速推注藥品150μl進(jìn)入鼻腔內(nèi)，所述加樣槍的加樣速度為20μl/min，使藥物隨大鼠吸氣時(shí)的氣流充分進(jìn)入支氣管內(nèi)，然后吹入單側(cè)肺中，推注完畢后，保持8s，重復(fù)上述給藥步驟5次，將小鼠直立旋轉(zhuǎn)3min，利用體位及重力作用，盡量使藥液在兩側(cè)肺內(nèi)均勻分布，解除鼠四肢彈力固定夾將鼠放回鼠籠內(nèi)待復(fù)蘇，給藥的過程中不時(shí)觀察小鼠的呼吸情況，給藥結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長28天，然后置于恒溫大鼠房飼養(yǎng)；然后用戊巴比妥鈉麻醉處死大鼠,迅速開胸,取出肺臟,部分用于制作組織切片,部分速凍于液氮備作羥脯氨酸含量測定。

實(shí)施例6

一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，建立方法如下：將大鼠進(jìn)行稱重，腹腔注射麻藥進(jìn)行麻醉，將其放于籠中，讓其自然暈倒，對于給藥組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于藥品，所述藥品中含有濃度分別為5mg/ml和0.06mg/ml的胺碘酮和鹽酸萘甲唑啉，所述胺碘酮的給藥量為5mg/kg體重，將大鼠脖頸處毛發(fā)剔除，準(zhǔn)備一個口部邊沿帶彈性緊固帶的透明塑料袋，將所述透明塑料袋套在大鼠頭部，使所述透明塑料袋口部邊沿的彈性緊固帶套設(shè)在大鼠脖頸處，在透明塑料袋上設(shè)置兩個洞，其中一個洞中插入導(dǎo)氣管，所述導(dǎo)氣管另一端連接有三通閥，所述三通閥一端和抽氣泵相連，還有一端和吹氣泵相連，另一個洞中插入軟質(zhì)導(dǎo)藥管，所述導(dǎo)藥管一端和加樣槍的針頭相連，另一端和大鼠一側(cè)鼻孔相連，所述導(dǎo)氣管和導(dǎo)藥管外側(cè)壁與透明塑料袋相接處無縫貼合；在大鼠暈倒后，使大鼠呈仰臥位狀以彈力固定夾將其四肢分別固定于鼠板上，首先打開抽氣泵和吹氣泵，操作者一手控制三通閥，另一手控制注射器，注射器內(nèi)裝定量藥品，先讓抽氣泵和導(dǎo)氣管相通將透明塑料袋中空氣抽出，保持5s，迅速切換三通閥使吹氣泵和導(dǎo)氣管相連，與此同時(shí)，迅速推注藥品200μl進(jìn)入鼻腔內(nèi)，所述加樣槍的加樣速度為30μl/min，使藥物隨大鼠吸氣時(shí)的氣流充分進(jìn)入支氣管內(nèi)，然后吹入單側(cè)肺中，推注完畢后，保持10s，重復(fù)上述給藥步驟4次，將小鼠直立旋轉(zhuǎn)3min，利用體位及重力作用，盡量使藥液在兩側(cè)肺內(nèi)均勻分布，解除鼠四肢彈力固定夾將鼠放回鼠籠內(nèi)待復(fù)蘇，給藥的過程中不時(shí)觀察小鼠的呼吸情況，給藥結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長30天，然后置于恒溫大鼠房飼養(yǎng)；然后用戊巴比妥鈉麻醉處死大鼠,迅速開胸,取出肺臟,部分用于制作組織切片,部分速凍于液氮備作羥脯氨酸含量測定。

實(shí)施例7

一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，建立方法如下：將大鼠進(jìn)行稱重，腹腔注射麻藥進(jìn)行麻醉，將其放于籠中，讓其自然暈倒，對于給藥組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于藥品，所述藥品中含有濃度分別為5mg/ml和0.06mg/ml的胺碘酮和鹽酸萘甲唑啉，以及濃度為5μm的1-磷酸鞘氨醇和1μm的激動劑sew2871，所述胺碘酮的給藥量為5mg/kg體重，將大鼠脖頸處毛發(fā)剔除，準(zhǔn)備一個口部邊沿帶彈性緊固帶的透明塑料袋，將所述透明塑料袋套在大鼠頭部，使所述透明塑料袋口部邊沿的彈性緊固帶套設(shè)在大鼠脖頸處，在透明塑料袋上設(shè)置兩個洞，其中一個洞中插入導(dǎo)氣管，所述導(dǎo)氣管另一端連接有三通閥，所述三通閥一端和抽氣泵相連，還有一端和吹氣泵相連，另一個洞中插入軟質(zhì)導(dǎo)藥管，所述導(dǎo)藥管一端和加樣槍的針頭相連，另一端和大鼠一側(cè)鼻孔相連，所述導(dǎo)氣管和導(dǎo)藥管外側(cè)壁與透明塑料袋相接處無縫貼合；在大鼠暈倒后，使大鼠呈仰臥位狀以彈力固定夾將其四肢分別固定于鼠板上，首先打開抽氣泵和吹氣泵，操作者一手控制三通閥，另一手控制注射器，注射器內(nèi)裝定量藥品，先讓抽氣泵和導(dǎo)氣管相通將透明塑料袋中空氣抽出，保持5s，迅速切換三通閥使吹氣泵和導(dǎo)氣管相連，與此同時(shí)，迅速推注藥品200μl進(jìn)入鼻腔內(nèi)，所述加樣槍的加樣速度為30μl/min，使藥物隨大鼠吸氣時(shí)的氣流充分進(jìn)入支氣管內(nèi)，然后吹入單側(cè)肺中，推注完畢后，保持10s，重復(fù)上述給藥步驟3次，將小鼠直立旋轉(zhuǎn)3min，利用體位及重力作用，盡量使藥液在兩側(cè)肺內(nèi)均勻分布，解除鼠四肢彈力固定夾將鼠放回鼠籠內(nèi)待復(fù)蘇，給藥的過程中不時(shí)觀察小鼠的呼吸情況，給藥結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長30天，然后置于恒溫大鼠房飼養(yǎng)；然后用戊巴比妥鈉麻醉處死大鼠,迅速開胸,取出肺臟,部分用于制作組織切片,部分速凍于液氮備作羥脯氨酸含量測定。

實(shí)施例8

一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，建立方法如下：將大鼠進(jìn)行稱重，腹腔注射麻藥進(jìn)行麻醉，將其放于籠中，讓其自然暈倒，對于給藥組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于藥品，所述藥品中含有濃度分別為5mg/ml和0.06mg/ml的胺碘酮和鹽酸萘甲唑啉，以及濃度為8μm的1-磷酸鞘氨醇和4μm的激動劑sew2871，所述胺碘酮的給藥量為5mg/kg體重，將大鼠脖頸處毛發(fā)剔除，準(zhǔn)備一個口部邊沿帶彈性緊固帶的透明塑料袋，將所述透明塑料袋套在大鼠頭部，使所述透明塑料袋口部邊沿的彈性緊固帶套設(shè)在大鼠脖頸處，在透明塑料袋上設(shè)置兩個洞，其中一個洞中插入導(dǎo)氣管，所述導(dǎo)氣管另一端連接有三通閥，所述三通閥一端和抽氣泵相連，還有一端和吹氣泵相連，另一個洞中插入軟質(zhì)導(dǎo)藥管，所述導(dǎo)藥管一端和加樣槍的針頭相連，另一端和大鼠一側(cè)鼻孔相連，所述導(dǎo)氣管和導(dǎo)藥管外側(cè)壁與透明塑料袋相接處無縫貼合；在大鼠暈倒后，使大鼠呈仰臥位狀以彈力固定夾將其四肢分別固定于鼠板上，首先打開抽氣泵和吹氣泵，操作者一手控制三通閥，另一手控制注射器，注射器內(nèi)裝定量藥品，先讓抽氣泵和導(dǎo)氣管相通將透明塑料袋中空氣抽出，保持5s，迅速切換三通閥使吹氣泵和導(dǎo)氣管相連，與此同時(shí)，迅速推注藥品200μl進(jìn)入鼻腔內(nèi)，所述加樣槍的加樣速度為30μl/min，使藥物隨大鼠吸氣時(shí)的氣流充分進(jìn)入支氣管內(nèi)，然后吹入單側(cè)肺中，推注完畢后，保持10s，重復(fù)上述給藥步驟3次，將小鼠直立旋轉(zhuǎn)3min，利用體位及重力作用，盡量使藥液在兩側(cè)肺內(nèi)均勻分布，解除鼠四肢彈力固定夾將鼠放回鼠籠內(nèi)待復(fù)蘇，給藥的過程中不時(shí)觀察小鼠的呼吸情況，給藥結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長30天，然后置于恒溫大鼠房飼養(yǎng)；然后用戊巴比妥鈉麻醉處死大鼠,迅速開胸,取出肺臟,部分用于制作組織切片,部分速凍于液氮備作羥脯氨酸含量測定。

實(shí)施例9

一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，建立方法如下：將大鼠進(jìn)行稱重，腹腔注射麻藥進(jìn)行麻醉，將其放于籠中，讓其自然暈倒，對于給藥組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于藥品，所述藥品中含有濃度分別為5mg/ml和0.06mg/ml的胺碘酮和鹽酸萘甲唑啉，以及濃度為10μm的1-磷酸鞘氨醇和5μm的激動劑sew2871，所述胺碘酮的給藥量為5mg/kg體重，將大鼠脖頸處毛發(fā)剔除，準(zhǔn)備一個口部邊沿帶彈性緊固帶的透明塑料袋，將所述透明塑料袋套在大鼠頭部，使所述透明塑料袋口部邊沿的彈性緊固帶套設(shè)在大鼠脖頸處，在透明塑料袋上設(shè)置兩個洞，其中一個洞中插入導(dǎo)氣管，所述導(dǎo)氣管另一端連接有三通閥，所述三通閥一端和抽氣泵相連，還有一端和吹氣泵相連，另一個洞中插入軟質(zhì)導(dǎo)藥管，所述導(dǎo)藥管一端和加樣槍的針頭相連，另一端和大鼠一側(cè)鼻孔相連，所述導(dǎo)氣管和導(dǎo)藥管外側(cè)壁與透明塑料袋相接處無縫貼合；在大鼠暈倒后，使大鼠呈仰臥位狀以彈力固定夾將其四肢分別固定于鼠板上，首先打開抽氣泵和吹氣泵，操作者一手控制三通閥，另一手控制注射器，注射器內(nèi)裝定量藥品，先讓抽氣泵和導(dǎo)氣管相通將透明塑料袋中空氣抽出，保持5s，迅速切換三通閥使吹氣泵和導(dǎo)氣管相連，與此同時(shí)，迅速推注藥品200μl進(jìn)入鼻腔內(nèi)，所述加樣槍的加樣速度為30μl/min，使藥物隨大鼠吸氣時(shí)的氣流充分進(jìn)入支氣管內(nèi)，然后吹入單側(cè)肺中，推注完畢后，保持10s，重復(fù)上述給藥步驟4次，將小鼠直立旋轉(zhuǎn)3min，利用體位及重力作用，盡量使藥液在兩側(cè)肺內(nèi)均勻分布，解除鼠四肢彈力固定夾將鼠放回鼠籠內(nèi)待復(fù)蘇，給藥的過程中不時(shí)觀察小鼠的呼吸情況，給藥結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長30天，然后置于恒溫大鼠房飼養(yǎng)；然后用戊巴比妥鈉麻醉處死大鼠,迅速開胸,取出肺臟,部分用于制作組織切片,部分速凍于液氮備作羥脯氨酸含量測定。

對照組

將大鼠進(jìn)行稱重，腹腔注射麻藥進(jìn)行麻醉，將其放于籠中，讓其自然暈倒，對于對照組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于和實(shí)施例6中藥品等體積的0.9％氯化鈉注射液，將大鼠脖頸處毛發(fā)剔除，準(zhǔn)備一個口部邊沿帶彈性緊固帶的透明塑料袋，將所述透明塑料袋套在大鼠頭部，使所述透明塑料袋口部邊沿的彈性緊固帶套設(shè)在大鼠脖頸處，在透明塑料袋上設(shè)置兩個洞，其中一個洞中插入導(dǎo)氣管，所述導(dǎo)氣管另一端連接有三通閥，所述三通閥一端和抽氣泵相連，還有一端和吹氣泵相連，另一個洞中插入軟質(zhì)導(dǎo)藥管，所述導(dǎo)藥管一端和加樣槍的針頭相連，另一端和大鼠一側(cè)鼻孔相連，所述導(dǎo)氣管和導(dǎo)藥管外側(cè)壁與透明塑料袋相接處無縫貼合；在大鼠暈倒后，使大鼠呈仰臥位狀以彈力固定夾將其四肢分別固定于鼠板上，首先打開抽氣泵和吹氣泵，操作者一手控制三通閥，另一手控制注射器，注射器內(nèi)裝定量氯化鈉注射液，先讓抽氣泵和導(dǎo)氣管相通將透明塑料袋中空氣抽出，保持5s，迅速切換三通閥使吹氣泵和導(dǎo)氣管相連，與此同時(shí)，迅速推注氯化鈉注射液200μl進(jìn)入鼻腔內(nèi)，所述加樣槍的加樣速度為30μl/min，使氯化鈉注射液隨大鼠吸氣時(shí)的氣流充分進(jìn)入支氣管內(nèi)，然后吹入單側(cè)肺中，推注完畢后，保持10s，重復(fù)上述給樣步驟4次，將小鼠直立旋轉(zhuǎn)3min，利用體位及重力作用，盡量使氯化鈉注射液在兩側(cè)肺內(nèi)均勻分布，解除鼠四肢彈力固定夾將鼠放回鼠籠內(nèi)待復(fù)蘇，給樣的過程中不時(shí)觀察小鼠的呼吸情況，給樣結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長30天，然后置于恒溫大鼠房飼養(yǎng)；然后用戊巴比妥鈉麻醉處死大鼠,迅速開胸,取出肺臟,部分用于制作組織切片,部分速凍于液氮備作羥脯氨酸含量測定。

ct掃描

將實(shí)施例1-3和對照組處理過的兩組大鼠飼養(yǎng)28天后進(jìn)行ct觀察記錄肺部變化。用3％戊巴比妥0.3ml/100g腹腔注射進(jìn)行麻醉，然后通過高分辨率ct進(jìn)行掃描觀察肺部變化，最佳的掃描條件：層厚0.67mm，120kv，300mas，掃描結(jié)果顯示：對照組和實(shí)施例1-3組右肺的ct圖，肺部無明顯異常；而實(shí)施例1-3組的ct圖，左肺部內(nèi)有蜂窩狀陰影和磨玻璃影，具有典型的肺纖維化特征。

將實(shí)施例4-6和對照組處理過的兩組大鼠飼養(yǎng)28天后進(jìn)行ct觀察記錄肺部變化。用3％戊巴比妥0.3ml/100g腹腔注射進(jìn)行麻醉，然后通過高分辨率ct進(jìn)行掃描觀察肺部變化，最佳的掃描條件：層厚0.67mm，120kv，300mas，掃描結(jié)果顯示：對照組的ct圖，肺部無明顯異常；而實(shí)施例4-6組的ct圖，肺部內(nèi)有蜂窩狀陰影和磨玻璃影，具有典型的肺纖維化特征。

病理切片鑒定(he染色)

將實(shí)施例1-3和對照組處理過的兩組大鼠飼養(yǎng)28天后，脫臼處死大鼠，取下大鼠兩側(cè)肺部組織，一部分放進(jìn)10％福爾馬林固定液固定進(jìn)行病理鑒定，一部分發(fā)到超低溫冰箱保存進(jìn)行羥脯氨酸含量測定。結(jié)果顯示：對照組肺部和實(shí)施例1-3組的大鼠右肺部：肺泡大小均勻，肺泡分布均勻，肺泡內(nèi)未見炎癥細(xì)胞侵潤和成纖維細(xì)胞增生，而實(shí)施例1-3組的大鼠左肺部明顯可見融合形成較大的肺泡或肺泡結(jié)構(gòu)消失，有大量的成纖維細(xì)胞和纖維組織增生，炎性細(xì)胞侵潤明顯，具有明顯纖維化癥狀。

將實(shí)施例4-6和對照組處理過的兩組大鼠飼養(yǎng)28天后，脫臼處死大鼠，取下大鼠兩側(cè)肺部組織，一部分放進(jìn)10％福爾馬林固定液固定進(jìn)行病理鑒定，一部分發(fā)到超低溫冰箱保存進(jìn)行羥脯氨酸含量測定。結(jié)果顯示：對照組肺部：肺泡大小均勻，肺泡分布均勻，肺泡內(nèi)未見炎癥細(xì)胞侵潤和成纖維細(xì)胞增生，而實(shí)施例4-6組的大鼠肺部明顯可見融合形成較大的肺泡或肺泡結(jié)構(gòu)消失，有大量的成纖維細(xì)胞和纖維組織增生，炎性細(xì)胞侵潤明顯，具有明顯纖維化癥狀。

羥脯氨酸含量測定

羥脯氨酸是膠原纖維中特有的一類氨基酸，測定肺部羥脯氨酸含量可以換算出膠原蛋白的含量，以判斷肺纖維化程度，按羥脯氨酸檢測試劑盒說明書方法測定培養(yǎng)基中羥脯氨酸含量，在酶標(biāo)儀540nm處測定a值，樣品中羥脯氨酸質(zhì)量濃度(mg/l培養(yǎng)基)＝測定管a值×標(biāo)準(zhǔn)管濃度/標(biāo)準(zhǔn)液a值。

從上表數(shù)據(jù)可知通過在鼻腔給藥時(shí)把鼠板豎起與桌面成70-80°夾角，然后向右傾斜與桌面成60-70°夾角，將藥品吹入單側(cè)肺中，為實(shí)現(xiàn)在同一個體上評價(jià)藥物治療肺纖維化的同時(shí)對正常肺部的毒性研究，肺纖維化和正常肺部組織基因表達(dá)譜分析、肺部代償性增生的誘導(dǎo)機(jī)制等提供可靠的大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/p>

從上標(biāo)數(shù)據(jù)可以看出在藥品中加入濃度為5-10μm的1-磷酸鞘氨醇和1-5μm的激動劑sew2871，能夠有效促進(jìn)胺碘酮致肺纖維化進(jìn)程。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅局限于上述實(shí)施例，凡屬于本發(fā)明思路下的技術(shù)方案均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理前提下的若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。