本發(fā)明涉及一種醫(yī)藥制劑及其制備方法，特別是涉及一種載vegf抗體的眼用溫敏水凝膠植入劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

糖尿病視網(wǎng)膜?。╠iabeticretinopathy,dr）是糖尿病常見和嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一，是成人后天性致盲的主要原因。dr的特點(diǎn)是新生血管形成，視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生是新生血管形成的前提。目前治療此類疾病的方法主要有激光光凝術(shù)、光動力療法、玻璃體切割術(shù)等，但這些治療方法都無法從根本上解決新生血管生成的問題。

近年來，隨著“血管內(nèi)皮生長因子(vegf)是新生血管形成的重要啟動因子”這一理論出現(xiàn)并被驗(yàn)證，采用抗vegf單抗藥物治療新生血管性眼病取得了令人驚喜的效果。然而該方法的主要缺陷是單抗藥物在眼內(nèi)滯留時(shí)間不可控，其在玻璃體內(nèi)的半衰期短（約3-5天），藥物代謝快，需每4-6周進(jìn)行1次重復(fù)注射，增加了由眼內(nèi)注射這一有創(chuàng)操作引起的并發(fā)癥發(fā)生機(jī)率。

溫敏水凝膠，可以隨著溫度的變化，其體積或狀態(tài)發(fā)生劇烈的變化，比如體積發(fā)生十倍以上變化，或體系從液態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楣虘B(tài)、從固態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)橐簯B(tài)等，從而在靶部位釋放出承載的藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種載vegf抗體的眼用溫敏水凝膠植入劑及其制備方法，本發(fā)明使抗vegf單抗藥物緩慢釋放，且相對無創(chuàng)的方法，將抗vegf單抗藥物與凝膠均勻混合后制成一種在體外時(shí)呈液態(tài)，注射入眼球后迅速轉(zhuǎn)化為半固態(tài)的一種凝膠體系，使藥物通過注射的方式到達(dá)眼后端，達(dá)到局部緩慢釋放的作用。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種載vegf抗體的眼用溫敏水凝膠植入劑，所述植入劑用于眼部注射用溫敏水凝膠，溫敏性水凝膠的相變溫度為34℃~35℃；溫敏性水凝膠選自溫敏性nipaam水凝膠，載vegf抗體；溫敏性水凝膠溶液的質(zhì)量濃度為10%~20%。

一種載vegf抗體的眼用溫敏水凝膠植入劑制備方法，所述眼用溫敏水凝膠植入劑包括vegf抗體的聚n-異丙基丙烯酰胺（nipaam）水凝膠緩釋系統(tǒng)的制備，包括以下過程：

1）聚n-異丙基丙烯酰胺水凝膠的合成

取單體nipaam和交聯(lián)劑n,n'-亞甲雙丙烯酰胺(質(zhì)量比為99∶1)溶解在4ml去離子水中，混合均勻，通氮?dú)?0min，加12mg引發(fā)劑過二硫酸銨，再加入20μl加聚劑四甲基乙二胺，25℃聚合6h，即得水凝膠；所得凝膠在室溫下用去離子水浸泡3d，每隔一段時(shí)間更換去離子水以除去未反應(yīng)的單體等；將得到的凝膠切成均勻的圓片，在真空干燥箱內(nèi)60℃干燥至恒重；

2）vegf單抗的聚n-異丙基丙烯酰胺水凝膠緩釋系統(tǒng)的制備

稱取200mgnipaam水凝膠粉末置于1.5ml平衡鹽溶液量筒中，快速攪拌2min，使粉末充分溶解成混合液，將混合液放入60°c水箱中水浴5min后冷卻，成膠溶狀態(tài)時(shí)加入vegf單抗33mg，后放入冰水中冰浴5min，得到可注射vegf單抗水凝膠緩釋系統(tǒng)，即眼用溫敏水凝膠植入劑。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)與效果是：

本發(fā)明制劑不僅可以準(zhǔn)確地定位于病發(fā)部位，減少副作用，而且可以減少疾病給病人帶來的危害，水凝膠可以用于維持體內(nèi)的血藥濃度，對癥狀起到一個長時(shí)間治療的作用。

本發(fā)明溫敏性水凝膠的相變溫度為34℃~35℃。這種制劑不僅可以減少注射的次數(shù)，減少病人對藥物的依賴性，而且可減少血藥濃度的波動，使血藥濃度長時(shí)間穩(wěn)定于治療濃度，使其發(fā)揮緩釋和局部起效的作用，從而提高藥物的療效，增加患者的順應(yīng)性。

附圖說明

圖1為pnipaam凝膠的平衡溶脹比隨溫度的變化關(guān)系圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。

本發(fā)明包括，1、聚n-異丙基丙烯酰胺水凝膠的合成；2、vegf抗體的聚n-異丙基丙烯酰胺（nipaam）水凝膠緩釋系統(tǒng)的制備：稱取200mgnipaam水凝膠粉末置于1.5ml平衡鹽溶液（bss）量筒中，快速攪拌2min，使粉末充分溶解成混合液，將混合液放入60°c水箱中水浴5min后冷卻，成膠溶狀態(tài)時(shí)加入vegf抗體25mg，后放入冰水中冰浴5min，得到可注射凝膠狀的vegf抗體水凝膠緩釋系統(tǒng)。

一、vegf單抗的聚n-異丙基丙烯酰胺（nipaam）水凝膠緩釋系統(tǒng)的制備

1、聚n-異丙基丙烯酰胺水凝膠的合成

取單體nipaam和交聯(lián)劑bis(質(zhì)量比為99∶1)溶解在4ml去離子水中，混合均勻，通n230min，加12mg引發(fā)劑aps，再加入20μl加聚劑temed，25℃聚合6h，即得水凝膠。所得凝膠在室溫下用去離子水浸泡3d，每隔一段的時(shí)間更換去離子水以除去未反應(yīng)的單體等。將得到的凝膠切成均勻的圓片，在真空干燥箱內(nèi)60℃干燥至恒重。

2、vegf單抗的聚n-異丙基丙烯酰胺（nipaam）水凝膠緩釋系統(tǒng)的制備

稱取200mgnipaam水凝膠粉末置于1.5ml平衡鹽溶液（bss）量筒中，快速攪拌2min，使粉末充分溶解成混合液，將混合液放入60°c水箱中水浴5min后冷卻，成膠溶狀態(tài)時(shí)加入vegf抗體33mg，后放入冰水中冰浴5min，得到可注射凝膠狀的vegf抗體的水凝膠緩釋系統(tǒng)。

二、平衡溶脹比的測定

準(zhǔn)確稱取干凝膠，置于某一特定溫度下的去離子水中使其充分溶脹，用濾紙吸去凝膠表面的水，稱重。

某一溫度下的平衡溶脹比(sr)為:sr=ws/wd。

式中:ws為凝膠中水的質(zhì)量(溶脹凝膠質(zhì)量－干凝膠質(zhì)量)，wd為干凝膠質(zhì)量。

平衡溶脹比隨溫度的變化關(guān)系是評價(jià)凝膠溫敏性能的重要參數(shù)。圖1為pnipaam水凝膠在去離子水中平衡溶脹比隨溫度變化的關(guān)系曲線?？梢?，凝膠的平衡溶脹比隨溫度的升高呈下降趨勢，表明凝膠具有明顯的熱縮溫敏特性。當(dāng)溫度升高到33℃附近時(shí)，凝膠的平衡溶脹比急劇下降，表明凝膠發(fā)生了顯著的體積相變，此溫度被認(rèn)為即是pnipaam凝膠的lcst。這是因?yàn)楫?dāng)溫度低于lcst時(shí)，凝膠中的酰胺鏈(—conh—)能與水分子形成分子間氫鍵，導(dǎo)致膠的鏈伸展開來而溶脹;當(dāng)溫度高于lcst時(shí)，凝膠中酰胺鏈與水分子間的氫鍵及相鄰酰胺鏈之間的分子內(nèi)氫鍵斷開，從而把水排出聚合物網(wǎng)絡(luò)?？梢妶D1pnipaam凝膠的平衡溶脹比隨溫度的變化關(guān)系圖。

三、vegf抗體活性的檢測

使用elisa試劑盒檢測抗體的活性。參照試劑盒中說明書的方法進(jìn)行。按公式計(jì)算載入水凝膠緩釋系統(tǒng)后抗體活性的保存率：

抗體活性的保存率（%）=聚n-異丙基丙烯酰胺水凝膠中vegf抗體的od/同濃度vegf抗體水溶液的od×100。

結(jié)果如表1顯示，與同濃度單抗的活性相比，水凝膠的抗體活性保存率在85%以上。表明，水凝膠較好地保留了vegf抗體的活性。

表1：vegf抗體載入水凝膠植入劑后的活性保存率

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