本發(fā)明涉及一種肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑，尤其是一種影響肺部腫瘤細(xì)胞增殖的菌株——恥垢分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)，屬于微生物學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

恥垢分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)是一種抗酸分枝桿菌，它與結(jié)核分枝桿菌共享超過2000個(gè)同源染色體，具有與結(jié)核分枝桿菌及其它分枝桿菌相同的獨(dú)特細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)。這些特性使恥垢分枝桿菌成為研究結(jié)核分枝桿菌和其它致病性分枝桿菌的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀u垢分枝桿菌本身具有快速生長(zhǎng)和非致病性等特點(diǎn)，與特殊致病分枝桿菌(如結(jié)核分枝桿菌)相比，恥垢分枝桿菌可以誘導(dǎo)機(jī)體更強(qiáng)大的固有免疫反應(yīng)，從而易被宿主殺傷并清除。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明首先提供了一種抗肺部腫瘤的藥物或抑制劑，其特征在于，其有效成分是以下(a)或(b)：

(a)恥垢分枝桿菌(M.smegmatis)；

(b)在恥垢分枝桿菌的基礎(chǔ)上進(jìn)行蛋白、基因等水平上進(jìn)行改造的且仍具有抗肺部腫瘤活性的恥垢分枝桿菌重組菌株。

本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)證明：(1)M.smegmatis感染顯著抑制人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的增殖。CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：M.smegmatis感染A549細(xì)胞24小時(shí)后，A549細(xì)胞數(shù)量較未感染細(xì)胞減少，并隨著感染時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞數(shù)量差異逐漸明顯。(2)M.smegmatis感染顯著抑制人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的遷移能力；細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)證明M.smegmatis感染A549細(xì)胞12小時(shí)后，發(fā)生遷移的細(xì)胞數(shù)量遠(yuǎn)低于未感染細(xì)胞。(3)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明M.smegmatis感染后的A549細(xì)胞較未感染細(xì)胞成瘤能力明顯減弱，成瘤較??；并進(jìn)一步對(duì)腫瘤組織進(jìn)行Ki-67免疫組化和HE染色，結(jié)果顯示M.smegmatis感染過的腫瘤組織Ki-67蛋白水平顯著降低，說明細(xì)胞的增殖能力減弱。

本發(fā)明成果可以用來開發(fā)治療肺部腫瘤的藥物，或用于輔助篩選能夠治療肺癌的藥物，并為針對(duì)肺癌的免疫療法研究提供指導(dǎo)。

附圖說明

圖1：M.smegmatis抑制A549細(xì)胞的增殖。

圖2：M.smegmatis抑制A549細(xì)胞的侵襲能力。

圖3：M.smegmatis對(duì)A549腫瘤的形成有抑制作用；(A)腫瘤照片，(B)腫瘤體積。

圖4：M.smegmatis抑制A549腫瘤組織的增殖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1 M.smegmatis對(duì)人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞增殖的影響

(A)實(shí)驗(yàn)方法：用恥垢分枝桿菌(M.smegmatis mc² 155)和卡介苗(BCG)分別感染A549細(xì)胞(MOI＝10)，未感染細(xì)胞(Non-infected)和BCG感染細(xì)胞作為對(duì)照組。通過CCK-8實(shí)驗(yàn)對(duì)比感染不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞增殖能力變化來分析M.smegmati對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響。

(B)結(jié)果：如圖1所示，M.smegmatis感染A549細(xì)胞24小時(shí)后，細(xì)胞數(shù)量較未感染細(xì)胞減少，并隨著感染時(shí)間延長(zhǎng)差異逐漸明顯。相反，BCG不會(huì)抑制A549細(xì)胞的增殖，反而具有一定的促進(jìn)作用，BCG感染A549細(xì)胞24小時(shí)后，細(xì)胞數(shù)量較未感染細(xì)胞略增多，并隨著感染時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞數(shù)量差異逐漸明顯。

實(shí)施例2 M.smegmatis對(duì)人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞遷移能力的影響

(A)實(shí)驗(yàn)方法：用M.smegmatis mc² 155和BCG分別感染A549細(xì)胞(MOI＝10)，未感染細(xì)胞和BCG感染細(xì)胞作為對(duì)照組。通過細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)(transwell)對(duì)比A549細(xì)胞被感染12小時(shí)后，發(fā)生遷移的細(xì)胞數(shù)量的差別。

(B)結(jié)果：如圖2所示，M.smegmatis感染A549細(xì)胞12小時(shí)后，發(fā)生遷移的細(xì)胞數(shù)量較未感染細(xì)胞顯著減少。相反，BCG對(duì)A549細(xì)胞的遷移能力沒有抑制反而具有一定的促進(jìn)作用，BCG感染A549細(xì)胞12小時(shí)后，發(fā)生遷移的細(xì)胞數(shù)量較未感染細(xì)胞略多。

實(shí)施例3 M.smegmatis對(duì)人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞成瘤能力的影響

(A)實(shí)驗(yàn)方法：(1)用M.smegmatis和BCG分別感染A549細(xì)胞(MOI＝10)，未感染細(xì)胞和BCG感染細(xì)胞作為對(duì)照組。感染2小時(shí)后更換細(xì)胞培養(yǎng)基，并在新鮮培養(yǎng)基中加入終濃度10μg/ml的慶大霉素培養(yǎng)細(xì)胞過夜。次日去掉細(xì)胞培養(yǎng)基，1×PBS洗滌2遍，加入胰酶消化并離心收集細(xì)胞，1×PBS重懸并洗滌細(xì)胞3次充分去掉殘留的胰酶，離心并收集細(xì)胞并用1×PBS將細(xì)胞重懸成濃度為5×10⁷個(gè)/毫升的細(xì)胞懸液，置于冰上用于皮下注射。(2)出生8周BALB/c裸鼠腋下分別接種200微升細(xì)胞懸液(M.smegmatis感染、BCG感染及未感染三種細(xì)胞系，每種細(xì)胞系接種五只)，2周后處死小鼠，量取腫瘤大小、拍照并制作切片進(jìn)行病理學(xué)觀察。

(B)結(jié)果：如圖3、4所示，裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)表明M.smegmatis感染后的A549細(xì)胞較未感染細(xì)胞成瘤能力明顯減弱，成瘤較小(圖3)；并進(jìn)一步對(duì)腫瘤組織進(jìn)行Ki-67免疫組化和HE染色，結(jié)果顯示Ki-67蛋白水平顯著降低，說明細(xì)胞的增殖能力減弱。相反，BCG感染后的A549細(xì)胞成瘤能力沒有減弱反而增強(qiáng)。

雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例公開如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動(dòng)與修飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書所界定的為準(zhǔn)。