本發(fā)明涉及一種腫瘤治療領(lǐng)域，尤其涉及五谷蟲制品用于制備治療結(jié)腸癌的藥品、保健品或食品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
五谷蟲為麗蠅科(Calliphoridae)昆蟲大頭金蠅(ChrysomyiamegacephalaFab.)或其他近緣昆蟲的干燥幼蟲體，在古代醫(yī)書中就有記載，用于治療小兒疳積、膿包瘡。
目前記載五谷蟲具有以下藥理作用：1.平喘作用，五谷蟲所含的總氨基酸是平喘的有效成分；2.對腸平滑的作用，五谷蟲乙醇提取物和五谷蟲總氨基酸粗提取物對組胺所致離體家兔和豚鼠的回腸平滑肌痙攣均有明顯的爭痙作用；3.毒性，五谷蟲的毒性很小。
中國發(fā)明專利申請(申請?zhí)朇N200510060277.4申請日2005.08.04)一種具有抗腫瘤生物活性蠅蛆的養(yǎng)殖方法。養(yǎng)殖的蠅蛆經(jīng)過國家新藥篩選中心幾年來多次檢測有對肝癌、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、肺癌、胃癌、等腫瘤細(xì)胞生長有很強(qiáng)的抑制率，其抗腫瘤生物活性都在75％～97％。
中國發(fā)明專利申請(申請?zhí)朇N200710067951.0申請日2007.04.10)公開了一類抗腫瘤化合物，該組份從外源物質(zhì)誘導(dǎo)的蠅蛆中提取、分離獲得，具有抑制人原髓細(xì)胞白血病HL－60和人肺腺癌A549細(xì)胞增殖生長的作用。
中國發(fā)明專利申請(申請?zhí)朇N201310223817.0申請日2013.06.06)公開了一種五谷蟲抗腫瘤新用途，通過五谷蟲抑制小鼠腫瘤重量的作用來表現(xiàn)，五谷蟲能抑制腫瘤細(xì)胞的生長，對腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用，能夠在制備抗腫瘤藥物或保健品中應(yīng)用，具體公開了小鼠肉瘤S180的生長抑制。
結(jié)腸癌是常見的發(fā)生于結(jié)腸部位的消化道惡性腫瘤，好發(fā)于直腸與乙狀結(jié)腸交界處，以40～50歲年齡組發(fā)病率最高，男女之比為2～3：1。發(fā)病率占胃腸道腫瘤的第3位。結(jié)腸癌主要為腺癌、黏液腺癌、未分化癌。大體形態(tài)呈息肉狀、潰瘍型等。結(jié)腸癌可沿腸壁環(huán)行發(fā)展，沿腸管縱徑上下蔓延或向腸壁深層浸潤，除經(jīng)淋巴管、血流轉(zhuǎn)移和局部侵犯外，還可向腹腔內(nèi)種植或沿縫線、切口面擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。慢性結(jié)腸炎患者、結(jié)腸息肉患者、男性肥胖者等為易感人群。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的第一個目的是提供五谷蟲制品用于制備治療結(jié)腸癌的藥品中的應(yīng)用。
本發(fā)明的第二個目的是提供五谷蟲制品用于制備抑制結(jié)腸癌的保健品中的應(yīng)用。
本發(fā)明的第二個目的是提供五谷蟲制品用于制備抑制結(jié)腸癌的食品中的應(yīng)用。
作為優(yōu)選，上述的五谷蟲制品為五谷蟲干粉和\或五谷蟲提取物以及五谷蟲干粉和\或五谷蟲提取物制備的制劑。
作為再優(yōu)選，所述的制劑為膠囊劑、片劑、丸劑、散劑、復(fù)方顆粒劑、保健酒、蛋白粉、口服液或凍干粉。
作為優(yōu)選，上述的五谷蟲提取物包括五谷蟲全蟲或五谷蟲干粉的水提取物和有機(jī)溶劑提取物中的一種或多種。
作為再優(yōu)選，所述的有機(jī)溶劑提取物中的有機(jī)溶劑包括乙醇、石油醚或己烷中的一種或多種。
本發(fā)明的五谷蟲制品為一種天然的產(chǎn)品，五谷蟲制品有效成分是五谷蟲全蟲，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明：五谷蟲中含蛋白質(zhì)、脂肪、幾丁聚糖、含抗菌肽以及18種氨基酸。本發(fā)明的五谷蟲干粉中包括了五谷蟲全蟲的所有有效成分，五谷蟲提取物主要是以脂肪酸和/或蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸等。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，五谷蟲制品可以有效抑制結(jié)腸癌生長，且五谷蟲制品不具有臨床上常用的化療藥的耐藥及其毒副作用。
具體實施方式
實施例1
1、種蠅選擇
動物學(xué)鑒定：麗蠅科Calliphoridae昆蟲大頭金蠅Chrysomyia megacephala(Fab.)。成蠅體長8～11毫米，綠藍(lán)色、頭部寬，頂部黑色；復(fù)眼大，深紅色，額中條褐紅色，顏和頰部橙黃色，觸角及小顎須褐色。胸、腹部綠藍(lán)色，帶有紫色光澤。第1腹節(jié)及第2，3腹節(jié)后緣黑色。雌蠅的額部及中條在中部處向外側(cè)略為凸出。雄蠅復(fù)眼上部2/3有大形的小眼面，下方1/3則為小形的小眼面，二者界面清晰。前胸氣門黑色，中胸氣門淺褐色；有氣門。腋瓣帶棕色，上有小毛。幼蟲成熟時黃白色，前端尖細(xì)，后端截平。體節(jié)14，頭部1節(jié)，胸部3節(jié)，腹部10節(jié)，但通常只見8節(jié)。體表由小棘形成的環(huán)。后氣門略高出表面，較扁于上方，氣門環(huán)不完全；后氣門間距不大于后氣門的橫徑；第1氣門裂垂直形；前氣門具有10—13個指狀突。
2、種蠅采集
(1)種蠅箱的制作：可以選用木質(zhì)、玻璃、陶瓷制作，圓形或長方形均可，頂部留一個直徑25厘米的口，并制作一個用透氣的網(wǎng)狀蓋，以防種蠅逃逸。
(2)種蠅飼料配置：奶粉+紅糖，1:1混合，加15％的水調(diào)和，放置于種蠅箱內(nèi)。
(3)打開種蠅箱網(wǎng)狀蓋，置于28--38攝氏度，濕度小于65％的環(huán)境內(nèi)。
讓外界的大頭金蠅進(jìn)入箱內(nèi)覓食，對不符合要求的蠅種進(jìn)行分揀丟棄，并蓋上網(wǎng)狀蓋，使其滯留于種蠅箱內(nèi)覓食、產(chǎn)卵。
3、養(yǎng)殖硬件與養(yǎng)殖飼料
(1)蠅房建造：按養(yǎng)殖規(guī)模，可以選用磚石，玻璃、塑料、鋼架結(jié)構(gòu)材料，離地面2米左右的墻體上間隔1.5--2米設(shè)置通風(fēng)窗，為防止其他蒼蠅或昆蟲進(jìn)入，宜設(shè)有紗窗與外界隔離，在養(yǎng)殖箱上方一米制成可活動的通風(fēng)管道，便于廢氣收集，防止異味散發(fā)污染環(huán)境，廢氣統(tǒng)一通過臭氧除臭裝置處理后排出。為防止蠅種進(jìn)入廢氣收集管道，宜在各進(jìn)氣口設(shè)置紗窗隔斷。
(2)養(yǎng)殖箱制作：可以選用木質(zhì)、陶瓷、水泥材料，制成長方形箱體，底部設(shè)置止水密封裝置，箱體上方留一個直徑30--40厘米的圓孔，即可。各養(yǎng)殖箱下方設(shè)有污水收集通道，統(tǒng)一進(jìn)入污水池處理后排放。
(3)保溫：為符合養(yǎng)殖產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)化要求，可以附設(shè)加溫、降溫設(shè)施。在炎熱時季可在蠅房頂面設(shè)置防嗮遮陽設(shè)施。
(4)養(yǎng)殖飼料：豬內(nèi)臟、淡水魚、牛蛙、奶粉、蜂蜜。
4、養(yǎng)殖工藝步驟
(1)蠅種：采集的蠅種移植到提前一天放有淡水魚的種蠅箱內(nèi)，培養(yǎng)2天，待其在箱內(nèi)產(chǎn)卵。
(2)收集蠅卵：待種蠅在蠅種箱內(nèi)產(chǎn)卵，即可將蠅卵收集，轉(zhuǎn)移到加有飼料的蠅房養(yǎng)殖箱內(nèi)進(jìn)行孵化、養(yǎng)殖，飼料和蠅卵的比例為每5克蠅卵，加入15公斤的飼料。
(3)孵化養(yǎng)殖：蠅卵孵化后，即可在養(yǎng)殖箱內(nèi)獲得所需的飼料，一般需要72小時，蟲體長到長度1--1.2厘米，直徑2.5--3毫米時。
(4)活性催化：在養(yǎng)殖箱內(nèi)加入用200毫升預(yù)配的5％蔗糖(w/w)水溶液和1％的超氧化物歧化酶(LA-SOD)(酶系活力大于300萬單位/克)500毫升，2小時后取出活體五谷蟲，用清水反復(fù)沖洗干凈，即刻放入—38攝氏度以下的冰柜內(nèi)速凍。
(5)清洗干燥：低溫速凍兩天后，取出，在清水中融化，再仔細(xì)清洗，瀝干水分，使用真空低溫干燥設(shè)備干燥到水分含量低于10％。
試驗例1
一、實驗?zāi)康?/p>
評價五谷蟲全蟲粉對人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29的體外抗腫瘤作用。
二、主要實驗儀器與材料
1.主要儀器
可調(diào)波長式微孔板酶標(biāo)儀。
2.主要試劑
五谷蟲整體物，本公司培養(yǎng)；DMEM高糖完全液體培養(yǎng)基，購自南京凱基生物公司；MTT.三、實驗方法和步驟
實驗方法:
MTT原理:MTT，一種黃顏色的染料?；罴?xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶能夠代謝還原MTT，同時在細(xì)胞色素C的作用下，生成藍(lán)色(或藍(lán)紫色)不溶于水的甲臜(Formazan)，甲臜的多少可以用酶標(biāo)儀在490nm處進(jìn)行測定。在通常情況下，甲臜生成量與活細(xì)胞數(shù)成正比，因此可根據(jù)光密度OD值推測出活細(xì)胞的數(shù)目。由于死細(xì)胞中不含琥珀酸脫氫酶，因此加入MTT不會有反應(yīng)。
實驗步驟：
五谷蟲樣品處理。以1:5的比例，蒸餾水10攝氏度浸泡24小時，過濾去渣，每毫升相當(dāng)于原料樣品0.2克，備用。
1:收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入150ul,鋪板使待測細(xì)胞調(diào)密度1*105/孔，(邊緣孔用無菌PBS填充)。
2:5％CO2，37℃孵育，至細(xì)胞單層鋪滿孔底(96孔平底板),加入3個濃度梯度的藥物(分段提取化合物為0.063mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml；整體化合物為0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml),每孔50ul,設(shè)3個復(fù)孔.同時零孔(培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜)，對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)；5％CO2，37℃孵育48小時，倒置顯微鏡下觀察。
3:每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)4h；終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液每孔加入150ul二甲基亞砜，置搖床上振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。
4：按下列公式計算被測化合物對癌癥細(xì)胞生長的抑制率。
抑制率＝(1-對照組OD值/給藥組OD值)×100％
四、實驗結(jié)果：
表一：各被測整體物對HT-29細(xì)胞生長的抑制率
本次MTT實驗檢測結(jié)果表明：整體物樣品對人結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制生長作用都很明顯。
試驗例2
王**，性別:女，年齡：31，住址：長興。
2010年3月份患者因出現(xiàn)間斷性全腹隱痛，疼痛部位不定，右下腹有腫塊。遂前往醫(yī)院進(jìn)行檢查，確診為橫結(jié)腸低分化腺癌?；颊哂?010年4月2日在復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院行手術(shù)。
2010年6月，結(jié)腸癌術(shù)后3月復(fù)查，發(fā)現(xiàn)肝內(nèi)多發(fā)性占位，直徑2厘米，腹膜后見多發(fā)小淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。進(jìn)行過放療。
2011年7月15日開始服接受抗腫瘤五谷蟲口服治療，四個月后復(fù)查，肝區(qū)轉(zhuǎn)移灶大片低密度影明顯減少，最大直徑由2厘米縮小到0.3厘米。胸片未見異常，腹部彩超正常,身體狀況良好.
至今，患者服用近2年，復(fù)查指標(biāo)檢查報告顯示，大部分檢測指標(biāo)正常，恢復(fù)情況良好,仍堅持服藥鞏固治療。
試驗例3
楊**，性別:女，年齡：42，住址：廣德縣
患者楊金鳳,女,42歲，2011年8月份于湖州中心醫(yī)院診斷為結(jié)腸中分化腺癌、雙肺、縱膈淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，接受手術(shù)治療后，于10月份于浙江省腫瘤醫(yī)院行三次化療治療后，患者自感身體不適，病情沒有得到有效控制且出現(xiàn)復(fù)發(fā)趨勢，遂患者放棄繼續(xù)接受化療治療并辦理出院。
病案簡介：
患者出院后，于2012年2月開始口服抗腫瘤五谷蟲治療，期間患者未接受其他藥物及手段治療，用藥前病情：兩肺紋理稍多，兩肺野可見多發(fā)小結(jié)節(jié)狀高密度影，邊界不清，肺門及縱膈淋巴結(jié)腫大，直徑2.6厘米，脾腫大，可達(dá)8個肋單元。白球比列1.05。
用藥9個月，2012年11月13日復(fù)查，影像報告顯示，高密度陰影周邊尚清，淋巴結(jié)縮小到0.6厘米，脾臟稍大。各項腫瘤標(biāo)志物檢查正常，體重增加4.8公斤?；颊呱眢w狀況恢復(fù)良好，無明顯不適、疼痛，尚在鞏固治療。飲食可。能完成一般家務(wù)事宜。