一種桑黃多糖zdt及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種桑黃多糖ZDT組分及其制備方法。所述桑黃多糖ZDT組分是以桑黃子實(shí)體為原料，經(jīng)粉碎，提取，沉淀等工藝分離得到的一種β葡甘聚糖ZDT，重均分子量在88～102萬道爾頓之間，多糖質(zhì)量百分含量超過90％。提取工藝使用聚維酮K30代替乙醇，同樣體積的提取液聚維酮K30用量只有乙醇的五十分之一，這大大降低了生產(chǎn)成本，所得多糖ZDT具有顯著的抗腫瘤活性。
【專利說明】一種桑黃多糖ZDT及其制備方法
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【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種桑黃多糖ZDT及其制備方法。桑黃子實(shí)體經(jīng)粉碎，提取，分離等步驟得到一種桑黃多糖ZDT，該多糖主要由葡萄糖和甘露糖組成，可用于制作食品添加劑，各種藥物制劑。本發(fā)明屬于食品加工，醫(yī)藥工業(yè)相關(guān)領(lǐng)域。
(二)

【背景技術(shù)】
[0002]桑黃是我國的傳統(tǒng)藥用真菌，是針層孔屬真菌火木層孔菌的子實(shí)體，該真菌生于桑樹、楊樹、樺樹、櫟樹等樹干上，分布于我國華北、東北、西北及四川、云南等地。在我國傳統(tǒng)醫(yī)藥中桑黃主要用于治療血崩，血淋，脫肛瀉血，帶下等癥，是一種珍貴的藥用真菌。近幾十年隨著對桑黃的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)桑黃具有較高的抑制腫瘤及抗病毒活性，目前在日本和韓國主要作為免疫增強(qiáng)劑和癌癥治療的輔助藥物。桑黃主要活性成份為多糖，國外研究認(rèn)為，桑黃多糖可通過提高機(jī)體免疫力達(dá)到對腫瘤抑制的目的。
[0003]吉林大學(xué)溫克等經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)(吉林大學(xué)學(xué)報(bào)，2002年第28卷第3期)在桑黃、靈芝、阿加里斯鸞、PL-2，PL-5(MeSima)幾種物質(zhì)中，桑黃具有更好的抑制腫瘤作用，進(jìn)一步研究中發(fā)現(xiàn)，動物服用桑黃水體物后，單核一吞噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)k和吞噬系數(shù)η明顯增高，并可提高脾系數(shù)和胸腺系數(shù)，促進(jìn)ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。韓國Sang-BaeHan等在Internat1nal Immunopharmacology雜志2006年第6期發(fā)表文章，研究結(jié)果表明從桑黃中分離出來的一種具有治療癌癥活性的多糖，這種多糖可以抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。G1-YoungKim等2004年在Journal of Ethnopharmacology雜志95卷發(fā)表文章,發(fā)現(xiàn)從桑黃中提取的一種多糖具有抗腫瘤活性，這種多糖抗腫瘤機(jī)理可能跟提高一氧化氮和TNF-α濃度有關(guān)。葛青等(食品科學(xué)，2008年第09期)對桑黃子實(shí)體水提、醇沉、冷凍干燥得水溶性多糖，使用凝膠柱進(jìn)一步純化得純多糖PIFI，其單糖組成為甘露糖、葡萄糖和半乳糖，摩爾比為 0.64:1: 1.94。
[0004]雖然桑黃多糖的提取純化已經(jīng)工業(yè)化，有不少公司已經(jīng)在市場上銷售桑黃多糖，但是提取工藝大都比較復(fù)雜，離不開乙醇沉淀這一步驟，也有人通過膜處理的辦法進(jìn)行桑黃多糖提取，但是由于膜的成本更高，再生性不好，提取多糖含量不高等原因?qū)е律｜S多糖的生產(chǎn)成本無法顯著下降。目前市場上銷售的桑黃多糖質(zhì)量百分含量大都在60%以下，缺乏超過90%含量的聞端廣品。
(三)


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所述桑黃多糖ZDT組分是以桑黃子實(shí)體為原料，經(jīng)粉碎，提取，沉淀等工藝分離得到的一種β葡甘聚糖ZDT，該提取方法及多糖組分在之前的文獻(xiàn)中未見報(bào)道。提取該組分使用聚維酮Κ30代替乙醇，同樣體積的提取液聚維酮Κ30用量只有乙醇的五十分之一，這大大降低了生產(chǎn)成本，所得多糖ZDT具有顯著的抗腫瘤活性。聚維酮Κ30是一種大分子助溶劑，也被用做絮凝劑凈化水中的雜質(zhì)，中國藥典2010版第二部收錄為藥用原料。用它作為提取桑黃多糖的試劑不僅成本低，而且安全性也有保障，有利于今后工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)。聚維酮K30之所以能作為沉淀劑提取出桑黃多糖的原理目前尚未有文獻(xiàn)報(bào)道，推測可能跟其絮凝作用有關(guān)，提取得到的桑黃多糖ZDT重均分子量在88萬~102萬道爾頓之間，針對性較強(qiáng)，這點(diǎn)有別于乙醇沉淀所得桑黃多糖。乙醇沉淀所得多糖成分復(fù)雜，須要經(jīng)過一系列色譜柱純化才能得到分子量比較均一的相對純品。賈建波等利用乙醇沉淀得到桑黃多糖，進(jìn)一步分離得到284萬和5.33萬道爾頓兩種分子量差別顯著的多糖組分(桑黃多糖分離純化及其結(jié)構(gòu)初步鑒定食品科學(xué)2006年Vol.27N0.12)。聚維酮K30作為沉淀劑提取得到的桑黃多糖ZDT的多糖質(zhì)量百分含量較高，提取3批含量均超過92%，這為進(jìn)一步純化桑黃多糖降低了成本。
[0006]制備桑黃多糖ZDT的優(yōu)選的提取工藝具體步驟為:
[0007]一、干燥，粉碎
[0008]桑黃子實(shí)體干品使用打粉機(jī)打碎，用四號篩網(wǎng)篩過得到桑黃粉。
[0009]二、提取
[0010]桑黃粉I公斤，加10升熱水100°C提取2小時，使用離心機(jī)進(jìn)行固液分離，殘?jiān)鼦壢?，澄清的提取液?200毫升，備用。
[0011]三、沉淀
[0012]取步驟〃 二、提取”中提取液7200ml，向提取液中加720克聚維酮K30，充分?jǐn)嚢柚辆劬S酮K30全部溶解。靜置過夜，離心得到沉淀，沉淀用50%質(zhì)量濃度的乙醇水溶液洗滌2次，每次2000毫升，再用無水乙醇洗滌2次，每次2000毫升，80°C烘干后稱重為230克。沉淀粉碎用四號篩網(wǎng)篩過得沉淀粉末，沉淀粉末加6900毫升水100°C提取2小時，離心，上清加690克聚維酮K30，充分?jǐn)嚢柚辆劬S酮K30全部溶解。靜置過夜，離心得到沉淀，沉淀用50%質(zhì)量濃度的乙醇水溶液洗滌2次，每次2000毫升，再用無水乙醇洗滌2次，每次2000毫升，80°C烘干后沉淀粉碎，用四號篩網(wǎng)反復(fù)篩過得粉末狀桑黃多糖ZDT 182克。
[0013]桑黃多糖ZDT組分的結(jié)構(gòu)信息為:
[0014]1、含量測定
[0015]3個批次的桑黃多糖ZDT樣品經(jīng)硫酸苯酚法測定，多糖質(zhì)量百分含量均在90%以上。
[0016]2、單糖組成分析
[0017]參照文獻(xiàn)(戴軍等，分析測試學(xué)報(bào)，第26卷第2期P206~216)對桑黃多糖ZDT組分進(jìn)行單糖組成分析，結(jié)果表明ZDT的單糖組成主要為葡萄糖和甘露糖，葡萄糖和甘露糖的摩爾數(shù)比為1: 2。
[0018]3、重均分子量
[0019]以Dextran系列葡聚糖為對照品，測定3批ZDT的重均分子量，結(jié)果表明3批ZDT的重均分子量分別為88萬,93萬，102萬道爾頓。
[0020]4、紅外掃描(構(gòu)型)
[0021]紅外掃描結(jié)果表明ZDT樣品在890CHT1有弱吸收峰，840 cm—1無吸收，說明ZDT組分是β構(gòu)型。
[0022]所述的桑黃多糖ZDT可應(yīng)用于制備抗腫瘤藥物，也可用于制成食品、保健食品的添加物，應(yīng)用于患有癌癥的病人。
[0023]桑黃多糖ZDT組分腹腔注射(20mg/kg、50mg/kg和100mg/kg)給藥10天，香燕多糖(天地欣)為對照，結(jié)果表明桑黃多糖ZDT組分3種劑量對小鼠S-180瘤均具有顯著抑制作用。其中50mg/kg與天地欣20mg/kg給藥劑量抑瘤率無顯著差別,均高于80%。提示桑黃多糖ZDT組分可以用于抗腫瘤藥物的制備。
[0024](四)說明書附圖
[0025]無
(五)

【具體實(shí)施方式】
[0026]下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此:
[0027]實(shí)施例1桑黃多糖ZDT的制備
[0028]桑黃子實(shí)體干品I公斤，用打粉機(jī)粉碎，四號篩網(wǎng)篩過得桑黃粉。加10升熱水至桑黃粉中，攪拌均勻，100°c提取2小時，使用離心機(jī)進(jìn)行固液分離，殘?jiān)鼦壢?，得提取?200毫升。向提取液中加720克聚維酮K30，充分?jǐn)嚢柚辆劬S酮K30全部溶解。靜置過夜，離心得到沉淀，沉淀用50%質(zhì)量濃度的乙醇水溶液洗滌2次，每次2000毫升，再用無水乙醇洗滌2次，每次2000毫升，80°C烘干后稱重為230克。沉淀粉碎用四號篩網(wǎng)篩過得沉淀粉末，沉淀粉末加6900毫升水100°C提取2小時，離心，上清加690克聚維酮K30，充分?jǐn)嚢柚辆劬S酮K30全部溶解。靜置過夜，離心得到沉淀，沉淀用50%質(zhì)量濃度的乙醇水溶液洗滌2次，每次2000毫升，再用無水乙醇洗滌2次，每次2000毫升，80°C烘干后粉碎，用四號篩網(wǎng)反復(fù)篩過得粉末狀桑黃多糖ZDT 182克。
[0029]實(shí)施例2桑黃多糖ZDT的理化檢測
[0030]依照實(shí)施例1中的制備方法制備ZDT多糖3批(批號20120601,20120602，20120603)進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。單糖組成分析采用PMP (1-苯基-3-甲基_5_吡唑啉酮)衍生化法；多糖構(gòu)型采用紅外分析法；重均分子量采取高效液相凝膠滲透色譜法(GPC)測定，檢測器使用示差檢測器。以上測試結(jié)果如下:
[0031]3批ZDT多糖的單糖組成測定結(jié)果如下表1:
[0032]表1
[0033]

【權(quán)利要求】
1.一種桑黃多糖ZDT，其特征在于所述的桑黃多糖ZDT是葡萄糖和甘露糖組成的β-葡甘聚糖，兩種單糖的摩爾比例為1: 2，重均分子量在88~102萬道爾頓之間，多糖的質(zhì)量百分含量高于90%。
2.制備如權(quán)利要求1所述的桑黃多糖ZDT的方法，其特征在于桑黃子實(shí)體干品I公斤，用打粉機(jī)粉碎，四號篩網(wǎng)篩過得桑黃粉，加10升熱水至桑黃粉中，攪拌均勻，100°C提取2小時，使用離心機(jī)進(jìn)行固液分離，殘?jiān)鼦壢?，得提取?200毫升，向提取液中加720克聚維酮K30，充分?jǐn)嚢柚辆劬S酮K30全部溶解，靜置過夜，離心得到沉淀，沉淀用50%質(zhì)量濃度的乙醇水溶液洗滌2次，每次2000毫升，再用無水乙醇洗滌2次，每次2000毫升，80°C烘干后稱重為230克，沉淀粉碎，用四號篩網(wǎng)篩過得沉淀粉末，沉淀粉末加6900毫升水100°C提取2小時，離心，上清加690克聚維酮K30，充分?jǐn)嚢柚辆劬S酮K30全部溶解，靜置過夜，離心得到沉淀，沉淀用50%質(zhì)量濃度的乙醇水溶液洗滌2次，每次2000毫升，再用無水乙醇洗滌2次，每次2000毫升，80°C烘干后粉碎，用四號篩網(wǎng)反復(fù)篩過得粉末狀桑黃多糖ZDT182克。
3.如權(quán)利要求1~2所述的桑黃多糖ZDT在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/00GK104163874SQ201410355608
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年7月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月21日
【發(fā)明者】楊雪, 鄭寶芬, 毛延卿, 曹思路, 楊勇杰, 張萍, 楊小麗 申請人:杭州眾芝康菇生物技術(shù)有限公司