一種雙水相萃取蓯蓉苯乙醇苷的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種雙水相萃取蓯蓉苯乙醇苷的方法。其包括以下步驟：1)將蓯蓉原料粉末加入雙水相體系；2)萃取；3)移取苯乙醇苷富集相，濃縮干燥，得到蓯蓉苯乙醇苷提取物。本發(fā)明從蓯蓉提取苯乙醇苷，方法簡(jiǎn)單，提取率高，易放大進(jìn)行連續(xù)性生產(chǎn)操作，能耗低，提取物苯乙醇苷含量高?？朔爽F(xiàn)有從蓯蓉中提取蓯蓉苯乙醇苷的方法操作繁瑣、費(fèi)時(shí)、提取率低、提取的苯乙醇苷品質(zhì)不高等缺點(diǎn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種雙水相萃取蓯蓉苯乙醇苷的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物有效成分的分離純化領(lǐng)域，具體涉及一種雙水相萃取蓯蓉苯 乙醇苷工藝。

【背景技術(shù)】
[0002] 肉蓯蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma又名荒漠肉蓯蓉、蓯蓉或大蕓，甜大蕓， 寸蕓，梭梭大蕓等，為列當(dāng)科（Orobanchaceae)肉灰蓉屬（Cistanche Hoffmg.et Link)多 年生寄生植物。肉蓯蓉屬植物共約有20種，分布于歐亞大陸溫暖的干燥或半干旱地區(qū)，歷 史考證在我國(guó)境內(nèi)發(fā)現(xiàn)8個(gè)種和1個(gè)變種，經(jīng)屠鵬飛等人考證調(diào)查后，確定我國(guó)目前肉蓯 蓉屬植物分為4個(gè)種包括管花肉灰蓉（Cistanche tubulosa(Schrenk)Wight)、荒漠肉灰蓉 (C. deserticola，Y. C· Ma)、鹽生肉灰蓉（C_ salsa(C. A. Mey. )G. Beck)、沙雙蓉（C. sinensis G. Beck)和 1 個(gè)變種，其來(lái)源于白花鹽灰蓉（C. salsa var. albifora P. F. YU et Z. C. Lou)， 主要分布于我國(guó)內(nèi)蒙古、甘肅、新疆等地。
[0003] 肉蓯蓉史載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，以其肉質(zhì)莖入藥，具有多種生物活性，被譽(yù)為"沙漠 人參"。在中國(guó)和日本，肉灰蓉肉質(zhì)蓮作為一種補(bǔ)益藥已經(jīng)經(jīng)歷了上千年的歷史。目前現(xiàn)代 醫(yī)學(xué)已發(fā)現(xiàn)荒漠肉蓯蓉具有廣闊的藥用功能。已發(fā)現(xiàn)的相關(guān)藥理生理活性有：激素調(diào)節(jié)作 用、提高性功能作用、通便作用、肝保護(hù)作用、神經(jīng)保護(hù)作用、心肌缺血保護(hù)、免疫調(diào)節(jié)作用、 促進(jìn)骨形成、增強(qiáng)體力、視力保護(hù)，抗氧化作用、抗自由基、抗凋亡、抗衰老作用、抗疲勞、抗 炎、抗腫瘤，抗老年癡呆癥，提高記憶力等功效。因此以肉蓯蓉為基礎(chǔ)的藥物開(kāi)發(fā)具有很高 的價(jià)值。肉蓯蓉主要化學(xué)成分有：苯乙醇苷類(lèi)、苯甲醇苷類(lèi)、環(huán)烯醚萜類(lèi)、單萜類(lèi)、木脂素和 苯丙醇類(lèi)、生物堿類(lèi)、氨基酸、糖類(lèi)、留醇和揮發(fā)油類(lèi)成分。其中苯乙醇苷類(lèi)被認(rèn)為是肉蓯蓉 中主要的活性成分。苯乙醇苷類(lèi)成分（Phenylethanoid Glycosides，PhGs)通常是以葡萄 糖為母核的含有酯鍵及氧苷鍵的天然糖苷，廣泛存在于雙子葉植物中。由于PhGs的紫外吸 收能力很強(qiáng)，故其適用于高相液相法以及紫外分光光度法進(jìn)行分析，并且由于多數(shù)化合物 糖上都連有咖啡?；虬⑽乎；瑖?guó)內(nèi)外學(xué)者又稱其為苯丙素類(lèi)化合物。目前荒漠肉蓯蓉 共分離得到22個(gè)苯乙醇苷類(lèi)成分，包括一個(gè)單糖苷，十四個(gè)雙糖苷和七個(gè)三糖苷。苯乙醇 苷成分具有抗氧化、清除自由基、抗病毒、抗菌、抗腫瘤、強(qiáng)心、DNA損傷修復(fù)、抗輻射等功能。 該成分中多種物質(zhì)也具有其他用途，如作為應(yīng)激性機(jī)能障礙改善劑，用于化妝品以防止各 種類(lèi)型的脫發(fā)，治療慢性便秘，消除子宮肌瘤等疾病。
[0004] 雙水相萃取技術(shù)是于六十年代首先由瑞典的P.A.Albertsson等提出的，近三十 年得到廣泛重視，己涉及酶、核酸、生長(zhǎng)激素、病毒等各種活性有效成分的分離及提純。其具 有活性損失小、分離步驟少、操作條件溫和且不存有機(jī)溶劑殘留的問(wèn)題等優(yōu)點(diǎn)，因而在天然 產(chǎn)物中有效成分的提取方面具有應(yīng)用前景。
[0005] 混合兩種水溶性不同的化合物的水溶液時(shí)，當(dāng)化合物濃度達(dá)到一定值，體系會(huì)自 然地分成互不相溶的兩相。這一現(xiàn)象早在1896年就由Beijerinck觀察到：當(dāng)明膠與瓊脂 或明膠與可溶性淀粉的水溶液混合時(shí),得到一個(gè)渾濁不透明的溶液，它隨之分成兩個(gè)液相， 這就是雙水相體系。雙水相體系的形成主要是由于化合物之間的不相溶性，造成相互無(wú)法 滲透，不能形成均一相，從而具有分離傾向，在一定條件下即可分為二相。一般認(rèn)為只要兩 化合物水溶液的憎水程度有所差異，混合時(shí)就可發(fā)生相分離，且憎水程度相差越大，相分離 傾向也就越大。
[0006] 盡管采用雙水相萃取技術(shù)從天然產(chǎn)物中提取有效成分的文獻(xiàn)報(bào)道不是很多，但己 有的實(shí)例已充分表明了其良好的應(yīng)用前景。東北林業(yè)大學(xué)符韻林，張東陽(yáng)等（2013年）建立 了一種雙水相系統(tǒng)從鴿子豆根中分離富集染料木黃酮和芹黃素的方法。防化研究所畢鵬禹 等（2013年）建立了一種高效環(huán)境又好的從黃芩中分離富集黃芩苷的雙水相浮選方法。雙 水相系統(tǒng)分離技術(shù)，所形成的兩相大部分是水，兩相界面張力很小，為有效成分的溶解和萃 取提供了適宜的環(huán)境；相際間的質(zhì)量傳遞快，所需操作時(shí)間較短。操作方便，條件溫和。所 用的聚合物如聚乙二醇等對(duì)活性有效成分有穩(wěn)定作用。易于工程放大和連續(xù)操作，可以用 于規(guī)模化生產(chǎn)制備，能夠完成較大處理量的操作。
[0007] 從中藥中提取天然成分的首要條件是被提取物能夠快速、高效地進(jìn)入提取介質(zhì)， 由于中藥有效成分多為胞內(nèi)產(chǎn)物，提取過(guò)程中一般需要破壞原料細(xì)胞壁。超聲波對(duì)各種成 分提取的強(qiáng)化作用主要源于其空化作用，空化中微小氣泡的爆裂產(chǎn)生的極大壓力使被破碎 物細(xì)胞壁及整個(gè)生物體的破裂在瞬間完成，縮短了破碎時(shí)間，同時(shí)超聲波產(chǎn)生的振動(dòng)作用 加強(qiáng)了胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散及溶解，顯著提高提取效率。因此超聲輔助天然產(chǎn)物提取也是 未來(lái)發(fā)展的重要技術(shù)。
[0008] 就目前的肉蓯蓉苯乙醇苷提取方法來(lái)看，多集中采用傳統(tǒng)溶劑提取，同時(shí)微波輔 助、超聲輔助等方法。這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，傳統(tǒng)溶劑提取能耗高、耗時(shí)長(zhǎng)、效率較低，微波 提取技術(shù)效果比傳統(tǒng)的方法好，但由于微波采用的熱效應(yīng)提取原理，有效成分損失大，不利 于肉灰蓉功效成分的綜合利用，并且工業(yè)化放大有困難。而超聲輔助提取的效率明顯優(yōu)于 微波輔助，因此超聲輔助提取應(yīng)是天然產(chǎn)物提取的發(fā)展方向。并且考慮到后續(xù)分離的成本， 應(yīng)該在提取階段就選擇分離效果好，純度高，有效成分損失少的分離方法與工藝。而在這 方面近年出現(xiàn)的雙水相提取方法則有較明顯優(yōu)勢(shì)的，經(jīng)過(guò)研究認(rèn)為雙水相結(jié)合超聲波法在 中藥材活性成分提取分離中會(huì)有更深的應(yīng)用和研究前景?；谝陨细鞣N原因，本發(fā)明提供 了一種超聲輔助雙水相萃取肉蓯蓉苯乙醇苷的方法，克服了以上方法高能耗，高損失，低效 率，低質(zhì)量的缺點(diǎn)，為肉蓯蓉苯乙醇苷的生產(chǎn)提供了綠色，低成本，高質(zhì)量的生產(chǎn)途徑。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于提供一種雙水相萃蓯蓉苯乙醇苷的方法，克服目前蓯蓉苯乙醇 苷生產(chǎn)過(guò)程中的不足和缺點(diǎn)。
[0010] 為達(dá)此目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0011] 一種雙水相萃取蓯蓉苯乙醇苷的方法，其包括以下步驟：
[0012] 1)將蓯蓉原料粉末加入雙水相體系；
[0013] 2)萃??；
[0014] 3)移取苯乙醇苷富集相，濃縮干燥，得到蓯蓉苯乙醇苷提取物。
[0015] 所述苯乙醇苷富集相為雙水相體系中含有乙醇或PEG的相。
[0016]所述蓯蓉原料粉末的粉碎度為10-80目，優(yōu)選20-40目，更優(yōu)選30目。
[0017]所述蓯蓉原料為肉蓯蓉、管花肉蓯蓉、鹽生肉蓯蓉、沙蓯蓉和白花鹽蓯蓉中的一種 或至少兩種的混合物。
[0018]所述雙水相體系為選自乙醇/硫酸銨、乙醇/磷酸氫二鉀、乙醇/檸檬酸鈉或PEG/ 硫酸銨體系中的一種。所述乙醇/硫酸銨、乙醇/磷酸氫二鉀、乙醇/檸檬酸鈉或PEG/硫 酸銨，指所述雙水相體系中兩種水相的兩種溶質(zhì)。
[0019]優(yōu)選地，所述雙水相體系為無(wú)水乙醇/硫酸銨體系，其中基于所述雙水相體系，乙 醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15% -40%，優(yōu)選18% -30%，更優(yōu)選20% ;基于所述雙水相體系，硫酸銨質(zhì) 量分?jǐn)?shù)為14% -40 %,優(yōu)選18% -30 %,更優(yōu)選23 %。
[0020] 所述蓯蓉原料粉末與所述雙水相體系按重量計(jì)比值為1 :5_1 :50,例如1 :15,優(yōu)選 1 :20-1 :40,例如 1 :35,更優(yōu)選 1 :30。
[0021] 所述萃取采用攪拌震蕩和/或超聲輔助的提取方法。
[0022] 所述超聲輔助提取的時(shí)間為10-90分鐘，例如80,優(yōu)選30-60分鐘，例如50,更優(yōu) 選40分鐘；所述超聲輔助提取功率100-3000W，例如2500W，優(yōu)選200-2000W，例如1000W，更 優(yōu)選800W ;所述超聲輔助提取頻率l〇-l〇〇kHz，例如20kHz，優(yōu)選30-80kHz，例如48kHz,更 優(yōu)選40kHz ;提取溫度20-80°C，例如25°C，優(yōu)選30-7(TC，例如5(TC,更優(yōu)選4(TC。
[0023]所述苯乙醇苷富集相的濃縮干燥采用選自真空濃縮干燥、噴霧干燥、鼓風(fēng)干燥和 冷凍干燥中的一種；
[0024] 優(yōu)選地，所述濃縮千燥采用噴霧干燥，其進(jìn)風(fēng)溫度為160-230°C,例如210°C,優(yōu)選 170-200°C，例如 180°C，更優(yōu)選 175°C。
[0025] 移取苯乙醇苷富集相之后，剩余的雙水相體系進(jìn)行回收，所述回收包括回收無(wú)機(jī) 鹽，所述回收無(wú)機(jī)鹽的方法為結(jié)晶法。所述回收雙水相體系包括回收有機(jī)物，所述中回收有 機(jī)物的方法包括減壓蒸餾法。
[0026] 本發(fā)明的雙水相萃取肉蓯蓉苯乙醇苷的方法，具有以下有益效果：
[0027] 采用雙水相萃取技術(shù)，提取快速回收率高，效率高；
[0028] 采用雙水相萃取技術(shù)，易于放大生產(chǎn)，成本低，污染少；
[0029] 采用采用雙水相萃取技術(shù)，產(chǎn)品質(zhì)量高品質(zhì)好，苯乙醇苷含量較傳統(tǒng)溶劑萃取法 高3倍；
[0030] 提取完畢后的雙水相體系回收利用，使用效率高，條件溫和易控制。
[0031] 本發(fā)明所述的雙水相萃取肉蓯蓉苯乙醇苷的方法，具有溫和的生產(chǎn)條件、技術(shù)易 放大，生產(chǎn)快速、溶劑易回收利用，綠色環(huán)保無(wú)污染，苯乙醇苷品質(zhì)高等優(yōu)點(diǎn)。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0032] 圖1為松果菊苷對(duì)照品紫外吸收光譜圖。
[0033] 圖2為總苯乙醇苷提取物紫外吸收光譜圖。
[0034] 圖3為松果菊苷對(duì)照品高效液相色譜圖。
[0035] 圖4為總苯乙醇苷高效液相色譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0036] 下面結(jié)合附圖并通過(guò)【具體實(shí)施方式】來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案。
[0037] 實(shí)施例1
[0038] 1)將肉蓯蓉粉碎至20目，密封保存。
[0039] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 I5 %，磷酸氫二鉀分?jǐn)?shù)為30%，將稱取5g肉蓯蓉藥材粉末加入到雙水相體系"'中，料液比 1/20。 '、 '
[0040] 3)攪拌下提取80min，其中提取溫度為45°C。
[0041] 4)取本乙醉苷雖集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸饋，減壓蒸饋的溫度為4〇?c，回收憐酸氣 二鉀，最后在40°C下真空干燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 68g。 '
[0042] 實(shí)施例2
[0043] 1)將管花肉蓯蓉粉碎，過(guò)40目篩后密封保存。
[0044] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 40%，磷酸氫二鉀分?jǐn)?shù)為14%,將稱取5g管花肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比 1/5。 ""
[0045] 3)攪拌下提取80min，其中提取溫度為45°C。
[0046] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為5〇t；，回收磷酸氫 二鉀，最后在50?下真空干燥，得到管花蓯蓉苯乙醇苷提取物i.wg。 '
[0047] 實(shí)施例3
[0048] 1)將肉灰蓉粉碎至80目，密封保存。
[0049] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 23%，磷酸氫二鉀分?jǐn)?shù)為22%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加 入到雙水相體系中，料液比1/4〇。' [0050] 3)超聲波的輔助下提取80min，其中提取溫度為2(TC。
[0051] 4)取本乙醇苷雖集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸饋，減壓蒸飽的溫度為6〇。〇，回收磷酸氫 二鉀，最后在60Γ下真空干燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 99g。 '
[0052] 實(shí)施例4
[0053] 1)將管花肉蓯蓉粉碎，過(guò)40目篩后密封保存。
[0054] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 2S%，磷酸氫二鉀分?jǐn)?shù)為20%，將稱取5g管花肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比 1/40。
[0055] 3)超聲波的輔助下提取lOmin，其中提取溫度為8(rc，
[0056] 4)取本乙醇苷雖集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸饋，減壓蒸餾的溫度為4(rc，回收磷酸氫 二鉀，最后在進(jìn)行噴務(wù)干燥，進(jìn)風(fēng)溫度160°C，得到管花雙蓉苯乙醇苷提取物1. 5如。
[0057] 實(shí)施例5 °
[0058] 1)將肉蓯蓉粉碎，過(guò)60目篩后密封保存。
[0059] 2)在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18%,硫酸銨分?jǐn)?shù)為 3〇%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比丨/30。
[0060] 3)超尸波取80min，其中提取溫度為6〇。〇,超聲波功率為3〇〇〇w，超聲波頻率 30kHz〇
[0061] 4)取苯乙醇苷雖集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為S(rc，回收硫酸銨， 最后在70°C下真空干燥，得到肉灰蓉苯乙醇管提取物〇. 76g。
[0062] 實(shí)施例6
[0063] 1)將肉蓯蓉粉碎至30目，密封保存。
[0064] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 I5%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為40%，將稱取叱肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇。
[0065] 3)超尸波的輔助下取40min，其中提取溫度為4CTC,超聲波功率為loo#，超聲波 頻率 80kHz。 '
[0066] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為4(rc回收硫酸銨， 最后在進(jìn)行噴霧千燥，進(jìn)風(fēng)溫度2〇〇°c，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物0. 74g。' '
[0067] 實(shí)施例7 ?
[0068] 1)將肉灰蓉粉碎，過(guò)5〇目篩后密封保存。
[0069] 2)在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為22%，硫酸按分?jǐn)?shù)為 23%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比丨/%。 '
[0070] 3)攪拌震蕩提取8〇min，其中提取溫度為7(TC。
[0071] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為8(rc回收硫酸錢(qián)， 最后在7〇°C下真空干燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物0.76g。 ' '
[0072] 實(shí)施例8
[0073] 1)將肉蓯蓉粉碎，過(guò)8〇目篩后密封保存。
[0074] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 I5%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為30%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^5〇。
[0075] 3)攬摔晨蕩提取4〇min，其中提取溫度為25°C，超聲波功率為2〇〇評(píng)超聲波頻率 50kHz〇
[0076] 4)取本乙醇苷雖集相，對(duì)其進(jìn)行減壓黑饋，減壓蒸飽的溫度為4〇。0，回收硫酸錢(qián)， 最后在進(jìn)行噴霧千燥，進(jìn)風(fēng)溫度160?，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇.74g。' M '
[0077] 實(shí)施例9
[0078] 1)將肉灰蓉粉碎，過(guò)7〇目篩后密封保存。
[0079] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 40%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為14%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^3〇。
[0080] 3)超聲波的輔助下提取4〇min，其中提取溫度為5(TC，超聲波功率為8〇〇ff，超聲波 頻率80kHz。
[0081] 4)取苯乙醇苷雖集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸溜，減壓蒸饋的溫度為4〇。〇，回收硫酸按， 最后在6CTC下真空千燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇.89g。 ' '
[0082] 實(shí)施例1〇
[0083] 1)將肉蓯蓉粉碎，過(guò)80目篩后密封保存。
[0084] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 18%，磷酸氫二鉀分?jǐn)?shù)為30%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇。
[0085] 3)超聲波的輔助下提取4〇min，其中提取溫度為25°C，超聲波功率為3〇〇w，超聲波 頻率40kHz。
[0086] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為4(TC，回收磷酸氫 二鉀，最后在進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度21〇 C，得到肉灰蓉苯乙醇昔提取物〇. 8知。
[0087] 實(shí)施例11
[0088] 1)將管花蓯蓉粉碎，過(guò)45目篩后密封保存。
[0089] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 30%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為18%，將稱取如肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比〇3〇 _〇] 3)超聲波的輔助下提取4〇min，其中提取溫度為 5(TC，超聲波功率為8〇〇ff，超聲波 頻率 80kHz。 '
[0091] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為4〇trc 硫酸 銨，最后在70°C下真空干燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物i.sgg。 '
[0092] 實(shí)施例I2
[0093] 1)將肉蓯蓉粉碎，過(guò)40目篩后密封保存。
[0094] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 24%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為20%，將稱取如肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇 _5] 3)超聲波的輔助下提取40min，其中提取溫度為6(rC，超聲波功率為 1〇〇ff，超聲波 頻率 80kHz。 '
[0096] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸飽，減壓蒸餾的溫度為8〇υ，回收硫酸按， 最后在70°C下真空干燥,得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 79g。 '
[0097] 實(shí)施例13
[0098] 1)將肉蓯蓉粉碎至35目，密封保存。
[00"] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 15%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為26%，將稱取5g肉灰蓉粉末加入到雙水相體系中,料液比 [0100] 3)超聲波的輔助下提取SOmin，其中提取溫度為 6(rC，超聲波功率為3〇〇〇ff，超聲 波頻率10kHz。 '
[0101] 4)取本乙醇苷雖集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸溜，減壓蒸饋的溫度為6〇。〇,回收硫酸銨， 最后在65°C下真空干燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 68g。 '
[0102] 實(shí)施例14
[0103] 1)將肉蓯蓉粉碎，過(guò)40目篩后密封保存。
[0104] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 24%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為20%，將稱取如肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇。
[0105] 3)超聲波的輔助下提取5〇min,其中提取溫度為6(TC，超聲波功率為 5〇〇w，超聲波 頻率 40kHz。 '
[0106] 4)取本乙醇苷g集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸饋的溫度為8〇。〇，回收硫酸銨， 最后在2〇0°C下噴霧，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇.93g。 ' '
[0107] 實(shí)施例15
[0108] 1)將管花蓯蓉粉碎，過(guò)40目篩后密封保存。
[0109] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 I5%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為26%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇。 3)超聲波的輔助下提取8〇min，其中提取溫度為5(TC,超聲波功率為 2〇〇〇w，超聲 波頻率40kHz。 '
[0111] 4)取本乙醇苷g集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸饋，減壓蒸餾的溫度為6〇。〇，回收硫酸按， 最后在65°C下真空干燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物2. 〇8g。
[0112] 實(shí)施例16
[0113] 1)將荒?吳肉灰蓉、管花肉灰蓉、鹽生肉灰蓉、沙灰蓉和白花鹽灰蓉混合粉碎。
[0114] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 20%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為24%，將稱取如肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比U3〇。
[0115] 3)超聲波的輔助下提取40min，其中提取溫度為4(TC，超聲波功率為300W，超聲波 頻率50kHz，
[0116] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸飽，減壓蒸饋的溫度為4〇。〇，最后在 6〇。〇 下真空干燥,得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 76g。
[0117] 實(shí)施例17
[0118] 1)將管花肉蓯蓉、鹽生肉蓯蓉、沙蓯蓉和白花鹽蓯蓉混合粉碎。
[0119] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 18%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為49%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇。
[0120] 3)超聲波的輔助下提取25min，其中提取溫度為 2(rc，超聲波功率為2_，超聲波 頻率 30kHz。 '
[0121] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為7(rc，結(jié)晶法回收 硫酸銨，最后在80°C下真空干燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇.59g。
[0122] 實(shí)施例18
[0123] 1)將鹽生肉蓯蓉粉碎。
[0124] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 2〇%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為24%，將稱取5g鹽生肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中,料液比1/4〇。
[0125] 3)超聲波的輔助下提取40min，其中提取溫度為40°C，超聲波功率為3〇〇\γ超聲波 頻率 50kHz。 '
[0126] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為4〇?,最后在 6〇Γ 下真空千燥，得到鹽生肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇.76g。 ' °
[0127] 實(shí)施例19 t〇12幻1)將沙蓯蓉粉碎。
[0129] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 I5%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為30%，將稱取5g沙蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇
[0130] 3)超聲波的輔助下提取25min，其中提取溫度為2(TC，超聲波功率為7〇〇w超聲波 頻率 lOOklfe。 '
[0131] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為7(rc結(jié)晶法回收 硫酸銨，最后在8(TC下真空干燥，得到沙蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 75g。 ^Π0Η
[0132]實(shí)施例20
[0133] 1)將白花灰蓉粉碎，過(guò)40目篩后密封保存。
[0134] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 40%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為14%，將稱取5g白花蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比1/3〇。
[01、35] 3)超尸波的輔助下提取6〇min，其中提取溫度為6〇。〇，超聲波功率為8〇〇w超聲波 頻率 3〇kHz。 '
[0136] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為4(TC,最后在23(TC 噴霧干燥，得到白花蓯蓉肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 94g。
[0137] 實(shí)施例21
[0138] 1)將鹽生肉蓯蓉、沙蓯蓉和白花鹽蓯蓉混合粉碎，過(guò)40目篩后密封保存。
[0139] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 26%，檸檬酸鈉分?jǐn)?shù)為23%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比丨/仙。 [0140] 3)超聲波的輔助下提取50min，其中提取溫度為40°C，超聲波功率為500W，超聲波 頻率70kHz。
[0141] 4)取苯乙醇苷富集相，結(jié)晶法回收硫酸銨，對(duì)其進(jìn)行噴霧干燥，得到肉灰蓉苯乙醇 苷提取物0. 78g。
[0142] 實(shí)施例22
[0143] 1)將沙蓯蓉和白花鹽蓯蓉混合粉碎，密封保存。
[0144] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，pEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 15%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為35%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比 1/3〇。
[0145] 3)超聲波的輔助下提取3〇min，其中提取溫度為50°C,超聲波功率為500W,超聲波 頻率50kHz。
[0146] 4)取苯乙醇苷富集相，結(jié)晶法回收硫酸銨，對(duì)其進(jìn)行噴霧干燥，得到肉灰蓉苯乙醇 苷提取物0.9lg。
[0147] 實(shí)施例23
[0148] 1)將管花肉蓯蓉粉碎，過(guò)40目篩后密封保存。
[0149] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，peg質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 24%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為23%，將稱取5g管花肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比1/4〇。 [0150] 3)超聲波的輔助下提取25-8〇min，其中提取溫度為60°C,超聲波功率為800W，超 聲波頻率10kHz。
[0151] 4)取苯乙醇苷富集相，結(jié)晶法回收硫酸銨，對(duì)其進(jìn)行噴霧干燥，得到管花肉灰蓉苯 乙醇苷提取物〇.77g。
[0152] 實(shí)施例24
[0153] 1)將鹽生肉蓯蓉粉碎，過(guò)40目篩后密封保存。
[0154] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，peg質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 15 %，硫酸銨分?jǐn)?shù)為35 %，將稱取5g鹽生肉灰蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比丨/如。
[0155] 3)超聲波的輔助下提取90min，其中提取溫度為5〇Γ，超聲波功率為5〇〇w，超聲波 頻率50kHz。
[0156] 4)取苯乙醇苷富集相，結(jié)晶法回收硫酸銨，對(duì)其進(jìn)行噴霧干燥，得到鹽生肉蓯蓉苯 乙醇苷提取物0. 86g。
[0157] 實(shí)施例25
[0158] 1)將管花肉蓯蓉粉碎，過(guò)40目篩后密封保存。
[0159] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 20%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為23%，將稱取5g管花肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比1/4〇。 [0160] 3)超聲波的輔助下提取25_8〇min，其中提取溫度為 4(rc，超聲波功率為4〇〇w，超 聲波頻率40kHz。
[0161] 4)取苯乙醇苷富集相，結(jié)晶法回收硫酸銨，對(duì)其進(jìn)行噴霧千燥，得到管花肉蓯蓉苯 乙醇苷提取物〇· 77g。
[0162] 實(shí)施例26
[0163] 1)將鹽生肉蓯蓉粉碎，過(guò)40目篩后密封保存。
[0164] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 30 %，硫酸銨分?jǐn)?shù)為18 %，將稱取5g鹽生肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比1/40。
[0165] 3)超聲波的輔助下提取50min，其中提取溫度為50Γ，超聲波功率為500W，超聲波 頻率50kHz。
[0166] 4)取苯乙醇苷富集相，結(jié)晶法回收硫酸銨，對(duì)其進(jìn)行噴霧千燥，得到鹽生肉蓯蓉苯 乙醇苷提取物〇.86g。
[0167] 實(shí)施例27
[0168] 1)將沙蓯蓉和白花鹽蓯蓉混合粉碎，過(guò)80目篩后密封保存。
[0169] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 24%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為23%，將稱取如沙蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比1/4〇。
[0170] 3)超聲波的輔助下提取5〇min，其中提取溫度為70°c，超聲波功率為300W,超聲波 頻率40kHz。
[0171] 4)取苯乙醇苷富集相，結(jié)晶法回收硫酸銨，對(duì)其進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度17〇,得 到沙蓯蓉苯乙醇苷提取物0. 74g。
[0172] 實(shí)施例28
[0173] 1)將白花鹽蓯蓉粉碎，過(guò)10目篩后密封保存。
[0174] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，pEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 I5%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為35%，將稱取5g白花鹽雙蓉粉末加 入到雙水相體系中，料液比jy4〇。
[0175] 3)超聲波的輔助下提取50min,其中提取溫度為4(TC,超聲波功率為500W，超聲波 頻率 50kHz。 '
[0176] 4)取苯乙醇苷富集相，結(jié)晶法回收硫酸銨，對(duì)其進(jìn)行噴霧干燥，得到白花±卜雙蓉苯 乙醇苷提取物0. 83g。 μ
[0177] 實(shí)施例29
[0178] 1)將肉蓯蓉藥材粉碎。
[0179] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 2〇%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為24%，將稱取5g肉蓯蓉藥材粉末加入到雙水相體系中，料液比1/3〇。 [0180] 3)攪拌震蕩下提取40min，其中提取溫度為 4(rc。 。
[0181] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為4〇υ 下真空干燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 76g。 ' ^
[0182] 實(shí)施例30
[0183] 1)將肉蓯蓉藥材粉碎至10目。
[0_ ^)雙水難系的建立，在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量 I5%，％識(shí)銨分?jǐn)?shù)為49%，將獅(5g肉棘雜粉末加人難水相體
[嶋]3)超聲波的輔助下提取，其中提取溫度為紙，超聲波功率為=,1超聲波 --------- 1U/10 貝 頻率30kHz。
[0? 4)取苯乙_富_，賴賄減壓難,減壓蒸_溫度為紙 硫酸銨，最后在進(jìn)風(fēng)溫度175C噴霧干燥，得到肉灰蓉苯乙醇營(yíng)提取物0 ―口曰
[0187] 實(shí)施例31 。
[0188] 1)將肉蓯蓉藥材粉碎。 _9] 2)、雙水娜系的建立，在該雙水獅系巾，基于雙水轉(zhuǎn)系，乙醇 2〇%，硫瞧分?jǐn)?shù)為24%，將龍5g 1--:鑛機(jī)末加人到雙水相體系巾、
[0190] 3)攪拌震蕩下提取30min，其中提取溫度為3(rc。 付欲CQ i/明。 _1] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸飽，減壓蒸饋的溫度為啊 溫度170°C噴霧干燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇.76g。
[0192] 實(shí)施例32
[0193] 1)將肉蓯蓉藥材粉碎。
[0194] 2)雙水相體系的建立'在該雙水相體系中，基于雙水相體系，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 22%，硫酸銨分?jǐn)?shù)為22%，將稱取Sg肉蓯蓉藥材粉末加入到雙水相體系中，料液比1/4〇。
[0195] 3)超聲波的輔助下提取25min，其中提取溫度為 7(TC,超聲波功率為2〇〇w，超聲波 頻率 30kHz。 '
[0196] 4)取苯乙醇苷富集相，對(duì)其進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為5〇t;，結(jié)晶法回收 硫酸銨，最后在60°C下真空干燥，得到蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 59g。
[0197]實(shí)施例33按照實(shí)施例卜32任意之一方法制備的苯乙醇苷在改善記憶或神經(jīng)保護(hù) 產(chǎn)品中的應(yīng)用
[0198]按照銀杏葉提取物：枸杞子提取物：苯乙醇苷=2 :5 :4配比，將三種物質(zhì)混合，滅 菌，壓片，制備成改善記憶蓯蓉片。 、
[0199] 實(shí)施例34
[0200]采用高效液相法測(cè)定由本發(fā)明所述方法制得的蓯蓉苯乙醇苷提取物中主要成分 松果菊苷，紫外分光光度法測(cè)定總苯乙醇苷（采用松果菊苷為標(biāo)品）。所得的全波長(zhǎng)掃描和 高效液相色譜圖見(jiàn)附圖。
[0201]圖1為松果菊苷對(duì)照品紫外吸收光譜圖，最大吸收波長(zhǎng)為（332nm)。
[0202]圖2為總苯乙醇苷提取物紫外吸收光譜圖，最大吸收波長(zhǎng)為（332nm)，證實(shí)所得的 蓯蓉苯乙醇苷提取物中的主要成分為松果菊苷。
[0203] 圖3為松果菊苷對(duì)照品高效液相色譜圖，保留時(shí)間為16. 2η?η。
[0204] 圖4為總苯乙醇苷高效液相色譜圖，保留時(shí)間為16. 2min，證實(shí)所得的蓯蓉苯乙醇 苷提取物中的主要成分為松果菊苷。
[0205] 本發(fā)明所述的雙水相萃取肉蓯蓉苯乙醇苷的方法，具有溫和的生產(chǎn)條件、技術(shù)易 放大，生產(chǎn)快速、溶劑易回收利用，綠色環(huán)保無(wú)污染，苯乙醇苷品質(zhì)高等優(yōu)點(diǎn)。
[0206] 申請(qǐng)人:聲明，本發(fā)明通過(guò)上述實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的詳細(xì)方法，但本發(fā)明并不局 限于上述詳細(xì)方法，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述詳細(xì)方法才能實(shí)施。所屬【技術(shù)領(lǐng)域】的 技術(shù)人員應(yīng)該明了，對(duì)本發(fā)明的任何改進(jìn)，對(duì)本發(fā)明產(chǎn)品各原料的等效替換及輔助成分的 添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍和公開(kāi)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1. 一種雙水相萃取蓯蓉苯乙醇苷的方法，其包括以下步驟： 1) 將蓯蓉原料粉末加入雙水相體系； 2) 萃取； 3) 移取苯乙醇苷富集相，濃縮干燥，得到蓯蓉苯乙醇苷提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述蓯蓉原料粉末的粉碎度為10-80目， 優(yōu)選20-40目，更優(yōu)選30目。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述蓯蓉原料為肉蓯蓉、管花肉蓯蓉、鹽 生肉蓯蓉、沙蓯蓉和白花鹽蓯蓉中的一種或至少兩種的混合物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述雙水相體系為選自乙醇/硫酸銨、乙 醇/磷酸氫二鉀、乙醇/檸檬酸鈉或PEG/硫酸銨體系中的一種； 優(yōu)選地，所述雙水相體系為乙醇/硫酸銨體系，其中，基于所述雙水相體系，乙醇質(zhì)量 分?jǐn)?shù)為I5% -40%，優(yōu)選18% -30%，更優(yōu)選20% ;基于所述雙水相體系，硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為 14% -40%，優(yōu)選 18% -30%，更優(yōu)選 23%。
5·根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述灰蓉原料粉末與所述雙 水相體系按重量計(jì)比值為1 :5-1 :50,優(yōu)選1 :20-1 :40,更優(yōu)選1 :30。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述萃取采用攪拌震蕩和/或 超聲輔助的提取方法； 優(yōu)選地，所述超聲輔助提取的時(shí)間為10-90分鐘，優(yōu)選30-60分鐘，更優(yōu)選40分鐘； 所述超聲輔助提取功率100-3000W，優(yōu)選200-2000W，更優(yōu)選8〇〇W ;所述超聲輔助提取頻率 10- 100kHz，優(yōu)選 30-80kHz，更優(yōu)選 40kHz ;提取溫度 20-8(TC,優(yōu)選 30-7(TC，更優(yōu)選 4(TC。
7·根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述苯乙醇苷富集相的濃縮 千燥采用選自真空濃縮干燥、噴霧干燥、鼓風(fēng)干燥和冷凍干燥中的一種； 優(yōu)選地，所述濃縮干燥采用噴霧干燥，其進(jìn)風(fēng)溫度為160-23(TC,優(yōu)選170-20(TC，更優(yōu) 選 175。。。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，移取苯乙醇苷富集相之后，剩余的雙水相 體系進(jìn)行回收，所述回收包括回收無(wú)機(jī)鹽，所述回收無(wú)機(jī)鹽的方法為結(jié)晶法。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述回收雙水相體系包括回收有機(jī)物，所 述中回收有機(jī)物的方法包括減壓蒸餾法。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述方法制備的苯乙醇苷在改善記憶或神經(jīng)保護(hù)產(chǎn)品 中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P39/06GK104189100SQ201410279513
【公開(kāi)日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年6月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月18日
【發(fā)明者】趙兵, 董貝濤, 趙慶生, 袁曉凡 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所