羧甲基葡聚糖在制備提高禽流感疫苗抗體陽性率藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了羧甲基葡聚糖（CMG）在制備提高禽流感疫苗抗體陽性率藥物中的應(yīng)用。所述的應(yīng)用是將羧甲基葡聚糖與礦物油乳化成油乳劑劑型后作為佐劑預(yù)先或注射疫苗時注入動物機體內(nèi)。本發(fā)明可以顯著提高禽流感疫苗抗體陽性率，從原來的65%左右提高到100%，且維持時間長，有效降低感染發(fā)病的幾率。其次，本發(fā)明無任何毒副作用、無殘留、使用方便，易于控制用量。
【專利說明】羧甲基葡聚糖在制備提高禽流感疫苗抗體陽性率藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉羧甲基葡聚糖，具體來說涉及羧甲基葡聚糖在制備提高禽流感疫苗抗體陽性率藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，滅活疫苗在畜禽疫病防控中發(fā)揮重要作用，但現(xiàn)有滅活疫苗免疫機體后，普遍存在抗體陽性率較低，抗體持續(xù)期較短等問題。一般常規(guī)滅活疫苗需要免疫兩次以上，且免疫后2-3周才能對機體提供有效保護。在規(guī)?；B(yǎng)殖條件下，因畜禽免疫后抗體陽性率較低，無法提供有效保護，可能會波及整群發(fā)病，帶來嚴(yán)重經(jīng)濟損失。
[0003]禽流感是危害我國養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展重要傳染病之一，免疫滅活疫苗是防控這種疾病有效措施之一。目前，由于雞群免疫抑制疾病發(fā)病率較高，禽流感疫苗免疫后抗體陽性率普遍較低，特別是在肉雞上體現(xiàn)尤為明顯。某些肉雞飼養(yǎng)場，H5亞型禽流感抗體陽性率為0，存在嚴(yán)重的免疫缺陷。另外，肉雞生長期比蛋雞短，且免疫性能方面比蛋雞略差，在母源抗體消失至免疫后自身產(chǎn)生有效保護抗體需要一段時間，同時肉雞生產(chǎn)期只有40多天，對疫苗的免疫效力要求更高。因此，臨床生產(chǎn)上亟需一種能提高現(xiàn)有禽流感滅活疫苗抗體效價的藥物，以提高現(xiàn)有滅活疫苗對肉雞的保護。
[0004]羧甲基葡聚糖是酵母葡聚糖的羧甲基化衍生物，是一種新型高效、無毒、水溶性生物大分子，它具有廣泛的生理調(diào)節(jié)作用。例如I)促進傷口愈合:研究發(fā)現(xiàn)使用羧甲基葡聚糖涂抹動物腿部傷口，能明顯加速其傷口愈合。2)曬后修復(fù):研究發(fā)現(xiàn)羧甲基葡聚糖能夠快速修復(fù)因紫外照射導(dǎo)致的皮膚紅斑。3)抗衰老:皮膚中具有免疫活性的朗格罕氏細胞能夠被羧甲基葡聚糖活化，誘發(fā)其系統(tǒng)的免疫和修復(fù)功能。羧甲基葡聚糖已被列入國際化妝品原料名單(INCI )，廣泛應(yīng)用化妝品領(lǐng)域，然而，尚未有關(guān)于羧甲基葡聚糖提高禽流感疫苗抗體陽性率的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明公開了羧甲基葡聚糖在制備提高禽流感疫苗抗體陽性率藥物中的應(yīng)用。它是將羧甲基葡聚糖與礦物油乳化成油乳劑后，按照一定比例與商品疫苗混合后注入畜禽機體內(nèi)。其中所述的提高禽流感疫苗抗體陽性率指的是提高肉雞H5亞型禽流感疫苗抗體的陽性率。
[0006]本發(fā)明所述的羧甲基葡聚糖指的是含有羧甲基葡聚糖的油乳劑型免疫增強劑。特別是應(yīng)用于家禽時，在制備的油乳劑型免疫增強劑中羧甲基葡聚糖最終濃度為5g/100mL。
[0007]本發(fā)明所述的羧甲基葡聚糖，指的是含有羧甲基葡聚糖的油乳劑型免疫增強劑。
[0008]本發(fā)明進一步公開了油乳劑型免疫增強劑，它是由下述重量份數(shù)的原料組成: 羧甲基葡聚糖 IOg吐溫-80 2mL
白油94mL司班-80 6mL注射用水lOOmL。
[0009]本發(fā)明同時也公開了油乳劑型免疫增強劑的制備方法按如下的步驟進行:
(O配制水相溶液:將IOg羧甲基葡聚糖加入IOOmL注射用水中溶解，然后加入吐溫-80 2mL, 200rpm攪拌IOmin,配制成水相溶液。
[0010](2)配制油相溶液:白油與司班-80混合配制成油相溶液；其中白油:司班-80的體積比比為100:6。
[0011](3)將配制的水相溶液緩慢加到油相溶液中，然后在24 000 r/min乳化10 min,即得羧甲基葡聚糖油乳劑；其中水相溶液與油相溶液的體積比1:1。
[0012]本發(fā)明更進一步公開了油乳劑型免疫增強劑使用方法，它是將油乳劑型免疫增強劑與商品禽流感滅活疫苗按體積比1: 9混合后注入動物機體。該羧甲基葡聚糖油乳劑能顯著提高H5亞型禽流感商品疫苗抗體抗體陽性率，且高達100%。
[0013]本發(fā)明更加詳細的試驗方法及結(jié)果如下:
I材料和方法
1.1疫苗和檢測試劑盒
H5(Re-5)亞型禽流感商品疫苗，購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。禽流感抗體ELISA檢測試劑盒，購自美國 愛德士( IDEXX)試劑公司。 [0014]1.2試驗動物
I日齡肉雞購自天津靜?？h某肉雞養(yǎng)殖場，在普通環(huán)境中飼養(yǎng)。
[0015]1.3油乳劑免疫增強劑配制及使用方法
(I)配制水相溶液:在注射用水中分別加入不同克數(shù)羧甲基葡聚糖，然后加入2%吐溫-80，200rpm攪拌，IOmin,配制成水相溶液，使其終濃度分別為；50g/100mL，5g/100mL，
0.5g/100mL。
[0016](2)配制油相溶液:94%白油與6%司班-80混合配制成油相溶液。
[0017](3)將水相以I: I的比例緩慢加到油相中后，24000 r/min乳化10 min，即得油乳劑型免疫增強劑。
[0018](4)將油乳劑型免疫增強劑與商品禽流感滅活疫苗按體積比為1: 9混合，注入動物機體進行免疫。
[0019]1.4動物免疫
選擇7日齡肉雞禽流感母源抗體效價為O雞群。將高中低三種濃度油乳劑免疫增強劑按照1:9與H5 (Re-5)亞型禽流感商品疫苗混合后，共同免疫(分別標(biāo)記為G、Z、D組)，免疫雞日齡為7日齡。另設(shè)常規(guī)疫苗(記為MD組)對照，疫苗劑量為0.3 mL/只雞，20只雞/組。免疫后第I周、第2周、第3周、第4周和第5周采血，抗體檢測。采用ELISA試劑盒檢測抗體陽性率。
[0020]2結(jié)果與討論
2.1肉雞免疫后的抗體陽性率
從圖1，2中可以看出，在免疫后第2周，所有試驗組H5亞型禽流感抗體陽性率均達70%，各組之間均無明顯差異；在免疫后第3周，SPF雛雞(Z組)抗體陽性率達100%，且一直持續(xù)到免疫后5周(42日齡)，而常規(guī)疫苗免疫對照組(MD組)與低劑量組(D組)抗體陽性率為80%，且在免疫后第4周抗體陽性率下降到62%左右；高劑量組(G組)在免疫后第2周抗體陽性率達70%，且一直持續(xù)到免疫后第5周。
[0021]試驗結(jié)果表明，中劑量(5g/100mL)羧甲基葡聚糖油乳劑能顯著提高H5亞型禽流感疫苗抗體抗體陽性率，且高到100%，與常規(guī)疫苗和其他劑量羧甲基葡聚糖油乳劑相比較，能維持到免疫后第5周(42日齡)。由此可見，從長效的預(yù)防機制上面來看，本發(fā)明可以提高H5亞型禽流感疫苗的抗體陽性率達100%，且持續(xù)到42日齡，從而在肉雞飼養(yǎng)全過程中，有效地預(yù)防禽流感疾病發(fā)生。
[0022]【專利附圖】

【附圖說明】:
圖1各試驗組雞免疫后不同時間抗體S/N值平均值；
圖2各試驗組雞免疫后不同時間抗體陽性率。
【具體實施方式】
[0023]下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0024]實施例1
50g/100mL羧甲基葡聚糖油乳劑免疫增強劑配制
(O配制水相溶液:將100g羧甲基葡聚糖加入IOOmL注射用水中溶解，然后加入吐溫-80 2mL,200rpm攪拌IOmin,配制成水相溶液。
[0025](2)配制油相溶液:白油與司班-80混合配制成油相溶液；其中白油:司班-80的體積比比為100:6。
[0026](3)將配制的水相溶液緩慢加到油相溶液中，然后在24 000 r/min乳化10 min,即得羧甲基葡聚糖油乳劑；其中水相溶液與油相溶液的體積比1:1。
[0027]實施例2
5g/100mL羧甲基葡聚糖油乳劑免疫增強劑配制
(O配制水相溶液:將IOg羧甲基葡聚糖加入IOOmL注射用水中溶解，然后加入吐溫-80 2mL, 200rpm攪拌lOmin，配制成水相溶液，使其終濃度分別為5g/100mL。
[0028](2)配制油相溶液:白油與司班-80混合配制成油相溶液；其中白油:司班-80的體積比比為100:6。
[0029](3)將配制的水相溶液緩慢加到油相溶液中，然后在24 000 r/min乳化10 min,即得羧甲基葡聚糖油乳劑；其中水相溶液與油相溶液的體積比1:1。
[0030]實施例3 對比試驗
將5mg/100mL油乳劑免疫增強劑按照1:9與H5 (Re-5)亞型禽流感商品疫苗混合后，共同免疫(發(fā)明組)，免疫雞日齡為7日齡。另設(shè)常規(guī)疫苗對照組(記為對照組)，疫苗劑量為0.3 mL/只雞，20只雞/組。免疫后不同時間段采血抗體檢測。采用ELISA試劑盒檢測抗體陽性率。
【權(quán)利要求】
1.羧甲基葡聚糖在制備提高禽流感疫苗抗體陽性率藥物中的應(yīng)用。
2.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述的提高禽流感疫苗抗體陽性率指的是提高肉雞H5亞型禽流感疫苗抗體的陽性率。
3.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述的羧甲基葡聚糖指的是含有羧甲基葡聚糖的油乳劑型免疫增強劑。
4.權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中所述的藥物在制備的油乳劑型免疫增強劑時，羧甲基葡聚糖最終濃度為5g/100mL。
5.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于它是由權(quán)利要求1所述的油乳劑型免疫增強劑與商品禽流感滅活疫苗按體積比1:9混合使用。
【文檔編號】A61P31/16GK103948622SQ201410143946
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年4月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月10日
【發(fā)明者】孫英峰, 李秀麗, 田向?qū)W, 李富強, 任衛(wèi)科, 鄢明華, 張莉, 楊春蕾, 刁澤惠, 楊鴻雁, 王利麗, 路超 申請人:天津市畜牧獸醫(yī)研究所