一種多肽、多肽衍生物、多肽的可藥用鹽及藥物組合物的制作方法
【專利摘要】為克服現(xiàn)有技術(shù)中促胰島新生多肽的血漿半衰期較短、活性較低的問題，本發(fā)明提供了一種多肽。同時，本發(fā)明還公開了上述多肽的衍生物、可藥用鹽及藥物組合物。本發(fā)明提供的多肽在血液中的穩(wěn)定性高，半衰期長。
【專利說明】一種多肽、多肽衍生物、多肽的可藥用鹽及藥物組合物
[0001] 本申請基于2013年3月15日提交的在先的PCT國際申請（申請?zhí)枮镻CT/ CN2013/072771 )，并要求其優(yōu)先權(quán)，將該在先申請的全部內(nèi)容通過引用結(jié)合在本申請中。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明主要涉及到醫(yī)藥及制藥領(lǐng)域，尤其是一種多肽以及該多肽的衍生物、可藥 用鹽及藥物組合物。

【背景技術(shù)】
[0003] 全世界有3億多人患有糖尿?。―M)并忍受由此帶來的痛苦。主要的糖尿病類型 分為一型糖尿病（T1D)和二型糖尿?。═2D)兩種。一型糖尿病是由于機體無法產(chǎn)生胰島素 從而病人需要每天給予胰島素進(jìn)行治療；二型糖尿病的發(fā)病則是由于胰島素抵抗，即機體 細(xì)胞無法恰當(dāng)?shù)睦靡葝u素。目前對于二型糖尿病已經(jīng)有多種被證實確切有效的非胰島素 治療方式，然而隨著疾病的發(fā)展，有相當(dāng)大比例的晚期二型糖尿病病人胰島β細(xì)胞的功能 喪失從而需要給予胰島素治療。
[0004] 糖尿病的發(fā)展與胰腺中胰島的大量喪失有關(guān)。在被診斷出糖尿病之初，一型糖尿 病病人90%以上的胰島、二型糖尿病病人50%左右的胰島已經(jīng)喪失。胰島新生被公認(rèn)是治 療一型和二型糖尿病的最優(yōu)方案，人們?yōu)閷ふ掖碳ひ葝u新生的方法也做出了很多嘗試和努 力。
[0005] 目前，研究者發(fā)現(xiàn)胰島新生相關(guān)蛋白（INGAP)、人促胰島肽（HIP)、胰高血糖素樣 肽-1 (GLP-1)、胰島內(nèi)分泌血管活性腸肽（VIP)、表皮生長因子和胃泌素等都具有引發(fā)非 內(nèi)分泌胰腺母細(xì)胞分化成功能完善的胰島的功能，且已經(jīng)在多種動物模型中得到證實。 在所有的這些化合物中，INGAP蛋白序列中104 - 118區(qū)域15個氨基酸的INGAP多肽 (INGAP-PP)可誘發(fā)胰島新生，并且已經(jīng)在逆轉(zhuǎn)STZ誘發(fā)的小鼠糖尿病、增加一型糖尿病病 人C-肽的釋放、改善二型糖尿病病人的血糖控制等多種實驗結(jié)果中得到證實。除此之外， 另外有報道表明INGAP-PP還具有其他一些生物學(xué)效應(yīng)，比如劑量依賴性的刺激胰島β細(xì) 胞數(shù)目的增加、增加胰島素的分泌以及β細(xì)胞的大小。在人體開展的臨床驗證研究表明， 其具有改善血糖平衡的功效，二型糖尿病病人給藥90天HbAlc指標(biāo)的改善以及一型糖尿病 病人C-肽的釋放明顯增加等均進(jìn)一步證實了上述INGAP-PP的功效。然而，INGAP-PP的血 漿半衰期較短并且需要給予較高的劑量等特點使得該多肽的臨床應(yīng)用受到限制。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)中INGAP-PP的血漿半衰期較短的問 題，提供一種多肽。
[0007] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案如下：
[0008] 提供一種多肽，具有如下通式：
[0009] x1glhx2px3x4gtx5px 6gs ；
[0010] 其中，X1 選自 Isoleucine (I)、D-Isoleucine、L-NorValine 或 L-NorLeucine ; X2 選自 Alanine (A)或 Aspartic Acid (D) ;X3 選自 Serine (S)或 Threonine (T) ;X4 選自 Histidine (H)或 Glutamine (Q) ;X5 選自 Leucine (L)或 Glutamic acid (E)；
[0011] 并且，當(dāng) X1 為 Isoleucine (I)、X2 為 Aspartic Acid (D)、X3 為 Serine (S)、X4 為 Histidine (Η)、X5 為 Leucine (L)成立時，X6 選自 Alanine (A)、a -Amino-isobutyric acid 或 N-methyl-L-Alanine ;
[0012] 當(dāng) X1 為 Isoleucine (I)、X2 為 Aspartic Acid (D)、X3 為 Serine (S)、X4 為 Histidine (H)、X5 為 Leucine (L)不成立時，X6 選自 Alanine (A)、Asparagine (N)、 a -Amino-isobutyric acid 或 N-methyl-L-Alanine〇
[0013] 同時，本發(fā)明還提供了基于上述多肽的多肽衍生物，該多肽衍生物為上述多肽的 修飾產(chǎn)物。
[0014] 進(jìn)一步的，本發(fā)明還公開了上述多肽或多肽衍生物在制備治療糖尿病的藥物中的 應(yīng)用。
[0015] 進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供了上述多肽或多肽衍生物的可藥用鹽，所述可藥用鹽為 醋酸鹽和鹽酸鹽。
[0016] 進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物由上述多肽或多肽 衍生物與藥用載體按配方制造而成。
[0017] 進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供了一種促進(jìn)胰島細(xì)胞增殖的方法，包括采用上述多肽或 多肽衍生物與胰島細(xì)胞接觸。
[0018] 進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供了一種產(chǎn)生胰島細(xì)胞簇的方法，包括采用上述多肽或多 肽衍生物與胰腺導(dǎo)管細(xì)胞接觸。
[0019] 進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供了一種促進(jìn)肝細(xì)胞再生的方法，包括采用上述多肽或多 肽衍生物與肝細(xì)胞接觸。
[0020] 進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供了一種促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞再生的方法，包括采用上述多肽或 多肽衍生物與神經(jīng)細(xì)胞接觸。
[0021] 將本發(fā)明提供的多肽制備成藥物后，使用時可有效的改善胰島功能，并且該多肽 的血漿半衰期長，穩(wěn)定性好，可在血液中長時間發(fā)揮作用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0022] 圖1是本發(fā)明實施例2中，肽1、肽3、肽7對ARIP細(xì)胞增殖作用的對比圖；
[0023] 圖2是本發(fā)明實施例3中，肽1、肽7、肽8的穩(wěn)定性對比圖；
[0024] 圖3A是本發(fā)明實施例4中，肽1、肽3、肽7在STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠模型上，治療 的第21天血糖的比較；
[0025] 圖3B是本發(fā)明實施例4中，肽1、肽3、肽7在STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠模型上，治療 的第21天空腹胰島素水平的比較；
[0026] 圖3C是本發(fā)明實施例4中，肽1、肽3、肽7在STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠模型上，治療 的第21天0GTT實驗中測定的葡萄糖曲線下面積（AUC)的比較；
[0027] 圖4是本發(fā)明實施例5中，分別采用肽1、肽3、肽7治療10天的雌性小鼠胰島粒 徑分布圖。

【具體實施方式】
[0028] 為了使本發(fā)明所解決的技術(shù)問題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，以下結(jié)合 附圖及實施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用 以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0029] 本發(fā)明所述化合物，包含具有治療各種疾病和病癥，尤其是與糖尿病有關(guān)的疾病 和病癥的多肽或多肽衍生物。另外本發(fā)明的多肽和多肽衍生物可用于以下用途：治療胰腺 功能障礙、代謝性疾病、體外誘導(dǎo)胰島增殖用于移植、提高體內(nèi)移植胰島的存活率、神經(jīng)保 護(hù)或促進(jìn)神經(jīng)再生、促進(jìn)肝再生及抗炎等。
[0030] 如本文所公開的，本發(fā)明提供了具有與原INGAP-PP和HIP肽相比活性和穩(wěn)定性 相當(dāng)或有所提高的一系列多肽(見表2和表3)。改善了成藥性的多肽使得它們更適合于臨 床開發(fā)。本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明中所提到的多肽或多肽衍生物的藥學(xué)組成成分及使 用方法制備的藥物，用于治療代謝性疾病，包含但不限于一型糖尿?。═1D)和二型糖尿病 (T2D)。本發(fā)明還提供本發(fā)明的組合物的合適的配方，包括緩釋制劑。
[0031] 如前所述，來源于倉鼠的胰島新生相關(guān)蛋白（INGAP)已經(jīng)被證實具有促進(jìn) 胰島新生的作用（見美國專利第5834590號）。這里提到的INGAP-PP是INGAP蛋白 的15個氨基酸多肽片段，已經(jīng)被證實具有逆轉(zhuǎn)小鼠糖尿病模型的作用（Rosenberg et al. , Ann. Surg. 240:875-884(2004) ;US publication2006/0009516;see also US publication2008/0171704;Kapur et al.,Islets4:1-9(2012);Chang et al.,Mol.Cell.Endocrinol. 335:104-109 (2011) ;Borelli et al., Regulatory Peptides131:97_102 (2005) ;Dungan et a 1. , Diabetes/Metabo1ism Res. Rev. 25:558-565(2009);Zha et al. , J. Endocrinol. Invest. 35:634-639(2012);Wang et al. , J. Cell. Physiol. 224:501-508(2010);Petropavlovskaia et al. , J. Endocrinol. 19 1:65-81 (2006);Taylor-Fishwick et al. , Pancreas39:64-70(2010);Rosenberg, Diabe tologia39:256-262(1996);Madrid et al. , Regulatory Peptides 157:25-31 (2009);and Taylor-Fishwick et al. , J. Endocrinol. 190:729-737(2006))〇 一 個被稱作 人促胰島肽（HIP)的多肽也同樣被證實其功效（1^6七3116七31.311(1〇(^；[11· Pract. 14:1075-1083(2008) ;US publication2011/0280833)。本發(fā)明提供的 INGAP-PP 和 HIP多肽，包括表2和表3中的多肽，不是INGAP-PP或HIP母肽，而是表現(xiàn)出較INGAP-PP或 HIP母肽非顯而易見的性能提高的多肽。
[0032] 如本文所用，術(shù)語"肽"是指兩個或兩個以上的氨基酸的聚合物?？杀恍揎棾善漕?似物，衍生物，功能模擬物，偽肽等諸如此類包含至少兩個氨基酸的聚合物。術(shù)語"肽"的含 義是被本專業(yè)領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的。通常情況下，肽是由兩個或多個氨基酸由酰胺鍵 鏈接，酰胺鍵則由一個氨基酸的氨基與相鄰氨基酸的羧基構(gòu)成。本文所述的多肽可包含天 然存在的氨基酸或者非天然存在的氨基酸。
[0033] 如本文所用的術(shù)語"衍生物"是指母體分子如多肽的一種變型。例如多肽的衍生 物，可以包括相對于多肽而言一個或多個氨基酸被取代的一種變型。還可以包括對于多肽 的修飾，包含但不限于非天然存在的氨基酸、D型氨基酸、氨基和/或羧基末端（N-或C-末 端)修飾的氨基酸，特別是對于在N-末端的氨基和/或C-末端的羧基的修飾、脂肪酸修飾、 肽模擬物和偽肽等本文所公開的諸如此類的修飾物。下面有對于改造修飾示例更詳細(xì)地描 述。
[0034] 如本文所用術(shù)語"胰腺功能障礙"是指與正?；蚪】祩€體胰腺相比功能下降的一 種疾病或病癥。胰腺功能受損的典型不例包含但不限于，一型糖尿病、二型糖尿病、成人隱 匿性自身免疫糖尿病（LADA)、空腹血糖受損、糖耐量異常、胰島素不足、空腹胰島素血癥、胰 島素抵抗或空腹胰島素水平受損或者以上幾種情況的組合。下面有對這些疾病和病癥情況 更詳細(xì)地討論。
[0035] 如本文所述，本發(fā)明提供了 INGAP-PP和HIP。表1顯示了 INGAP-PP和HIP肽，以 及多種被用作本文所述實驗陰性對照的雜肽的序列，這些雜肽在比較INGAP-PP，HIP與本 發(fā)明的衍生物的活性研究實驗時作為陰性對照。
[0036] 表1. INGAP-PP和HIP肽以及對照雜肽
[0037]

【權(quán)利要求】
1. 一種多肽，其特征在于，具有如下通式： x1glhx2px3x4gtx5px 6gs ； 其中，X1 選自 Isoleucine (I)、D-Isoleucine、L-NorValine 或 L-NorLeucine ;X2選自 Alanine (A)或 Aspartic Acid (D) ;X3 選自 Serine (S)或 Threonine (T) ;X4 選自 Histidine (H)或 Glutamine (Q) ;X5 選自 Leucine (L)或 Glutamic acid (E)； 并且，當(dāng) X1 為 Isoleucine (I)、X2 為 Aspartic Acid (D)、X3 為 Serine (S)、X4 為 Histidine (Η)、X5 為 Leucine (L)成立時，X6 選自 Alanine (A)、a -Amino-isobutyric acid 或 N-methyl-L-Alanine ; 當(dāng) X1 為 Isoleucine (I)、X2 為 Aspartic Acid (D)、X3 為 Serine (S)、X4 為 Histidine (H)、 X5 為 Leucine (L)不成立時，X6 選自 Alanine (A)、Asparagine (N)、a -Amino-isobutyric acid 或 N-methyl-L-Alanine〇
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于，具有如下序列： H-IGLHAPSHGTLPNGS-OH(序列編號：6) H-IGLHDPSHGTLP(Aib)GS-〇H(序列編號：10)、 H-IGLHDPSHGTLP(N-methyl-L-Alanine)GS-〇H(序列編號：11)、 H-(D-Isoleucine)GLHDPSHGTLPNGS-〇H(序列編號：17)、 H-IGLHDPSHGTEPNGS-OH(序列編號：18)、 H-IGLHDPSQGTLPNGS-OH(序列編號：19)、 H-IGLHDPTHGTLPNGS-OH(序列編號：20)中的一種或多種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于，具有如下序列： H-IGLHDPSHGTLPAGS-OH(序列編號：7)、 H-IGLHAPSHGTLPAGS-OH(序列編號：8)、 H-(D-Isoleucine)GLHDPSHGTLPAGS-〇H(序列編號：13)、 H-(L-NorValine)GLHDPSHGTLPAGS-〇H(序列編號：14)、 H-(L-NorLeucine) GLHDPSHGTLPAGS-OH(序列編號：15)、 H-IGLHDPSHGTEPAGS-OH(序列編號：24)、 H-IGLHDPSQGTLPAGS-OH(序列編號：25)、 H-IGLHDPTHGTLPAGS-OH(序列編號：26)中的一種或多種。
4. 一種多肽衍生物，其特征在于，所述多肽衍生物為權(quán)利要求1-3中任意一項所述的 多肽的修飾產(chǎn)物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的多肽衍生物，其特征在于，所述修飾包括烷基化、酰基化、氨 基甲酰化、碘化。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的多肽衍生物，其特征在于，所述修飾包括N-末端乙?；?C-末端酰胺化、D型氨基酸非天然氨基酸替換所述多肽中的天然氨基酸、脂肪酸修飾中的 一種或多種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的多肽衍生物，其特征在于，所述非天然氨基酸選自2-氨基脂 肪酸、3-氨基脂肪酸、β -丙氨酸、β -氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、哌啶羧酸、6-氨 基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基異丁酸、3-氨基異丁酸、2-氨基庚二酸、2, 4-二氨基丁酸、鎖鏈 素、2, 2' -二氨基庚二酸、2, 3-二氨基丙酸、Ν-乙基甘氨酸、Ν-乙基天冬酰胺、羥賴氨酸、異 羥賴氨酸、3-羥脯氨酸、4-羥基脯氨酸、異鎖鏈素、異-異亮氨酸、N-甲基甘氨酸、N-甲基異 亮氨酸、6-N-甲基賴氨酸、N-甲基纈氨酸、正纈氨酸、正亮氨酸或鳥氨酸。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的多肽衍生物，其特征在于，所述脂肪酸修飾包括C2、C4、C6、 C8、CIO、C12、C14、C16、C18、C20或更長碳鏈的脂肪族基團酰化。
9. 如權(quán)利要求1-3中任意一項所述的多肽或者選自權(quán)利要求4-8中任意一項所述的多 肽衍生物在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
10. -種多肽的可藥用鹽，其特征在于，所述多肽選自權(quán)利要求1-3中任意一項所述的 多肽或者選自權(quán)利要求4-8中任意一項所述的多肽衍生物，所述的可藥用鹽為醋酸鹽和鹽 酸鹽。
11. 一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物由多肽與藥用載體按配方制造而 成； 所述多肽選自權(quán)利要求1-3中任意一項所述的多肽或者選自權(quán)利要求4-8中任意一項 所述的多肽衍生物。
12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥用載體包括水、緩沖鹽溶 液、生理鹽水、林格氏液、乙二醇、甘油、油脂或可注射的有機酯中的一種或多種。
13. 根據(jù)權(quán)利要求11或12所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥用載體包括碳水化 合物、抗氧劑、螯合劑、二價金屬離子、酶抑制劑、低分子量蛋白或穩(wěn)定劑中的一種或多種。
14. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其特征在于，所述碳水化合物包括葡萄糖、 蔗糖、葡聚糖、纖維素；所述抗氧劑包括抗壞血酸或谷胱甘肽；所述螯合劑包括乙二胺四乙 酸；所述二價金屬離子包括鈣離子或鎂離子。
15. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物還包括增稠劑、 稀釋劑、緩沖液、防腐劑、表面活性劑、增加所述多肽分子選擇可能的物質(zhì)、抗菌劑、抗炎劑、 麻醉劑中的一種或多種。
16. -種促進(jìn)胰島細(xì)胞增殖的方法，其特征在于，包括采用權(quán)利要求1-3中任意一項所 述的多肽或者選自權(quán)利要求4-8中任意一項所述的多肽衍生物與胰島細(xì)胞接觸。
17. -種產(chǎn)生胰島細(xì)胞簇的方法，其特征在于，包括采用權(quán)利要求1-3中任意一項所述 的多肽或者選自權(quán)利要求4-8中任意一項所述的多肽衍生物與胰腺導(dǎo)管細(xì)胞接觸。
18. -種促進(jìn)肝細(xì)胞再生的方法，其特征在于，包括采用權(quán)利要求1-3中任意一項所述 的多肽或者選自權(quán)利要求4-8中任意一項所述的多肽衍生物與肝細(xì)胞接觸。
19. 一種促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞再生的方法，其特征在于，包括采用權(quán)利要求1-3中任意一項所 述的多肽或者選自權(quán)利要求4-8中任意一項所述的多肽衍生物與神經(jīng)細(xì)胞接觸。
【文檔編號】A61P3/10GK104045703SQ201410096596
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年3月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月15日
【發(fā)明者】劉利平, 白茹 申請人:深圳君圣泰生物技術(shù)有限公司