一種注射用烏頭提取物的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種注射用烏頭提取物的制備方法，其包括提取、萃取、反相色譜純化和水解炮制過程；烏頭藥材采用乙醇提取，有機(jī)相萃取和反相色譜純化，得到單酯型和雙酯型生物堿組分；將該組分中的雙酯型生物堿在堿性條件下水解轉(zhuǎn)化，去除毒性，冷凍干燥，即得到淡黃色的烏頭提取物。本發(fā)明的制備工藝重復(fù)性好，自動(dòng)化程度高，操作工藝簡(jiǎn)便，適合于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)；得到的烏頭提取物有效的去除了色素等大量雜質(zhì)，提高了藥效成分單酯型生物堿的含量，控制了毒性成分雙酯型生物堿的含量，經(jīng)適當(dāng)?shù)乃幮W(xué)和毒性評(píng)價(jià)，可作用烏頭注射劑的原料。
【專利說(shuō)明】一種注射用烏頭提取物的制備方法
【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，可用于一種注射用烏頭提取物的制備方法。
【【背景技術(shù)】】
[0002]烏頭(Aconitum carmichaeli Dibx)屬于毛茛科烏頭屬植物，目前世界上已發(fā)現(xiàn)超過300個(gè)品類，我國(guó)是主要的產(chǎn)區(qū)之一。烏頭具有祛風(fēng)除濕，勝濕止痛的功效，臨床上主要用于抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、解熱、免疫抑制、抗腫瘤作用及強(qiáng)心、降血壓、擴(kuò)張血管等作用，具有較高的藥理活性和藥用價(jià)值。
[0003]烏頭注射劑是從烏頭中提取出的總生物堿制劑，臨床上主要用于癌癥晚期的鎮(zhèn)痛、抗炎和抗癌作用，給藥方式主要有肌肉注射和靜脈注射。傳統(tǒng)的肌肉注射通過皮下血管吸收，起效慢，而且很容易造成局部組織痙攣；此外，肌肉注射的劑量小，需多次給藥，給病人帶來(lái)痛苦的同時(shí)藥效也不顯著，為臨床應(yīng)用帶來(lái)巨大的局限性，所以，烏頭注射劑正在向靜脈注射的方向發(fā)展。
[0004]烏頭的有效成分為二萜類生物堿，主要包括胺醇型生物堿，單酯型生物堿，雙酯型生物堿和脂肪族生物堿，其中雙酯型生物堿的含量最高，毒性也最大，在制備注射劑的過程中需要經(jīng)過水解炮制，去除毒性?！吨袊?guó)藥典》對(duì)炮制后的烏頭中雙酯型生物堿的含量有明確的規(guī)定，不得超過0.04%，以保證用藥的安全性。
[0005]烏頭注射劑傳統(tǒng)的制備工藝比較簡(jiǎn)單，采用乙醇冷浸提取，藥渣水煮，合并提取液后直接酸性條件下水煮炮制，活性炭脫色后再水煮的方法。此制備工藝沒有明確的除雜過程，得到的烏頭提取物中雜質(zhì)含量較高，顏色較深；此外，該工藝在酸性條件下炮制效率不高，產(chǎn)物中還有部分毒性成分雙酯型生物堿殘留。因此，可以針對(duì)烏頭藥材建立一種烏頭提取物的制備工藝，該工藝有效地去除了色素等雜質(zhì)，提高了藥效成分單酯型生物堿的含量，控制了毒性成分雙酯型生 物堿的含量，再經(jīng)過適當(dāng)?shù)乃幮W(xué)和毒性評(píng)價(jià)，可作用烏頭注射劑的原料，目標(biāo)是改善烏頭注射劑的安全性和穩(wěn)定性。
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【發(fā)明內(nèi)容】
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[0006]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，開發(fā)了一套完整的注射用烏頭提取物的制備方法。
[0007]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0008]一種注射用烏頭提取物的制備方法，其具體步驟為:
[0009](I)超聲提取:將烏頭藥材粉碎后加入乙醇水溶液超聲提取兩次，合并兩次提取液，蒸至無(wú)醇味；
[0010]所述的乙醇水溶液的體積濃度為75~100%，用量為6~10倍量(w: v)，w: v是指烏頭藥材的質(zhì)量和乙醇水溶液的體積比；
[0011]所述的提取時(shí)間為每次I~3小時(shí)；
[0012](2)有機(jī)相萃取:直接向步驟(1)所得的提取液中加水補(bǔ)充至固體充分溶解，滴加氨水調(diào)堿性；加入有機(jī)溶劑萃取，合并有機(jī)相溶液蒸干；
[0013]所述的堿性條件為pH8~10，有機(jī)溶劑為乙酸乙酯，環(huán)己烷，二氯甲烷等弱極性溶劑；
[0014]所述的有機(jī)相與水相體積比為1:1~1: 1.5，萃取2~4次；
[0015](3)反相色譜純化:將步驟(2)所得的固體殘余物加入有機(jī)溶劑和水的混合溶液重溶，進(jìn)行反相色譜純化；上樣量與填料的質(zhì)量比為1: 30~1: 100;依次用洗脫液進(jìn)行三次梯度洗脫，每次洗脫體積為2~4倍柱體積；取第二次洗脫液減壓濃縮，得到生物堿組分；
[0016]所述的有機(jī)溶劑可為甲醇、乙醇或者乙腈等；
[0017]所述的洗脫液有機(jī)相的體積分?jǐn)?shù)為第一次10~20%，第二次20~60%，第三次100% ；
[0018]所述的反相色譜填料粒徑為5~60 μ m ;
[0019](4)水解炮制:直接向步驟(3)所得的生物堿組分中加水，超聲至固體完全溶解，滴加氨水調(diào)堿性，回流煮沸，冷卻，冷凍干燥得到注射用烏頭提取物；
[0020]所述的水溶液用量為400~600倍量(w: v)w: V是指生物堿組分的質(zhì)量和水溶液的體積比。
[0021]所述 的水解炮制堿性條件為pH8~10 ；
[0022]所述的水解溫度為60~100°C恒溫環(huán)境，水解時(shí)間為20min~3h ；
[0023]所述的注射用烏頭提取物采用外標(biāo)法，測(cè)得單酯型生物堿含量以苯甲酰烏頭堿，苯甲酰中烏頭堿和苯甲酰次烏頭堿的總量計(jì)大于20%，雙酯型生物堿含量以烏頭堿，中烏頭堿和次烏頭堿的總量計(jì)小于4%。另有水解生成的胺醇型生物堿和中間產(chǎn)物焦烏頭堿。
[0024]淡黃色的烏頭提取物，采用外標(biāo)法測(cè)得烏頭提取物中單酯型生物堿含量大于20%，雙酯型生物堿含量小于4%，換算到藥材中雙酯型生物堿含量小于0.005%，優(yōu)于《中國(guó)藥典》中制川烏和制草烏項(xiàng)下毒性成分雙酯型生物堿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
[0025]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的積極效果是:
[0026](I)雜質(zhì)含量少，水解過程穩(wěn)定:本發(fā)明通過乙醇超聲得到烏頭生物堿提取液，采用有機(jī)相萃取除去了強(qiáng)極性雜質(zhì)，反相色譜純化除去了弱極性雜質(zhì)，避免了水解炮制過程副反應(yīng)的發(fā)生，為水解過程的穩(wěn)定性和高效性提供了有力的保障。
[0027](2)毒性成分雙酯型生物堿含量低:本發(fā)明采用堿性水解炮制方法，得到產(chǎn)物用外標(biāo)法測(cè)定雙酯型生物堿含量以烏頭堿，中烏頭堿和次烏頭堿總量計(jì)小于4%，控制了毒性成分雙酯型生物堿的含量；
[0028](3)方法簡(jiǎn)單易行，操作簡(jiǎn)便:本發(fā)明涉及到的注射用烏頭提取物的制備方法，儀器自動(dòng)化程度高，操作方法簡(jiǎn)便，可適用于大規(guī)模生產(chǎn)。
【【具體實(shí)施方式】】
[0029]以下提供本發(fā)明一種注射用烏頭提取物的制備方法的【具體實(shí)施方式】。
[0030]實(shí)施例1
[0031]生川烏500g，粉碎，加入10倍量95%乙醇超聲提取2次，每次lh，合并乙醇提取液，蒸至無(wú)醇味；加水定容至IOOmL,滴加ImL氨水(pH9~10,溶液顏色加深),加入IOOmL乙酸乙酯溶液萃取3次，合并乙酸乙酯層，蒸干；加入100mL20%甲醇溶解，分三次過20gC18反相色譜填料，每次上樣33mL，再用3倍柱體積20%甲醇水溶液、3倍柱體積40%甲醇水溶液和100%甲醇溶液洗脫，取40%甲醇水洗脫液蒸干；加入600倍量的水溶解(滴加氨水調(diào)pH8-9)，80°C油浴水煮lh，冷卻，冷凍干燥，得到川烏提取物質(zhì)量為0.32g。采用高效液相色譜法外標(biāo)法測(cè)得單酯型生物堿含量以苯甲酰烏頭堿，苯甲酰中烏頭堿和苯甲酰次烏頭堿的總量計(jì)約為20.6%，雙酯型生物堿含量以烏頭堿，中烏頭堿和次烏頭堿的總量計(jì)約為
3.5%。
[0032]實(shí)施例2
[0033]生川烏500g，粉碎，加入8倍量75%乙醇超聲提取2次，每次lh，合并乙醇提取液，蒸至無(wú)醇味；加水定容至IOOmL,滴加氨水調(diào)pH8~9,加入IOOmL乙酸乙酯溶液萃取4次，合并乙酸乙酯層，蒸干；加入100mL20%甲醇溶解，分三次過20g C18反相色譜填料，每次上樣33mL，再用2倍柱體積20%甲醇水溶液、3倍柱體積50%甲醇水溶液和100%甲醇溶液洗脫，取50%甲醇水洗脫液蒸干；加入500倍量的水溶解(滴加氨水調(diào)pH8-9)，70°C油浴水煮2h，冷卻，冷凍干燥，得到川烏提取物質(zhì)量為0.33g。采用高效液相色譜法外標(biāo)法測(cè)得單酯型生物堿含量以苯甲酰烏頭堿，苯甲酰中烏頭堿和苯甲酰次烏頭堿的總量計(jì)約為20.5%，雙酯型生物堿含量以烏頭堿，中烏頭堿和次烏頭堿的總量計(jì)約為3.9%。
[0034]本發(fā)明的制備工藝重復(fù)性好，自動(dòng)化程度高，操作工藝簡(jiǎn)便，適合于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)；得到的烏頭提取物有效的去除了色素等大量雜質(zhì)，提高了藥效成分單酯型生物堿的含量，控制了毒性成分雙酯型生物堿的含量，經(jīng)適當(dāng)?shù)乃幮W(xué)和毒性評(píng)價(jià)，可作用烏頭注射劑的原料。 [0035]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種注射用烏頭提取物的制備方法，其特征在于，其具體步驟為: (1)超聲提取:將烏頭藥材粉碎后加入乙醇水溶液超聲提取兩次，合并兩次提取液，蒸至無(wú)醇味； (2)有機(jī)相萃取:直接向步驟(1)所得的提取液中加水補(bǔ)充至固體充分溶解，滴加氨水調(diào)堿性；加入有機(jī)溶劑萃取，合并有機(jī)相溶液蒸干； (3)反相色譜純化:將步驟(2)所得的固體殘余物加入有機(jī)溶劑和水的混合溶液重溶，進(jìn)行反相色譜純化；上樣量與填料的質(zhì)量比為1: 30~1: 100 ;依次用洗脫液進(jìn)行三次梯度洗脫，每次洗脫體積為2~4倍柱體積；取第二次洗脫液減壓濃縮，得到生物堿組分； (4)水解炮制:直接向步驟(3)所得的生物堿組分中加水，超聲至固體完全溶解，滴加氨水調(diào)堿性，回流煮沸，冷卻，冷凍干燥得到注射用烏頭提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的一種注射用烏頭提取物的制備方法，其特征在于，在所述的步驟⑴中，所述的乙醇水溶液的體積濃度為75~100%，用量為6~10倍量(w: V); 所述的提取時(shí)間為每次I~3小時(shí)。
3.如權(quán)利要求1所述的一種注射用烏頭提取物的制備方法，其特征在于，在所述的步驟⑵中，所述的堿性條件為pH8~10，有機(jī)溶劑為乙酸乙酯，環(huán)己燒，二氯甲烷中的一種； 所述的有機(jī)相與水相體積比為1:1~1: 1.5，萃取2~4次。
4.如權(quán)利要求1所述的一種注射用烏頭提取物的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(3)中，所述的有機(jī)溶劑可為甲醇、乙醇或者乙腈中的一種。
5.如權(quán)利要求1所述的一種注射用烏頭提取物的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(3)中，所述的洗脫液有機(jī)相的體積分?jǐn)?shù)為第一次10%~20%，第二次20%~60%，第三次100%。
6.如權(quán)利要求1所述的一種注射用烏頭提取物的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(3)中，所述的反相色譜填料粒徑為5~60 μ m。
7.如權(quán)利要求1所述的一種注射用烏頭提取物的制備方法，其特征在于，在所述的步驟⑷中，所述的水溶液用量為400~600倍量(w: V)。
8.如權(quán)利要求1所述的一種注射用烏頭提取物的制備方法，其特征在于，在所述的步驟⑷中，所述的水解炮制堿性條件為PH8~10。
9.如權(quán)利要求1所述的一種注射用烏頭提取物的制備方法，其特征在于，在所述的步驟⑷中，所述的水解溫度為60~100°C恒溫環(huán)境，水解時(shí)間為20min~3h。
10.如權(quán)利要求1所述的一種注射用烏頭提取物的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(4)中，所述的注射用烏頭提取物采用外標(biāo)法，測(cè)得單酯型生物堿含量以苯甲酰烏頭堿，苯甲酰中烏頭堿和苯甲酰次烏頭堿的總量計(jì)大于20%，雙酯型生物堿含量以烏頭堿，中烏頭堿和次烏頭堿的總量計(jì)小于4%。另有水解生成的胺醇型生物堿和中間產(chǎn)物焦烏頭堿。
【文檔編號(hào)】A61K36/714GK103768173SQ201410024866
【公開日】2014年5月7日 申請(qǐng)日期:2014年1月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月20日
【發(fā)明者】周彬彬, 金郁, 柯燕雄, 傅青 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)