專利名稱：：骨瓜提取物注射劑及其制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種多肽藥物組合物，具體地說是骨瓜提取物注射用藥物，本發(fā)明還涉及該藥物的制備方法。
背景技術：
：骨瓜提取物含有多種活性多肽和游離氨基酸，具有調(diào)節(jié)骨代謝，刺激成骨細胞增殖,促進新骨形成,調(diào)節(jié)鈣、磷代謝，增加骨鈣沉積，防止骨質(zhì)疏松等作用。骨誘導多肽類生物因子的作用骨誘導多肽類生物因子可有效促進機體內(nèi)影響骨形成和吸收和骨源性生長因子的合成，包括骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)，P-轉化生長因子(TGF-(3),成纖維細胞生長因子(FGF)等，從而具有多種生物活性。其主要藥理作用有促進細胞有絲分裂、分化作用、趨化作用和溶骨活性。其中BMPs是一組酸性低分子量糖蛋白，作為一種高效骨誘導物質(zhì)，BMPs是間充質(zhì)細胞向骨系細胞分化的最初信號因子，能誘導血管周圍游動的間充質(zhì)細胞轉化為不可逆性的骨系細胞，即軟骨細胞和成骨細胞，從而促進骨痂形成，誘導新骨形成，促進骨折修復；此外，BMPs還可調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)成份的改變，并通過與TGF-(3和FGF相互之間的協(xié)調(diào)作用更好地誘導新骨形成，使骨組織更成熟。TGF-(3是一組具有多種功能的蛋白多肽，對成骨細胞及成軟骨細胞有促進分化或降低分化的雙重調(diào)節(jié)作用，與多種因子如細胞外基質(zhì)和其他分化調(diào)節(jié)生長因子一起協(xié)同參與對細胞分化的調(diào)節(jié)；TGF-P可促進細胞外基質(zhì)合成，可以直接刺激成纖維細胞外基質(zhì)的合成，并對其新合成的基質(zhì)降解有顯著抑制作用；對于成骨細胞，TGF-p可促進其合成I型膠原、骨粘連素和骨橋蛋白；同時，TGF-p對淋巴細胞和巨噬細胞的作用表明，它即能緩解炎性反應的破壞性，又能協(xié)助巨噬細胞來源的某些細胞因子在細胞組織修復中發(fā)揮作用。FGF是一組肝素黏合多肽，可刺激細胞的趨向移動、增值和分化，增加合成膠原細胞的數(shù)量，促進骨膠原蛋白及非膠原蛋白的合成，增加骨鈣素的合成。甜瓜籽提取物的作用甜瓜籽提取物是從葫蘆科植物甜瓜(C"cwm》me/o丄.)的成熟干燥種子經(jīng)特殊工藝提取而成，能降低骨折局部毛細血管通透性，減少炎性滲出，促進局部血運障礙的恢復；同時還能降低全血黏度及紅細胞聚集程度，改善骨痂局部的血液循環(huán)，為骨細胞提供一個良好的供血環(huán)境；另外還能抑制前列腺素的釋放，達到止痛效果；在促進骨折早期愈合中，甜瓜籽提取物與補充的骨誘導多肽生物因子具有協(xié)同作用，促進骨原性生長因子的作用。其它成份的作用富含的多種游離氨基酸，為骨細胞合成BMPs、TGF-p、FGF等骨源性生物因子提供原料，促進骨源性生物因子的合成，有機鈣、磷離子可參與鈣磷代謝，維持骨容量。CN1742778A公開了一種鹿瓜多肽藥物組合物，該組合物含有鹿骨提取物、甜瓜籽提取物和一種或多種賦形劑組成，其中鹿骨多肽與甜瓜籽的重量比為2:l至6:1。其是通過如下方法制備A)鹿骨提取物溶液的制備(l)鹿骨預處理(2)將預處理后的凈鹿骨粉碎；(3)在碎鹿骨中加2倍重量以上的注射用水，12rc熱壓提取濾出獲得一次鹿骨提取液；(4)在一次提取后的鹿骨渣中加入2倍以上重量注射用水，繼續(xù)在12rC-123'C熱壓提取，濾出獲得二次鹿骨提取液，與步驟(3)獲得的一次鹿骨提取20液合并制成鹿骨提取液(5)將鹿骨提取液離心，收集上清離心液；(6)將離心液分別進行100KD、IOKD、6KO超濾，收集濾出液，減壓濃縮至總體積的10%，收取濃縮液，制得鹿骨提取物溶液B)甜瓜子提取物溶液的制備(l)將干燥成熟甜瓜子漂洗干凈:(2)在凈甜瓜子中加入2倍以上重量的注射用水，用膠體磨研磨成甜瓜子勾漿;(3)將甜瓜子勻漿在12rC熱壓提取，濾出一次甜瓜子提取液(4)在一次提取后的甜瓜子渣中加入2倍以上重量注射用水，繼續(xù)在12rC-123'C熱壓提取，濾出二次甜瓜子提取液，與步驟(3)獲得的一次甜瓜子提取液合并制成甜瓜子提取液1(5)將甜瓜子提取液離心，收集上清離心液(6)將離心液分別進行100KD、IOKD、6KD超濾，收集濾出液，減壓濃縮至原體積的10%,收取濃縮液，制得甜瓜子提取物溶液C)注射用鹿瓜多肽藥物組合物的制備混合步驟A)制備的鹿骨提取物溶液和步驟B)制備的甜瓜子提取物溶液和一種或多種賦形劑制備藥物組合物，通過冷凍干燥技術制成凍干粉針，其中鹿骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為2:1至6:1。上述制備方法的提取率低，制成的骨瓜提取物注射液有效成分較低。為此，人們迫切尋求一種更有效的解決方案。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種骨瓜提取物注射用藥物，及其制備方法。本發(fā)明的骨瓜提取物注射用藥物通過如下方法制備獲得A)骨提取物的制備1)將哺乳動物骨頭預處理后得凈骨；2)取凈骨，力口2~5倍重量的純化水，于120°C~123°C，0.110.13Mpa條件下熱壓提取l~3h,過濾，得濾液；3)將濾液于01(TC條件下靜止816小時，去掉上層油脂；4)調(diào)節(jié)PH為8.5~9.0,加熱至44°C~46°C，按骨重量的0.1~0.3%加入胰酶，恒溫連續(xù)水解13小時；5)調(diào)節(jié)pH為3.5~4.0,煮沸，保溫15-45分鐘后過濾，濾液調(diào)節(jié)pH為6.5~7.0;6)加入適量活性炭，加熱至沸騰，保溫10~20分鐘后過濾，濾液于-20'C深凍36~50小時后室溫融化；7)IOKD分子截留下超濾，濾液經(jīng)適當濃縮后，再在6KD分子截留下超濾，即得；B)甜瓜籽提取物的制備1)將甜瓜籽預處理后得凈甜瓜籽；2)取凈甜瓜籽，加入1~3倍重量的水，于120°C~123°C，0.110.13MPa熱壓提取l~3h，過濾得濾液3)重復步驟2)1~3次；4)合并濾液，降溫至2535。C，調(diào)節(jié)pH至3.54.0，靜置8~16個小時，去沉淀；5)煮沸，保溫15-45分鐘，過濾；6)調(diào)節(jié)pH為8.59.0,于-20'C深凍36-50小時后室溫融化;7)煮沸，保溫15~45分鐘，過濾，調(diào)節(jié)pH至6.07.058)IOKD分子截留下超濾，濾液經(jīng)適當濃縮后，再在6KD分子截留下超濾，即得；C)將步驟A)制備的骨提取物和步驟B)制備的甜瓜籽提取物混合，添加適量賦形劑，制備成注射液或凍干粉，其中注射液可以是小容量骨瓜提取物注射液、骨瓜氯化鈉注射液或骨瓜葡萄糖注射液，其中骨多肽與甜瓜籽多肽的重量比為1:1010:1,優(yōu)選為15:1，更優(yōu)選為3:1。優(yōu)選地，本發(fā)明注射劑通過如下制備方法獲得A)骨提取物的制備1)將哺乳動物骨頭預處理后得凈骨；2)取凈骨，加4倍重量的純化水，于121。C,0.12Mpa條件下熱壓提取2h,過濾，得濾液；3)將濾液于01(TC條件下靜止12小時，去掉上層油脂；4)調(diào)節(jié)pH為8.59.0,加熱至45"C,按骨重量的0.2%加入胰酶，恒溫連續(xù)水解2小時；5)調(diào)節(jié)pH為3.5~4.0，煮沸，保溫30分鐘后過濾，濾液調(diào)節(jié)pH為6.5~7.0;6)加入適量活性炭，加熱至沸騰，保溫15分鐘后過濾，濾液于-20°C深凍48小時后室溫融化；7)IOKD分子截留下超濾，-O.IMPA，60。C條件下減壓濃縮至原體積的1/3,再在6KD分子截留下超濾，即得；B)甜瓜籽提取物的制備1)將甜瓜籽預處理后得凈甜瓜籽；2)取凈甜瓜籽，加入2倍重量的水，于121'C,0.12MPa熱壓提取2h，過濾得濾液3)重復步驟2)2次；4)合并濾液，降溫至2535。C，調(diào)節(jié)pH至3,5~4.0,靜置12個小時，去沉淀；5)煮沸，保溫30分鐘，過濾；6)調(diào)節(jié)pH為8.5~9.0，于-2(TC深凍48小時后室溫融化;7)煮沸，保溫15~45分鐘，過濾，調(diào)節(jié)pH至6.0~7.0;8)IOKD分子截留下超濾，-0.1MPA,60。C條件下減壓濃縮至原體積的1/3，再在6KD分子截留下超濾，即得；C)將步驟A)制備的骨提取物和步驟B)制備的甜瓜籽提取物混合，添加適量的賦形劑制備成注射液或凍干粉。其中所用賦形劑可以為甘露醇和/或右旋糖酐，優(yōu)選為甘露醇，賦形劑與總多肽按重量比為1:1~5,優(yōu)選為1:2。本發(fā)明中所述的哺乳動物骨頭優(yōu)選為哺乳動物四肢骨，更優(yōu)選為鹿骨或豬骨。所述的甜瓜籽為葫蘆科植物瓜籽，優(yōu)選為甜瓜籽；提取所用的水為純化水或注射用水。本發(fā)明骨瓜提取物注射劑，其有效成分含量高，對風濕、類風濕關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、腰腿疼痛、骨折創(chuàng)傷修復等疾病具有顯著的療效，且高分子物質(zhì)含量小，通過此法制得的注射劑較為穩(wěn)定，成品收率高，且可以制得多種供臨床使用的劑型。具體實施例方式以下實施例進一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應理解為對本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規(guī)手段。實施例l豬骨提取物的制備剝離取新鮮或冷凍的豬四肢骨，除肉及筋膜,斷開，去除骨髓,得凈骨15kg。提取取凈骨，加4倍重量的純化水，于121'C,0.12Mpa條件下熱壓提取2h，過濾，得濾液，濾液于5'C條件下靜止12小時后，去掉提取液的上層油脂，用8。/。氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為8.5，加熱至45°。左右，按骨重量的0.2%加入胰酶，恒溫連續(xù)水解2小時后，用12。/。鹽酸調(diào)節(jié)pH為3.5，煮沸，保溫30分鐘后過濾，濾液用8°/。氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為6.5。按濾液體積的0.1%加入活性炭，加熱至沸騰，保溫15分鐘后過濾，濾液于-2(TC深凍48小時后室溫融化。超濾、濃縮用1萬道爾頓分子量的超濾器將上述溶液超濾，濾液于-0.1MPA,60'C條件下減壓濃縮至原體積的1/3。濃縮液再經(jīng)過6000道爾頓分子量的超濾器超濾，得濾液20L，超濾液攪拌均勻后盛于無菌容器中，于-2(TC條件下保存。經(jīng)檢測提取液中的豬骨多肽的含量為10.1mg/ml,游離氨基酸含量為6.1mg/ml。實施例2鹿骨提取物的制備剝離取新鮮或冷凍的梅花鹿四肢骨，除肉及筋膜，斷開，去除骨髓，得凈骨15kg。提取取凈骨，加3倍重量的純化水，于12廠C,0.12Mpa條件下熱壓提取2h,過濾，得濾液，濾液于4'C條件下靜止12小時后，去掉提取液的上層油脂，用8。/。氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為9.0，加熱至45t:左右，按骨重量的0.2%加入胰酶，恒溫連續(xù)水解2小時后，用12。/。鹽酸調(diào)節(jié)pH為4.0，煮沸，保溫30分鐘后過濾，濾液用8%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為7.0。按濾液體積的0.1%加入活性炭，加熱至沸騰，保溫15分鐘后過濾，濾液于-2(TC深凍48小時后室溫融化。超濾、濃縮用1萬道爾頓分子量的超濾器將上述溶液超濾，濾液于-0.1MPA,6(TC條件下減壓濃縮至原體積的1/3。濃縮液再經(jīng)過6000道爾頓分子量的超濾器超濾，得濾液15L，超濾液攪拌均勻后盛于無菌容器中，于-20'C條件下保存。經(jīng)檢測提取液中的鹿骨多肽的含量為10.2mg/ml,游離氨基酸含量為7.2mg/ml。實施例3甜瓜籽提取物的制備洗滌取成熟干燥得甜瓜籽，加純化水漂洗4次，空干水分，挑出雜物，得凈甜瓜籽15kg。提取取凈甜瓜籽，加入2倍重量的純化水，于121°C，0.12MPA熱壓提取2h，過濾，得濾液，再加入2倍重量的純化水，重復上次提取，如此反復提取三次，合并三次濾液，降溫至3(TC，用12%鹽酸將上述濾液的pH調(diào)節(jié)為3.5,靜止12小時。去除雜蛋白，將上述水解液煮沸，保溫30分鐘后過濾，濾液用8%氫氧化鈉溶液將上述濾液pH調(diào)節(jié)為8.5,于-20'C深凍48小時后室溫融化，煮沸，保溫30分鐘后過濾，濾液用12。/。鹽酸調(diào)節(jié)PH為6.0。超濾、濃縮用1萬道爾頓分子量的超濾器將上述溶液超濾，濾液于-0.1MPA，60'C條件下減壓濃縮至原體積的1/3。濃縮液再經(jīng)過6000道爾頓分子量的超濾器超濾，得濾液30kg,超濾液攪拌均勻后盛于無菌容器中，于-2(TC條件下保存。經(jīng)檢測提取液中的甜瓜籽多肽的含量為4.3mg/ml，游離氨基酸含量為3.8mg/ml。肽測定法按照福林酚測定法測定。游離氨基酸測定利用高效液相色譜先進行鑒別再用適宜的氨基酸測定儀或高效液相色譜法進行測定。實施例4甜瓜籽提取物的制備洗滌取成熟干燥得甜瓜籽，加純化水漂洗3次，空干水分，挑出雜物，得凈甜瓜籽15kg。提取取凈甜瓜籽，加入2倍重量的純化水，于121°C，0.12MPA熱壓提取2h,過濾，得濾液，再加入2倍重量的純化水，重復上次提取，如此反復提取三次，合并三次濾液，降溫至3(TC,用12%鹽酸將上述濾液的pH調(diào)節(jié)為4.0,靜止12小時。去除雜蛋白，將上述水解液煮沸，保溫30分鐘后過濾，濾液用8%氫氧化鈉溶液將上述濾液pH調(diào)節(jié)為9.0，于-2(TC深凍48小時后室溫融化，煮沸，保溫30分鐘后過濾，濾液用12。/。鹽酸調(diào)節(jié)PH為6.0。超濾、濃縮用l萬道爾頓分子量的超濾器將上述溶液超濾，濾液于-0.1MPA,6(TC條件下減壓濃縮至原體積的1/3。濃縮液再經(jīng)過6000道爾頓分子量的超濾器超濾，得濾液30kg，超濾液撹拌均勻后盛于無菌容器中，于-2(TC條件下保存。經(jīng)檢測提取液中的甜瓜籽多肽的含量為4.2mg/ml，游離氨基酸含量為3.8mg/ml。多肽測定法按照福林酚測定法測定。游離氨基酸測定利用高效液相色譜先進行鑒別再用適宜的氨基酸測定儀或高效液相色譜法進行測定。實施例5骨瓜多肽注射劑的配制l實施例1的提取物7.5g(按豬骨多肽計)實施例3的提取物2.5g(按甜瓜籽多肽計)注射用水加至2000ml將實施例1制備的豬骨提取物溶液和實施例1制備的豬骨提取物溶液按豬骨多肽與甜瓜籽多肽重量比3:1混合，用8%的氫氧化鈉溶液或12%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8，再加注射用水至全量，用0.22pm的微孔濾膜過濾后灌裝于2ml曲頸安瓶中，拉絲封口。121°C滅菌12分鐘。經(jīng)燈檢、貼簽、包裝、入庫即得。實施例6骨瓜多肽注射劑的配制2實施例1的提取物6.25(按豬骨多肽計)實施例3的提取物6.25g(按甜瓜籽多肽計)注射用水加至2500ml將實施例1制備的豬骨提取物溶液和實施例1制備的豬骨提取物溶液按豬骨多肽與甜瓜籽多肽重量比1:1混合，用5%的氫氧化鈉溶液或5。/。的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至6.5，再加注射用水至全量，用0.22pim的微孔濾膜過濾后灌裝于5ml曲頸安瓶中，拉絲封口。121。C滅菌12分鐘。經(jīng)燈檢、貼簽、包裝、入庫即得。實施例7骨瓜多肽注射劑的配制3實施例1的提取物25g(按豬骨多肽計)實施例3的提取物5g(按甜瓜籽多肽計)注射用水加至6000ml將實施例1制備的豬骨提取物溶液和實施例1制備的豬骨提取物溶液按豬骨多肽與甜瓜籽多肽重量比5:1混合，用稀稀氫氧化鈉溶液或稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至6.7，再加注射用水至全量，用0.22pm的微孔濾膜過濾后灌裝于10ml曲頸安瓶中，拉絲封口。121'C滅菌12分鐘。經(jīng)燈檢、貼簽、包裝、入庫即得。實施例8骨瓜多肽注射劑的配制4實施例1的提取物37.5g(按豬骨多肽計)實施例3的提取物12.5g(按甜瓜籽多肽計)氯化鈉900g注射用水加至100000ml將實施例1制備的豬骨提取物溶液和實施例1制備的豬骨提取物溶液按豬骨多肽與甜瓜籽多肽重量比3:1混合，加入氯化鈉900g溶解，用稀稀氫氧化鈉溶液或稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值，再加注射用水至全量，用0.22pm的微孔濾膜過濾后灌封于100ml輸液瓶中。121'C滅菌15分鐘。經(jīng)燈檢、貼簽、包裝、入庫即得。實施例9骨瓜多肽注射劑的配制5實施例1的提取物37.5g(按豬骨多肽計)實施例3的提取物12.5g(按甜瓜籽多肽計)葡萄糖5000g注射用水加至100000ml將實施例1制備的豬骨提取物溶液和實施例1制備的豬骨提取物溶液按豬骨多肽與甜瓜籽多肽重量比3:1混合，加入葡萄糖5000g溶解，用稀稀氫氧化鈉溶液或稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值，再加注射用水至全量，用0.22pm的微孔濾膜過濾后灌封于100ml輸液瓶中。121。C滅菌15分鐘。經(jīng)燈檢、貼簽、包裝、入庫即得。實施例10骨瓜多肽注射劑的配制6實施例1的提取物18.75g(按豬骨多肽計)實施例3的提取物6.25g(按甜瓜籽多肽計)甘露醇50g注射用水加至5000ml將實施例1制備的豬骨提取物溶液和實施例1制備的豬骨提取物溶液按豬骨多肽與甜瓜籽多肽重量比3:1混合，加入甘露醇溶解，用稀稀氫氧化鈉溶液或稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值6.4,再加注射用水至全量，用0.22pm的微孔濾膜過濾后灌裝，凍干，軋蓋，經(jīng)貼簽、包裝、入庫即得。實施例11骨瓜多肽注射劑的配制7實施例1的提取物25g(按豬骨多肽計)實施例3的提取物2.5g(按甜瓜籽多肽計)注射用水加至5000ml將實施例1制備的豬骨提取物溶液和實施例1制備的豬骨提取物溶液按豬骨多肽與甜瓜籽多肽重量比10:1混合，用8%的氫氧化鈉溶液或12%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至6.3，再加注射用水至全量，用0.22pm的微孔濾膜過濾后灌裝于5ml曲頸安瓶中，拉絲封口。121°C滅菌12分鐘。經(jīng)燈檢、貼簽、包裝、入庫即得。實施例12骨瓜多肽注射劑的配制8實施例1的提取物2.5g(按豬骨多肽計)實施例3的提取物25g(按甜瓜籽多肽計)注射用水加至2000ml將實施例1制備的豬骨提取物溶液和實施例1制備的豬骨提取物溶液按豬骨多肽與甜瓜籽多肽重量比1:10混合，用8%的氫氧化鈉溶液或12%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8，再加注射用水至全量，用0.22pm的微孔濾膜過濾后灌裝于5ml曲頸安瓶中，拉絲封口。121°C滅菌12分鐘。經(jīng)燈檢、貼簽、包裝、入庫即得。實驗例1高分子量物質(zhì)含量測定按照《中國藥典2005年版二部附錄VD》中規(guī)定的高效液相色譜法測定。17對照品為胰島素(分子量5800),加流動相(三氟醋酸-乙腈-水0.05:10:90)制成每lml含lmg的溶液。測試品為實施例5中的制劑，加流動相制成lml中含多肽lmg的溶液。測定方法取對照品溶液和測試溶液個20nl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，經(jīng)檢測，測試溶液的高分子物質(zhì)含量低于1.5%。說明本品穩(wěn)定，不會引起變態(tài)反應。實驗例2本發(fā)明制劑治療骨性關節(jié)炎的效果方法60例OA患者(符合美國ACR修訂的OA診斷標準)隨機分為2組，觀察組每例患者應用骨瓜提取物注射液連續(xù)10d治療，每天12mg靜脈滴注。對照組僅用鈣劑和活性a-D3及止痛治療，療程10d，療效評價標準1.疼痛觀察指標用視覺比量表(VAS)表示。2.壓痛、腫脹、功能障礙觀察，每天評價1次。具體計分方法按表1內(nèi)容計分。3.療效判定顯效腫脹及壓痛明顯減輕，關節(jié)活動改善明顯，治療后總計分下降>2/3;有效腫脹及壓痛減輕，關節(jié)活動有明顯，治療后總計分下降>1/3;無效癥狀無改善，治療后總計分下降<1/3。統(tǒng)計學處理計量資料釆用t檢驗，計數(shù)資料釆用方差分析，等級資料用Ridit檢驗，所有資料用SPSS8.0軟件包處理。表I壓痛、腫脹、功能障礙計分標準<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>結果觀察組在治療前后疼痛分數(shù)分別為(5.7±1.5)分與(4.2±1.4)分，二者比較差異有顯著性(P0.05)。對照組在治療前后疼痛分數(shù)分別為(4.9±1.1)分與(4.3±1.0)分，二者比較差異有顯著性(P〈0.05)。②2組療效比較觀察組顯效總有效率為80.00%，對照組總有效率為53.34%,觀察組療效較對照組好，差異有顯著性(PO，05)。結論骨瓜提取物注射液有較好的消腫，止痛作用，并有一定的調(diào)節(jié)骨代謝的作用，安全性好，可作為OA的一種輔助治療措施。權利要求1、一種骨瓜提取物注射用藥物，其通過如下方法制備獲得A)骨提取物的制備1)將哺乳動物骨頭預處理后得凈骨；2)取凈骨，加2～5倍重量的純化水，于120℃～123℃，0.11～0.13Mpa條件下熱壓提取1～3h，過濾，得濾液；3)將濾液于0～10℃條件下靜止8～16小時，去掉上層油脂；4)調(diào)節(jié)pH為8.5～9.0，加熱至44℃～46℃，按骨重量的0.1～0.3％加入胰酶，恒溫連續(xù)水解1～3小時；5)調(diào)節(jié)pH為3.5～4.0，煮沸，保溫15～45分鐘后過濾，濾液調(diào)節(jié)pH為6.5～7.0；6)加入適量活性炭，加熱至沸騰，保溫10～20分鐘后過濾，濾液于-20℃深凍36～50小時后室溫融化；7)10KD分子截留下超濾，濾液經(jīng)適當濃縮后，再在6KD分子截留下超濾，即得；B)甜瓜籽提取物的制備1)將甜瓜籽預處理后得凈甜瓜籽；2)取凈甜瓜籽，加入1～3倍重量的水，于120℃～123℃，0.11～0.13MPa熱壓提取1～3h，過濾得濾液3)重復步驟2)1～3次；4)合并濾液，降溫至25～35℃，調(diào)節(jié)pH至3.5～4.0，靜置8～16個小時，去沉淀；5)煮沸，保溫15～45分鐘，過濾；6)調(diào)節(jié)pH為8.5～9.0，于-20℃深凍36～50小時后室溫融化；7)煮沸，保溫15～45分鐘，過濾，調(diào)節(jié)pH至6.0～7.0；8)10KD分子截留下超濾，濾液經(jīng)適當濃縮后，再在6KD分子截留下超濾，即得；C)將步驟A)制備的骨提取物和步驟B)制備的甜瓜籽提取物混合，添加適量的賦形劑制備成注射用藥物，其中骨多肽與甜瓜籽多肽的重量比為1∶10至10∶1。2、如權利要求1所述的骨瓜提取物注射用藥物，其通過如下方法制備獲得A)骨提取物的制備將哺乳動物骨頭預處理后得凈骨；2)取凈骨，加4倍重量的純化水，于12rC，0.12Mpa條件下熱壓提取2h，過濾，得濾液；3)將濾液于01(TC條件下靜止12小時，去掉上層油脂；4)調(diào)節(jié)pH為8.59.0，加熱至45t:，按骨重量的0.2%加入胰酶，恒溫連續(xù)水解2小時；調(diào)節(jié)pH為3.5-4.0，煮沸，保溫30分鐘后過濾，濾液調(diào)節(jié)pH為6.57.0;6)加入適量活性炭，加熱至沸騰，保溫15分鐘后過濾，濾液于-20°。深凍48小時后室溫融化；7)IOKD分子截留下超濾，-O.IMPA，60。C條件下減壓濃縮至原體積的1/3，再在6KD分子截留下超濾，即得；B)甜瓜籽提取物的制備1)將甜瓜籽預處理后得凈甜瓜籽；2)取凈甜瓜籽，加入2倍重量的水，于121。C,0.12MPa熱壓提取2h,過濾得濾液3)重復步驟2)2次；4)合并濾液，降溫至2535。C,調(diào)節(jié)pH至3.5~4.0,靜置12個小時，去沉淀；煮沸，保溫30分鐘，過濾；6)調(diào)節(jié)pH為8.5~9.0，于-2(TC深凍48小時后室溫融化；7)煮沸，保溫15~45分鐘，過濾，調(diào)節(jié)pH至6.0~7.0;8)IOKD分子截留下超濾，-O.IMPA，60。C條件下減壓濃縮至原體積的1/3，再在6KD分子截留下超濾，即得；C)將步驟A)制備的骨提取物和步驟B)制備的甜瓜籽提取物混合，添加適量的賦形劑制備成注射用藥物，其中骨多肽與甜瓜籽多肽的重量比為1~5:1。3、如權利要求1或2所述的骨瓜提取物注射用藥物，其特征在于所述哺乳動物的骨頭為鹿骨或豬骨。4、如權利要求l或2所述的骨瓜提取物注射用藥物，其特征在于所述甜瓜籽為葫蘆科植物瓜籽。5、如權利要求l或2所述的骨瓜提取物注射用藥物，其為注射液或凍干粉。6、如權利要求5所述的骨瓜提取物注射用藥物，其特征在于，所述注射液為骨瓜提取物注射液、氯化鈉注射液或葡萄糖注射液。7、如權利要求5所述的骨瓜提取物注射用藥物，其特征在于制備成凍干粉時所用賦形劑為甘露醇和/或右旋糖酐，賦形劑與總多肽按重量比為1:1~5。8、一種制備權利要求17任一項所述骨瓜提取物注射用藥物的方法，其包括步驟A)骨提取物的制備1)將哺乳動物骨頭預處理后得凈骨；2)取凈骨，力口2~5倍重量的純化水，于120°C123°C,0.110.13Mpa條件下熱壓提取13h,過濾，得濾液；3)將濾液于01(TC條件下靜止816小時，去掉上層油脂；4)調(diào)節(jié)pH為8.5~9.0,加熱至44。C46。C，按骨重量的0.10.30/0加入胰酶，恒溫連續(xù)水解13小時；5)調(diào)節(jié)pH為3.5~4.0，煮沸，保溫15-45分鐘后過濾，濾液調(diào)節(jié)pH為6.5~7.0;6)加入適量活性炭，加熱至沸騰，保溫1020分鐘后過濾，濾液于-2(TC深凍3650小時后室溫融化；7)IOKD分子截留下超濾，濾液經(jīng)適當濃縮后，再在6KD分子截留下超濾，即得；B)甜瓜籽提取物的制備1)將甜瓜籽預處理后得凈甜瓜籽；2)取凈甜瓜籽，加入1~3倍重量的水，于12(TC123'C,0.110.13MPa熱壓提取13h,過濾得濾液3)重復步驟2)13次；4)合并濾液，降溫至25~35°(:,調(diào)節(jié)pH至3.5~4.0，靜置816個小時，去沉淀；5)煮沸，保溫1545分鐘，過濾；6)調(diào)節(jié)pH為8.5~9.0,于-20。C深凍3650小時后室溫融化；7)煮沸，保溫15~45分鐘，過濾，調(diào)節(jié)pH至6.07.0;8)IOKD分子截留下超濾，濾液經(jīng)適當濃縮后，再在6KD分子截留下超濾，即得；C)將步驟A)制備的骨提取物和步驟B)制備的甜瓜籽提取物混合，添加適量的賦形劑制備成注射用藥物。9、如權利要求8所述的方法，其通過如下方法制備獲得A)骨提取物的制備1)將哺乳動物骨頭預處理后得凈骨；2)取凈骨，加4倍重量的純化水，于121。C,0.12Mpa條件下熱壓提取2h，過濾，得濾液；3)將濾液于01(TC條件下靜止12小時，去掉上層油脂；4)調(diào)節(jié)pH為8.5-9.0，加熱至45"C，按骨重量的0.2%加入胰酶，恒溫連續(xù)水解2小時；5)調(diào)節(jié)pH為3.5-4.0,煮沸，保溫30分鐘后過濾，濾液調(diào)節(jié)pH為6.5~7.0;6)加入適量活性炭，加熱至沸騰，保溫15分鐘后過濾，濾液于-20°C深凍48小時后室溫融化；7)IOKD分子截留下超濾，-O.IMPA，60。C條件下減壓濃縮至原體積的1/3,再在6KD分子截留下超濾，即得；B)甜瓜籽提取物的制備1)將甜瓜籽預處理后得凈甜瓜籽；2)取凈甜瓜籽，加入2倍重量的水，于121'C，0.12MPa熱壓提取2h，過濾得濾液3)重復步驟2)2次；4)合并濾液，降溫至2535〔，調(diào)節(jié)pH至3.5~4.0,靜置12個小時，去沉淀；5)煮沸，保溫30分鐘，過濾；6)調(diào)節(jié)pH為8,5~9.0，于-20'C深凍48小時后室溫融化;7)煮沸，保溫15~45分鐘，過濾，調(diào)節(jié)pH至6.07.0;8)IOKD分子截留下超濾，-0.1MPA,6(TC條件下減壓濃縮至原體積的1/3，再在6KD分子截留下超濾，即得；C)將步驟A)制備的骨提取物和步驟B)制備的甜瓜籽提取物混合，添加適量賦形劑制備成注射用藥物。全文摘要本發(fā)明提供了一種骨瓜提取物注射用藥物，其通過對哺乳類動物骨多肽的提取以及甜瓜籽多肽的提取，將獲得的提取物按一定的比例配比，制成可供注射用的藥物。本發(fā)明采用特定的提取工藝增加了有效成分，提取效率高，同時高分子量物質(zhì)被降到了最低。本發(fā)明藥物具有調(diào)節(jié)骨代謝，刺激成骨細胞增殖，促進新骨形成，調(diào)節(jié)鈣、磷代謝，增加骨鈣沉積，防止骨質(zhì)疏松等作用，能夠用于風濕、類風濕關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、腰腿疼痛、骨折創(chuàng)傷修復等疾病的預防和治療。文檔編號A61P19/10GK101297853SQ20081011511公開日2008年11月5日申請日期2008年6月17日優(yōu)先權日2008年6月17日發(fā)明者楊拴定,邵曙光申請人:楊拴定