免疫調(diào)節(jié)劑及其用途
【專利摘要】公開了用于治療或預(yù)防關(guān)節(jié)損傷的免疫調(diào)節(jié)劑。特別是，公開了用于誘發(fā)聚集蛋白聚糖多肽抗原(包括其瓜氨酸化形式)特異性耐受原應(yīng)答以治療或預(yù)防患有早期RA或初期RA的個體的關(guān)節(jié)損傷(包括關(guān)節(jié)損傷)的免疫調(diào)節(jié)劑。
【專利說明】免疫調(diào)節(jié)劑及其用途
[0001] 本申請要求2012年3月 23 日提交的題目為"Immunomodulatory Agents and Uses Therefor (免疫調(diào)節(jié)劑及其用途）"的澳大利亞臨時申請第2012901189號的優(yōu)先權(quán)，其全部 內(nèi)容通過引用并入本文。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明通常涉及可用于治療或預(yù)防關(guān)節(jié)損傷的免疫調(diào)節(jié)劑。特別是，本發(fā)明涉及 引發(fā)針對聚集蛋白聚糖多肽（包括瓜氨酸化形式）的抗原特異性耐受原應(yīng)答的免疫調(diào)節(jié)劑 治療或預(yù)防患有早期RA或初期RA的對象中的關(guān)節(jié)損傷（包括關(guān)節(jié)損傷）的用途。

【背景技術(shù)】
[0003] 炎性關(guān)節(jié)炎是多種自身免疫病的主要臨床表現(xiàn)，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA)、銀肩 病關(guān)節(jié)炎（PsA)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE)、斯耶格倫氏綜合征以及多發(fā)性肌炎。在體檢時，這 些患者中的大多數(shù)都患有關(guān)節(jié)畸形，但通常僅RA和PsA患者在顯像研宄時表現(xiàn)出骨侵蝕。
[0004] 慢性炎性骨疾病如RA的發(fā)病機理尚未完全闡明。這類疾病伴有由于破骨細(xì)胞 吸收增加所致的受影響的關(guān)節(jié)周圍的骨丟失，所述破骨細(xì)胞吸收增加主要由促炎細(xì)胞 因子的局部產(chǎn)生增加而介導(dǎo)（Teitelbaum, 2000. Science 289:1504-1508 ;Goldring 和 Gravallese, 2000. Arthritis Res. 2(1) :33-37)。這些細(xì)胞因子能夠直接作用于破骨細(xì)胞 譜系的細(xì)胞，或通過影響成骨細(xì)胞/基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生必須的破骨細(xì)胞分化因子即NF- κ B配 體的受體激活劑（RANKL)和/或其可溶性誘殺型受體即護骨蛋白（OPG)而間接發(fā)揮作用 (Hossbauer 等，2000. J. Bone Min. Res. 15 (1) : 2-12) 〇
[0005] RA是全身性炎性疾病，其影響約0. 5-1 %的北歐和北美的成年人群，以及世界上 其他地區(qū)的稍低比例的人群（Alamanos 和 Drosos, 2005. Autoimmun. Rev. 4:130-136)。其特 征是關(guān)節(jié)滑膜組織的慢性炎癥，其最終由于慢性疼痛和疲勞而導(dǎo)致日常功能喪失。其是一 種慢性炎性疾病。大多數(shù)患者還經(jīng)歷受影響關(guān)節(jié)中的軟骨和骨的漸進性惡化，這最終可導(dǎo) 致永久性殘疾。RA的長期預(yù)后欠佳，約50%的患者在從診斷開始的10年內(nèi)經(jīng)歷明顯的功 能性殘疾。
[0006] 描述了 RA中的幾個自身抗原，包括在患病關(guān)節(jié)中瓜氨酸化的多種蛋白。瓜氨 酸化是在凋亡和炎癥過程中發(fā)生的精氨酸瓜氨酸化（deimination)的生理過程。該過 程導(dǎo)致含有精氨酸的蛋白得以修飾，這可在攜帶處于危險中的HLA等位基因的個體中產(chǎn) 生若干組新的自身抗原（Vossenaar ER 等，2004. Arthritis Res. Ther. 6:107-11)。定 位于DRf3-鏈第三高變區(qū)的氨基酸70-74的特異性HLA-DR基因變體與RA高度相關(guān) (Gregersen PK 等，1987. Arthritis Rheum. 30:1205-1213)。該區(qū)編碼形成 HLA-DR抗原結(jié) 合溝中第四銷定囊（anchoring pocket) (P4)的保守氨基酸序列。這種"共同的易感性表 位"（SE)發(fā)現(xiàn)于多種RA相關(guān)的DR等位基因中，包括白種人中的DRB 1*0401、DRB 1*0404以 及DRB*0101 (Gregersen PK等，1987，同上）。編碼SE的HLA等位基因與ACPA-陽性RA 尤其相關(guān)（Klareskog L 等，2006. Arthritis Rheum. 54:38-46 ;van Gaalen FA 等，2004. Arthritis Rheum.50: 2113-21 ;Hida S 等，2004. J.Autoimmun.23:141-50 ;Hill JA 等，2003. J. Immunol. 171:538-41) 〇
[0007] SE是高度帶正電荷的，位于DRf3 -鏈的影響結(jié)合配體的P4氨基酸的特異性的區(qū) 中，從而在該位置優(yōu)先結(jié)合含有帶負(fù)電荷的或非極性的氨基酸的肽。瓜氨酸化用不帶電荷 的羰基取代帶電荷的精氨酸氨基側(cè)鏈基團，并且增加人波形蛋白肽表位與SE +HLA DR分子 的結(jié)合親和性（Hill JA等，2003，同上；Snir 0等，2011. Arthritis Rheum.n/a-n/a)。
[0008] 約70% RA患者血清含有抗瓜氨酸化蛋白自身抗體（ACPA) (Meyer 0等，2006. Arthritis Res. Ther. 8:R40)。這種反應(yīng)性反映了針對一組翻譯后修飾的瓜氨酸化自身抗 原的自身抗體的產(chǎn)生，包括纖維蛋白原、波形蛋白、II型膠原蛋白和烯醇化酶（Wegner N 等，2010. Immunol. Rev. 233:34-54)。在RA發(fā)作之前，ACPA發(fā)展高達(dá)15年，并且隨著疾病 發(fā)作的迫近，伴隨效價和肽反應(yīng)性的提高（van de Stadt LA等，2011. Arthritis Rheum. n/a-n/a)。在RA的發(fā)炎的組織中已經(jīng)顯示了瓜氨酸化蛋白，并且在許多小鼠炎性關(guān)節(jié)炎 模型中誘導(dǎo)了 ACPA(Masson_Bessiere C 等，2001. J. Immunol. 166:4177-84 ;Vossenaar ER 等，2003. Arthritis Rheum. 48:2489-500 ;Kuhn KA 等，2006. J. Clin. Invest. 116:961-73 ; Giant TT等，2011. Arthritis Rheum. 63:1312-1321)。盡管針對響應(yīng)應(yīng)激和炎癥，瓜氨酸 化普遍存在，但是ACPA對于RA是高度特異性的，并且與較為嚴(yán)重的關(guān)節(jié)損傷和射線照相后 果相關(guān)（Klareskog L 等，2006，同上；van Gaalen FA 等，2004，同上；Meyer 0 等，2006， 同上）。
[0009] 用瓜氨酸化纖維蛋白原而非天然纖維蛋白原免疫HLA-DRB1*0401轉(zhuǎn)基因小鼠誘 導(dǎo)了炎性關(guān)節(jié)炎，其特征在于B細(xì)胞和T細(xì)胞同時對瓜氨酸化HLA-DR-限制性纖維蛋白 原表位和天然HLA-DR-限制性纖維蛋白原表位的自身反應(yīng)性，這并不存在于幼稚（naiVe) HLA-DRB1*0401轉(zhuǎn)基因小鼠中。瓜氨酸化纖維蛋白原而非天然纖維蛋白原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的能 力表明：一個或多個瓜氨酸化新自身表位在引發(fā)表位擴展過程中或者由于表位擴展而破壞 了 T細(xì)胞對相應(yīng)天然表位的耐受性（Hill JA等，2008. J. Exp. Med. 205:967-979)。而且， 最近的研宄表明：阿巴西普（abatacept)的送遞可以恢復(fù)對瓜氨酸化抗原的耐受性（Yue D 等，2010. Arthritis Rheum. 62:2941-2952)。盡管有這些轉(zhuǎn)基因小鼠的研宄，但是由于自 身反應(yīng)性效應(yīng)記憶T細(xì)胞體外進行的弱增殖應(yīng)答，難以在RA患者中證明瓜氨酸特異性自身 反應(yīng)性T細(xì)胞。然而，幾篇最近的文章已經(jīng)顯示了 RA患者T細(xì)胞響應(yīng)瓜氨酸化波形蛋白和 聚集蛋白聚糖表位而進行的令人信服的細(xì)胞因子應(yīng)答（Snir 0等，2011，同上；von Delwig A等，2010. Arthritis Rheum. 62:143-149)。在波形蛋白的情況下，表位的免疫原性取決于 肽序列中瓜氨酸修飾的位置（Snir 0等，2011，同上）。
[0010] 本發(fā)明人現(xiàn)在已經(jīng)描繪了 SE+健康對照和RA患者對一組瓜氨酸化和非修飾（天 然）自身抗原的應(yīng)答，并且表征了應(yīng)答T細(xì)胞。發(fā)明人的目標(biāo)是：⑴鑒別在ACPA +RA中特 別相關(guān)的瓜氨酸化表位；(2)確定在瓜氨酸化自身抗原T細(xì)胞應(yīng)答中個體變異程度；以及 (3)鑒別有助于ACPA +RA發(fā)展的T細(xì)胞。
[0011] 發(fā)明概述
[0012] 本發(fā)明部分源于意料不到的發(fā)現(xiàn)，即，長期患病的RA患者更可能對多重瓜氨酸化 自身抗原進行進行T淋巴細(xì)胞應(yīng)答，而患有最近發(fā)作的RA的患者（包括之前未治療的那些 患者）更可能不響應(yīng)抗原或僅響應(yīng)瓜氨酸化聚集蛋白聚糖?；谶@些發(fā)現(xiàn)，提出了全部或 部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖（包括瓜氨酸化聚集蛋白聚糖）的抗原可用于治療或預(yù)防包括患 有早期RA的對象（例如還不存在臨床癥狀如關(guān)節(jié)腫脹或疼痛時）或處于發(fā)展RA (例如初 期RA)風(fēng)險的對象中的關(guān)節(jié)損傷的免疫治療策略。
[0013] 因此，一方面，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防對象的關(guān)節(jié)損傷的方法。這些方法通常包 括、僅包括或基本包括（包括、由以下組成或由以下基本組成）在對象中誘發(fā)針對聚集蛋白 聚糖多肽（例如瓜氨酸化聚集蛋白聚糖多肽，其在本文中也可交換地稱為"cit-聚集蛋白 聚糖"或"cit-agg"多肽）的抗原特異性耐受原應(yīng)答，由此治療或預(yù)防關(guān)節(jié)損傷。在一些實 施方案中，對象患有早期RA或初期RA，并且在這種類型的說明性實例中，所述方法還包括， 適當(dāng)?shù)卦谡T發(fā)抗原特異性耐受原應(yīng)答之前，鑒別對象患有早期RA或初期RA。在一些實施方 案中，對象對于共同的表位（SE)是陽性的，并且在這種類型的說明性實例中，所述方法還 包括在誘發(fā)抗原特異性耐受原應(yīng)答之前鑒別對象對SE是陽性的。適宜的是，對象具有針對 聚集蛋白聚糖多肽（如cit-agg多肽）或其片段的免疫應(yīng)答，或處于發(fā)展針對聚集蛋白聚 糖多肽（如cit-agg多肽）或其片段的免疫應(yīng)答的風(fēng)險，所述免疫應(yīng)答包括效應(yīng)免疫應(yīng)答 (例如效應(yīng)T淋巴細(xì)胞應(yīng)答，諸如但不限于CD4+效應(yīng)T淋巴細(xì)胞）。在非限制性實例中，免 疫應(yīng)答包括產(chǎn)生（例如分泌）至少一種選自白介素-6 (IL-6)、干擾素 -γ (IFN-γ、腫瘤壞 死因子（TNF)以及白介素-10 (IL-10)的細(xì)胞因子。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答包括促炎 T淋巴細(xì)胞應(yīng)答，其包括、僅包括或基本包括產(chǎn)生（例如分泌）至少一種選自IL-6、IFN-γ 以及TNF的細(xì)胞因子。在這種類型的說明性實例中，促炎T淋巴細(xì)胞應(yīng)答包括、僅包括或基 本包括產(chǎn)生（例如分泌）IL-6。適宜的是，免疫應(yīng)答至少部分由⑶4+⑶28_Τ淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。 在一些實施方案中，免疫應(yīng)答至少部分由CD4+CD28+T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。在具體實施方案中，免 疫應(yīng)答至少部分由⑶4+⑶28飛淋巴細(xì)胞和⑶4+CD28+T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。
[0014] 抗原特異性耐受原應(yīng)答可以利用任何合適的策略實現(xiàn)，其說明性實例包括：
[0015] (1)增加對象的耐受原抗原呈遞細(xì)胞的數(shù)量，所述細(xì)胞呈遞對應(yīng)于聚集蛋白聚糖 多肽（在本文中也稱為"聚集蛋白聚糖特異性耐受原抗原呈遞細(xì)胞"或"agg-tolAPC"）的 一部分的肽（例如自身抗原），其中所述部分與針對聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-agg多 肽）的促炎或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答相關(guān)；
[0016] (2)誘導(dǎo)對象中促炎或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞（例如效應(yīng)T淋巴細(xì)胞）的無反應(yīng) 性或凋亡，所述細(xì)胞對聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-agg多肽）或其部分是反應(yīng)性的；以及
[0017] (3)增加對象的調(diào)節(jié)性或抑制性T淋巴細(xì)胞的數(shù)量，所述細(xì)胞抑制或以其它方式 減少針對聚集蛋白聚糖多肽的促炎或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答。
[0018] 因此，在一些實施方案中，本發(fā)明的方法包括、僅包括或基本包括增加對象的 agg-tolAPC的數(shù)量，由此治療或預(yù)防關(guān)節(jié)損傷。在一些實施方案中，agg-tolAPC刺激抑制 或以另外方式減少針對聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的促炎或自身 反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答的調(diào)節(jié)性或抑制性T淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生。適宜的是，調(diào)節(jié)性或抑制性 T淋巴細(xì)胞表達(dá)組成型調(diào)節(jié)性或抑制性T淋巴細(xì)胞的至少一（例如1、2、3、4、5等）個標(biāo)記 (例如選自CD4、CD25、CD62L、GITR、CTLA4中的至少一個標(biāo)記）和轉(zhuǎn)錄因子叉頭框（Forkhead box) P3 (FoxP3)。說明性的調(diào)節(jié)性或抑制性T淋巴細(xì)胞包括但不限于CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T淋 巴細(xì)胞、Trl淋巴細(xì)胞、T h3淋巴細(xì)胞以及⑶8+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞。在具體實施方案中，調(diào) 節(jié)性T淋巴細(xì)胞是⑶4+⑶25+。非限制性抗原呈遞細(xì)胞包括樹突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、朗格漢斯 細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞以及人工抗原呈遞細(xì)胞。
[0019] 聚集蛋白聚糖特異性耐受原抗原呈遞細(xì)胞可以利用任何合適的策略產(chǎn)生。在一 些實施方案中，它們通過使抗原呈遞細(xì)胞（例如樹突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞、B細(xì)胞 等）與以下接觸而產(chǎn)生：（1)至少一種NF-κ B抑制劑，其量足以抑制所述抗原呈遞細(xì)胞的 NF- κ B途徑；和/或（2)至少一種mTOR抑制劑，其量足以抑制抗原呈遞細(xì)胞的mTOR ;和/ 或（3)至少一種Syk抑制劑，其量足以抑制抗原呈遞細(xì)胞的Syk途徑，以及使抗原呈遞細(xì)胞 與以下接觸而產(chǎn)生：選自全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多 肽）的抗原或可表達(dá)抗原的核酸分子的抗原性分子，其量足以使抗原呈遞細(xì)胞在其表面呈 遞抗原或其加工形式。在這種類型的說明性實例中，所述方法包括、僅包括或基本包括向?qū)?象（例如患有關(guān)節(jié)損傷或處于發(fā)展關(guān)節(jié)損傷風(fēng)險的對象，如患有早期RA或初期RA的對象） 共施用NF-κ B抑制劑和選自全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚 糖多肽）的抗原或可表達(dá)抗原的核酸分子的抗原性分子，其中以足以抑制對象的抗原呈遞 細(xì)胞中NF- κ B活性的量施用所述抑制劑，且其中以足以使NF- κ B活性受到抑制的抗原呈 遞細(xì)胞向?qū)ο蟮拿庖呦到y(tǒng)呈遞抗原或其加工形式的量施用所述抗原性分子。在其他說明性 實例中，所述方法包括、僅包括或基本包括向?qū)ο螅ɡ缁加嘘P(guān)節(jié)損傷或處于發(fā)展關(guān)節(jié)損 傷風(fēng)險的對象，如患有早期RA或初期RA的對象）共施用mTOR抑制劑和選自全部或部分對 應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的抗原或可表達(dá)抗原的核酸分子 的抗原性分子，其中以足以抑制對象的抗原呈遞細(xì)胞中的mTOR活性的量施用所述抑制劑， 且其中以足以使mTOR活性受到抑制的抗原呈遞細(xì)胞向所述對象的免疫系統(tǒng)呈遞抗原或其 加工形式的量施用所述抗原性分子。在其他說明性實例中，所述方法包括、僅包括或基本包 括向?qū)ο螅ɡ缁加嘘P(guān)節(jié)損傷或處于發(fā)展關(guān)節(jié)損傷風(fēng)險的對象，如患有早期RA或初期RA 的對象）共施用Syk抑制劑和選自全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋 白聚糖多肽）的抗原或可表達(dá)抗原的核酸分子的抗原性分子，其中以足以抑制所述對象的 抗原呈遞細(xì)胞中的Syk活性的量施用所述抑制劑，且其中以足以使NF- κ B活性受到抑制的 抗原呈遞細(xì)胞向所述對象的免疫系統(tǒng)呈遞抗原或其加工形式的量施用所述抗原性分子。適 宜的是，當(dāng)所述抗原性分子是可表達(dá)抗原的核酸分子時，所述核酸分子通常采用包含核苷 酸序列的核酸構(gòu)建體的形式，所述核苷酸序列編碼所述抗原并且可操作地連接于在抗原呈 遞細(xì)胞可操作的調(diào)節(jié)元件。在這些實施方案中，一種或多種抑制劑（例如至少一種NF-κ B 抑制劑和/或至少一種mTOR抑制劑和/或至少一種Syk抑制劑）和/或所述抗原性分子 通常采用適合引入（例如通過轉(zhuǎn)化、內(nèi)在化、內(nèi)吞作用、吞噬作用）抗原呈遞細(xì)胞或其前體 的形式，其包括抑制劑和/或抗原性分子的可溶性形式和顆粒形式。
[0020] 在一些實施方案中，使抗原呈遞細(xì)胞與NF- K B途徑的至少一種抑制劑接觸，所述 抑制劑的說明性實例列于下文的表2、3A、3B或4中。在具體實施方案中，NF- κ B抑制劑是 姜黃色素或姜黃色素衍生物。
[0021] 聚集蛋白聚糖抗原可以包括、僅包括或基本包括對應(yīng)于推定的全長瓜氨酸化聚集 蛋白聚糖多肽（包括其未加工形式、部分加工形式和成熟形式）的氨基酸序列?？蛇x地，聚 集蛋白聚糖抗原可以包括、僅包括或基本包括瓜氨酸化聚集蛋白聚糖多肽的結(jié)構(gòu)域，例如 但不限于Gl、G2和G3結(jié)構(gòu)域。在一些實施方案中，所述抗原包括、僅包括或基本包括對應(yīng) 于T細(xì)胞表位的氨基酸序列。在其他實施方案中，所述抗原包括、僅包括或基本包括多個 肽，其中單個肽包含對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如Cit-聚集蛋白聚糖多肽）的氨基酸序 列的不同部分。在這種類型的說明性實例中，所述肽是重疊肽。
[0022] 在相關(guān)的實施方案中，抑制劑（例如NF- κ B抑制劑、mTOR抑制劑和/或Syk抑制 劑）和抗原性分子以可溶性形式或顆粒的形式（例如抗原性分子和抑制劑都采用可溶性形 式，或抗原性分子或抑制劑之一采用可溶性形式，而另一個采用顆粒形式，或抗原性分子和 抑制劑都采用顆粒形式）共施用。在具體實施方案中，以顆粒的形式共施用抑制劑和抗原 性分子。例如，可以將抑制劑和抗原性分子包含于一個或多個顆粒（例如納米顆?；蛭⒘?， 如脂質(zhì)體和聚合物顆粒）中，適宜的是，所述顆粒能被抗原呈遞細(xì)胞攝取。在具體實施方案 中，將抑制劑和抗原性分子包含于同一顆粒中。抑制劑和抗原性分子可以通過注射、通過局 部應(yīng)用或通過鼻或口腔途徑，包括緩釋給藥模式，在一段時間內(nèi)被施用，適宜的是，其量有 效抑制或以其它方式減少針對聚集蛋白聚糖多肽的T淋巴細(xì)胞應(yīng)答或改善RA的癥狀。在 具體實施方案中，皮下共施用抑制劑和抗原性分子。
[0023] 在其他實施方案中，通過在B淋巴細(xì)胞中表達(dá)編碼全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚 糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的抗原的核酸分子，產(chǎn)生agg-tolAPC，其中核酸分 子的表達(dá)導(dǎo)致所述抗原或其加工形式在B淋巴細(xì)胞表面上的呈遞。令人期望的是，在這些 實例中，所述核酸分子還編碼免疫球蛋白（例如IgG)或直接或間接與所述抗原融合（例如 與所述抗原的C末端相鄰）的免疫球蛋白的片段（例如？1? &13、？&13'以及？(&13'）2免疫球 蛋白片段、免疫球蛋白重鏈等）。
[0024] 在一些實施方案中，所述方法包括、僅包括或基本包括，以足以抑制或以另外方式 減少針對聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的促炎或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì) 胞應(yīng)答或抑制所述應(yīng)答發(fā)展的量，向所述對象施用agg-tolAPC或其前體。在這種類型的說 明性實例中，agg-tolAPC或其前體通過以下方式產(chǎn)生：從對象或從組織相容性供體收獲抗 原呈遞細(xì)胞或抗原呈遞細(xì)胞前體并將其離體暴露于：(Al)至少一種NF-κ B抑制劑，其量足 以抑制抗原呈遞細(xì)胞的NF- κ B途徑；和/或（A2)至少一種mTOR抑制劑，其量足以抑制抗 原呈遞細(xì)胞的mTOR ;和/或（A3)至少一種Syk抑制劑，其量足以抑制抗原呈遞細(xì)胞的Syk 途徑，以及暴露于（B)選自全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖 多肽）的抗原或可表達(dá)抗原的核酸分子的抗原性分子，其量足以使抗原呈遞細(xì)胞或其前體 向所述對象的免疫系統(tǒng)呈遞所述抗原或其加工形式。
[0025] 在其他說明性實例中，agg-tolAPC或其前體通過以下方式產(chǎn)生：從所述對象或從 組織相容性供體收獲B淋巴細(xì)胞或B淋巴細(xì)胞前體，并向其中離體引入核酸分子，所述核酸 分子與可在B淋巴細(xì)胞中操作的調(diào)節(jié)元件可操作地連接，且編碼全部或部分對應(yīng)于聚集蛋 白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的抗原，其中所述核酸分子的表達(dá)導(dǎo)致所述抗 原或其加工形式呈遞于B淋巴細(xì)胞的表面。在具體實施方案中，核酸分子還編碼免疫球蛋 白或直接或間接與所述抗原融合的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段。適宜的是，當(dāng)使用前體 時，在足以從所述前體分化抗原呈遞細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所述前體一段時間。
[0026] 在其他實施方案中，所述方法包括、僅包括或基本包括向所述對象施用MHC-肽復(fù) 合體，所述復(fù)合體疾病基本上由全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白 聚糖多肽）的抗原和具有抗原結(jié)合位點的分離的（例如可溶性）MHC組分（組件）組成，其 中所述抗原結(jié)合所述抗原結(jié)合位點。
[0027] 仍然在其他實施方案中，所述方法包括、僅包括或基本包括向所述對象施用包含 免疫調(diào)節(jié)肽和免疫或T細(xì)胞結(jié)合配體（I/TCBL)的嵌合構(gòu)建體，其中所述免疫調(diào)節(jié)肽包括、 僅包括或基本包括對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的一部分（例 如自身抗原）的氨基酸序列，適宜的是，所述部分與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA)相關(guān)，且結(jié)合促炎 或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞上的抗原受體（例如T細(xì)胞受體），并且其中I/TCBL結(jié)合選自下 述的一類或亞類T細(xì)胞：輔助T細(xì)胞、抑制性T細(xì)胞以及細(xì)胞毒性T細(xì)胞，并且調(diào)節(jié)T細(xì)胞 活性。適宜的是，I/TCBL至少包含選自以下的分子的一部分:MHC I類分子、MHC II類分 子、輔助分子如β 2-微球蛋白、淋巴細(xì)胞功能相關(guān)分子-3(LFA-3)、免疫球蛋白分子重鏈Fc 區(qū)、Ia+分子、⑶2抗體、⑶3抗體、CD4抗體、⑶8抗體、凝集素抗體、淋巴因子。
[0028] 在其他實施方案中，所述包括、僅包括或基本包括向所述對象使用改變的肽配體 (APL)，所述改變的肽配體包括、僅包括或基本包括對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚 集蛋白聚糖多肽）的一部分（例如自身抗原）的氨基酸序列，所述部分適宜地與類風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎（RA)相關(guān)，并且結(jié)合促炎或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞上的抗原受體（例如T細(xì)胞受 體），其中APL氨基酸序列與所述所述部分的氨基酸序列的區(qū)別在于至少一個氨基酸取代、 缺失或增加，其通過抗原受體干擾正常的信號傳導(dǎo)，并且具有至少一種選自以下的活性： (i)對抗T淋巴細(xì)胞對聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的應(yīng)答，（ii)引 起聚集蛋白聚糖-或瓜氨酸化聚集蛋白聚糖-特異性T淋巴細(xì)胞的無反應(yīng)性，（iii)引起 聚集蛋白聚糖-或瓜氨酸化聚集蛋白聚糖-特異性T淋巴細(xì)胞的凋亡，（iv)刺激或誘導(dǎo)聚 集蛋白聚糖-或瓜氨酸化聚集蛋白聚糖-特異性T h2免疫應(yīng)答，（V)抑制聚集蛋白聚糖-或 瓜氨酸化聚集蛋白聚糖-特異性ThI免疫應(yīng)答的發(fā)展，包括抑制促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，（vi) 刺激聚集蛋白聚糖-或瓜氨酸化聚集蛋白聚糖-特異性調(diào)節(jié)性淋巴細(xì)胞（例如T調(diào)節(jié)性淋 巴細(xì)胞（Treg))的激活，或（vii)防止或抑制炎性刺激物激活聚集蛋白聚糖-或瓜氨酸化 聚集蛋白聚糖-特異性抗原呈遞細(xì)胞。
[0029] 在相關(guān)方面，本發(fā)明延及劑（agent)在治療或預(yù)防關(guān)節(jié)疾病（例如早期RA或初 期RA)中的用途或在制造用于治療或預(yù)防關(guān)節(jié)疾?。ɡ缭缙赗A或初期RA)的藥物中的 用途，其中所述劑選自：（1)如上文廣泛描述的，NF-κ B途徑抑制劑和選自全部或部分對應(yīng) 于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的抗原或可表達(dá)所述抗原的核酸分 子的抗原性分子；（2)如上文廣泛描述的，mTOR抑制劑和選自全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白 聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的抗原或可表達(dá)所述抗原的核酸分子的抗原性 分子；（3)如上文廣泛描述的，Syk途徑抑制劑和選自全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽 (例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的抗原或可表達(dá)所述抗原的核酸分子的抗原性分子；(4) 如上文廣泛描述的，編碼全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多 肽）的抗原，用于引入B淋巴細(xì)胞的核酸分子；（5)如上文廣泛描述的，MHC-肽復(fù)合體，其 基本上由全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的抗原和 具有抗原結(jié)合位點的分離的（例如可溶性）MHC組分組成，其中所述抗原與抗原結(jié)合位點結(jié) 合；(6)如上文廣泛描述的，嵌合構(gòu)建體；（7)如上文廣泛描述的，聚集蛋白聚糖-特異性耐 受原抗原呈遞細(xì)胞；或（8)如上文廣泛描述的，包括、僅包括或基本包括對應(yīng)于聚集蛋白聚 糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的部分的氨基酸序列的APL。
[0030] 本發(fā)明的另一方面還涉及適合用于治療或預(yù)防對象的關(guān)節(jié)損傷的組合物。這些組 合物通常包括、僅包括或基本包括選自以下的劑：（1)如上文廣泛描述的，NF- K B途徑抑制 劑和選自全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的抗原或 可表達(dá)所述抗原的核酸分子的抗原性分子；（2)如上文廣泛描述的，mTOR抑制劑和選自全 部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的抗原或可表達(dá)所述 抗原的核酸分子的抗原性分子；（3)如上文廣泛描述的，Syk途徑抑制劑和選自全部或部分 對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的抗原或可表達(dá)所述抗原的核 酸分子的抗原性分子；(4)如上文廣泛描述的，編碼全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽 (例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的抗原，用于引入B淋巴細(xì)胞的核酸分子；（5)如上文廣泛 描述的，MHC-肽復(fù)合體，其基本上由全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集 蛋白聚糖多肽）的抗原和具有抗原結(jié)合位點的分離的（例如可溶性）MHC組分組成，其中所 述抗原與抗原結(jié)合位點結(jié)合；（6)如上文廣泛描述的，嵌合構(gòu)建體；（7)如上文廣泛描述的， 聚集蛋白聚糖-特異性耐受原抗原呈遞細(xì)胞；或（8)如上文廣泛描述的，包括、僅包括或基 本包括對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽（例如cit-聚集蛋白聚糖多肽）的部分的氨基酸序列的 APL0

【專利附圖】

【附圖說明】
[0031] 圖1是顯示用瓜氨酸化肽和天然肽刺激的健康對照和RA患者的T細(xì)胞增殖應(yīng)答 的圖示。如所示，將20例RA患者和6名健康對照的PBMC和SFMC與0、3或30 μ g/mL肽或 4Lfi/mL破傷風(fēng)類毒素一起溫育（培育）5天。通過[3H]胸苷攝取評估T細(xì)胞增殖。每一個 點表示一個個體。比較多個平均值（Kruskal-Wallis檢驗），對于RA患者而言*#p〈0. 001， 而對于健康對照而言**P〈〇. 01，通過（曼-惠特尼檢驗），比較健康對照和RA患者PBMC對 破傷風(fēng)類毒素的應(yīng)答，**P〈〇. 01。比較RA患者對瓜氨酸化和天然聚集蛋白聚糖肽的應(yīng)答 (曼-惠特尼檢驗），*Ρ〈〇· 05。
[0032] 圖2是顯示比較用瓜氨酸化和天然肽刺激的RA和健康對照單核細(xì)胞的未受刺激 的細(xì)胞因子分泌和凈IL-6分泌的圖示。A :將17例RA患者和6名健康對照的PBMC在培養(yǎng) 基中溫育5天，并通過CBA評估上清液中的細(xì)胞因子。比較IFN-Y的產(chǎn)量與其他細(xì)胞因子 的產(chǎn)量（Kruskal-Wallis檢驗和Dunns后驗校正），#p〈0. 01。B :如所示，將17例RA患者 和6名健康對照的PBMC與0、3或30 μ g/mL肽一起溫育，并通過CAB評估上清液中的IL-6。 凈細(xì)胞因子分泌計算為[用肽刺激的IL-6濃度]減去[無肽刺激的IL-6濃度]。每一個點 代表一個個體。每一個點代表一個個體。比較IL-6對瓜氨酸化和天然肽的應(yīng)答（Wilcoxon 符號秩檢驗），*Ρ〈〇· 05, #ρ〈0· 01。
[0033] 圖3是顯示用瓜氨酸化和天然肽刺激的RA和健康對照PBMC的凈TNF、IFN- γ、 IL-10以及IL-17分泌的圖示。如所示，將17例RA患者和6名健康對照的PBMC與0、3或 30 μ g/mL肽一起溫育，并通過CBA評估上清液中的細(xì)胞因子。按圖2B，計算凈細(xì)胞因子分 泌。每一個點代表一個個體。比較IL-10對瓜氨酸化和天然聚集蛋白聚糖的應(yīng)答（Wilcoxon 符號秩檢驗），*P〈〇. 05。
[0034] 圖4是顯示RA患者和健康對照所產(chǎn)生的細(xì)胞因子的呈遞的圖示。針對每一細(xì)胞 因子，計算具有陽性應(yīng)答的RA患者或健康對照的百分比（>2SD，高于針對相應(yīng)天然多肽的 平均應(yīng)答），并且針對對瓜氨酸化纖維蛋白原、聚集蛋白聚糖以及II型膠原蛋白的應(yīng)答，將 其繪制成圖。
[0035] 圖5是顯示RA患者和健康對照間瓜氨酸化肽反應(yīng)性IL-6應(yīng)答的多樣性的圖示。 A :如所示，將17例RA患者和6名健康對照的PBMC和SFMC與0、3或30 μ g/mL肽一起溫 育，并且將上清液中每一個體的IL-6應(yīng)答繪制成圖。標(biāo)示疾病病程和HLA類型。B :顯示對 于每一肽，患有近期發(fā)作或長期存在的疾病且具有陽性應(yīng)答的RA患者的頻率（>2SD，高于 針對相應(yīng)天然肽的平均應(yīng)答）。
[0036] 圖6是顯示⑶4+T細(xì)胞亞群的細(xì)胞因子分泌的圖示。將HLA-DR SE+RA患者和健 康對照的PBMC與0或30 μ g/ml瓜氨酸化纖維蛋白原或瓜氨酸化聚集蛋白聚糖一起溫育， 用針對 CD4、CD28、IFN- γ 和 IL-6 (A)或 CD4、CD45RO、IL-6 和 IFN- γ (E)的 mAb 染色，然 后通過流式細(xì)胞術(shù)進行分析。B :概述了門控策略（gating strategy)。C :焚光補償對照 (Fluorescence minus one, FMO)圖，其顯示門控于⑶4+T細(xì)胞上的細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色的 背景染色。D :門控的⑶€非-T細(xì)胞的IL-6染色。在（E)中，分別針對不與肽、瓜氨酸化 纖維蛋白原以及瓜氨酸化聚集蛋白聚糖一起溫育，IL-6+⑶4+⑶45R0+T細(xì)胞的比例分別為 2.2%、5.3%以及7.1%，11^-6 +〇04+0)451?0_1'細(xì)胞的比例分別為0.8%、2.1%以及4%。顯 示了兩例個體RA患者和1名健康對照。數(shù)據(jù)代表2名健康供體和5例RA患者。
[0037] 圖7顯示NF- κ B、mTOR或Syk抑制劑對RA患者的抗原呈遞細(xì)胞的抑制阻抑它們 響應(yīng)瓜氨酸化聚集蛋白聚糖肽誘導(dǎo)T細(xì)胞細(xì)胞因子產(chǎn)生的能力。
[0038] 圖8顯示RA患者中針對瓜氨酸化聚集蛋白聚糖Gl表位的細(xì)胞因子應(yīng)答。
[0039] 圖9顯示瓜氨酸化聚集蛋白聚糖-特異性T細(xì)胞存在于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的外 周血中，這通過四聚體染色確定。
[0040] 圖10顯示外周血中cit-聚集蛋白聚糖-特異性T細(xì)胞的數(shù)量和熒光強度。
[0041] 表 A
[0042] 序列簡述
[0043]

【權(quán)利要求】
1. 治療或預(yù)防對象的關(guān)節(jié)損傷的方法，所述方法包括以下步驟，或由以下步驟組成或 基本組成：在所述對象中引起針對聚集蛋白聚糖多肽的抗原特異性耐受原應(yīng)答，由此治療 或預(yù)防所述關(guān)節(jié)損傷。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述聚集蛋白聚糖多肽是瓜氨酸化聚集蛋白聚糖多 肽。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述對象患有早期RA或初期RA。
4. 如權(quán)利要求3所述的方法，還包在引起所述抗原特異性耐受原應(yīng)答之前，鑒別所述 對象患有早期RA或初期RA。
5. 如權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述對象對共同的表位（SE)是陽性的。
6. 如權(quán)利要求5所述的方法，還包括在引起所述抗原特異性耐受原應(yīng)答之前，鑒別所 述對象對SE是陽性的。
7. 如權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述對象具有針對所述聚集蛋白聚糖多 肽的免疫應(yīng)答，或處于發(fā)展所述免疫應(yīng)答的風(fēng)險。
8. 如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述免疫應(yīng)答包括效應(yīng)T淋巴細(xì)胞應(yīng)答。
9. 如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述免疫應(yīng)答包括產(chǎn)生至少一種選自以下的細(xì)胞因 子：白介素-6 (IL-6)、干擾素-γ (IFN-γ)、腫瘤壞死因子（TNF)以及白介素-10 (IL-IO)。
10. 如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述免疫應(yīng)答包括促炎T淋巴細(xì)胞應(yīng)答，其包括、僅 包括或基本包括產(chǎn)生至少一種選自IL-6、IFN-y以及TNF的細(xì)胞因子。
11. 如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述促炎T淋巴細(xì)胞應(yīng)答包括、僅包括或基本包括 產(chǎn)生IL-6。
12. 如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述免疫應(yīng)答至少部分地由CD4 +淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。
13. 如權(quán)利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述抗原特異性耐受原應(yīng)答通過以下 方式實現(xiàn)： (1) 增加所述對象中耐受原抗原呈遞細(xì)胞（agg-tolAPC)的數(shù)量，所述細(xì)胞呈遞對應(yīng)于 所述聚集蛋白聚糖多肽一部分的肽，其中所述部分與針對所述聚集蛋白聚糖多肽的促炎或 自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答有關(guān)； (2) 誘導(dǎo)所述對象的促炎或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的無反應(yīng)性或凋亡，所述細(xì)胞對所 述聚集蛋白聚糖多肽是反應(yīng)性的；以及 (3) 增加所述對象的調(diào)節(jié)性或抑制性T淋巴細(xì)胞的數(shù)量，所述細(xì)胞阻抑或以另外方式 減少針對所述聚集蛋白聚糖多肽的促炎或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答。
14. 如權(quán)利要求13所述的方法，包括、僅包括或基本包括增加所述對象的agg-tolAPC 的數(shù)量，由此治療或預(yù)防所述關(guān)節(jié)損傷。
15. 如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述agg-tolAPC刺激阻抑或以另外方式減少針對 所述聚集蛋白聚糖多肽的促炎或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答的調(diào)節(jié)性或抑制性T淋巴細(xì)胞 的產(chǎn)生。
16. 如權(quán)利要求14或15所述的方法，其中通過使所述對象的抗原呈遞細(xì)胞與抗原性分 子接觸以及與以下接觸而產(chǎn)生所述agg-tolAPC : (I)NF-κ B抑制劑，其量足以抑制所述抗 原呈遞細(xì)胞中的NF- κ B活性，和/或（2)mT0R抑制劑，其量足以抑制所述抗原呈遞細(xì)胞中 的mTOR活性，和/或（3) Syk抑制劑，其量足以抑制所述抗原呈遞細(xì)胞中的Syk活性，所述抗 原性分子選自全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽的抗原或可表達(dá)所述抗原的核酸分子， 其量足以使抗原呈遞細(xì)胞在其表面呈遞所述抗原或其加工形式。
17. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述抗原包含對應(yīng)于全長聚集蛋白聚糖多肽的氨 基酸序列。
18. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述抗原包含對應(yīng)于成熟聚集蛋白聚糖多肽的氨 基酸序列。
19. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述抗原包含對應(yīng)于選自Gl結(jié)構(gòu)域、G2結(jié)構(gòu)域或 G3結(jié)構(gòu)域的聚集蛋白聚糖多肽的結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。
20. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述抗原包含對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽的T細(xì)胞 表位的氨基酸序列。
21. 如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述氨基酸序列選自SEQ ID NO:5-35任意之一， 包括其瓜氨酸化形式。
22. 如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述氨基酸序列選自SEQ ID NO:32-35中的任一 個。
23. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述抗原是HLA DR限制性的，并且所述對象對HLA DR等位基因是陽性的。
24. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述抗原采用一種或多種肽的形式，所述肽全部 或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽，包括其瓜氨酸化形式。
25. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述抗原采用多個連續(xù)重疊肽的形式，所述重疊 肽的序列跨越聚集蛋白聚糖多肽，包括其瓜氨酸化形式的至少一部分。
26. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述重疊肽包括選自SEQ ID NO:49-531的氨基酸 序列，包括其瓜氨酸化形式，或由選自SEQ ID N0:49-531的氨基酸序列，包括其瓜氨酸化形 式組成或基本組成。
27. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述抑制劑是NF- κ B抑制劑（例如選自表2、3A、 3B或4所列抑制劑中的任一種的NF- κ B抑制劑）。
28. 如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述NF- κ B抑制劑是姜黃色素或姜黃色素衍生 物。
29. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中以可溶形式共施用所述抑制劑和所述抗原性分 子。
30. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中以顆粒的形式共施用所述抑制劑和所述抗原性分 子。
31. 如權(quán)利要求30所述的方法，其中在同一顆粒中共施用所述抑制劑和所述抗原性分 子。
32. 如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述顆粒是聚合物顆粒。
33. 如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述顆粒是脂質(zhì)體。
34. 如權(quán)利要求13所述的方法，其中通過在B淋巴細(xì)胞中表達(dá)編碼全部或部分對應(yīng)于 聚集蛋白聚糖多肽的抗原的核酸分子產(chǎn)生所述agg-tolAPC，其中所述核酸分子的表達(dá)導(dǎo)致 所述抗原或其加工形式呈遞于所述B淋巴細(xì)胞的表面上。
35. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述核酸分子還編碼直接或間接融合于所述抗原 的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段。
36. 如權(quán)利要求13所述的方法，包括向所述對象施用調(diào)節(jié)性或抑制性T淋巴細(xì)胞，所述 調(diào)節(jié)性或抑制性T淋巴細(xì)胞阻抑或以另外方式減少針對所述聚集蛋白聚糖多肽的促炎或 自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答。
37. 如權(quán)利要求1所述的方法，包括向所述對象施用MHC-肽復(fù)合體，所述復(fù)合體由全部 或部分對應(yīng)于所述聚集蛋白聚糖多肽的抗原和具有抗原結(jié)合位點的分離的MHC組分基本 上組成，其中所述抗原與所述抗原結(jié)合位點結(jié)合。
38. 如權(quán)利要求1所述的方法，包括向所述對象施用包含免疫調(diào)節(jié)肽和免疫或T細(xì)胞結(jié) 合配體（I/TCBL)的嵌合構(gòu)建體，其中所述免疫調(diào)節(jié)肽包括、僅包括或基本包括對應(yīng)于聚集 蛋白聚糖多肽的一部分的氨基酸序列，并且，其結(jié)合促炎或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞上的抗 原受體，并且其中所述I/TCBL結(jié)合一類或一亞類選自輔助T細(xì)胞、抑制性T細(xì)胞以及細(xì)胞 毒性T細(xì)胞的T細(xì)胞并調(diào)節(jié)T細(xì)胞活性。
39. 如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述I/TCBL至少包含選自以下的分子的一 部分:MHC I類分子、MHC II類分子、輔助分子如β2-微球蛋白、淋巴細(xì)胞功能相關(guān)分 子-3 (LFA-3)、免疫球蛋白分子重鏈Fc區(qū)、Ia+分子、⑶2抗體、⑶3抗體、⑶4抗體、⑶8抗 體、凝集素抗體、淋巴因子。
40. 組合物，包含劑或劑的組合，或由劑或劑的組合組成或基本組成，其中所述劑引起 針對聚集蛋白聚糖多肽的抗原特異性耐受原應(yīng)答。
41. 如權(quán)利要求40所述的組合物，其中所述劑或劑的組合選自：（I)NF- κ B途徑抑制 劑和選自全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽的抗原或可表達(dá)所述抗原的核酸分子的抗 原性分子；（2) mTOR抑制劑和選自全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽的抗原或可表達(dá)所 述抗原的核酸分子的抗原性分子；（3) Syk途徑抑制劑和選自全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白 聚糖多肽的抗原或可表達(dá)所述抗原的核酸分子的抗原性分子；(4)用于引入到B淋巴細(xì)胞 中的編碼抗原的核酸分子，所述抗原全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽；(5)MHC-肽復(fù) 合體，由全部或部分對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽的抗原和具有抗原結(jié)合位點的分離的MHC組 分基本上組成，其中所述抗原與所述抗原結(jié)合位點結(jié)合；(6)本文定義的嵌合構(gòu)建體；（7) 聚集蛋白聚糖特異性耐受原抗原呈遞細(xì)胞；或（8)APL，其包括對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽的 一部分的氨基酸序列，或由對應(yīng)于聚集蛋白聚糖多肽的一部分的氨基酸序列組成或基本組 成。
42. 權(quán)利要求40或41所述的引起針對聚集蛋白聚糖多肽的抗原特異性耐受原應(yīng)答的 劑或劑的組合，用于治療或預(yù)防關(guān)節(jié)損傷。
43. 權(quán)利要求40或41所述的引起針對聚集蛋白聚糖多肽的抗原特異性耐受原應(yīng)答的 劑或劑的組合在制備用于治療或預(yù)防關(guān)節(jié)損傷的藥物中的用途。
【文檔編號】A61K39/00GK104519907SQ201380027092
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年3月25日 優(yōu)先權(quán)日:2012年3月23日
【發(fā)明者】R·托馬斯 申請人:昆士蘭大學(xué)