一種抗腫瘤裸花紫珠提取物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗腫瘤裸花紫珠提取物及其制備方法和用途。將裸花紫珠藥材粉碎，然后用水、乙醇或甲醇或乙醇水溶液或甲醇水溶液浸提，浸提液過濾后濃縮獲得總浸膏；將總浸膏用水溶解，使之成懸浮狀，再依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液濃縮后獲得乙酸乙酯萃取物；將乙酸乙酯萃取物用乙醇或乙醇水溶液溶解，然后置于0～5℃冷藏，冷藏后溶液會(huì)有沉淀產(chǎn)生，收集沉淀部分，冷凍干燥后即為裸花紫珠提取物。裸花紫珠提取物的主要成分是倍半萜和二萜類成分，而且還有黃酮和三萜類成分，總有效成分含量相對(duì)很高，提取物的制備工藝簡(jiǎn)單，得率高。裸花紫珠提取物具有顯著的抗腫瘤作用，毒性小，能夠用于制備抗腫瘤藥物，具有臨床應(yīng)用的巨大潛力。
【專利說明】一種抗腫瘤裸花紫珠提取物及其制備方法和用途
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，具體涉及一種抗腫瘤裸花紫珠提取物及其制備方法和用途。
【背景技術(shù)】:
[0002]中藥資源是中華民族幾千年醫(yī)藥文化積淀所形成的國(guó)粹，是我國(guó)參與世界創(chuàng)新藥物研發(fā)，治療重大疾病的有利戰(zhàn)略資源。傳統(tǒng)中藥以其豐富的化學(xué)組分和新穎的化學(xué)結(jié)構(gòu)在新藥創(chuàng)新中獨(dú)領(lǐng)風(fēng)騷，在對(duì)當(dāng)前重大疾病、慢性病和老年病等的預(yù)防和治療中發(fā)揮著獨(dú)特的作用，其功能和價(jià)值往往超過西藥所含有的單一的化學(xué)組分，并具有毒副作用小和不易產(chǎn)生耐藥性的顯著優(yōu)勢(shì)。[0003]癌癥目前已經(jīng)成為威脅人類健康的首要疾病之一，循證醫(yī)學(xué)證據(jù)顯示癌癥發(fā)病率和死亡率均呈逐年上升的態(tài)勢(shì)，尤其以包括中國(guó)在內(nèi)的發(fā)展中國(guó)家患病人群增長(zhǎng)較快。臨床使用的抗癌藥物以化學(xué)藥居多如阿霉素、順鉬、卡鉬等，在臨床中廣泛使用，但往往其毒副作用較大，許多患者無法耐受，化療用藥過程異常痛苦，有些患者不得不被迫放棄治療。從我國(guó)瀕危保護(hù)植物云南紅豆杉中分離得到的紫杉醇(Paclitaxel，別名泰素、紫素、特素)已進(jìn)入國(guó)家基本藥物目錄，成為臨床一線抗癌藥物，但是珍稀的植物資源與不斷上升的藥物需求之間產(chǎn)生巨大的供需矛盾沖突。隨著對(duì)傳統(tǒng)中藥化學(xué)成分的長(zhǎng)期研究和抗癌新穎天然產(chǎn)物的系統(tǒng)篩選，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，植物提取物或稱之為化合物組合物往往表現(xiàn)出比單體化合物更強(qiáng)的抗腫瘤活性。其內(nèi)在原因一方面是因?yàn)榛衔镏g存在構(gòu)效關(guān)系，具有協(xié)同增效作用；另一方面植物提取物活性成分中富含具有提高機(jī)體免疫、保護(hù)肌體細(xì)胞免受損傷的活性分子。所以，在整體上表現(xiàn)為提高免疫與抗腫瘤共同推進(jìn)的作用，臨床表現(xiàn)出非常好的抗腫瘤作用。我國(guó)現(xiàn)臨床使用的大量抗腫瘤藥物即是基于這一原理開發(fā)出來的。如康萊特注射液，是從薏苡里面提取的薏苡酯，主要用于原發(fā)性肺癌、肝癌、胃癌、鼻咽癌、乳腺癌、食道癌等，尤其對(duì)晚期腫瘤有治療作用。消癌平注射液，是由烏骨藤等天然中藥材提煉精制而成的純中藥制劑，主要含多糖、生物堿和皂苷類等，具有抗癌、消炎、平喘、利尿的作用。莪術(shù)油注射液和莪術(shù)油葡萄糖注射液，主要為莪術(shù)油，含莪術(shù)醇、欖香烯、莪術(shù)二酮等多種抗癌活性成分，是一種非細(xì)胞毒性廣譜抗腫瘤藥，適用于各種惡性腫瘤，尤其是肝癌、肺癌、皮膚癌、宮頸癌、外陰癌等。鴉膽子油乳注射液，是鴉膽子提取物中的油性成分，主含油酸等，能夠抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶活性，從而抑制細(xì)胞DNA的合成，阻斷癌細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)干擾素的生成，促使癌細(xì)胞的凋亡。哈特靈注射液和巖舒注射液，是由天然藥物苦參提取的總堿性注射液，具有抗腫瘤、止血、止痛等作用。艾迪注射液，是黃芪、刺五加、人參等與抗癌藥斑蝥素精制而成。還有以人參多糖為主要成分的安爾欣注射液、參一膠囊，白花蛇舌草注射液、復(fù)方紅豆杉膠囊等，都是中藥提取物抗腫瘤藥物。仔細(xì)分析發(fā)現(xiàn)，上述抗腫瘤藥物大多具有提高免疫、軟堅(jiān)散結(jié)、清熱解毒、抗炎消腫的作用，為抗腫瘤藥物的開發(fā)提供了新的方向和思路。
[0004]裸花紫珠(Callicarpa nudiflora Hook)是馬鞭草科紫珠屬植物,是我國(guó)海南省黎族地區(qū)常用的特色民族藥，在廣東和廣西等省地亦有分布，以海南五指山產(chǎn)的為上品。裸花紫珠以地上干燥部分入藥，具有止血消炎、散瘀消腫、解毒、驅(qū)風(fēng)濕之功效，民間主要用于治療創(chuàng)傷出血、呼吸道及消化道出血、化膿性炎癥等癥，外用治燒、燙傷及外傷出血。裸花紫珠收載于1977年版《中國(guó)藥典》，以裸花紫珠水提物為主要成分的成藥有裸花紫珠片、裸花紫珠分散片、裸花紫珠顆粒和裸花紫珠膠囊等。
[0005]對(duì) 裸花紫珠的研究和專利申報(bào)主要集中在止血活性部位的發(fā)現(xiàn)、止血功能和止血制劑的保護(hù)等方面。裸花紫珠的化學(xué)成分和藥理作用研究表明，其主要含有黃酮、鞣質(zhì)、三萜類和酚類等成分，其中總黃酮提取物具有抗血栓形成、降低全血粘度、抑制血小板凝集和抗炎等作用。在臨床應(yīng)用中，裸花紫珠片口服對(duì)肛腸病、鼻腔鼻竇、流產(chǎn)和上環(huán)等術(shù)后止血作用效果顯著。
[0006]然而，針對(duì)裸花紫珠抗腫瘤作用的研究目前還無相關(guān)的專利和文獻(xiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】
:
[0007]本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種具有抗腫瘤活性的裸花紫珠提取物及其制備方法。
[0008]本發(fā)明的裸花紫珠提取物是通過以下方法制備的，該方法包括以下步驟:
[0009]a、將裸花紫珠藥材粉碎，然后用水、乙醇或甲醇或乙醇水溶液或甲醇水溶液浸提，浸提液過濾后濃縮獲得總浸膏；
[0010]b、將總浸膏用水溶解，使之成懸浮狀，再依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液濃縮后獲得乙酸乙酯萃取物；
[0011]C、將乙酸乙酯萃取物用乙醇或乙醇水溶液溶解，然后置于O~5°C冷藏，冷藏后溶液會(huì)有沉淀產(chǎn)生，收集沉淀部分，冷凍干燥后即為裸花紫珠提取物。
[0012]所述的濃縮優(yōu)選為減壓濃縮。
[0013]所述的步驟a和步驟c的乙醇水溶液優(yōu)選為體積分?jǐn)?shù)95%乙醇水溶液。
[0014]本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供裸花紫珠提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0015]所述的抗腫瘤藥物優(yōu)選為抗肺癌、肝癌、乳腺癌、表皮瘤、鼻咽癌或白血病的藥物。
[0016]本發(fā)明的裸花紫珠提取物的主要成分是倍半萜和二萜類成分，而且還有黃酮和三萜類成分，總有效成分含量相對(duì)很高，提取物的制備工藝簡(jiǎn)單，得率高。所得裸花紫珠提取物具有顯著的抗腫瘤作用，毒性小，能夠用于制備抗腫瘤藥物，具有臨床應(yīng)用的巨大潛力。
【具體實(shí)施方式】:
[0017]以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0018]實(shí)施例1:裸花紫珠提取物的制備:
[0019]將裸花紫珠藥材1.0kg,粉碎，經(jīng)體積分?jǐn)?shù)95%乙醇水溶液于70°C水浴鍋回流提取3次，每次提取lh，合并提取液并過濾，濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮獲得醇提總浸膏125.0go取總浸膏100.0g水溶解后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取分別得到石油醚萃取物ZH-Petro、乙酸乙酯萃取物ZH-EtOAc，正丁醇萃取物ZH-BuOH以及水相ΖΗ_Η20。其中乙酸乙酯萃取物減壓濃縮后經(jīng)體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇水溶液加熱溶解，于4°C冰箱放置過夜，有沉淀產(chǎn)生，離心將沉淀與上清液分離，沉淀部分冷凍干燥后得ZH-EtOAc-Pr印:25.3g，即為本實(shí)施例的裸花紫珠提取物。[0020]實(shí)施例2:裸花紫珠提取物抗腫瘤活性測(cè)定
[0021](I)細(xì)胞株:人肺腺癌細(xì)胞A549，人肝癌細(xì)胞H印G2，人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，人表皮瘤細(xì)胞KB-3-1，人鼻咽癌細(xì)胞CNE，非小細(xì)胞肺癌NC1-H460，白血病細(xì)胞K562。
[0022](2)待測(cè)樣品:ZH-Petro、ZH-Et0Ac、ZH-Bu0H、ZH-H20、ZH-Et0Ac-Pr印，分別設(shè)置梯度濃度為 200，100，50，25，12.5，6.25μ g/ml。陽性對(duì)照=Doxorubicin (阿霉素)。
[0023](3)方法:MTT 法
[0024]a)收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞以I XlOVmL的濃度接種于96孔板，100 μ L/孔，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h使細(xì)胞貼壁；
[0025]b)吸去上清液，加入含實(shí)驗(yàn)所需濃度樣品液的維持液(含有待測(cè)樣品)，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h ；
[0026]c)棄藥液，每孔加含5mg/mL的MTT20 μ L，繼續(xù)培養(yǎng)4h ；
[0027]d)終止培養(yǎng)，棄孔內(nèi)培養(yǎng)液，加DMS0150 μ L/孔，置于搖床上震蕩lOmin，使結(jié)晶充分溶解，于酶標(biāo)儀570nm處測(cè)各孔吸光值。實(shí)驗(yàn)同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基，MTT, DMSO)，對(duì)照孔(細(xì)胞，相同濃度的藥物溶解介質(zhì)DMSO，培養(yǎng)液，MTT, DMSO)
[0028]e)計(jì)算:細(xì)胞抑制率=[(對(duì)照-本底)-(給藥-本底)]/ (對(duì)照-本底)X 100%.[0029]測(cè)定結(jié)果:(IC5tl:μ g/ml)
[0030]3.抗腫瘤活性測(cè)定結(jié)果:(IC5tl: μ g/mL)，具體結(jié)果如表1所示:
[0031]表1:各提取物的對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性結(jié)果
[0032]
【權(quán)利要求】
1.一種裸花紫珠提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: a、將裸花紫珠藥材粉碎，然后用水、乙醇或甲醇或乙醇水溶液或甲醇水溶液浸提，浸提液過濾后濃縮獲得總浸膏； b、將總浸膏用水溶解，使之成懸浮狀，再依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液濃縮后獲得乙酸乙酯萃取物； C、將乙酸乙酯萃取物用乙醇或乙醇水溶液溶解，然后置于O~5°C冷藏，冷藏后溶液會(huì)有沉淀產(chǎn)生，收集沉淀部分，冷凍干燥后即為裸花紫珠提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的濃縮為減壓濃縮。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟a和步驟c的乙醇水溶液為體積分?jǐn)?shù)95%乙醇水溶液。
4.一種根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的制備方法制備得到的裸花紫珠提取物。
5.權(quán)利要求4所述的裸花紫珠提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物為抗肺癌、肝癌、乳腺癌、表皮瘤、鼻咽癌或白血病的藥物。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK103893412SQ201310724691
【公開日】2014年7月2日 申請(qǐng)日期:2013年12月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月24日
【發(fā)明者】馮世秀, 易博, 陳濤, 徐文彤, 張旻, 張力軍 申請(qǐng)人:深圳市仙湖植物園管理處, 中國(guó)人民解放軍第一八七中心醫(yī)院