大戟脂抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫(yī)藥應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥大戟脂抗腫瘤有效提取物及其組合物的制備方法和其在制備預(yù)防及治療腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝癌等惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用。維吾爾藥大戟脂經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，即為該提取物；或維吾爾藥大戟脂經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100:0-100:1的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比100:2-0:100的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，體積比100:2-0:100的石油醚：乙酸乙酯洗脫液干燥得到該提取物，或先用體積比100：0-100:3的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用純甲醇洗脫，純甲醇洗脫液干燥得到該提取物。
【專利說明】
大戟脂抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫(yī)藥應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥大戟脂抗腫瘤有效提取物及其組 合物的制備方法和其在制備抗腦膠質(zhì)瘤、肝癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、宮頸癌 等惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 本品為大戟科植物多脂大戟的樹脂狀分泌物，拉丁名：Euphorbium，維文名稱： 排日非云，別名：法而非榮、法刺夫榮、法刺夫云，等。多脂大戟（Euphorbia resinifera Berger)多年生灌木狀草本，原產(chǎn)歐洲，非洲亦產(chǎn)，英國、前蘇聯(lián)等也有分布。大戟脂采收加 工是在植物莖的棱緣處，以快刀切傷皮部，收集流出的乳汁，干燥后貯于密閉瓶內(nèi)，置干燥、 陰涼處。本品為不規(guī)則塊狀或滴狀物。大小不等，直徑可達(dá)3cm，暗黃色或黃棕色，新鮮者 色略淺。質(zhì)脆。氣微，加熱則有香脂樣芳香，味辛辣而特異。粉末能強(qiáng)烈刺激黏膜并引起噴 嚏?！栋莸匾浪帟份d："大戟脂，是一種樹的乳狀分泌物。新鮮、氣味強(qiáng)烈、透明、黃色者為上 品，易溶于橄欖油中，藥效期三年；四年以上者，變暗紅色，不易在橄欖油中溶化者為次品。" 根據(jù)上述維吾爾醫(yī)本草所述藥材特征和實(shí)物對(duì)照，與現(xiàn)代維吾爾醫(yī)所用大戟脂一致?；瘜W(xué) 成分含大戟腦，大戟醇約為22%，另外，還含有蒲公英留醇，大戟脂醇，β -欖香精，大戟酸， 大戟雙酮酸等。
[0003] 大戟脂具有生干生熱，清除異常黏液質(zhì)，強(qiáng)筋健肌，醒腦除緊，散寒止痛，燥濕退 月中，通利腸阻，除白內(nèi)障等功效，主治濕寒性或黏液質(zhì)性疾病，如癱瘓，面癱，昏迷，抽搐，顫 動(dòng)，坐骨神經(jīng)痛，關(guān)節(jié)疼痛，腹水，腸梗阻，白內(nèi)障等?！蹲⑨t(yī)典》:"消除壞死骨質(zhì)，消除肢體麻 木，清除眼部有害物質(zhì)，解毒蟲之毒。治骨質(zhì)壞死，肢體麻木，眼部有害物質(zhì)，毒蟲咬傷等。" 《拜地依藥書》:"祛寒健肌，燥濕強(qiáng)筋，開通腸阻，溫腎壯腰。治面癱，關(guān)節(jié)寒濕，腸梗阻，腎寒 腰虛等。"
[0004] 本發(fā)明通過系統(tǒng)地篩選研究，意外地發(fā)現(xiàn)大戟脂提取物具有顯著抗腫瘤活性，即 大戟脂提取物對(duì)腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、宮頸癌、肝癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌等惡性腫瘤的 具有很好的預(yù)防及治療作用，可以應(yīng)用于癌癥的預(yù)防和治療。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種大戟脂提取物。
[0006] 本發(fā)明還提供了以大戟脂提取物為主要活性成分的組合物。
[0007] 本發(fā)明同時(shí)提供了大戟脂提取物及其組合物的制備和應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0009] 維吾爾藥大戟脂經(jīng)有機(jī)溶劑（如優(yōu)選甲醇）超聲提取，提取液濃縮后，提取液濃 縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系測試其抗腫瘤活性，意外地發(fā)現(xiàn)用甲醇提取物具 有顯著地抗腫瘤活性。該活性提取物從未見文獻(xiàn)報(bào)道，其TLC分析表征如圖1，TLC色譜條 件：GF 254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)，顯色方法：香草醛-硫酸顯 色。
[0010] 維吾爾藥大戟脂經(jīng)有機(jī)溶劑（優(yōu)選甲醇）超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫（石油醚：乙酸乙酯，比例 見表1)，各石油醚：乙酸乙酯比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性 篩選體系測試其抗腫瘤活性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:0-100:1，體積比）洗脫，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:2-0:100,體積比）洗脫，石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2,體積 比）洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性。優(yōu)選地，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石 油醚：乙酸乙酯，100:1，體積比）洗脫，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:2,體積比）洗脫，石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2,體積比） 洗脫液干燥即得，本發(fā)明抗腫瘤活性的化合物，可以通過以上方法，得到富集，從而與其他 雜質(zhì)類成分分離開。該活性提取物從未見文獻(xiàn)報(bào)道，其TLC分析表征如圖2, TLC色譜條件： GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)，顯色方法：香草醛-硫酸顯色。 [0011] 或維吾爾藥大戟脂經(jīng)有機(jī)溶劑（優(yōu)選甲醇）超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫（石油醚：乙酸乙酯，比例見表 1)，各石油醚：乙酸乙酯比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系 測試其抗腫瘤活性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100 : 0-100:3,體積比）洗脫，繼用純甲醇洗脫，純甲醇洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性。 優(yōu)選地，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:3,體積比）洗脫，繼用純 甲醇洗脫，純甲醇洗脫液干燥即得，本發(fā)明的抗腫瘤活性的化合物，可以通過以上方法，得 到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該活性提取物從未見文獻(xiàn)報(bào)道，其TLC分析表征如 圖3,TLC色譜條件：GF 254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)，顯色方法：香 草醛-硫酸顯色。
[0012] 具體，發(fā)現(xiàn)過程如下：
[0013] 1、維吾爾藥大戟脂經(jīng)甲醇超聲提取物的制備
[0014] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物 SN0194A 樣品 2g。
[0015] 2、石油醚：乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫方法和結(jié)果
[0016] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物 SN0194A樣品2g上柱，甲醇溶解，共用甲醇15mL。上硅膠柱，拌樣硅膠3mg，空白硅膠10g， 玻璃柱內(nèi)徑I. 8cm，石油醚：乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫（條件見表1)，柱體積25mL，每個(gè)梯度 洗脫200mL，得到，各個(gè)濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得石油醚：乙酸乙酯梯度洗 脫提取物，收率見表1，TLC分析結(jié)果見圖4,圖5, TLC色譜條件：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石 油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)，石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)，顯色方法：香草醛-硫酸 顯色。
[0017] 表 1，
[0018]

[0019] 3、抗腫瘤活性篩選方法和結(jié)果
[0020] 1)實(shí)驗(yàn)條件
[0021] a)細(xì)胞株信息
[0022] 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6購于中國典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫
[0023] b)藥品及試劑
[0024] 樣品無菌條件下，DMSO溶解配置成母液濃度為100mg/mL，使用時(shí)用RPMI-1640培 養(yǎng)液稀釋至所需濃度（DMSO彡1%。）。
[0025] RPMI Medium 1640培養(yǎng)基干粉購于美國GIBCO公司。胎牛血清購于北京元亨圣馬 生物技術(shù)研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴鹽（MTT)。
[0026] c)儀器
[0027] CO2培養(yǎng)箱（SANYO,日本）
[0028] 垂直層流潔凈工作臺(tái)（上海上凈凈化設(shè)備有限公司）
[0029] 倒置生物顯微鏡（重慶光電儀器有限公司）
[0030] 低/高速臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）
[0031] 電子天平（奧豪斯儀器有限公司）
[0032] 酶標(biāo)儀（伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司）
[0033] 立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）
[0034] 鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）
[0035] PH 計(jì)（SART0RIUS，德國）
[0036] 2)實(shí)驗(yàn)方法和過程
[0037] 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6以4000/孔的密度鋪于96孔板，每孔100 μ L，12小時(shí)后 使用。各組分以DMSO溶解為lOOmg/mL儲(chǔ)存液，保存于-20°C待用。鋪板后12小時(shí)，觀察 細(xì)胞匯合率約為40%，加藥，濃度均為100 μ g/mL，每個(gè)組分3個(gè)復(fù)孔。每板細(xì)胞設(shè)立二個(gè) 對(duì)照組（培養(yǎng)基+細(xì)胞；含0. 1DMS0培養(yǎng)基+細(xì)胞），3個(gè)空白孔（只有培養(yǎng)基）。加入藥 物24小時(shí)后，加入20 μ L四甲基偶氮唑鹽化學(xué)名為3-(4, 5-二甲基噻唑）-2, 5-二苯基四 氮挫溴鹽（3-(4, 5-dimethyl_2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT)，繼 續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。完全棄去上清液，加入100 μ L DMS0,混勻使MTT完全溶解，去氣泡。490nm 測定OD值。
[0038] 抑制率（IR)= A對(duì)照-A試驗(yàn) χ 1〇〇 % A對(duì)照-A空白
[0039] 3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表
[0040] 表 2

[0046] 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：
[0047] 本發(fā)明的優(yōu)選方案為：維吾爾藥大戟脂經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮，干燥后，利 用體外抗腫瘤活性篩選體系測試其抗腫瘤活性，意外地發(fā)現(xiàn)甲醇提取物具有顯著地抗腫瘤 活性。該活性提取物從未見文獻(xiàn)報(bào)道，其TLC分析表征如圖1。
[0048] 維吾爾藥大戟脂經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫（石油醚：乙酸乙酯，比例見表1)，各石油醚：乙 酸乙酯比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系測試其抗腫瘤活 性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:1，體積比）洗脫， 繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2,體積比）洗脫，石油醚：乙酸乙 酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2,體積比）洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性，即 抗腫瘤活性的化合物，可以通過以上方法，得到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該活 性提取物從未見文獻(xiàn)報(bào)道，其TLC分析表征如圖2。
[0049] 維吾爾藥大戟脂經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫（石油醚：乙酸乙酯，比例見表1)，各石油醚：乙 酸乙酯比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系測試其抗腫瘤活 性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:3,體積比）洗脫， 繼用純甲醇洗脫，純甲醇洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性。即抗腫瘤活性的化合物， 可以通過以上方法，得到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該活性提取物從未見文獻(xiàn)報(bào) 道，其TLC分析表征如圖3。
[0050] 具體發(fā)現(xiàn)過程如下：
[0051 ] 4、抗腫瘤有效提取物的提取方法研究
[0052] 1)提取溶劑的種類研究
[0053] 分別用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑等有 機(jī)溶劑提取，并測試提取物的對(duì)C6細(xì)胞的抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0054] 表 3
[0056] 研究結(jié)果表明：提取用有機(jī)溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水 混合溶劑、乙醇水混合溶劑。
[0057] 2)提取溶劑的用量研究
[0058] 分別用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/體積比）有機(jī)溶劑提取，并測試提取物 的抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0059]表 4

[0063] 有效提取物提取用有機(jī)溶劑用量為藥材重量的2-50倍（重量/體積比）。
[0064] 3)干燥方法的研究
[0065] 分別用真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干燥法等方法，對(duì)得到 的抗腫瘤活性提取物進(jìn)行干燥，以含水量、TLC、活性測試為指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)真空干燥法、冷凍干 燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干燥法適用于對(duì)抗腫瘤活性提取物進(jìn)行干燥，其中，最優(yōu)為 真空干燥法、冷凍干燥法。
[0066] 表 5
[0068] 因此，大戟脂抗腫瘤有效提取物的制備方法優(yōu)選為：
[0069] 維吾爾藥大戟脂經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取，提取液濃縮，干燥后，即為該有效提取物。 其中最優(yōu)提取溶劑為甲醇。
[0070] 維吾爾藥大戟脂經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，1〇〇: 1，體積比）洗脫2-50倍柱體 積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2,體積比）洗脫2-50倍柱體 積，石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2,體積比）洗脫液干燥后，即為該 有效提取物。以上條件最優(yōu)為先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:1， 體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2,體 積比）洗脫40倍柱體積。
[0071] 維吾爾藥大戟脂經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:3,體積比）洗脫2-50倍柱體 積，繼用純甲醇洗脫2-50倍柱體積，純甲醇洗脫液干燥后，即為該有效提取物。以上條件最 優(yōu)為先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:3,體積比）洗脫25倍柱體 積，繼用純甲醇洗脫40倍柱體積。其中，
[0072] 1)有效提取物提取用有機(jī)溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混 合溶劑、乙醇水混合溶劑，最優(yōu)條件為甲醇和95乙醇。有效提取物提取用有機(jī)溶劑用量為 藥材重量的2-40彳首（重量/體積比）。
[0073] 2)提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干 燥法等，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0074] 5.大戟脂總抗腫瘤有效提取物的抗腫瘤活性研究
[0075] 利用各種腫瘤細(xì)胞，如腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦 膠質(zhì)瘤、肝癌等惡性腫瘤細(xì)胞株，分別測試大戟脂抗腫瘤提取物的抗腫瘤活性，IC 5。結(jié)果如 下：
[0076] 表 6
[0079] 因此，我們發(fā)現(xiàn)，大戟脂抗腫瘤有效提取物具備抗腫瘤活性，可望用于各種腫瘤如 腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤、肝癌等惡性腫瘤細(xì)胞株 的預(yù)防及治療。
[0080] 6、大戟脂抗腫瘤有效提取物的組合物及其制備方法研究
[0081] 1)固體分散體 「00821 々卜方
[0084] 制備方法：
[0085] 稱取大戟脂有效提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質(zhì) 量比分別放入燒杯中，加入無水乙醇，磁力攪拌器攪拌至大戟脂有效提取物和載體完全溶 解，轉(zhuǎn)入旋蒸儀中除去有機(jī)溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得大戟脂有效提取物PVP包合物。
[0086] 2)環(huán)糊精包合物
[0087] 處方：
[0089] 制備方法：
[0090] 將β -環(huán)糊精與1~5倍水研勻，加大戟脂有效提取物（水難溶性的應(yīng)先溶于少 量有機(jī)溶劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0091] 3)分散片處方：
[0093] 制備方法：
[0094] 1.大戟脂有效提取物淀粉分散體的制備，精密稱取大戟脂有效提取物，加入適量 的十二烷基硫酸鈉，用70%的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均勻后，在70°C的溫 度下蒸干，粉碎，過100目篩；
[0095] 2.稱取處方量，大戟脂有效提取物淀粉分散體，交聯(lián)聚維酮，預(yù)膠化淀粉，用70% 乙醇做濕潤劑，邊加入邊攪拌，制成濕顆粒過14目篩，室溫下放置15min后，60°C烘箱烘干 45min，16目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
[0096] 7、大戟脂抗腫瘤有效提取物的檢測方法研究
[0097] 我們發(fā)現(xiàn)，可以用薄層色譜的方法，很好地檢測和標(biāo)示大戟脂抗腫瘤有效提取物 的特征，見圖1，圖2,圖3。
[0098] 具體條件為：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)，顯色方法： 香草醛-硫酸顯色
【附圖說明】：
[0099] 圖1大戟脂C6抑制活性提取物的TLC色譜圖；
[0100] 圖2大戟脂C6抑制活性提取物的TLC色譜圖；
[0101] 圖3大戟脂C6抑制活性提取物的TLC色譜圖；
[0102] 圖4大戟脂得到的化學(xué)組分的TLC色譜圖；
[0103] 圖5大戟脂得到的化學(xué)組分的TLC色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0104] 以下實(shí)施例表示本發(fā)明的實(shí)用性，本發(fā)明不受此限制。
[0105] 實(shí)施例1 :
[0106] 維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，回收有機(jī)溶 劑，真空干燥，即為該有效提取物。收率為5. 13%。
[0107] 實(shí)施例2 :
[0108] 維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，回收有機(jī)溶 劑，冷凍干燥，即為該有效提取物。收率為4. 73%。
[0109] 實(shí)施例3 :
[0110] 維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，回收有機(jī)溶 劑，鼓風(fēng)干燥，即為該有效提取物。收率為4. 21 %。
[0111] 實(shí)施例4:
[0112] 維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，回收有機(jī)溶 劑，離心干燥，即為該有效提取物。收率為4. 09%。
[0113] 實(shí)施例5:
[0114] 維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，回收有機(jī) 溶劑，旋蒸干燥，即為該有效提取物。收率為4. 16%。
[0115] 實(shí)施例6:
[0116] 維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取15min， 提取液濃縮后，回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該有效提取物。收率為4. 88%。
[0117] 實(shí)施例7:
[0118] 維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取15min， 提取液濃縮后，回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該有效提取物。收率為4. 72%。
[0119] 實(shí)施例8:
[0120] 維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提取 15min，提取液濃縮后，回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該有效提取物。收率為4. 95%。
[0121] 實(shí)施例9:
[0122] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:1，體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:2，體積比）洗脫35倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2， 體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該有效提取物。收率為0. 50%。
[0123] 實(shí)施例10 :
[0124] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:1，體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:2，體積比）洗脫35倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2， 體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該有效提取物。收率為0. 44%。
[0125] 實(shí)施例11 :
[0126] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:1，體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:2，體積比）洗脫35倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2， 體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，鼓風(fēng)干燥，即為該有效提取物。收率為0. 39%。
[0127] 實(shí)施例12 :
[0128] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:1，體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:2，體積比）洗脫35倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2， 體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，離心干燥，即為該有效提取物。收率為0. 42%。
[0129] 實(shí)施例13 :
[0130] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:1，體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:2,體積比）洗脫35倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:2,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，旋蒸干燥，即為該有效提取物。收率為0.43%。
[0131] 實(shí)施例14:
[0132] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:1，體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：乙酸 乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2,體積比）洗脫35倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯混 合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該有效 提取物。收率為0.48%。
[0133] 實(shí)施例15 :
[0134] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:1，體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：乙酸 乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2,體積比）洗脫35倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯混 合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，旋蒸干燥，即為該有效 提取物。收率為0.47%。
[0135] 實(shí)施例16 :
[0136] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:1，體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：乙酸 乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2,體積比）洗脫35倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯混 合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:2,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，旋蒸干燥，即為該有效 提取物。收率為0.46%。
[0137] 實(shí)施例17 :
[0138] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOmL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:3,體積比）洗脫35倍柱體積，繼用純甲醇洗脫35倍柱體積。純甲醇洗脫液經(jīng)回收 有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該有效提取物，收率為3. 92%。
[0139] 實(shí)施例18 :
[0140] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOm乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:3,體積比）洗脫35倍柱體積，繼用純甲醇洗脫35倍柱體積。純甲醇洗脫液經(jīng)回收 有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該有效提取物，收率為3. 80%。
[0141] 實(shí)施例19 :
[0142] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOm丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:3,體積比）洗脫35倍柱體積，繼用純甲醇洗脫35倍柱體積。純甲醇洗脫液經(jīng)回收 有機(jī)溶劑，鼓風(fēng)干燥，即為該有效提取物，收率為3. 21 %。
[0143] 實(shí)施例20 :
[0144] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOm氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:3,體積比）洗脫35倍柱體積，繼用純甲醇洗脫35倍柱體積。純甲醇洗脫液經(jīng)回收 有機(jī)溶劑，離心干燥，即為該有效提取物，收率為3. 34%。
[0145] 實(shí)施例21 :
[0146] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOm乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:3，體積比）洗脫35倍柱體積，繼用純甲醇洗脫35倍柱體積。純甲醇洗脫液經(jīng) 回收有機(jī)溶劑，旋蒸干燥，即為該有效提取物，收率為3. 45%。
[0147] 實(shí)施例22 :
[0148] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOm甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:3,體積比）洗脫35倍柱體積，繼用純甲醇洗脫35 倍柱體積。純甲醇洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該有效提取物，收率為3. 70%。
[0149] 實(shí)施例23 :
[0150] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOm乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:3,體積比）洗脫35倍柱體積，繼用純甲醇洗脫35 倍柱體積。純甲醇洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該有效提取物，收率為3. 68%。
[0151] 實(shí)施例24:
[0152] 取維吾爾藥大戟脂20g，經(jīng)IOOm乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 8cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:3,體積比）洗脫35倍柱體積，繼用純甲醇洗脫35 倍柱體積。純甲醇洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該有效提取物，收率為3. 68%。
[0153] 實(shí)施例25:固體分散體
[0154] 稱取大戟脂有效提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質(zhì) 量比分別放入燒杯中，加入無水乙醇，磁力攪拌器攪拌至大戟脂有效提取物和載體完全溶 解，轉(zhuǎn)入旋蒸儀中除去有機(jī)溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得大戟脂有效提取物PVP包合物。
[0155] 實(shí)施例26 :環(huán)糊精包合物
[0156] 將β -環(huán)糊精與1~5倍水研勻，加大戟脂有效提取物（水難溶性的應(yīng)先溶于少 量有機(jī)溶劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0157] 實(shí)施例27 :分散片
[0158] 1.稱取干燥的大戟脂有效提取物，加入適量的十二烷基硫酸鈉，使用70%的乙醇 充分溶解，加入水溶性淀粉與大戟脂有效提取物（I: 1)，攪拌混合均勻，在70°C下干燥，粉 碎，過100目篩，得大戟脂有效提取物分散體。
[0159] 2.精密稱取處方量，大戟脂有效提取物分散體，交聯(lián)聚維酮，可壓性淀粉，用70% 乙醇做濕潤劑，邊加入邊攪拌，14目篩制成濕顆粒，室溫下放置15min后，70°C烘箱烘干 45min，16目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種維吾爾藥大戟脂提取物，其特征為，維吾爾藥大戟脂經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取，提取 液濃縮后，即為該提取物； 或維吾爾藥大戟脂經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，先用體積比100:0-100:1的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比100:2-0:100 的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，體積比100:2-0:100的石油醚：乙酸乙酯洗脫液干燥得 到該提取物； 或維吾爾藥大戟脂經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，先用體積比100 :0-100:3的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用純甲醇洗脫，純甲醇 洗脫液干燥得到該提取物。2. 如權(quán)利要求1所述的維吾爾藥大戟脂提取物，其特征為，提取用有機(jī)溶劑為，甲醇、 乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑或乙醇水混合溶劑，提取物提取用有機(jī)溶劑用 量為藥材重量的2-50倍(重量/體積比)。3. 如權(quán)利要求1或2所述的一種維吾爾藥大戟脂提取物，其特征為，維吾爾藥大戟脂經(jīng) 甲醇超聲提取，提取液濃縮后，即為該提取物； 或維吾爾藥大戟脂經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱， 先用體積比100:1的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比100:2的石油醚：乙酸乙 酯混合溶劑洗脫，體積比100:2的石油醚：乙酸乙酯洗脫液干燥得到該提取物； 或維吾爾藥大戟脂經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱， 先用體積比100:3的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用純甲醇洗脫，純甲醇洗脫液干燥 得到該提取物。4. 如權(quán)利要求1-3任何一項(xiàng)所述的一種維吾爾藥大戟脂提取物，其特征為，用于洗脫 的石油醚：乙酸乙酯、甲醇的洗脫體積為2-50倍柱體積。5. 如權(quán)利要求3或4任何一項(xiàng)所述的一種維吾爾藥大戟脂提取物，其特征為，先用體積 比100:1的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫15倍柱體積，繼用體積比100:2的石油醚：乙酸 乙酯混合溶劑洗脫10倍柱體積； 或先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑體積比100:3的石油醚：乙酸乙酯洗脫25倍柱體 積，繼用純甲醇洗脫50倍柱體積。6. -種藥物組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的大戟脂提取物和 藥學(xué)上可接受的載體。7. -種藥物制劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的大戟脂提取物或權(quán) 利要求6所述的藥物組合物。8. 權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的大戟脂提取物或權(quán)利要求6所述的組合物或權(quán)利要求 7所述的藥物制劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。9. 如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征為，所述的腫瘤為腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、 結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌或肝癌。10. 如權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的大戟脂提取物，其特征在于，用TLC法檢測，其色譜 條件為：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：GF 254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)， 石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)，顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
【文檔編號(hào)】G01N30/90GK105982945SQ201510082429
【公開日】2016年10月5日
【申請(qǐng)日】2015年2月15日
【發(fā)明人】王金輝, 黃健, 王書云
【申請(qǐng)人】沈陽藥科大學(xué)