白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了能在眼內(nèi)以特定量準(zhǔn)確釋放藥物直至釋放結(jié)束的白介素18的控釋劑的制作方法。本發(fā)明的控釋劑為可生物降解型植入劑，是由高分子量聚乳酸與低分子量聚乳酸的混合物制成。將白介素18與控釋劑混合后制成一類固體制劑，如薄膜、片劑、柱狀及釘狀等，以手術(shù)方式經(jīng)睫狀體平部植入玻璃體，通過(guò)基質(zhì)的生物降解而將其內(nèi)的藥物釋出。本發(fā)明改變了普通白介素18制劑為了維持在眼內(nèi)的濃度需反復(fù)注射的缺點(diǎn)，減少了由此帶來(lái)的發(fā)生感染、出血、晶狀體和視網(wǎng)膜損傷等并發(fā)癥的危險(xiǎn)。另外，由于本發(fā)明的控釋特點(diǎn)，能特定量準(zhǔn)確釋放藥物，最大程度地避免了普通白介素18制劑在眼內(nèi)的濃度波動(dòng)較大以及有時(shí)初始峰值濃度過(guò)高對(duì)眼組織產(chǎn)生的毒性作用。
【專利說(shuō)明】白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體屬于一種治療玻璃體視網(wǎng)膜疾病的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法。
【背景技術(shù)】
[0002]白介素18 (IL-18)是1995年首次從誘發(fā)的中毒性休克小鼠肝臟提取液中獲得的一種的蛋白。該蛋白有著與白介素12 (IL-12)相似的生物學(xué)活性，但其誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素18(interferon-18, IFN-18)的能力比IL-12強(qiáng)，初始命名為IFN-18誘導(dǎo)因子，隨后命名為IL-18。IL-18具有種屬特異性，人IL-18基因位于染色體llq22.2_q22.3，由7個(gè)外顯子組成，cDNA全長(zhǎng)約1.lkb，編碼分子質(zhì)量約18kD的含193個(gè)氨基酸的單鏈蛋白。IL-18基因有兩個(gè)啟動(dòng)子，分別位于I號(hào)外顯子和2號(hào)外顯子上游，它們均有基礎(chǔ)性表達(dá)，且均可被脂多糖誘導(dǎo)。 [0003]在治療玻璃體視網(wǎng)膜疾病方面，白介素18可以抑制視網(wǎng)膜新生血管的形成。視網(wǎng)膜新生血管往往導(dǎo)致失明，由于在多種細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子對(duì)眼內(nèi)細(xì)胞增殖的調(diào)控過(guò)程中，破壞了促血管生成因子和血管生成抑制因子間的平衡，最終導(dǎo)致正常組織內(nèi)新生血管的長(zhǎng)入。由于新生血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙增大引起的出血、滲出和增生常常導(dǎo)致眼內(nèi)結(jié)構(gòu)和功能的破壞終致視力的喪失。因此，抑制新生血管的形成是治療這類疾病的關(guān)鍵。而白介素18可特異性抑制堿性成纖維生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生和新生血管形成，成為治療這類疾病的理想藥物。。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明將白介素18制成眼內(nèi)控釋劑，解決了全身給藥型制劑由于受血眼屏障、血漿蛋白結(jié)合等多種困素影響而使玻璃體難以達(dá)到藥物治療濃度的難題。
[0005]本發(fā)明采用的技術(shù)解決方案是:
一種白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，包括如下步驟:
(1)將高分子量聚乳酸和低分子量聚乳酸溶解在乙酸中充分?jǐn)嚢杌旌现频萌芤海?br> (2)將白介素18加入到第一步溶解好的溶液中，充分混合；
(3)將第二步得到的溶液冷凍干燥，得到粉末；
(4)將所得粉末置于熱板上，制作成固體制劑的成品。
[0006]所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的固體制劑的成品的形狀為薄膜、片劑、柱狀或釘狀中的一種。
[0007]所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的白介素18在成品中的含量為50%。
[0008]所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的白介素18與高分子量聚乳酸和低分子量聚乳酸混合物添加的比例為1:1。[0009]所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的高分子量聚乳酸和低分子量聚乳酸的混合比例為9:1 一 1:1。
[0010]所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的高分子量聚乳酸分子量為 50000— 200000。
[0011]所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的低分子量聚乳酸分子量為 3000— 40000。
[0012]所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的成品的重量為5mg——IOmg0
[0013]所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的成品需保存在4°C的溫度下。
[0014]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明提供了一種白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，本發(fā)明無(wú)需反復(fù)注射，可根據(jù)病情的不同，制成釋放時(shí)間為幾十天到幾百天的藥物，最大程度避免了發(fā)生感染、出血、晶狀體和視網(wǎng)膜損傷等并發(fā)癥的危險(xiǎn)。另外，本發(fā)明的控釋特點(diǎn)表現(xiàn)為釋放藥物的速度在任何時(shí)候都為恒定速率，與制劑中藥物的含量無(wú)關(guān)，釋藥過(guò)程符合零級(jí)藥物動(dòng)力學(xué)過(guò)程。其原理是，易于水解的低分子量聚乳酸在眼內(nèi)逐漸降解并開始釋放藥物，并且整個(gè)白介素18控釋劑逐漸變成多孔結(jié)構(gòu)，然后，難以水解的高分子量聚乳酸逐漸降解。因?yàn)樗玫途畚锖蛦误w由于水解而從基質(zhì)的多孔結(jié)構(gòu)中平穩(wěn)地釋放出來(lái)，所以白介素18的釋放可被控制在恒定速度直至控釋劑崩解。因此，白介素18在眼內(nèi)的濃度波動(dòng)很小，防止像其他普通制劑有時(shí)初始峰值濃度過(guò)高對(duì)眼組織產(chǎn)生的毒性作用。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面通過(guò)臨床試驗(yàn)說(shuō)明本發(fā)明白介素18眼內(nèi)控釋劑的積極效果 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型的制備
采用同日出生7 d的SD大鼠幼鼠50只，共100只眼。隨機(jī)選取40只統(tǒng)一編號(hào)后置于密閉玻璃箱中，一端接進(jìn)氣管。連于混合氣體，另一端接出氣管，連于測(cè)氧儀.保持氧箱內(nèi)氧濃度為750±20 mL / L，室溫保持(23±2)°C.每日打開氧倉(cāng)3次各2h，將4只母鼠放入喂養(yǎng)并更換箱內(nèi)墊料，開箱時(shí)間約I h，氧倉(cāng)中連續(xù)飼養(yǎng)5 d，建立高氧誘導(dǎo)的血管增生性視網(wǎng)膜病變模型，小鼠在氧倉(cāng)內(nèi)生長(zhǎng)良好，無(wú)死亡現(xiàn)象。剩余10只為空白對(duì)照組，不給予任何處理，正常環(huán)境中飼養(yǎng)。建模后40只幼鼠隨機(jī)分為高濃度實(shí)驗(yàn)組(10只):給予雙眼玻璃體內(nèi)植入白介素18控釋劑(白介素18含量50%)。低濃度試驗(yàn)組(10只):給予雙眼玻璃體內(nèi)植入白介素18控釋劑(白介素18含量10%)。不含藥物控釋劑實(shí)驗(yàn)組(10只)--給予雙眼玻璃體內(nèi)植入不含白介素18的控釋劑。高氧未處理組(10只):雙眼不給予任何處理。繼續(xù)在正常環(huán)境中飼養(yǎng)，第21天將5組小鼠頸椎脫白處死，摘取雙眼球，分別標(biāo)記方向并編號(hào)，于中性甲醛中固定48h。
[0016]實(shí)驗(yàn)方法
將每組小鼠兩只眼球浸泡在4%甲醛固定液中，固定48h后常規(guī)脫水，石蠟包埋，矢狀面平行視神經(jīng)連續(xù)切片，厚度5 μ m，每只眼球選取10個(gè)切面(去掉有視神經(jīng)的切面)，貼于玻片上。在H.E.染色的組織學(xué)切片上觀察.在低倍鏡下統(tǒng)計(jì)平均每張眼球切片突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜而長(zhǎng)入玻璃體內(nèi)的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)。顯微鏡下觀察，免疫組織化學(xué)陽(yáng)性染色為細(xì)胞漿內(nèi)棕黃色顆粒，陽(yáng)性細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn):以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒者為陽(yáng)性細(xì)胞，每張切片取3~5個(gè)典型者10X40倍視野進(jìn)行觀察.每個(gè)視野連續(xù)計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞.根據(jù)切片上著色細(xì)胞比例不同分別標(biāo)示為:陰性(_):無(wú)著色細(xì)胞或僅有〈10%細(xì)胞著色，計(jì)為O分。弱陽(yáng)性(±):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10%~25%，計(jì)為I分。陽(yáng)性分為:(+)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25%~50%，計(jì)為2分；(++)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)50%~75%.計(jì)為3分；(+++)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)75%~100%，計(jì)為4分；進(jìn)行免疫組化定性分析。所有記錄數(shù)據(jù)整理后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。各組數(shù)據(jù)均用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS13.0對(duì)表達(dá)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。對(duì)所測(cè)結(jié)果進(jìn)行正態(tài)分析及方差齊性檢驗(yàn)，各組差異采用單因素方差分析法，LSD檢驗(yàn)法進(jìn)行兩兩比較，P〈0.05為差異有顯著性。
[0017]結(jié)果
空白對(duì)照組基本看不到突出內(nèi)界膜的血管芽，內(nèi)界膜下視網(wǎng)膜內(nèi)的血管內(nèi)皮細(xì)胞散在分布、數(shù)量較少，高氧未處理組和不含藥物控釋劑實(shí)驗(yàn)組可見大量突出內(nèi)界膜伸向玻璃體腔的血管內(nèi)皮細(xì)胞核，內(nèi)界膜下視網(wǎng)膜內(nèi)也有大量血管內(nèi)皮細(xì)胞增生.高氧未處理組和不含藥物控釋劑實(shí)驗(yàn)組突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核個(gè)數(shù)與正常對(duì)照組比較差異均有顯著性意義，表明該視網(wǎng)膜新生血管形成的動(dòng)物模型誘導(dǎo)成功。高、低濃度實(shí)驗(yàn)組切片中均可見到突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的新生血管的內(nèi)皮細(xì)胞核，但較高氧未處理組、不含藥物控釋劑實(shí)驗(yàn)組及空白對(duì)照組明顯減少，平均每張切片突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核個(gè)數(shù)與高氧未處理組、不含藥物控釋劑實(shí)驗(yàn)組及空白對(duì)照組比較差異均有顯著性意義(下表)。
【權(quán)利要求】
1.一種白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)將高分子量聚乳酸和低分子量聚乳酸溶解在乙酸中充分?jǐn)嚢杌旌现频萌芤海? (2)將白介素18加入到第一步溶解好的溶液中，充分混合； (3)將第二步得到的溶液冷凍干燥，得到粉末； (4)將所得粉末置于熱板上，制作成固體制劑的成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求 1所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的固體制劑的成品的形狀為薄膜、片劑、柱狀或釘狀中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的白介素18在成品中的含量為50%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的白介素18與高分子量聚乳酸和低分子量聚乳酸混合物添加的比例為1:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的高分子量聚乳酸和低分子量聚乳酸的混合比例為9:1一1:1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的高分子量聚乳酸分子量為50000— 200000。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的低分子量聚乳酸分子量為3000— 40000。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的成品的重量為5mg—10mg。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白介素18眼內(nèi)控釋劑的制作方法，其特征在于，所述的成品需保存在4°C的溫度下。
【文檔編號(hào)】A61K38/20GK103536525SQ201310527697
【公開日】2014年1月29日 申請(qǐng)日期:2013年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月31日
【發(fā)明者】宋宗明, 胡旭颋, 周芬, 王雷, 李美, 胡志翔 申請(qǐng)人:溫州眼視光發(fā)展有限公司