一種鼻用疫苗組合物液體制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鼻用疫苗組合物液體制劑及其制備方法。所述鼻用疫苗組合物液體制劑包括如下原料組分：（1)0.002?0.2%抗原；（2)0.1?15%油相；（3)70?99.7%水相；和（4)0.1?15%表面活性劑；所述百分比表示各組分在每lOOmL原料總體積中的克數(shù)。所述制備方法包括如下步驟：（1)將油相和表面活性劑混合，再與水相混合，得佐劑；（2)將步驟（1)制得的佐劑與抗原混合均勻，即得。本發(fā)明的鼻用疫苗組合物液體制劑為經(jīng)鼻黏13吳免疫，其制備方法簡單，穩(wěn)定性高，實際應(yīng)用過程中操作便捷，能大幅提高接種率，具有非常好的應(yīng)用前景。
【專利說明】一種鼻用疫苗組合物液體制劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥劑領(lǐng)域，具體涉及一種鼻用疫苗組合物液體制劑及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 疫苗是預(yù)防和治療病毒感染類疾病最為經(jīng)濟(jì)有效的手段。以流感疫苗為例，在發(fā) 達(dá)國家，如果流感疫苗的抗原和正在流行的流感病毒匹配良好，就能夠保護(hù)70-90%的健康 成人免于出現(xiàn)臨床疾病。目前，國內(nèi)主要的免疫手段仍然是傳統(tǒng)的注射接種，但是肌肉注射 的給藥方式存在諸多缺陷，包括注射接種不便、明顯的疼痛感(尤其對于嬰幼兒和兒童)、注 射可能存在的不安全因素等。
[0003] 口服流感疫苗需克服胃腸道的酸性環(huán)境，將敏感的抗原蛋白完整遞送至胃腸道黏 膜上的微褶細(xì)胞（M細(xì)胞)。由于胃腸道環(huán)境的不適宜及流感抗原蛋白的不穩(wěn)定性，口服流 感疫苗的研究鮮有突破。
[0004] 鼻噴霧流感疫苗的出現(xiàn)改善了肌注免疫因疼痛感造成的患者順應(yīng)性差，并且避免 了肌肉注射可能引起的血液感染或疾病傳播風(fēng)險。
[0005] 專利文獻(xiàn)CN1562364A公開了一種含脂肪乳佐劑的鼻用流感疫苗，制劑制備過程 需要經(jīng)歷高速攪拌和納米對撞過程，即通過高速攪拌，混勻流感全病毒懸液與納米化脂肪 乳懸液；通過納米對撞，使流感病毒脂肪乳混合液裂解為l〇-12nm微粒。其制備過程控制難 度高，且易導(dǎo)致抗原效價降低。
[0006] 專利文獻(xiàn)CN101405027A公開了一種包含流感病毒重構(gòu)包膜的流感病毒顆粒組合 物，而無單獨添加的佐劑，用于經(jīng)鼻免疫；其制備工藝復(fù)雜，難以應(yīng)用于大生產(chǎn)。
[0007] 因此，為了提高免疫接種的便捷性，降低醫(yī)護(hù)人員的人力成本；避免肌肉注射可能 引起的血液感染或疾病傳播風(fēng)險，減少此類原因造成的醫(yī)療支出，同時提升接種者的依從 性，提高目標(biāo)人群的接種率，降低疾病的發(fā)生概率和死亡率，本領(lǐng)域目前迫切需要發(fā)展制備 過程更簡單、效果更好的鼻用疫苗制劑。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有的鼻用疫苗制劑制備繁瑣、穩(wěn)定性差的 缺陷，而提供一種鼻用疫苗組合物液體制劑。其適用于不同年齡人群、動物的免疫接種，提 高免疫系統(tǒng)的黏膜應(yīng)答和系統(tǒng)應(yīng)答，改善接種者順應(yīng)性。本發(fā)明的鼻用疫苗組合物液體制 齊U，其制備過程不需高壓均質(zhì)或納米裂解，簡化了生產(chǎn)步驟，提高了產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
[0009] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案之一是：一種鼻用疫苗組合物液體制劑，其包括如下原料 組分：
[0010] (1) 0· 002 ?0· 2% 抗原；
[0011] (2) 0· 1 ?15% 油相；
[0012] (3) 70 ?99. 7% 水相；和
[0013] (4) 0· 1?15%表面活性劑；
[0014] 所述百分比表示各組分在每lOOmL原料總體積中的克數(shù)。
[0015] 在本發(fā)明中，如0. 1%油相表示在每lOOmL原料總體積中油相組分的質(zhì)量為0. lg。
[0016] 較佳地，所述的鼻用疫苗組合物液體制劑包括如下原料組分：
[0017] (1)0.02 ?0· 1% 抗原；
[0018] (2) 0.2 ?8% 油相；
[0019] (3) 85 ?99. 5% 水相；和
[0020] (4) 0· 2?8%表面活性劑；
[0021] 所述百分比表示各組分在每lOOmL原料總體積中的克數(shù)。
[0022] 更佳地，所述的鼻用疫苗組合物液體制劑包括如下原料組分：
[0023] (1) 0· 03 ?0· 1% 抗原；
[0024] (2) 0.5 ?5% 油相；
[0025] (3 ) 90 ?98% 水相；和
[0026] (4) 0· 5?5%表面活性劑；
[0027] 所述百分比表示各組分在每lOOmL原料總體積中的克數(shù)。
[0028] 本發(fā)明中，所述抗原可以為本領(lǐng)域常規(guī)所述的各類抗原。
[0029] 從抗原的種類而言，所述抗原可以包括但不局限于流感病毒抗原、SARS病毒抗原、 麻疫病毒抗原、人乳頭瘤狀病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原、狂犬病毒抗原以及脊髓灰質(zhì)炎病 毒抗原，更優(yōu)選流感病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和破傷風(fēng)病毒抗原中的任一種；所述的流 感病毒抗原包括季節(jié)性流感病毒抗原和大流行性流感病毒抗原(如流感病毒抗原HI、H2、 H3、H5、H7、H9、B亞型以及HA、NA、Ml、M2亞單位抗原等）。
[0030] 從抗原的來源而言，所述抗原可以包含一種或多種不同來源，即抗原可源自一種 或多種不同的病原體或不同的病原體血清型。
[0031] 從抗原的存在形式和制備方法而言，所述抗原可以為滅活疫苗、減活疫苗、裂解疫 苗、DNA疫苗、重組疫苗、亞單位疫苗和多肽蛋白疫苗中的一種或多種。
[0032] 本發(fā)明中，所述油相為本領(lǐng)域常規(guī)所述油相，較佳地，所述油相選自角鯊烯、角鯊 烷、中鏈甘油三酸酯、魚油、橄欖油和大豆油中的一種或多種，更優(yōu)選角鯊烯、角鯊?fù)楹椭墟?甘油三酸酯中的一種或多種。
[0033] 本發(fā)明中，所述水相為本領(lǐng)域常規(guī)所述水相，較佳地，所述水相為水，更佳地，所述 水相為注射用水。
[0034] 本發(fā)明中，所述表面活性劑為本領(lǐng)域常規(guī)所述表面活性劑，較佳地，所述表面活性 劑選自吐溫、聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯（Solutol HS15)、聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯 (Solutol HS15)和磷脂的混合物，以及吐溫與磷脂的混合物中的一種或多種。
[0035] 所述磷脂為本領(lǐng)域常規(guī)，優(yōu)選可藥用的天然磷脂或合成磷脂，或磷脂的衍生物，更 優(yōu)選自大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂和氫化大豆磷脂中的一種或多種。
[0036] 本發(fā)明中，較佳地，所述的原料組分還包括不超過2%的緩沖劑，更優(yōu)選0. 5? 1. 5%，所述的百分比表示緩沖劑在每100mL原料總體積中的質(zhì)量（g)。所述緩沖劑較佳地選 自4-羥乙基哌嗪乙磺酸（HEPES)、枸櫞酸、磷酸鹽和醋酸鹽中的一種或多種。
[0037] 本發(fā)明中，較佳地，所述的原料組分還包括不超過0.01%的防腐劑，更優(yōu)選 0. 005?0. 01%，所述的百分比表示防腐劑在每100mL原料總體積中的質(zhì)量（g)。所述防腐 劑較佳地選自硫柳汞、苯扎氯氨、苯酚、芐索氯銨和2-苯氧乙醇中的一種或多種。
[0038] 本發(fā)明中，較佳地，所述的原料組分還包括不超過0. 2%的等滲調(diào)節(jié)劑，更優(yōu)選 0. 05?0. 15%，所述的百分比表示等滲調(diào)節(jié)劑在每100mL原料總體積中的質(zhì)量（g)。所述等 滲調(diào)節(jié)劑較佳地選自甘油、氯化鈉和葡萄糖中的一種或多種。
[0039] 本發(fā)明中，所述鼻用疫苗組合物液體制劑的規(guī)格可以為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為 0· 05 ?0· 3ml/劑。
[0040] 本發(fā)明的鼻用疫苗組合物液體制劑的制備方法同本領(lǐng)域常規(guī)，其只需要將油相和 表面活性劑混合，攪拌并加入水相，得到帶乳光的溶液后加入抗原混勻即可。所述鼻用疫 苗組合物液體制劑以液體形式存在，灌裝于本領(lǐng)域常規(guī)的給藥裝置(如常規(guī)的鼻噴霧裝置） 中，做鼻噴霧劑備用。
[0041] 較佳地，所述的鼻用疫苗組合物液體制劑的制備方法包括如下步驟：
[0042] ( 1)將油相和表面活性劑混合，再與水相混合，得佐劑；
[0043] (2)將步驟（1)制得的佐劑與抗原混合均勻，即得。
[0044] 其中，所述油相、表面活性劑和水相的用量如前所述。
[0045] 在本發(fā)明中，在步驟（2)之后較佳地還包括步驟（3):將步驟（2)所得的混合物過 濾后分裝，然后低溫保存，優(yōu)選于2?8°C保存。
[0046] 在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實 例。
[0047] 本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[0048] 本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：本發(fā)明的鼻用疫苗組合物液體制劑為經(jīng)鼻黏膜免 疫，可同時誘導(dǎo)包括體液免疫和細(xì)胞免疫在內(nèi)的系統(tǒng)免疫應(yīng)答和黏膜免疫應(yīng)答；經(jīng)由呼吸 道黏膜入侵人體而引發(fā)疾病的病原體在感染部位即時得到有效抵抗；可通過共同黏膜免疫 系統(tǒng)引起消化道和生殖道的遠(yuǎn)端黏膜免疫應(yīng)答；可使抗原經(jīng)黏膜特有的褶皺細(xì)胞(M細(xì)胞） 轉(zhuǎn)運至樹突狀細(xì)胞（DC)等抗原提呈細(xì)胞（APC)，提高APC對抗原的攝取和提呈能力。

【具體實施方式】
[0049] 下面通過實施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實 施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商 品說明書選擇。
[0050] 實施例1
[0051] 稱取角鯊烯lg，中鏈甘油三酸酯lg，Solutol HS151. 5g，蛋黃卵磷脂0. 5g，攪拌， 得到油相/表面活性劑混合物；稱取枸櫞酸2g，硫柳汞0. Olg，加入60mL注射用水中，攪拌 使溶解；在攪拌下，將上述水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶 液 ；加入7500μgHA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL，攪勻，0.22μm濾膜 濾過；按照〇. 2ml/劑（即15 μ g/劑）灌裝于鼻用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0052] 實施例2
[0053] 稱取角鯊烯4g，中鏈甘油三酸酯4g，Solutol HS156g，蛋黃卵磷脂2g，攪拌，得到 油相/表面活性劑混合物；稱取磷酸二氫鉀〇. 2g，苯酚0. 01g，加入60mL注射用水中；在攪 拌下，將上述水溶液慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入50000 μ g HA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至lOOmL ;加入0. Olg氯化鈉，調(diào)節(jié)為鼻腔黏液 等滲溶液攪勻，〇. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 2ml/劑（即100 μ g/劑）灌裝于鼻用噴霧劑裝置 中，即得疫苗組合物。
[0054] 實施例3
[0055] 稱取角鯊烯3g，中鏈甘油三酸酯7g，Solutol HS1515g，攪拌，得到油相/表面 活性劑混合物；稱取苯扎氯胺0. 〇16g，加入60mL注射用水中；在攪拌下，將水溶液緩慢 加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入30000 μ g HA的流感抗原（B/ Brisbane/60/2008)，加水至 100mL，攪勻，(λ 22 μ m 濾膜濾過；按照(λ 05ml/ 劑（即 15 μ g/ 齊U)灌裝于鼻用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0056] 實施例4
[0057] 稱取角鯊?fù)?. 5g，中鏈甘油三酸酯0. 5g，Solutol HS153g，大豆磷脂lg，攪拌，得 到油相/表面活性劑混合物；稱取枸櫞酸〇. 3g，芐索氯銨0. 004g，加入60mL注射用水中，攪 拌使溶解；在攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液； 加入30000μ g HA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL ;加入0. 2甘油，調(diào)節(jié) 為鼻腔黏液等滲溶液，攪勻，〇. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 05ml/劑（即15 μ g/劑)灌裝于鼻用 噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0058] 實施例5
[0059] 稱取角鯊烯0.2g，中鏈甘油三酸酯0.2g，Solutol HS150.5g，氫化卵磷脂0· lg， 攪拌，得到油相/表面活性劑混合物；稱取磷酸二氫鉀lg，加入60mL注射用水中，攪拌使 溶解；在攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入 7500μ g HA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL ;加入0. lg葡萄糖，調(diào)節(jié)為鼻 腔黏液等滲溶液，攪勻，〇. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 2ml/劑（即15 μ g/劑）灌裝于鼻用噴霧 劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0060] 實施例6
[0061] 稱取角S烯2g，中鏈甘油三酸酯2g，Solutol HS154. 5g，氫化大豆磷脂0· 5g，攪 拌，得到油相/表面活性劑混合物；稱取枸櫞酸lg，苯酚〇. 〇lg，加入60mL注射用水中，攪拌 使溶解；在攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；力口 入25000μ g HA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL ;加入0· 05g甘油，調(diào)節(jié) 為鼻腔黏液等滲溶液，攪勻，〇. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 2ml/劑（即50 μ g/劑）灌裝于鼻用 噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0062] 實施例7
[0063] 稱取角S烯5g,中鏈甘油三酸酯10g,吐溫8012g,蛋黃卵磷脂3g,攪拌，得到油相 /表面活性劑混合物；稱取HEPESlg，芐索氯胺0. 002g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解； 在攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入250 μ g 重組乙型肝炎疫苗（由釀酒酵母表達(dá)并純化）加水至100mL ;加入0. 2g葡萄糖，調(diào)節(jié)為鼻腔 黏液等滲溶液，攪勻，〇. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 2ml/劑（即5 μ g/劑)灌裝于鼻用噴霧劑裝 置中，即得疫苗組合物。
[0064] 實施例8
[0065] 稱取中鏈甘油三酸酯0· lg，吐溫800. 075g，卵磷脂0· 025g，攪拌，得到油相/表面 活性劑混合物；量取60mL注射用水，攪拌使溶解；在攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面 活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液，加入20000IU破傷風(fēng)疫苗，加水至lOOmL ;加入0. lg 氯化鈉，調(diào)節(jié)為鼻腔黏液等滲溶液，攪勻，〇. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 2ml/劑（即40IU/劑） 灌裝于鼻用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0066] 實施例9
[0067] 稱取角鯊烯lg，中鏈甘油三酸酯lg，Solutol HS152g，卵磷脂0. 5g，攪拌，得到油 相/表面活性劑混合物；稱取枸櫞酸0. lg，加入60mL注射用水中；在攪拌下，將無菌注射用 水緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入11250 μ g HA的流感抗原 (B/Brisbane/60/2008)，加水至lOOmL ;加入0. 05g甘油，調(diào)節(jié)為鼻腔黏液等滲溶液，攪勻， 0. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 3ml/劑（即15 μ g/劑)灌裝于鼻用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合 物。
[0068] 實施例10
[0069] 稱取角鯊烯2. 5g，中鏈甘油三酸酯2. 5g，Solutol HS154g，蛋黃卵磷脂lg，攪拌， 得到油相/表面活性劑混合物；稱取HEPES0. 2g，硫柳汞lg，加入60mL注射用水中，攪拌使 溶解；在攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入 15000 μ g HA的流感抗原（A/California/7/2009)，加水至100mL ;加入0· 01g氯化鈉，調(diào)節(jié) 為鼻腔黏液等滲溶液，攪勻，〇. 22 μ m濾膜濾過；按照0. lml/劑（即15 μ g/劑）灌裝于鼻用 噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0070] 實施例11
[0071] 稱取角鯊烯0. 5g，中鏈甘油三酸酯0. 5g，Solutol HS152g，蛋黃卵磷脂0. 5g，攪 拌，得到油相/表面活性劑混合物；稱取枸櫞酸〇. 2g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶 解；在攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入 25000μ g HA 的流感抗原（A/California/7/2009)，加水至 100mL，攪勻，0· 22μπι 濾膜濾過； 按照〇. lml/劑（即25 μ g/劑）灌裝于鼻用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0072] 實施例12
[0073] 稱取角鯊烯0. 5g，Solutol HS154g，攪拌，得到油相/表面活性劑混合物；稱取磷 酸二氫鉀2g，硫柳汞0. 002g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解；在攪拌下，將水溶液緩慢 加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入10000 μ g HA的流感抗原（A/ California/7/2009)，加水至100mL ;加入0. 15g甘油，調(diào)節(jié)為鼻腔黏液等滲溶液，攪勻， 0. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 2ml/劑（即20 μ g/劑)灌裝于鼻用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合 物。
[0074] 實施例13
[0075] 稱取角鯊烯0. 3g，Solutol HS152g，攪拌，得到油相/表面活性劑混合物； 稱取枸櫞酸〇. 5g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解；在攪拌下，將水溶液緩慢加入 油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入25000 μ g HA的流感抗原（A/ California/7/2009)，加水至100mL ;加入0. 05g氯化鈉，調(diào)節(jié)為鼻腔黏液等滲溶液，攪勻， 0. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 2ml/劑（即50 μ g/劑)灌裝于鼻用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合 物。
[0076] 實施例14
[0077] 稱取角鯊烯0. 2g，Solutol HS150.4g，蛋黃卵磷脂0. lg，攪拌，得到油相/表面活 性劑混合物；稱取HEPESO. 8g，2-苯氧乙醇0. 006g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解；在 攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入250 μ g重 組乙型肝炎疫苗（由釀酒酵母表達(dá)并純化）加水至l〇〇mL ;加入0. lg氯化鈉，調(diào)節(jié)為鼻腔黏 液等滲溶液，攪勻，〇. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 2ml/劑（即5 μ g/劑)灌裝于鼻用噴霧劑裝置 中，即得疫苗組合物。
[0078] 實施例15
[0079] 稱取角鯊烯3g，中鏈甘油三酸酯5g，吐溫806g，蛋黃卵磷脂2g，攪拌，得到油相/ 表面活性劑混合物；稱取HEPES1. 5g，苯酚0. 005g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解；在 攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液，加入30000IU 破傷風(fēng)疫苗，加水至l〇〇mL ;加入0. 12g葡萄糖，調(diào)節(jié)為鼻腔黏液等滲溶液，攪勻，0. 22 μ m濾 膜濾過；按照〇. 2ml/劑（即60IU/劑）灌裝于鼻用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0080] 實施例16
[0081] 稱取角鯊烯5g，中鏈甘油三酸酯10g，Solutol HS1511g，蛋黃卵磷脂4g，攪拌， 得到油相/表面活性劑混合物；稱取HEPESO. 5g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解；在 攪拌下，將無菌注射用水緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入 7500 μ g HA的流感抗原（A/Perth/16/2009)，加水至100mL ;加入0. 08g甘油，調(diào)節(jié)為鼻腔黏 液等滲溶液，攪勻，〇. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 2ml/劑（即15 μ g/劑）灌裝于鼻用噴霧劑裝 置中，即得疫苗組合物。
[0082] 實施例17
[0083] 稱取中鏈甘油三酸酯0. lg，Solutol HS150. 15g，蛋黃卵磷脂0. 05g，攪拌，得到油 相/表面活性劑混合物；稱取磷酸二氫鉀0. 5g，芐索氯銨0. 008g，加入60mL注射用水中；在 攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入7500 μ g HA的流感抗原（A/Perth/16/2009)，加水至100mL，攪勻，0. 22 μ m濾膜濾過；按照0. lml/劑 (即15 μ g/劑）灌裝于鼻用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0084] 實施例18
[0085] 稱取中鏈甘油三酸酯5g，Solutol HS157g，攪拌，得到油相/表面活性劑混合物； 量取60mL注射用水，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7 ;在攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面 活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入30000 μ g HA的流感抗原（A/Perth/16/2009)， 加水至100mL ;加入0. 06甘油，調(diào)節(jié)為鼻腔黏液等滲溶液，攪勻，0. 22 μ m濾膜濾過；按照 0. 05ml/劑（即15 μ g/劑）灌裝于鼻用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0086] 實施例19
[0087] 稱取角鯊烯0. 2g，中鏈甘油三酸酯lg，Solutol HS155g，攪拌，得到油相/表面活 性劑混合物；稱取2-苯氧乙醇0. 018g，加入60mL注射用水，攪拌使溶解；在攪拌下，將水溶 液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入45000 μ g HA的流感抗原 (A/Perth/16/2009)，加水至 100mL，攪勻，0. 22μπι 濾膜濾過；按照 0. lml/劑（即 45μ g/劑） 灌裝于鼻用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0088] 實施例20
[0089] 稱取角鯊烯5g，Solutol HS1512g，蛋黃卵磷脂3g，攪拌，得到油相/表面活性劑混 合物；稱取磷酸二氫鉀1.5g，2-苯氧乙醇0.002g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，；在 攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入2500 μ g 重組乙型肝炎疫苗（由釀酒酵母表達(dá)并純化）加水至100mL ;加入0. lg葡萄糖，調(diào)節(jié)為鼻腔 黏液滲溶液，攪勻，〇. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 2ml/劑（即50 μ g/劑）灌裝于鼻用噴霧劑裝 置中，即得疫苗組合物。
[0090] 實施例21
[0091] 稱取魚油lg，中鏈甘油三酸酯lg，Solutol HS151.5g，蛋黃卵磷脂0. 5g，攪拌，得 到油相/表面活性劑混合物；稱取甘油2g，枸櫞酸2g，硫柳汞0. Olg，加入60mL注射用水中， 攪拌使溶解，;在攪拌下，將無菌注射用水緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光 的溶液 ；加入7500μgHA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL，攪勻，0·22μm 濾膜濾過；按照0. 2ml/劑（即15 μ g/劑）灌裝于鼻用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0092] 實施例22
[0093] 稱取大豆油4g，中鏈甘油三酸酯4g，Solutol HS156g，蛋黃卵磷脂2g，攪拌，得到 油相/表面活性劑混合物；稱取磷酸二氫鉀〇. 2g，苯酚0. 01g，加入60mL注射用水中，攪 拌，；在攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入 15000μ g HA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL ;加入0. 2g氯化鈉，調(diào)節(jié)為 鼻腔黏液等滲溶液，攪勻，〇. 22 μ m濾膜濾過；按照0. lml/劑（即15 μ g/劑）灌裝于鼻用噴 霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0094] 實施例23
[0095] 稱取魚油3g，中鏈甘油三酸酯5g，吐溫806g，蛋黃卵磷脂2g，攪拌，得到油相/表 面活性劑混合物；稱取HEPES1. 5g，苯酚0. 005g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，；在攪 拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液，加入30000IU破 傷風(fēng)疫苗，加水至l〇〇mL ;加入0. lg葡萄糖，調(diào)節(jié)為鼻腔黏液等滲溶液，攪勻，0.22 μ m濾膜 濾過；按照〇. 2ml/劑（即60IU/劑）灌裝于鼻用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0096] 實施例24
[0097] 稱取大豆油0. 5g，中鏈甘油三酸酯0. 5g，Solutol HS153g，大豆磷脂lg，攪拌，得 到油相/表面活性劑混合物；稱取枸櫞酸〇. 3g，芐索氯銨0. 004g，加入60mL注射用水中，攪 拌使溶解，；在攪拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液； 加入22500 μ g HA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL ;加入0. 05g甘油，調(diào) 節(jié)為鼻腔黏液等滲溶液，攪勻，〇. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 2ml/劑（即45 μ g/劑）灌裝于鼻 用噴霧劑裝置中，即得疫苗組合物。
[0098] 實施例25
[0099] 稱取橄欖油0· 2g，Solutol HS150. 4g，蛋黃卵磷脂0· lg，攪拌，得到油相/表面活 性劑混合物；稱取HEPES0. 8g，苯扎氯胺0. 006g，加入60mL注射用水中，攪拌使溶解，；在攪 拌下，將水溶液緩慢加入油相/表面活性劑混合物中，得到帶乳光的溶液；加入250 μ g重組 乙型肝炎疫苗（由釀酒酵母表達(dá)并純化)加水至l〇〇mL ;加入0. 01g氯化鈉，調(diào)節(jié)為鼻腔黏液 等滲溶液，攪勻，〇. 22 μ m濾膜濾過；按照0. 2ml/劑（即10 μ g/劑）灌裝于鼻用噴霧劑裝置 中，即得疫苗組合物。
[0100] 效果實施例1本發(fā)明液體制劑的粒徑測定
[0101] 將實施例1-25制備的鼻用疫苗組合物液體制劑以注射用水作適當(dāng)稀釋，采用 Malvern Nan〇-ZS90動態(tài)光散射粒徑電位測定儀測定其粒徑。結(jié)果記錄與表1中：
[0102] 表1液體制劑粒徑測定結(jié)果
[0103]

【權(quán)利要求】
1. 一種鼻用疫苗組合物液體制劑，其特征在于，其包括如下原料組分： (1) 0· 002 ?0· 2% 抗原； (2) 0· 1 ?15% 油相； (3) 70?99. 7%水相；和 (4) 0. 1?15%表面活性劑； 所述百分比表示各組分在每l〇〇mL原料總體積中的克數(shù)。
2. 如權(quán)利要求1所述的鼻用疫苗組合物液體制劑，其特征在于，所述抗原選自流感病 毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和破傷風(fēng)病毒抗原中的任一種。
3. 如權(quán)利要求1所述的鼻用疫苗組合物液體制劑，其特征在于，所述油相選自角鯊烯、 角鯊?fù)?、中鏈甘油三酸酯、魚油、橄欖油和大豆油中的一種或多種；所述表面活性劑選自吐 溫、聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯、聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯和磷脂的混合物以及吐溫與 磷脂的混合物中的一種或多種。
4. 如權(quán)利要求3所述的鼻用疫苗組合物液體制劑，其特征在于，所述油相選自角鯊烯、 角鯊?fù)楹椭墟湼视腿狨ブ械囊环N或多種；所述磷脂選自大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷 脂和氫化大豆磷脂中的一種或多種；所述水相為水。
5. 如權(quán)利要求1所述的鼻用疫苗組合物液體制劑，其特征在于，所述的原料組分還包 括不超過2%的緩沖劑，所述的百分比表示緩沖劑在每100mL原料總體積中的毫克數(shù)；所述 緩沖劑選自4-羥乙基哌嗪乙磺酸、枸櫞酸和磷酸鹽中的一種或多種。
6. 如權(quán)利要求1所述的鼻用疫苗組合物液體制劑，其特征在于，所述的原料組分還包 括不超過0. 01%的防腐劑，所述的百分比表示防腐劑在每100mL原料總體積中的毫克數(shù)；所 述防腐劑選自硫柳汞、苯扎氯氨、苯酚、芐索氯銨和2-苯氧乙醇中的一種或多種。
7. 如權(quán)利要求1所述的鼻用疫苗組合物液體制劑，其特征在于，所述的原料組分還包 括不超過0. 2%的等滲調(diào)節(jié)劑，所述的百分比表示等滲調(diào)節(jié)劑在每100mL原料總體積中的毫 克數(shù)；所述等滲調(diào)節(jié)劑選自甘油、氯化鈉和葡萄糖中的一種或多種。
8. 如權(quán)利要求1?7任一項所述的鼻用疫苗組合物液體制劑，其特征在于，所述鼻用疫 苗組合物液體制劑的規(guī)格為〇. 05?0. 3ml/劑。
9. 如權(quán)利要求1?7任一項所述的鼻用疫苗組合物液體制劑的制備方法，其特征在于， 其包括如下步驟： (1) 將油相和表面活性劑混合，再與水相混合，得佐劑； (2) 將步驟（1)制得的佐劑與抗原混合均勻，即得。
10. 如權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，在步驟（2)之后還包括步驟（3):將步 驟（2)所得的混合物過濾后分裝，然后于2?8°C保存。
【文檔編號】A61K39/145GK104208664SQ201310211896
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2013年5月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月30日
【發(fā)明者】金方, 蔡偉惠, 王穎 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院, 中國醫(yī)藥工業(yè)研究總院