一種鰻弧菌二價(jià)疫苗及其制備和使用方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物病害防治技術(shù)，具體的說是一種鰻弧菌（Vibrio?anguillarum）二價(jià)疫苗及其制備和使用方法。疫苗為鰻弧菌（Vibrio?anguillarum）01血清型和02血清型兩株菌混合的菌懸液，所述鰻弧菌（Vibrio?anguillarum）01血清型和02血清型兩株菌保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2012年12月07日，保藏號(hào)分別為CGMCC?No.6942和CGMCC?No.6944。本發(fā)明二價(jià)滅活疫苗可有效地保護(hù)易感魚類免受致病性鰻弧菌的感染。本發(fā)明的二價(jià)疫苗拓寬了疫苗保護(hù)范圍,有效刺激養(yǎng)殖魚類產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)，并有效提供對(duì)疾病的免疫保護(hù)效應(yīng)。制備本發(fā)明的鰻弧菌二價(jià)疫苗，所使用的材料成本低，對(duì)動(dòng)物和環(huán)境安全。
【專利說明】一種鰻弧菌二價(jià)疫苗及其制備和使用方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物病害防治技術(shù)，具體的說是一種鰻弧菌（Vibrio anguillarum)二價(jià)疫苗及其制備和使用方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 鰻弧菌是引起水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物敗血癥的重要病原之一，由其引起的弧菌病是我國水 產(chǎn)養(yǎng)殖魚類的主要疾病，感染的養(yǎng)殖魚類涉及大菱鲆、牙鲆、半滑舌鰨、鱸魚、美國紅魚等重 要養(yǎng)殖品種，引起養(yǎng)殖魚類產(chǎn)業(yè)的重大經(jīng)濟(jì)損失。鰻弧菌病的防治手段主要為藥物治療和 疫苗免疫。藥物治療涉及抗生素和化學(xué)藥物的使用，容易造成水產(chǎn)品藥物殘留和細(xì)菌的耐 藥性，破壞生態(tài)環(huán)境平衡，對(duì)人類健康形成潛在危害。由于抗生素及其他化學(xué)藥物的應(yīng)用帶 來的危害，在世界范圍內(nèi)受到很大的限制，而疫苗免疫在特異性、安全性和保護(hù)效果方面優(yōu) 于抗生素等藥物治療，已被證明是一種有效安全的疾病防治手段。滅活魚用疫苗安全性好、 生產(chǎn)成本低，在挪威、西班牙、北美等國家已經(jīng)有多種商業(yè)化的滅活疫苗應(yīng)用于規(guī)?；孽q 魚、鱒魚、鲇魚等養(yǎng)殖，對(duì)減少抗生素使用、保障國家和地區(qū)的魚類經(jīng)濟(jì)起到巨大推動(dòng)作用。 隨著養(yǎng)殖溫度上升、環(huán)境污染、集約化養(yǎng)殖等因素，水生動(dòng)物的病原微生物變異速度和頻率 加快，病原種類及血清型出現(xiàn)增加趨勢(shì)，針對(duì)不斷變化的疾病和病原種類，需要及時(shí)開展疾 病流行病學(xué)研究，明確病原種類及其變化規(guī)律，研制和應(yīng)用有效的新疫苗。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)告， 鰻弧菌有23種血清型，對(duì)魚類致病的有01、02、03血清型，目前出現(xiàn)了 01&、0113、02&、0213等 致病的血清亞型，其他血清型如04、05血清型對(duì)養(yǎng)殖魚類的致病性也有報(bào)道。由于血清亞 型菌株和新致病血清型菌株的出現(xiàn)，現(xiàn)有的鰻弧菌疫苗不能給養(yǎng)殖動(dòng)物提供有效保護(hù)或保 護(hù)率低，需要根據(jù)不同地區(qū)不同養(yǎng)殖品種的弧菌病開展流行病學(xué)研究，明確致病株及其血 清型，研制能夠提供有效保護(hù)的鰻弧菌疫苗。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明目的在于為克服現(xiàn)有鰻弧菌疫苗對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物不能提供完全保護(hù)、保護(hù) 力低的缺點(diǎn)提供一種鰻弧菌二價(jià)疫苗及其制備和使用方法。
[0004] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0005] -種鰻弧菌二價(jià)疫苗，疫苗為鰻弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清 型兩株菌混合的菌懸液，所述鰻弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型兩株菌 保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2012年12月07日，保 藏號(hào)分別為CGMCC No. 6942和CGMCC No. 6944,保藏單位地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào) 院3號(hào)。
[0006] 所述疫苗為溶于磷酸緩沖鹽溶液中的菌懸液；所述菌懸液中鰻弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型兩株菌按細(xì)胞數(shù)量比為1 : 1的比例混合。
[0007] 將鰻弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型兩株菌分別活化培養(yǎng)、發(fā) 酵培養(yǎng)和甲醒滅活后，將滅活后的鰻弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型兩 株菌的滅活細(xì)胞按數(shù)量比為1 : 1的比例混合于無菌磷酸緩沖鹽溶液中，即為二價(jià)滅活疫 苗。
[0008] 鰻弧菌二價(jià)疫苗的制備方法，將鰻弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和 02血清型兩株菌分別活化培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)和甲醛滅活后，將滅活后的鰻弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型兩株菌的滅活細(xì)胞按數(shù)量比為1 : 1的比例混合于無 菌磷酸緩沖鹽溶液中，即為二價(jià)滅活疫苗。
[0009] 鰻弧菌二價(jià)疫苗的使用方法，其特征在于：所述二價(jià)滅活疫苗用于制備防治養(yǎng)殖 魚類鰻弧菌病的疫苗。將上述二價(jià)滅活疫苗注射給藥量為1〇 6?l〇8cells/尾；或浸泡給藥 濃度為1〇7?l〇9cells/ml，浸泡時(shí)間10?30min。
[0010] 本發(fā)明采用的鰻弧菌菌株01血清型和02血清型兩株菌均保藏于中國普通微生物 菌種保藏管理中心，保藏日期2012年12月07日，保藏號(hào)分別為CGMCC No. 6942和CGMCC No. 6944,從我國發(fā)生鰻弧菌病的養(yǎng)殖牙鲆和大菱鲆分離，其生理生化、16SrRNA基因系統(tǒng)發(fā) 育分析、血清學(xué)、PCR鑒定等特征與鰻弧菌的特征符合（參見表1和表2以及圖ΙΑ、B、C)。
[0011] 表 1 弧菌 CGMCC No. 6942 和 CGMCC No. 6944 生理生化特征
[0012]

【權(quán)利要求】
1. 一種鰻弧菌二價(jià)疫苗，其特征在于：疫苗為鰻弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型 和02血清型兩株菌混合的菌懸液，所述鰻弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清 型兩株菌保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2012年12月 07 日，保藏號(hào)分別為 CGMCC No. 6942 和 CGMCC No. 6944。
2. 按權(quán)利要求1所述的鰻弧菌二價(jià)疫苗，其特征在于：所述疫苗為溶于磷酸緩沖鹽溶 液中的菌懸液；所述菌懸液中鰻弧菌（Vibrio anguillarum) 01血清型和02血清型兩株菌 按細(xì)胞數(shù)量比為1 :1的比例混合。
3. 按權(quán)利要求1或2所述的鰻弧菌二價(jià)疫苗，其特征在于：將鰻弧菌（Vibrio anguillarunOOl血清型和02血清型兩株菌分別活化培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)和甲醛滅活后，將滅活 后的鰻弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型兩株菌的滅活細(xì)胞按數(shù)量比為1 : 1的比例混合于無菌磷酸緩沖鹽溶液中，即為二價(jià)滅活疫苗。
4. 一種權(quán)利要求1所述的鰻弧菌二價(jià)疫苗的制備方法，其特征在于：將鰻弧菌（Vibrio anguillarunOOl血清型和02血清型兩株菌分別活化培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)和甲醛滅活后，將滅活 后的鰻弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型兩株菌的滅活細(xì)胞按數(shù)量比為1 : 1的比例混合于無菌磷酸緩沖鹽溶液中，即為二價(jià)滅活疫苗。
5. -種權(quán)利要求1所述的鰻弧菌二價(jià)疫苗的使用方法，其特征在于：所述二價(jià)滅活 疫苗用于制備防治養(yǎng)殖魚類鰻弧菌病的疫苗；將上述二價(jià)滅活疫苗注射給藥量為1〇 6? 108cells/尾；或浸泡給藥濃度為107?109cells/ml，浸泡時(shí)間10?30min。
【文檔編號(hào)】A61K39/106GK104138597SQ201310163260
【公開日】2014年11月12日 申請(qǐng)日期:2013年5月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月7日
【發(fā)明者】莫照蘭, 李貴陽, 李 杰 申請(qǐng)人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所