專利名稱：維藥瘤果黑種草子黃酮在制備治療慢性阻塞性肺病藥物的應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及NGS黃酮醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種維藥瘤果黑種草子黃酮在制備治療慢性阻塞性肺病藥物的應用。
背景技術(shù)：
慢性阻塞性肺病(chronicobstructive pulmonary disease, COPD)是一種慢性氣道阻塞性疾病的統(tǒng)稱，主要指具有不可逆性氣道阻塞的慢性支氣管炎和肺氣腫兩種疾病。COPD患者預后不良，最終死于呼吸衰竭和肺源性疾病，是造成人類死亡的第四大疾病。COPD發(fā)病機制主要是肺支氣管慢性炎癥，導致支氣管痙攣狀態(tài)的持續(xù)存在，組織蛋白酶功能亢進，長期作用使肺支氣管組織結(jié)構(gòu)損傷。目前還沒有藥物能夠改變肺功能進行性下降這一趨勢。coro對癥治療的化學藥物包括:糖皮質(zhì)激素、支氣管擴張劑、抗氧化劑、抗菌劑、祛痰劑等，但由于化學藥物副作用較大，不宜長期服用(鐘南山，姚婉貞，徐永健.慢性阻塞性肺疾病.第一版.北京大學醫(yī)學出版社.2007:497-508);市場上尚無針對治療COPD的中成藥；傳統(tǒng)中藥湯劑服用不便，降低了病人的依從性。因而，尋找新的治療CCffD藥物勢在必行。
黑種草屬植物屬于毛茛科植物金蓮花亞科，其中有3個種，分別是:瘤果黑種草(nigella glandulifera Preyn),又名腺毛黑種草；果黑種草(Nigella sativa),又名家黑種草；以及黑種草(Nigella damascena L)。瘤果黑種草的種子呈三棱狀卵形,長2.5一3_，寬約1.5_。表面黑色，粗糙，頂端較狹而尖，下端稍鈍，有不規(guī)則的突起，質(zhì)堅硬，斷面灰色，有油性(疆植物志編輯委員會.新疆植物志。第2卷，第I分冊[M].烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社，1993:231.)。果黑種草(sativa)廣泛分布在地中海地區(qū)(埃及、巴基斯坦等地)，古伊朗醫(yī)學書籍中記載對哮喘和呼吸困難有治療作用；黑種草(damascena)主要分布在歐洲地區(qū)；瘤果黑種草(glandulifera)是新疆特有的植物資源，為我國新疆維吾爾族常用藥材。維吾爾醫(yī)多以瘤果黑種草子(nigella glandulifera seeds, NGS)外用于生發(fā)、烏發(fā)、止痛、止癢等，內(nèi)服用于治療感冒等，如用黑種草子浸葡萄醋后，研成細粉，吸入鼻內(nèi)(國家中醫(yī)藥管理局.中華本草[M].上海:上?？茖W技術(shù)出版社，1999:364)。已研究的NGS化學成分包括:脂肪酸化學成分、揮發(fā)性化學成分、生物堿化學成分、以常春藤為主的皂苷類和以山奈酚為主·的黃酮類等(劉玉明，楊峻山孫，劉慶華.瘤果黑種草子化學成分的研究.中國中藥雜[J].2005，7 (30) 980-982);(倪君君，吳兆華，高慧媛，王喆星，吳立軍.瘤果黑種草子的化學成分.沈陽藥學大學學報[J].2007，24 (4):215-217);(信學雷，汪漢卿，阿吉艾克拜爾 艾薩.維藥瘤果黑種草籽化學成分研究.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)[J].2012,24:892-896,899)] 目前國外有報道果黑種草(sativa)子改善呼吸系統(tǒng)紊亂的少量體外研究，尚未報道NGS對COPD作用的研究資料。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種維藥瘤果黑種草子黃酮在制備治療慢性阻塞性肺病藥物的應用，克服了上述現(xiàn)有技術(shù)之不足，其能有效解決目前國內(nèi)外尚無利用NGS黃酮改善呼吸系統(tǒng)紊亂的問題，本發(fā)明中NGS黃酮能有效治療慢性阻塞性肺病引起的慢性支氣管炎癥，同時能夠有效改善慢性阻塞性肺病引起的肺支氣管痙攣癥狀，阻止形成肺大泡和肺氣腫。
本發(fā)明的技術(shù)方案是通過以下措施來實現(xiàn)的:一種維藥瘤果黑種草子黃酮在制備治療慢性阻塞性肺病藥物的應用。
下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案的進一步優(yōu)化或/和改進: 上述NGS黃酮按下述方法得到:稱取NGS非油脂部分，向NGS非油脂中加入重量是NGS非油脂重量6倍至12倍體積濃度是30%至60%的乙醇，回流提取2次至4次、每次0.5小時至2小時，合并提取液，在溫度為60°C至80°C條件下常壓濃縮至無醇味得到NGS黃酮。
上述所用的乙醇的體積濃度為40%，回流提取3次、每次1.5小時。
上述NGS黃酮按下述方法進行純化:按大孔樹脂吸附進行純化，NGS黃酮上樣液濃度為4.90 mg.πιΓ1，通過AB-8大孔樹脂的層析柱，用體積濃度為30%至50%的乙醇進行洗脫，收集洗脫液，揮干溶劑，得棕黃色粉末；將粉末用水溶解，上聚酰胺柱，先用水洗脫，再用4倍柱體積體積濃度為30%至50%的乙醇以2柱體積/h進行洗脫，收集洗脫液，揮干溶劑，得精制NGS黃酮。
本發(fā)明的NGS黃酮對由慢性阻塞性肺病引起的慢性支氣管炎癥具有較穩(wěn)定的抗慢性炎癥作用，同時能夠有效改善慢性阻塞性肺病引起的肺支氣管痙攣癥狀，阻止形成肺大泡和肺氣腫，其作用機制涉及抑制肺支氣管平滑肌M膽堿受體、減少肺支氣管組織炎癥細胞和炎癥細胞因子的功能，在目前國內(nèi)外研究中尚屬首次。


附圖1為本發(fā)明正常大鼠肺組織切片(HEX 100)。
附圖2為本發(fā)明肺部炎癥肺氣腫大鼠模型病理肺組織切片(HEX 100)。
附圖3為本發(fā)明NGS黃酮 低劑量治療組肺組織切片(HEX 100)。
附圖4為本發(fā)明NGS黃酮高劑量治療組肺組織切片(HEX 100)。
附圖5為本發(fā)明NGS黃酮中山萘酚的HPLC色譜圖，其中，圖中的A為對照品的山奈酚峰值。
附圖6為本發(fā)明NGS黃酮中山萘酚的HPLC色譜圖，其中，圖中的B為樣品的山奈酚峰值。
具體實施方式
本發(fā)明不受下述實施例的限制，可根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案與實際情況來確定具體的實施方式。
下面結(jié)合實施例及附圖對本發(fā)明作進一步描述: 實施例1，該維藥瘤果黑種草子黃酮在制備治療慢性阻塞性肺病藥物的應用。
可根據(jù)實際需要，對上述維藥瘤果黑種草子黃酮在制備治療慢性阻塞性肺病藥物的應用作進一步優(yōu)化或/和改進:實施例2，作為上述是實施例的優(yōu)選，該NGS黃酮按下述方法得到:稱取NGS非油脂部分，向NGS非油脂中加入重量是NGS非油脂重量6倍至12倍體積濃度是30%至60%的乙醇，回流提取2次至4次、每次0.5小時至2小時，合并提取液，在溫度為60°C至80°C條件下常壓濃縮至無醇味得到NGS黃酮。
實施例3，作為上述是實施例的優(yōu)選，所用的乙醇的體積濃度為40%，回流提取3次、每次1.5小時。
實施例4，作為上述是實施例的優(yōu)選，該NGS黃酮按下述方法進行純化:按大孔樹脂吸附進行純化，NGS黃酮上樣液濃度為4.90 mg.πιΓ1，通過ΑΒ-8大孔樹脂的層析柱，用體積濃度為30%至50%的乙醇進行洗脫，收集洗脫液，揮干溶劑，得棕黃色粉末；將粉末用水溶解,上聚酰胺柱,先用水洗脫,再用4倍柱體積體積濃度為30%至50%的乙醇以2柱體積/h進行洗脫，收集洗脫液，揮干溶劑，得精制NGS黃酮。
1.NGS黃酮的質(zhì)量控制: 紫外分光光度法(ultraviolet spectrum, UV)測定NGS總黃酮和高效液相色譜法(high performance liquid chroma- tography, HPLC)測定 NGS 中山奈酌.的含量。
(I)UV測定NGS總黃酮:在方法學驗證的基礎(chǔ)上，以蘆丁為對照品，甲醇溶解對照與供試品，乙醇為添加溶媒，加入1%A1C13試劑，最大吸收波長為271nm，測定結(jié)果代入建立的標準曲線回歸方程，計算出NGS非油脂中黃酮含量為1.52%。
(2)HPLC測定NGS中山奈酚的含量:在系統(tǒng)適應性和方法學考察的基礎(chǔ)上，以山奈酚為對照品，選擇色譜柱為Diamonsil C18，流動相為甲醇:0.4%磷酸(52: 48)，檢測波長為370nm，見附圖5和附圖6，測定結(jié)果代入建立的標準曲線回歸方程，計算NGS中黃酮含量為 0.33mg.g 1O
2.NGS黃酮藥理作用研究: 2.1NGS黃酮的肺支氣管解痙效應 2.1.1小鼠組胺引喘實驗: 將小鼠分為對照組和給藥組，對照組包括:陰性對照組(即生理鹽水組)、陽性對照組(即氨茶堿組)和NGS水煎液組，給藥組包括:NGS黃酮低劑量組和NGS黃酮高劑量組。
采用噴氯化乙酰 膽堿及磷酸組胺混合物能興奮氣管平滑肌，引發(fā)支氣管痙攣，引起小鼠喘咳癥狀，觀察各組對小鼠引喘潛伏期長短的影響。
結(jié)論:氯茶堿是目前公知的改善呼吸功能的藥物，它能夠有效松弛支氣管平滑肌，盡管NGS水煎液組較生理鹽水組引喘潛伏期延長，但是NGS黃酮低劑量組和NGS黃酮高劑量組，均較水煎液組引喘潛伏期明顯延長，說明NGS黃酮可以減輕支氣管痙攣癥狀。實驗結(jié)果見表I。
表I NGS黃酮對小白鼠平喘實驗的影響(X±S ,η =10)
權(quán)利要求
1.一種維藥瘤果黑種草子黃酮在制備治療慢性阻塞性肺病藥物的應用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的維藥瘤果黑種草子黃酮在制備治療慢性阻塞性肺病藥物的應用，其特征在于該NGS黃酮按下述方法得到:稱取NGS非油脂部分，向NGS非油脂中加入重量是NGS非油脂重量6倍至12倍體積濃度是30%至60%的乙醇，回流提取2次至4次、每次0.5小時至2小時，合并提取液，在溫度為60°C至80°C條件下常壓濃縮至無醇味得到NGS黃酮。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的維藥瘤果黑種草子黃酮在制備治療慢性阻塞性肺病藥物的應用，其特征在于所用的乙醇的體積濃度為40%，回流提取3次、每次1.5小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的維藥瘤果黑種草子黃酮在制備治療慢性阻塞性肺病藥物的應用，其特征在于該NGS黃酮按下述方法進行純化:按大孔樹脂吸附進行純化，NGS黃酮上樣液濃度為4.90 mg.πιΓ1，通過AB-8大孔樹脂的層析柱，用體積濃度為30%至50%的乙醇進行洗脫，收集洗脫液，揮干溶劑，得棕黃色粉末；將粉末用水溶解，上聚酰胺柱，先用水洗脫，再用4倍柱體積濃度為30%至50%的乙醇以2倍柱體積/h進行洗脫，收集洗脫液，揮干溶劑，得精 制NGS黃酮。
全文摘要
本發(fā)明涉及NGS黃酮醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種維藥瘤果黑種草子黃酮在制備治療慢性阻塞性肺病藥物的應用，本發(fā)明的NGS黃酮對由慢性阻塞性肺病引起的慢性支氣管炎癥具有較穩(wěn)定的抗慢性炎癥作用，同時能夠有效改善慢性阻塞性肺病引起的肺支氣管痙攣癥狀，阻止形成肺大泡和肺氣腫。其作用機制涉及抑制肺支氣管平滑肌M膽堿受體、減少肺支氣管組織炎癥細胞和炎癥細胞因子的功能，在目前國內(nèi)外研究中尚屬首次。
文檔編號A61K36/71GK103251689SQ201310060018
公開日2013年8月21日 申請日期2013年2月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月26日
發(fā)明者耿東升, 張宏濤, 張文斌 申請人:中國人民解放軍新疆軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗所