與脫氧膽酸及其多晶型物有關(guān)的組合物和方法【專利摘要】本發(fā)明提供脫氧膽酸（DCA）的多晶型形式、合成DCA及其中間體的改良方法，以及使用本發(fā)明提供的DCA的組合物和去脂方法。【專利說明】與脫氧膽酸及其多晶型物有關(guān)的組合物和方法[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用[0002]根據(jù)35U.S.C.119(e)，本申請(qǐng)要求2011年9月22日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/538，084號(hào)、2011年11月10日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/558，375號(hào)以及2012年6月14日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/659,920號(hào)的權(quán)益，上述美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)中的每一個(gè)的全部?jī)?nèi)容通過引入并入本文?！?br>技術(shù)領(lǐng)域：
】[0003]本發(fā)明提供脫氧膽酸(DCA)的多晶型形式，合成DCA及其中間體的改良方法，以及使用本發(fā)明提供的DCA的組合物和使用本發(fā)明提供的DCA的去脂方法。因此，在一些方面，本發(fā)明提供DCA多晶型物，優(yōu)選地，本發(fā)明提供具有意想不到的水穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性的DCA的結(jié)晶無水多晶型物。在其他方面，本發(fā)明還提供純化的DCA組合物以及用于DCA純化的方法和組合物，在所述DCA純化中，DCA的純度優(yōu)選為至少99%。在其他方面，本發(fā)明提供與制備合成的DCA相關(guān)的化合物、組合物和方法?！?br>背景技術(shù)：
】[0004]迅速除去身體脂肪是人們長(zhǎng)久以來的愿望，并且已聲稱有許多物質(zhì)可達(dá)到這種效果，但幾乎沒有物質(zhì)實(shí)際展現(xiàn)出這種效果。雖然自上世紀(jì)五十年代以來已經(jīng)出現(xiàn)了對(duì)“美塑療法”的同類療法以及美容產(chǎn)品的需求，但是，出于安全性和有效性考慮，“美塑療法”或者用于去除脂肪的血管注射劑的使用并不被醫(yī)師廣泛接受。美塑療法最初在歐洲被設(shè)計(jì)為一種使用皮膚注射劑的方法，所述皮膚注射劑含有用于治療局部醫(yī)學(xué)癥狀和美容癥狀的化合物的混合物。盡管美塑療法一般用于緩解疼痛，但是，最近在美國(guó)，美塑療法的美容用途，尤其是去除脂肪和脂肪團(tuán)的用途，已受到關(guān)注。有報(bào)道稱，在巴西得到推廣且使用磷脂酰膽堿注射劑的降低局部脂肪的治療方法被錯(cuò)誤地認(rèn)為與美塑療法類同。雖然上述治療方法由于所宣稱的“脂肪溶解”注射劑而受到關(guān)注，但是這些美容治療方法幾乎沒有安全性和有效性數(shù)據(jù)。參見Rotunda,A.M.和Μ.Kolodney,DermatologicSurgery32:,465-480(2006)(“MesotherapyandPhosphatidylcholineInjections!HistoricalClarificationandReview”)。[0005]最近發(fā)表的文章報(bào)道了膽汁酸、DCA和它們的鹽在注射至體內(nèi)脂肪堆積物中時(shí)具有去除脂肪的性質(zhì)。參見W02005/117900和W02005/112942,以及US2005/0261258;US2005/0267080;US2006/127468和US20060154906，這些文獻(xiàn)中的每一個(gè)的全部?jī)?nèi)容通過引用并入本文。注射至脂肪組織中的脫氧膽酸鹽通過細(xì)胞溶解機(jī)制降解脂肪細(xì)胞。因?yàn)樽⑸渲林局械拿撗跄懰猁}通過暴露于蛋白質(zhì)而快速失活，然后迅速回到小腸內(nèi)容物中，因此其通過空間方式起效。這種衰減效應(yīng)提供了臨床安全性，因此，脂肪去除一般需要4至6個(gè)階段。這種無需外科手術(shù)的局部脂肪去除不僅有益于與病態(tài)局部脂肪堆積(例如，HIV治療中的醫(yī)療干預(yù)易發(fā)生的血脂異常)相關(guān)的治療，還有益于美容性脂肪去除，這消除了外科手術(shù)(例如，抽脂術(shù))所伴隨的內(nèi)在風(fēng)險(xiǎn)。參見Rotunda等人，Dermato1.Surgery30:1001-1008(2004)(“Detergenteffectsofsodiumdeoxycholateareamajorfeatureofaninjectablephosphatidylcholineformulationusedforlocalizedfatdissolution”)和Rotunda等人，J.Am.Acad.Dermatol.(2005:973-978)(“Lipomastreatedwithsubcutaneousdeoxycholateinjections”)，這兩篇文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容通過引用并入本文。美國(guó)專利第7，622，130號(hào)和第7，754，230號(hào)描述了將DCA用于脂肪去除。[0006]此外，許多重要的類固醇在類固醇的C環(huán)上具有12-α-羥基-取代基。這些化合物包括，例如，諸如DCA、膽酸、石膽酸等的膽汁酸。迄今為止，基于成本效益，這些化合物通常從牛類和羊類動(dòng)物源中回收得到，所述牛類和羊類動(dòng)物源提供現(xiàn)成的膽汁酸來源。然而，最近發(fā)現(xiàn)諸如朊病毒之類的病原體可污染這些來源，因此通過植物來源或合成的原料合成膽汁酸的替代方法變得越來越重要。例如，根據(jù)美國(guó)的管理制度，來自新西蘭的動(dòng)物的DCA是人類用膽汁酸的來源，只要這些動(dòng)物繼續(xù)保持隔離或者不含可觀測(cè)量的病原體。這些嚴(yán)格條件對(duì)合適的哺乳動(dòng)物來源的膽汁酸的量強(qiáng)加限制，而且這些嚴(yán)格條件沒有排除膽汁酸不含這些病原體的可能性。美國(guó)專利公開第8，242，294號(hào)涉及含有少于Ippt14C的DCA。[0007]本領(lǐng)域仍然需要合適的量的諸如DCA之類的膽汁酸，優(yōu)選地，用于人體給藥的膽汁酸。因此，本領(lǐng)域亟需提供一種用于制備和純化DCA的方法。[0008]此外，當(dāng)將如DCA之類的結(jié)晶藥劑用于人體給藥時(shí)，重要的是，如DCA之類的結(jié)晶藥劑隨時(shí)間和生產(chǎn)批次的變化保持其多晶型穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性、溶解性和其它物理化學(xué)性質(zhì)。如果物理化學(xué)性質(zhì)隨著時(shí)間和批次的變化而發(fā)生改變，那么有效劑量的給藥會(huì)難以確定并可導(dǎo)致毒副作用或?qū)е陆o藥無效。因此，選擇穩(wěn)定的、可重復(fù)生產(chǎn)的并具有有利于人體給藥用途的物理化學(xué)性質(zhì)的結(jié)晶藥劑的形式是重要的。對(duì)于諸如DCA之類的化合物而言，其溶劑化多晶型物可能含有對(duì)于人體給藥而言不期望的量的有機(jī)溶劑。然而，從DCA晶體中除去這些殘留的溶劑可能會(huì)帶來一些問題。因此，無法預(yù)見到用于DCA的結(jié)晶，特別是用于制備藥品或活性藥物成分(API)的這些溶劑的使用，并且這些溶劑的使用受到限制。[0009]此外，本領(lǐng)域仍然不能預(yù)測(cè)藥劑的哪種晶型，特別是DCA的哪種晶型，一般會(huì)具有期望的性質(zhì)的組合且適于人體給藥，以及如何制備這種晶型的藥劑。【
發(fā)明內(nèi)容】[0010]本發(fā)明提供脫氧膽酸(DCA)的多晶型形式、合成DCA及其中間體的改良方法，以及使用本發(fā)明提供的這種DCA的組合物和去脂方法。[0011]因此，一方面，本發(fā)明提供DCA多晶型物，優(yōu)選地，本發(fā)明提供具有意想不到的水穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性的DCA的結(jié)晶無水多晶型物。[0012]本發(fā)明提供DCA的結(jié)晶多晶型物，例如在本發(fā)明中表征的A型、B型、C型、D型多晶型物。加熱后，觀察到以下多晶型形式轉(zhuǎn)化:C—B—D—A，這說明A型是熱力學(xué)上最穩(wěn)定的多晶型物。并且出乎意料地，當(dāng)在環(huán)境溫度下將A型和B型漿狀懸浮于約1:1.2v/v的乙醇(EtOH)/水中時(shí)，A型轉(zhuǎn)化為C型，但B型沒有轉(zhuǎn)化為C型。[0013]基于在40°C至160°C下，在C型的熱重量分析(TGA)中觀察到2.4%的失水量，C型多晶型物被認(rèn)為每摩爾DCA含有半摩爾弱結(jié)合的水。因?yàn)锳型、B型、D型在其TGA中均未顯示出任何實(shí)質(zhì)性失水，并且因?yàn)榘胨衔顲型加熱后轉(zhuǎn)化為B型，B型在加熱后進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為D型和A型，所以，A型、B型和D型是無水多晶型形式?；诓钍綊呙枇繜岱?DSC)分析，A型看起來是一種非溶劑化物，因?yàn)槠湓贒SC中顯示單吸熱峰(見圖6)。[0014]在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的DCA的結(jié)晶無水多晶型物是A型多晶型物。在另一實(shí)施方式中，A型多晶型物由15.0°2Θ處的粉末X-射線衍射峰表征，或者由選自8.9。2Θ,10.7°2Θ,14.0°2Θ，15.0。2Θ，16.2。2Θ和19.1。2Θ處的I個(gè)、2個(gè)或3個(gè)PXRD峰表征。在另一實(shí)施方式中，A型多晶型物由基本如圖1所示的PXRD圖表征。在另一實(shí)施方式中，A型多晶型物由通過差示掃描量熱法測(cè)量的174°C下的吸熱峰(±2°C范圍內(nèi))表征。在另一實(shí)施方式中，A型多晶型物由通過差示掃描量熱法測(cè)量的在低于(174±2)V的吸熱峰的溫度條件下基本無熱事件表征，或者由通過差示掃描量熱法測(cè)量的在高于溫度高達(dá)300°C的吸熱峰的溫度條件下基本無熱事件表征。[0015]在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的結(jié)晶無水DCA多晶型物為B型多晶型物。在一種實(shí)施方式中，B型多晶型物由7.4°2Θ處的粉末X-射線衍射(PXRD)峰表征，或者由選自6.7。2Θ,7.3°29,7.4°2Θ，8.4。2Θ,9.3°2Θ,11.2°2Θ,12.9°2Θ，13.9。2Θ,14.4°2Θ,14.6°2Θ,14.8°2Θ，15.8。2Θ，16.0。2Θ，16.9。2Θ和17.8°2Θ處的I個(gè)、2個(gè)或3個(gè)PXRD峰表征。在另一實(shí)施方式中，B型多晶型物由基本如圖2所示的PXRD圖表征。在另一實(shí)施方式中，B型多晶型物由通過差示掃描量熱法測(cè)量的135°C的吸熱峰(±2°C范圍內(nèi))表征。[0016]另一方面，本發(fā)明提供DCA的結(jié)晶水合C型多晶型物。在另一實(shí)施方式中，C型多晶型物由15.8°2Θ處的粉末X-射線衍射峰表征，或者由選自6.6°29,7.3°2Θ，7.4°29,9.6°2Θ,9.9°2Θ,12.6°2Θ,13.0°2Θ，13.2。2Θ,13.9。2Θ，14.2。2Θ，15.1。2Θ,15.6。2Θ,15.8°2Θ,16.4°2Θ，17.0。2Θ，17.1。2Θ和17.6。2Θ處的I個(gè)、2個(gè)或3個(gè)PXRD峰表征。在另一實(shí)施方式中，C型多晶型物由基本如圖3所示的PXRD圖表征。在另一實(shí)施方式中，C型多晶型物由差示掃描量熱法測(cè)量的低于100°C的寬轉(zhuǎn)變峰表征。在另一實(shí)施方式中，C型多晶型物由對(duì)應(yīng)于TGA分析中40°C至140°C下約2.4%的質(zhì)量損失的轉(zhuǎn)變峰表征。[0017]在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的結(jié)晶無水DCA多晶型物為D型多晶型物。在另一實(shí)施方式中，D型多晶型物由10.0°2Θ處的粉末X-射線衍射(PXRD)峰表征，或者由選自7.0。2Θ,7.4°2Θ,10.0°2Θ，14.2。2Θ，15.3。2Θ，15.8。2Θ，16.6。2Θ和17.3°2Θ處的I個(gè)、2個(gè)或3個(gè)PXRD峰表征。在另一實(shí)施方式中，D型多晶型物由基本如圖5所示的PXRD圖表征。在另一實(shí)施方式中，D型多晶型物由通過差示掃描量熱法測(cè)量的156°C的吸熱峰(±2°C范圍內(nèi))表征。[0018]另一方面，本發(fā)明提供DCA多晶型物，優(yōu)選地，本發(fā)明提供與至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑混合的DCA的結(jié)晶無水多晶型物。在一種實(shí)施方式中，所述DCA多晶型物為B型。在另一實(shí)施方式中，所述DCA多晶型物為A型或D型。在另一實(shí)施方式中，混合的多晶型物基本不包括水合多晶型物，優(yōu)選地，不包括C型多晶型形式。在另一實(shí)施方式中，混合的組合物包括約0.l%w/V至約2%w/vDCA,或優(yōu)選地,約0.5%w/v至約1.5%w/vDCA。在另一實(shí)施方式中，混合的組合物為適于皮下注射的水性制劑。在另一實(shí)施方式中，所述至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑和/或載劑選自水、緩沖液和防腐劑。[0019]另一方面，本發(fā)明提供將DCA的一種多晶型物形式轉(zhuǎn)化為另一種多晶型物形式的方法。在一種實(shí)施方式中，在低于135°C的溫度下，優(yōu)選地，在低于100°C的溫度下，更優(yōu)選地，在約40°C的溫度下，在真空(例如，約50mmHg)下加熱C型多晶型物，生成B型多晶型物。[0020]在本發(fā)明提供的各種不同的組合物、方法和步驟方面以及實(shí)施方式范圍內(nèi)，在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明使用的DCA為非微生物的DCA和/或非哺乳動(dòng)物的DCA。在一種實(shí)施方式中，這種本質(zhì)上是合成的DCA包括以合成方式加至DCA分子中的下式側(cè)鏈或其酯。【權(quán)利要求】1.一種化合物，所述化合物選自:2.一種組合物，所述組合物含有下式化合物以及2碳烯化試劑。3.如權(quán)利要求2所述的組合物，其中，2碳烯化試劑為Wittig試劑。4.一種組合物，所述組合物含有下式化合物、叔丁基氫過氧化物和CuI。5.如權(quán)利要求4所述的組合物，所述組合物不含次氯酸鹽(OCl(-))。6.—種組合物，所述組合物含有下式化合物和氫化催化劑，7.如權(quán)利要求6所述的組合物，所述組合物還含有氫。8.一種制備下式的脫氧膽酸或其鹽的方法，9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中:Ca)所述含有MeOH的溶劑為MeOH；(b)所述2碳烯化試劑包括EtPPh3Br和叔丁醇金屬；(c)步驟(iv)中的還原劑為氫硼化物；(d)P為R2-CO-,其中，R2為C1-C6烷基或芳基，其中，所述烷基和所述芳基被I至3個(gè)芳基、C1-C6烷氧基和鹵素任選地取代；Ce)所述路易斯酸催化劑為EtAlCl2；Cf)所述氫化條件包括使用負(fù)載型Pd、Pt或Rh催化劑；(g)步驟(ix)中的氧化反應(yīng)使用氫過氧化物和Cu(I)鹽進(jìn)行；(h)步驟(X)中的氧化反應(yīng)優(yōu)選在無水條件下，使用氯鉻酸吡啶鎗(PCC)進(jìn)行；(i)步驟(xii)中的任選的氧化使用PCC進(jìn)行；(j)步驟(xiii)中的還原使用LiAl(OCMe3)3H進(jìn)行；(k)所述脫保護(hù)使用堿的水溶液進(jìn)行；和/或(I)所述脫保護(hù)條件包括與亞硫酰氯接觸。10.一種氧化類固醇的12-位亞甲基的方法，該12-位亞甲基與Λ-9，11-烯相鄰，所述方法包括:在生成12-羥基Λ-9，11-烯類固醇，以及任選地12-酮Λ-9，11_烯類固醇的條件下，使含有所述亞甲基的類固醇與叔丁基氫過氧化物和CuI接觸。11.如權(quán)利要求10所述的方法，所述方法還包括:在生成12-酮Λ-9，11-烯類固醇的條件下，使所述12-羥基Λ-9，11-烯類固醇與氯鉻酸吡啶鎗接觸。12.—種制備下式的化合物的方法，13.—種DCA的結(jié)晶無水多晶型物。14.如權(quán)利要求13所述的DCA的無水多晶型物，所述無水多晶型物為B型。15.—種DCA的結(jié)晶B型多晶型物，所述B型多晶型物通過選自6.7°29,7.3°2Θ,7.4°2Θ,8.4°29,9.3°20,11.2°20,12.9°2Θ，13.9。2Θ，14.4。2Θ，14.6。2Θ，14.8。2Θ,15.8°2Θ,16.0°2Θ,16.9°2Θ和17.8。2Θ處的I個(gè)、2個(gè)或3個(gè)PXRD峰表征。16.如權(quán)利要求15所述的B型多晶型物，所述B型多晶型物通過基本如圖2所示的PXRD圖表征。17.如權(quán)利要求13至16中任一項(xiàng)所述的多晶型物，所述多晶型物與藥學(xué)上可接受的賦形劑混合。18.一種減少受治者體內(nèi)皮下脂肪堆積物的方法，所述方法包括在溶解所述脂肪堆積物的條件下，將與至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑混合的有效量的權(quán)利要求13至16中任一項(xiàng)所述的B型多晶型物局部給藥于所述受治者體內(nèi)的脂肪堆積物。【文檔編號(hào)】A61K31/56GK103906517SQ201280049972【公開日】2014年7月2日申請(qǐng)日期:2012年9月21日優(yōu)先權(quán)日:2011年9月22日【發(fā)明者】阿查姆佩塔·普拉薩德,?？枴ぬK布拉馬尼安,尼古拉斯·霍爾曼,約翰·格雷戈里·里德,史蒂文·法伊弗,孫旭峰,約翰·奈特,蘭迪·施泰因布林克申請(qǐng)人:凱瑟拉生物制藥有限公司